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EVALUACIN DE PRODUCTOS DE NUEVA FORMULACIN CON ESTEROLES INCORPORADOS,
APLICABLES A CONTROLAR TRASTORNOS METABLICOS ASOCIADOS CON FACTORES DE RIESGO

CARDIOVASCULAR
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EVALUACIN DE PRODUCTOS DE NUEVA FORMULACION CON ESTEROLES
INCORPORADOS, APLICABLES A CONTROLAR TRASTORNOS METABOLICOS
ASOCIADOS CON FACTORES DE RIESGO CARDIOVASCULAR

Informe Final
Junio de 2004

Facultad de Ciencias Experimentales y de la Salud
Universidad San Pablo-CEU

DEPARTAMENTOS PARTICIPANTES

Departamento de Fisiologa, Morfologa y Ciencias de la Alimentacin (Seccin de Nutricin,
Bromatologa y Diettica)
Departamento de Biologa Celular, Bioqumica y Biologa Molecular (Seccin de Bioqumica
y Biologa Molecular)

EQUIPO INVESTIGADOR

Gregorio Varela Moreiras (Coordinador)
Elena Alonso Aperte (Seccin de Nutricin, Bromatologa y Diettica)
Gonzalo Martn Pea (Seccin de Nutricin, Bromatologa y Diettica y Hospital General de
Mstoles)
Henar Ortega (Seccin de Bioqumica y Biologa Molecular)
Mara Garca de Pablo (Seccin de Bioqumica y Biologa Molecular)
Mara Achn y Tun (Seccin de Nutricin, Bromatologa y Diettica)
ngela Garca Gonzlez (Seccin de Nutricin, Bromatologa y Diettica)
ngeles Arrate Garca (Seccin de Nutricin, Bromatologa y Diettica)

1. DISEO EXPERIMENTAL
El Proyecto consta de una parte de Anlisis sensorial, en la que se pretende evaluar las
caractersticas organolpticas y la aceptacin de una leche experimental, y una parte de
ensayo en voluntarios, en la que se pretende evaluar el efecto del consumo de la leche
experimental. Las voluntarias se constituyeron en un grupo de mujeres en menopausia, en las
que se evalu el efecto del consumo de la leche experimental sobre el perfil de los principales
lpidos sanguneos y otros factores de riesgo cardiovascular, as como factores nutricionales,
antropomtricos y dietticos relacionados.

1.1. ANLISIS SENSORIAL

Se reclutaron un total de 102 catadores cuyo nico requisito era ser consumidor
habitual y comprador potencial del producto a ensayar. Se realizaron dos tipos de pruebas:
- Pruebas discriminativas: para ver si los consumidores diferencian la leche
enriquecidas frente a la no enriquecida.
- Pruebas afectivas: el consumidor, en este tipo de pruebas, expresa su reaccin
subjetiva ante el producto, indicando si le gusta o le disgusta, si lo acepta o lo rechaza.
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1.2. ENSAYO EN VOLUNTARIOS

SUJETOS SELECCIONADOS Y CRITERIOS DE INCLUSIN

Las mujeres candidatas a participar en el estudio fueron mujeres sanas que acudieron a
la consulta de menopausia del Hospital de Mstoles donde el/la Gineclogo/a les inform
brevemente de la posibilidad de participar en el mismo y les facilit la hoja de informacin
tras lo que se les remiti al Dr. Martn Pea quien les explic la finalidad del estudio, la
posibilidad de participar en el mismo y el calendario de pruebas analticas.

Se reclutaron 25 mujeres postmenopasicas sanas, con edades comprendidas entre 25
y 65 aos, a travs de los mdicos participantes en el estudio, seleccionadas tras examinar los
criterios de inclusin/exclusin correspondientes. Del total de participantes reclutados una
mujer reclutada en el mes de Julio rechaz en el mes de Septiembre participar en el estudio, y
otra abandon el mismo a los 15 das por problemas familiares. En total el estudio se extendi
desde los meses de Julio a Diciembre de 2003.

Criterios de Inclusin. Fue necesario la ausencia de criterios de exclusin y la firma
del consentimiento informado.

Criterios de Exclusin. Presencia de alguna de las siguientes enfermedades y/o
condiciones:
- Historia clnica compatible con intolerancia a lactosa.
- Aversin a la leche
- Alergia a los productos lcteos
- Colesterol srico < 220 mg/dl
- Colesterol srico >260 mg/dl
- Triglicridos > 200 mg/dl
- Cardiopata isqumica o enfermedad compatible con arteriosclerosis
- Insuficiencia cardiaca
- Insuficiencia respiratoria
- Apnea del sueo
- Diabetes mellitus tipo I o tipo II
- Hipotiroidismo
- Sndrome nefrtico o enfermedad renal crnica
- Hepatopata crnica
- Hepatitis aguda
- Enfermedad del tejido conectivo
- Fibromialgia
- Trastornos de la conducta alimentaria
- Bajo peso: IMC < 20
- Obesidad con IMC >30
- Enfermedad sea degenerativa con IMC>25
- Bypass gstrico
- Gastrectoma
- Sndrome de colon irritable
- Enfermedad inflamatoria intestinal
- Enfermedades que cursen con malabsorcin
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- Infeccin por HIV conocida (no se realizar determinacin de HIV)
- Fumadora activa
- Alcoholismo
- Gammata monoclonal
- Mieloma
- Linfoma
- Cncer tratado en los 5 aos anteriores
- Enfermedades neurolgicas que cursen con demencia o dficit neurolgico que impida
acudir al hospital
- Tratamiento farmacolgico con Anticoagulantes orales, Tiacidas, Betabloqueantes,
Ciclosporina, Glucocorticoides, Resincolestinamina, Estatinas, Fibratos, Colestipol,
Estrgenos, Progestgenos, Esteroides anabolizantes

Violacin de los criterios de inclusin. Los criterios de inclusin se respetaron de
manera explcita.
Tratamientos concomitantes permitidos y prohibidos. Se permiti a los pacientes
tomar cualquier medicacin concomitante que precisaron, excepto la especifica en los
criterios de exclusin.

