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Fermn A. Tenorio L., Leonardo del Valle M., Gustavo Pasteln H. Validacin de un mtodo analtico espectrofotomtrico para la cuantificacin de aminofilina en solucin inyectable Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 36, nm. 4, octubre-diciembre, 2005, pp. 39-48, Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C. Mxico
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57936406

Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, ISSN (Versin impresa): 1870-0195 rmcf@afmac.org.mx Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C. Mxico

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Trabajo Cientco

Validacin de un mtodo analtico espectrofotomtrico para la cuanticacin de aminolina en solucin inyectable

Validation of a spectrophotometric analytical method for quantifying aminophylline in injection
Fermn A. Tenorio L., Leonardo del Valle M., Gustavo Pasteln H. Departamento de Farmacologa, Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio Chvez
RESUMEN: el objetivo de este trabajo es reportar la validacin de un mtodo analtico por espectrometra de UV-Vis, alternativo a los reportados en la literatura especializada, desarrollado para la cuanticacin de aminolina en solucin inyectable. Para ello, se llevaron a cabo reacciones complejomtricas y de xido-reduccin, registrando la absorbancia a una longitud de onda analtica de 460 nm. As, el mtodo demostr ser especco, lineal, exacto y preciso en el rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina. Los lmites de deteccin y cuanticacin fueron 0.02 y 0.06 mg de aminolina, respectivamente. El porcentaje de recobro analtico absoluto oscila entre 98.1 99.2% con un coeciente de variacin entre 0.30 0.94%. ABSTRACT: In this work, our aim is to report the validation of an analytical UV-Vis spectrometric method for quantifying aminophylline in injection, as an alternative to the previously reported methodologies. For such, complex and redox reactions were used, and the absorbance was registered at 460 nm. Under these conditions, the method showed to be specic, linear, accurate and precise within the range of 5 to 40 mg of aminophylline. Detection and quantication limits were 0.02 and 0.06 mg of aminophylline, respectively. Absolute recovery percentage is within 98.1 99.2% with a variation coecient that lies between 0.30 0.94%.
Palabras claves: aminolina, complejacin, xido-reduccin, validacin Key words: aminophylline, complex, redox, validation

Introduccin
Correspondencia: Fermn Alejandro Tenorio Lpez Departamento de Farmacologa. Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio Chvez Juan Badiano No. 1, Col. Seccin XVI, 14080. Tlalpan, Mxico, D.F. Tel: 55 73 29 11. Ext. 1317 1344. Fax: 55 73 09 26. E-mail: fatl@att.net.mx; ft24@hotmail.com Fecha de recepcin: 20 de abril de 2005 Fecha de aceptacin: 02 de agosto de 2005 La aminolina, tambin conocida como carena, inolina, metalina, teoldina, entre otros nombres comerciales,1 tiene por nombre qumico 1H-2,6-diona-3,7-dihidro-1,3-dimetilpurina, en mezcla con 1,2-etilendiamina en proporcin 2:1 (gura 1), la cual puede estar en forma anhidra (de frmula C16H24N10O4), o bien, como dihidrato (C16H28N10O6).2 En el mercado, se encuentra disponible en las formas farmacuticas de solucin inyectable, solucin oral, enema, supositorios, tabletas y tabletas de liberacin prolongada.3 Los frmacos derivados de las xantinas, tales como la teolina, teobromina y aminolina son considerados como inhibidores de la fosfodiesterasa4 y, en la prctica clnica, la aminolina se utiliza en nios con asma aguda que presentan una respuesta subptima con la terapia de broncodilatadores

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Volumen 36 No. 4 octubre - diciembre 2005 Conference on Harmonisation (ICH, en sus siglas en ingls) respecto a los parmetros de validacin de mtodos analticos,13,14 en concordancia con lo sugerido tambin por la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamrica.15,16

Materiales y mtodos
Reactivos
Los reactivos empleados para este estudio fueron: diclorhidrato de aminolina (ICN Biomedicals Inc., Aurora, Ohio), cido yodhdrico (Merck, Darmstadt, Alemania), clorhidrato de hidroxilamina (ICN Biomedicals Inc., Aurora, Ohio), cido clorhdrico fumante (Merck, Darmstadt, Alemania), perxido de hidrgeno al 30% (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.). Todos estos reactivos utilizados fueron de grado reactivo analtico. Los estndares de xantina, 2-xantinol y proxantilina procedieron de Sigma-Aldrich Co., St. Louis Mo.

Figura 1: Estructura molecular de la aminolina. Se indica en la molcula la porcin que corresponde a la teolina y a la etilendiamina. PM = Peso molecular inhalados5 y para la prevencin de apnea en el tratamiento de pacientes con lesiones cardiacas congestivas sometidos a tratamiento con infusin de prostaglandina E1.6 Adicionalmente, se han reportado acciones farmacolgicas secundarias tales como vasodilatacin coronaria, incremento en la diuresis, estimulante cardiaco, cerebral, del sistema nervioso central y del msculo esqueltico.7-10 La aminolina ha sido cuanticada por mtodos gravimtricos, titulomtricos (mediante valoraciones en medio cido, en medio alcalino, argentometra, complejomtricos y no acuosas), espectroscpicos (mediante espectrometra de UV-Vis) y cromatogrcos (por cromatografa en capa na y de lquidos de alta resolucin),2,11 siendo actualmente los mtodos cromatogrcos de lquidos de alta resolucin (CLAR) las tcnicas analticas sugeridas por la United States Pharmacopeia3 para la cuanticacin de aminolina en las formas farmacuticas mencionadas anteriormente. Recientemente, se ha propuesto una metodologa para la cuanticacin de aminolina mediante quimiolumiscencia por inyeccin de ujo, basndose en la reaccin de sta con Nbromosuccinimida-luminol.12 Dadas las perspectivas de este frmaco, en este trabajo reportamos la validacin de un mtodo alternativo para la cuanticacin de aminolina en solucin inyectable, en el caso de no contar en el laboratorio de anlisis con los recursos econmicos para implementar el anlisis por CLAR. As, el mtodo propuesto satisface las recomendaciones plasmadas en los documentos siguientes: (1) ICH Harmonised Tripartite Guideline: Text on Validation of Analytical Procedures Q2A y (2) Validation of Analytical Procedures: Methodology Q2B, editados por la International

Forma farmacutica analizada

Para efectos de este trabajo, se analiz aminolina en solucin inyectable. Segn el marbete del producto, cada ampolleta contiene aminolina (250 mg) y agua c.b.p. (10 mL).

Disoluciones de trabajo
Diariamente, se prepararon las siguientes disoluciones acuosas: cido yodhdrico (50 mg/mL), estndar de aminolina (25 mg/mL), estndar de xantina (25 mg/mL), estndar de 2-xantinol (25 mg/mL), estndar de proxantilina (25 mg/mL) y clorhidrato de hidroxilamina (1 mg/mL). Todas las disoluciones se prepararon empleando agua desionizada a travs de un desionizador (Simplicity System, Millipore SAS, Molsheim, France). Se ltraron empleando ltros para jeringa de steres mixtos de celulosa, con tamao de poro de 0.22 m (Corning Glass Works, Corning, N.Y.) y se almacenaron en frascos de vidrio mbar con tapn de rosca de polivinilcarbonato (PVC).

Equipo
Se emple un espectrmetro de UV-Vis de doble haz marca SLM-AMINCO modelo DW-2000 (SLM Instruments, Urbana, Ilinois.), con un rango de longitud de onda de trabajo comprendido de 0 y 1100 nm. Vericacin experimental de la longitud de onda de mxima absorcin del producto de la reaccin complejomtrica propuesta para la cuanticacin de aminolina Dado que la aminolina es un preparado farmacutico que consta de 2 partes de teolina y 1 parte de etilendiamina, esta ltima

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resulta ser una interferencia en la deteccin del producto de degradacin de la aminolina en disolucin acuosa, la teolina.1 Por ello, la reaccin complejomtrica propuesta en este trabajo, se basa en la formacin de un complejo de inclusin de yodo entre la teolina y un derivado hidroxilado de la etilendiamina, la cual se muestra en la gura 2. Para ello, en un tubo de ensayo de 12 x 150 mm se colocaron 100 L de la disolucin de cido yodhdrico (50 mg/mL) y se agregaron lentamente 50 L de la disolucin estndar de aminolina (25 mg/mL). Se mezcl suavemente durante 5 minutos y se agregaron 5 L de la disolucin acuosa de clorhidrato de hidroxilamina (1 mg/mL). Se homogeniz suavemente y se agregaron 2 gotas de cido clorhdrico fumante. Se

Figura 3: Superposicin de los espectros de absorcin de UV-Vis de cada uno de los reactivos y materias primas utilizados. (1) cido yodhdrico; (2) aminofilina; (3) clorhidrato de hidroxilamina; (4) cido clorhdrico fumante; (5) perxido de hidrgeno al 30%

Figura 2: Reaccin complejomtrica y de xido-reduccin propuesta para la cuanticacin de aminolina agit vigorosamente hasta observar un color pardo rojizo opalescente. Una vez formado un precipitado no, se agregaron 2 mL de perxido de hidrgeno al 30% para completar la liberacin de yodo, lo cual se manifest por la aparicin de un precipitado de color gris metlico. Se incub durante 45 minutos a temperatura ambiente y se ltr. Para registrar la longitud de onda de mxima absorcin,15 se realiz un barrido comprendido entre 0 y 1100 nm en celdas de cuarzo de 1 cm de paso ptico, ajustando a cero de absorbancia con un blanco de reactivo. En la gura 3 se muestran los espectros de absorcin de UV-Vis superpuestos para la materia prima (aminolina) y reactivos empleados en este estudio. En la gura 4 se muestra la superposicin de los espectros de absorcin de UV-Vis de las materias primas y reactivos empleados con el complejo con aminolina formado. Debe recalcarse que todos los barridos para obtener los espectros de absorcin mostrados se realizaron en el intervalo comprendido entre 0 y 1100 nm (que corresponde al rango de trabajo del espectrmetro de UV-Vis utilizado en este estudio) empleando para tal n celdas de cuarzo de 1 cm de paso ptico y ajustando a cero de absorbancia con un blanco de reactivo.

Figura 4: Superposicin de los espectros de absorcin de UV-Vis de cada uno de los reactivos y materias primas utilizados, as como del complejo formado con aminofilina: (1) cido yodhdrico; (2) aminofilina; (3) clorhidrato de hidroxilamina; (4) cido clorhdrico fumante; (5) perxido de hidrgeno al 30%; (6) complejo formado con aminofilina. Obsrvese que la longitud de onda de mxima de absorcin del complejo corresponde a 460 nm ( max = 460 nm)

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Especicidad del sistema analtico

La reaccin complejomtrica propuesta involucra dos molculas de teolina y una de un derivado hidroxilado de etilendiamina en coordinacin con dos tomos de yodo, por lo que para evaluar la especicidad del sistema analtico, se emplearon analitos cuya estructura qumica es anloga a la teolina (xantina, 2-xantinol y proxantilina), los cuales fueron complejados bajo las mismas condiciones descritas para la reaccin propuesta, por lo que estos analitos se prepararon en disolucin acuosa a razn de 2 partes del analito por una parte de etilendiamina. Llevada a cabo la reaccin respectiva con cada analito, se determin, individualmente, los espectros de absorcin de UV-Vis (gura 5), segn se ha descrito anteriormente en este trabajo, en donde se estableci la absorbancia del complejo de inters para la aminolina (tabla 1).

Linealidad del mtodo analtico

Se prepar una serie de 3 curvas patrn independiente, en el rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina. Cada punto de la curva patrn se ley por triplicado a la longitud de onda de mxima absorcin del complejo formado con aminolina (max = 460 nm, ver gura 5). Como criterios de aceptacin, se emplearon los criterios indicados en las referencias bibliogrcas 13 a 16.

Exactitud y precisin del mtodo analtico

Se analiz el porcentaje de recobro analtico absoluto promedio de aminolina en el intervalo de concentracin nominal del frmaco de 20, 40, 80 y 160%. Para cada nivel de concentracin, como criterios de aceptacin, se emplearon los criterios indicados en las referencias bibliogrcas 13 a 16.

Linealidad del sistema analtico

Se prepar una serie de 3 curvas patrn independiente, con un rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina. Cada punto de la curva patrn se ley por triplicado a la longitud de onda de mxima absorcin del complejo formado con aminolina (max = 460 nm, ver gura 5). Como criterios de aceptacin, se emplearon las pautas indicadas en las referencias bibliogrcas 13 a 16. Otra serie de 3 curvas patrn independientes fueron empleadas para el clculo de los lmites de deteccin (LD) y cuanticacin (LC), respectivamente, empleando para ello el criterio sugerido por la ICH.13,14

Anlisis de la forma farmacutica

Se analizaron 9 muestras por triplicado de aminolina. El clculo del porcentaje de aminolina en la solucin inyectable analizada se calcula mediante la siguiente frmula: (Cestndar) (FD)(100) Aestndar % Aminolina=______________________________ 250 Donde: Aproblema = Absorbancia de la muestra problema Aestndar = Absorbancia de la disolucin estndar Cestndar = Concentracin de la disolucin estndar (25 mg/mL) FD = Factor de dilucin (10) 250 = Cantidad de aminolina expresado en el marbete del producto farmacutico analizado Como criterio de aceptacin del porcentaje de aminolina respecto al marbete, se emple el plasmado en la USP 24 (no menos de 93.0 y no ms del 107.0% de la cantidad de aminolina indicada en el marbete del producto).3

problema _________

Resultados
Figura 5: Evaluacin de la selectividad del mtodo analtico. Superposicin de los espectros de absorcin de UV-Vis de cada uno de los complejos de inclusin con yodo formados con: (1) aminolina, (2) xantina, (3) proxantilina y (4) 2-xantinol. Obsrvese que el nico complejo que presenta un mximo de absorcin a 460 nm es el complejo formado con aminolina Vericacin experimental de la longitud de onda de mxima absorcin del producto de la reaccin complejomtrica propuesta para la cuanticacin de aminolina Bajo las condiciones de reaccin descritas previamente, la longitud de onda de mxima absorcin del producto de reaccin con la aminolina es de 460 nm, no observndose interferencia espectral de este complejo con los dems reactivos empleados

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en la reaccin. La superposicin de los espectros de absorcin de UV-Vis individuales para los reactivos y el complejo con aminolina se muestran en la gura 4. Especicidad del sistema analtico La superposicin de los espectros individuales de absorcin de UV-Vis se muestra en la figura 5. Como se observa, ningn otro complejo formado con xantina, 2-xantinol y proxantilina (anlogos de teofilina) presentan una longitud de onda de mxima absorcin ( max) a 460 nm, por lo que se infiere que el mtodo analtico es selectivo. En lo que respecta a las absorbancias obtenidas a max de 460 nm, los resultados de especificidad del sistema analtico se muestran en la tabla 1. Tabla 1. Especicidad del sistema analtico Analito (25 mg/mL) Aminolina Xantina 2-xanitol Proxantilina Absorbancia ( max = 460 nm) 0.7391 0.0002 0.0001 0.0001

Figura 6: Evaluacin de la linealidad del sistema analtico. Cada punto de la grca es el promedio de los datos obtenidos (n = 9), obteniendo una ecuacin de regresin lineal simple promedio igual a y = 0.0018x + 1 x 10-5 (r2 = 1.0000). Lmite de deteccin 0.02 mg. Lmite de cuanticacin 0.06 mg. CV(%) = 0.4. Debido a que las barras de error estndar son ms pequeas respecto al smbolo, stas se omiten

En funcin de lo anterior, se inere que el sistema analtico es especco.

Linealidad del sistema analtico

En el rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina, se satisfacen las condiciones de linealidad del sistema analtico pues se cumplen con los requerimientos de un coeciente de determinacin lineal (r2) mayor o igual a 0.98 y un coeciente de variacin porcentual (C.V.) menor o igual a 2.5.13-16 Los resultados obtenidos se muestran en la gura 6.

Linealidad del mtodo analtico

En el rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina, se satisfacen las condiciones de linealidad del mtodo analtico pues se cumplen con los requerimientos de un coeciente de determinacin lineal (r2) mayor o igual a 0.98, un porcentaje de recobro analtico absoluto entre 98.0 102.0%, una pendiente de la recta cercana a la unidad y una ordenada al origen cercana a cero y un coeciente de variacin porcentual (C.V.) menor o igual a 2.5.13-16 Los resultados obtenidos se muestran en la gura 7 y en la tabla 2.

Figura 7: Evaluacin de la linealidad del mtodo analtico. Cada punto de la grca es el promedio de los datos obtenidos (n = 9), obteniendo una ecuacin de regresin lineal simple promedio igual a y = 0.9755x + 0.0043 (r2 = 1.0000). Bajo estas condiciones, el porcentaje de recobro analtico absoluto promedio se encuentra entre 98.1 99.2% con un coeciente de variacin comprendido de 0.30 0.94%. Debido a que las barras de error estndar son ms pequeas respecto al smbolo, stas se omiten

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Volumen 36 No. 4 octubre - diciembre 2005 Tabla 2. Evaluacin de la linealidad del mtodo analtico. Anlisis del porcentaje de recobro analtico promedio C.A. (mg) 0 5 10 20 40 P.R.1 (%) 100.0 97.8 96.8 97.6 97.5 P.R.2 (%) 100.0 98.1 97.4 97.3 97.3 P.R.3 (%) 100.0 97.0 99.6 97.0 97.1 P.R.4 (%) 100.0 96.4 97.7 98.0 97.8 P.R.5 (%) 100.0 97.6 97.1 97.7 97.3 P.R.6 (%) 100.0 97.6 97.7 98.3 97.5 P.R.7 (%) 100.0 97.3 98.1 97.7 98.0 P.R.8 (%) 100.0 97.3 97.0 98.2 97.9 P.R.9 (%) 100.0 98.4 96.4 97.7 97.4 P.R.P. (%) 100.0 97.5 97.5 97.7 97.5 Sx (%) 0.0 0.6 0.9 0.4 0.3 CV (%) 0.0 0.6 0.9 0.4 0.3

C.A. = Cantidad adicionada de aminolina; P.R. = Porcentaje de recobro analtico absoluto; P.R.P. = Porcentaje de recobro analtico absoluto promedio; Sx = Desviacin estndar; CV = Coeciente de variacin. Bajo estas condiciones, se obtiene un P.R.P. = 98.1% y un CV(%) = 0.4

Exactitud y precisin del mtodo analtico

Las tablas 3 y 4 muestran el anlisis de la exactitud y precisin para el mtodo analtico propuesto. Como se inere de los resultados obtenidos, en cada nivel de concentracin, el mtodo analtico propuesto es exacto y preciso.13-16

Tabla 3. Anlisis de la exactitud del mtodo analtico C.A. (mg) 0 5 10 20 40 (P.R.P.)G (%) (Sx)G CVG(%) C.R. (mg) 0.0 4.9 9.8 19.5 39.9 99.2 0.9 1.0 C.R.2 (mg) 0.0 4.9 9.8 19.6 39.0 C.R.3 (mg) 0.0 4.8 9.7 19.6 39.1 P.R.1 (%) 100.0 97.7 98.3 97.5 99.8 P.R.2 (%) 100.0 100.0 99.4 100.6 97.6 P.R.3 (%) 100.0 98.9 98.9 99.7 100.1 P.R.P. (%) 100.0 98.8 98.9 99.3 99.2 Sx (%) 0.0 1.2 0.6 1.6 1.4 CV (%) 0.0 1.2 0.6 1.6 1.4

C.A. = Cantidad adicionada de aminolina; C.R. = Cantidad recuperada de aminolina; P.R. = Porcentaje de recobro analtico absoluto; P.R.P. = Porcentaje de recobro analtico absoluto promedio; Sx = Desviacin estndar; CV = Coeciente de variacin; (P.R.P.)G = Porcentaje de recobro analtico absoluto global; (Sx)G = Desviacin estndar global; CVG = Coeciente de variacin global

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Tabla 4. Anlisis de la precisin del mtodo analtico P.R.1 (%) 100.0 96.4 97.7 98.0 97.8 (P.R.P.)G (Sx)G CVG(%) P.R.2 (%) 100.0 97.3 98.1 97.7 98.0 98.1 0.3 0.3 P.R.3(%) 100.0 97.3 97.0 98.2 97.9 P.R.P. (%) 100.0 97.0 97.6 98.0 97.9 Sx (%) 0.0 0.5 0.6 0.3 0.1 CV (%) 0.0 0.5 0.6 0.3 0.1

P.R. = Porcentaje de recobro analtico absoluto; P.R.P. = Porcentaje de recobro analtico absoluto promedio; Sx = Desviacin estndar; CV = Coeciente de variacin; (P.R.P.)G = Porcentaje de recobro analtico absoluto global; (Sx)G = Desviacin estndar global; CVG = Coeciente de variacin global

Porcentaje de aminolina respecto al marbete

En la siguiente tabla 5 se muestran los resultados obtenidos. Tabla 5. Cantidad de aminolina respecto al marbete en la forma farmacutica analizada (Amolin, Laboratorios PISA, S.A. de C.V.) Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 (% R.A.M.)P Sx I.C. Cantidad de aminolina encontrada (mg) 249.9 250.1 250.0 249.9 250.0 250.2 249.9 250.0 250.0 100.00 0.0400 99.97 - 100.03 % Respecto a marbete 99.96 100.04 100.00 99.96 100.00 100.08 99.96 100.00 100.00

(% R.A.M.)P = Porcentaje de aminolina respecto a marbete; Sx = Desviacin estndar; I.C. = Intervalo de conanza

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Anlisis de Resultados
La Farmacopea de los Estados Unidos de Norteamrica en su edicin 24 (USP 24) propone para el caso particular del anlisis de aminolina, en la forma farmacutica inyectable, una tcnica que involucra dos anlisis: un anlisis titulomtrico, en donde se analiza el contenido de etilendiamina mediante una valoracin con cido clorhdrico 0.1 N y un anlisis por cromatografa de lquidos de alta resolucin (CLAR) para la valoracin de la porcin teolina de la molcula (la molcula de aminolina se representa en la gura 1),3 lo que es tambin congruente con metodologas analticas previamente reportadas en la literatura especializada.2 Debido a que el anlisis de aminolina involucra en realidad un doble anlisis, decidimos desarrollar y validar un mtodo analtico por espectrometra de UV-Vis que permitiera cuanticar aminolina en un solo paso. Para ello, la reaccin de cuanticacin involucra reacciones sucesivas de complejacin y de xido-reduccin (gura 2) en donde se aprovechan todos los centros nucleoflicos de la molcula, formando una esfera de coordinacin entre la porcin teolnica de la molcula y los extremos N,N-dihidroxilados de la etilendiamina, ambas, coordinadas con tomos de yodo. Estas esferas de coordinacin resultantes, denominadas tambin complejos de inclusin de yodo, se favorecen en medios fuertemente oxidantes y en presencia de grupos nucleoflicos no impedidos estricamente, aunque se ha propuesto que en dichos complejos de inclusin, participan activamente complejos de transferencia de carga entre tomos de yodo-nitrgeno, lo cual es factible en la formacin de complejos de transferencia de carga entre tomos de yodo-oxgeno.17-19 El complejo formado mediante reacciones de xido-reduccin y de complejacin para aminolina, presenta una longitud de onda de mxima absorcin de 460 nm (gura 5), en donde se observa que ningn otro reactivo o analito de estructura qumica similar presenten un mximo de absorcin a la longitud de onda de 460 nm (guras 4 y 5). Para el caso de la forma farmacutica analizada, el vehculo empleado en la formulacin es agua, por lo que no se requieren pasos adicionales en la corrida de anlisis, como lo sera una extraccin lquido-lquido, lo que incrementara el tiempo de anlisis y podra conducir a una disminucin en los porcentajes de recobro analtico.15 Por otra parte, aunque existen reportadas en la literatura especializada otras metodologas analticas que podran implementarse para el mismo n,11,12 consideramos que es oportuno contar con alternativas analticas en donde, por razones de costo-benecio, por adquisicin de equipo, por capacitacin del personal, o bien, por la infraestructura en donde se est llevando a cabo el anlisis, las metodologas por CLAR no resulten factibles de implementar. Como hemos mencionado, en este estudio se reporta una metodologa analtica en donde no se requiere un equipo para CLAR y en donde se puede analizar el contenido de aminolina en un solo paso, lo que podra reducir los costos y tiempos de anlisis. Cuando el mtodo analtico que nosotros proponemos en este trabajo es validado conforme a lo sugerido por organismos nor-

mativos internacionales13,14 y por guas de desarrollo y validacin de mtodos analticos en concordancia a lo sugerido por la Food and Drug Administration de los Estados Unidos de Norteamrica (FDA) y la International Conference on Harmonisation (ICH),13-16 ste satisface las condiciones de especicidad (gura 5 y tabla 1), linealidad (guras 6, 7 y tabla 2), exactitud y precisin (tablas 3 y 4, respectivamente), que son a saber, los parmetros mnimos necesarios para considerar a un mtodo analtico por espectrometra de UV-Vis como validado. Respecto al clculo de los lmites de deteccin y cuanticacin (documentos gua Q2A y Q2B respectivamente, editados por la ICH),13,14 se recomienda emplear las siguientes ecuaciones: 3.3 Lmite de deteccin (LD) =_________ S 10 Lmite de deteccin (LC) =_________ S Donde:

= Desviacin estndar de la respuesta S = Pendiente de la curva de calibracin

Los datos requeridos para tales ecuaciones (desviacin estndar de la respuesta y pendiente de la curva de calibracin) se obtienen mediante el anlisis de regresin lineal de las curvas de calibracin para la linealidad del sistema analtico. Respecto al anlisis de la forma farmacutica, encontramos que la Farmacopea de los Estados Unidos en su edicin 243 indica que la forma farmacutica analizada debe contener no menos del 93.0% y no ms del 107.0% de aminolina de lo indicado en el marbete. El mtodo analtico cuya validacin reportamos, permite establecer que el porcentaje de aminolina en la presentacin analizada se encuentra entre 99.97 a 100.03% (tabla 5) respecto a lo indicado en el marbete, por lo que cumple tambin con lo sugerido por mtodos analticos compendiales.

Conclusiones
El mtodo analtico desarrollado para la cuanticacin de aminolina en una forma farmacutica comercial (solucin inyectable) cumple con los parmetros de validacin mnimos sugeridos por organismos normativos internacionales (FDA e ICH) pues es un mtodo analtico lineal, en el rango de concentracin de 5 a 40 mg de aminolina, con un porcentaje de recobro analtico que oscila entre el 98.1 al 99.2%, un coeciente de variacin comprendido entre 0.30 a 0.94% y lmites de deteccin y cuanticacin de 0.02 y 0.06 mg de aminolina, respectivamente. Por todo ello,

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podra representar una alternativa de anlisis, en especial para los establecimientos en donde no se cuente con un equipo para CLAR teniendo, adems, como ventaja adicional, el hecho de que el analito es cuanticable en un nico paso, lo que podra contribuir a disminuir los tiempos y costos del anlisis.

11. Yin C., Tang C., Wu X. 2003. HPLC determination of aminophylline, methoxyphenamine hydrochloride, noscapine and chlorphenamine maleate in compound dosage forms with an aqueous-organic mobile phase. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis , 33(1): 39-43. 12. Wang Z., Zhang Z., Fu Z., Luo W., Zhang X. 2004. Flow-injection chemiluminescence determination of aminomethylbenzoic acid and aminophylline based on N-bromosuccinimide-luminol reaction. Talanta, 62(3): 611-617. 13. International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. 1994. ICH Harmonised Tripartite Guideline: Text on Validation of Analytical Procedures Q2A. 14. International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. 1996. ICH Harmonised Tripartite Guideline: Validation of Analytical Procedures Methodology Q2B. 15. Crowther J.B., Salomons P., Callaghan C. 2000. Analytical method development for assay and impurity determination in drug substances and drug products. En: Miller J.M., Crowther J.B. (eds.), Analytical Chemistry in a GMP environment: a practical guide. John Wiley and Sons, New York, pp. 331-370. 16. Crowther J.B., Jimidar M.I., Niemeijer N., Salomons P. 2000. Qualication of laboratory instrumentation, validation, and transfer of analytical methods. En: Miller J.M., Crowther J.B. (eds.), Analytical Chemistry in a GMP environment: a practical guide. John Wiley and Sons, New York, pp. 423-458. 17. Westra A.N., Bourne S.A., Esterhuysen C., Koch K.R. 2005. Reactions of halogens with Pt(II) complexes of N-alkyl- and N,N-dialkyl-N-benzoylthioureas: oxidative addition and formation of an I2 inclusion compound. Dalton Transactions, 12: 2162-2172. 18. Konu J., Chivers T., Schatte G., Parvez M., Laitinen R.S. 2005. Formation of N-I charge-transfer bonds and ion pairs in polyiodides with imidotellurium cations. Inorganic Chemistry, 44(8): 2973-2982. 19. Refat M.S., Teleb S.M., Gravcheb I. 2005. Charge-transfer interaction of iodine with some polyamidoamines. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 61(1-2): 205-211.

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