DESARROLLO TEMPORAL DEL ESTUDIO

El estudio const de una fase de inclusin de una semana, seguido de tres periodos de
un mes cada uno en que se utiliz la leche con fitoesteroles el primer y tercer mes con un mes
de lavado entre ambos meses experimentales.

Fase de seleccin

A las mujeres incluidas en el estudio se les realiz en la semana siguiente a la
inclusin en el mismo:
- Historia clnica completa.
- Estudio Antropomtrico
- Evaluacin del estado nutricional mediante el estudio cualitativo y cuantitativo de la
dieta a travs de un Cuestionario de Frecuencia de Consumo de Alimentos, de tipo
general, validado y Encuesta Recuerdo de 24 horas. Se incluyeron, adems, los items
necesarios para cuantificar el consumo de alimentos de tipo funcional.
- Dos determinaciones analticas separadas en un intervalo de una semana, que se
analizaron en los laboratorios de la Universidad San Pablo CEU. En el caso de que el
sujeto se ajustase a los parmetros bioqumicos antes indicados, la muestra se
identific como control 0 o inicial.

Primer periodo: Periodo experimental con suplementacin de 3 g/da de
fitoesteroles: duracin 28 das

Las mujeres seleccionadas recibieron en su domicilio la leche correspondiente al
primer periodo de estudio (leche enriquecida con fitoesteroles, 30 envases de 750 ml, junto
con un vaso dosificador de 250 ml), indicndoles la pauta de ingesta: diariamente 3 tomas de
250 ml en desayuno, comida y cena durante un mes. A los 14 das se les cit en la consulta
para evaluar la adherencia al tratamiento a travs del nmero de envases consumidos y
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detectar posibles efectos adversos. En el da 28 del estudio se realiz un nuevo estudio
diettico a travs de Encuesta Recuerdo de 24 horas, evaluacin antropomtrica y una nueva
extraccin de sangre que se proces en los laboratorios de la Universidad San Pablo CEU,
identificada como control 1.

Segundo periodo: Periodo de lavado o Periodo de leche sin fitoesteroles: duracin
28 das

Tras completar el periodo de estudio con la leche enriquecida con fitoesteroles, las
voluntarias recibieron en su domicilio la leche de la segunda fase de estudio (leche control, 30
bricks de 750 ml, junto con un vaso dosificador de 250 ml), as como las indicaciones de
administracin: 3 tomas diarias de 250 ml cada una repartidas en desayuno, comida y cena
durante un mes. A los 42 das desde su inclusin en el estudio se les cit en la consulta para
evaluar la adherencia al tratamiento, cuantificado por nmero de envases consumidos y
detectar posibles efectos adversos. En el da 56 desde su inclusin en el estudio se realiz un
nuevo estudio diettico a travs de Encuesta Recuerdo de 24 horas, evaluacin antropomtrica
y una nueva extraccin de sangre, para su procesamiento en los laboratorios de la Universidad
San Pablo CEU.

Tercer periodo: Periodo experimental con suplementacin de 3 g/da de
fitoesteroles: duracin 28 das
Tras completar el periodo de lavado con la leche libre de fitoesteroles, los voluntarios
recibieron en su domicilio la leche de la tercera fase de estudio (leche enriquecida con
fitoesteroles, 30 envases de 750 ml, junto con un vaso dosificador de 250 ml), as como las
indicaciones de administracin: 3 tomas diarias de 250 ml cada una repartidas en desayuno,
comida y cena durante un mes. A los 70 das desde su inclusin en el estudio se les cit en la
consulta para evaluar la adherencia al tratamiento, cuantificado por nmero de envases
consumidos y detectar posibles efectos adversos. En el da 84 desde su inclusin en el estudio
se realiz un nuevo estudio diettico a travs de Encuesta Recuerdo de 24 horas, evaluacin
antropomtrica y una nueva extraccin de sangre, para su procesamiento en los laboratorios
de la Universidad San Pablo CEU.
En sntesis, el diseo experimental queda reflejado en el siguiente esquema:

Entre las medidas para garantizar y valorar el cumplimiento, el investigador o un
miembro autorizado del equipo estim el cumplimiento del paciente en cada visita,
fundamentalmente a travs de la recogida de los tapones de los envases y corroborando la
informacin en las encuestas dietticas.

Ingesta de leche
desnatada con
fitoesteroles
Ingesta de leche
desnatada
Ingesta de leche
desnatada con
fitoesteroles
Inicial Fitoesteroles Lavado Fitoesteroles II
Da 0 28 56 84
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2. MATERIALES Y MTODOS

Se realizaron dos tipos de pruebas:

A. Pruebas discriminativas: Con el fin de evaluar si los consumidores diferencian la
leche enriquecida frente a la no enriquecida. Concretamente se realizaron dos tipos de
pruebas.
- Prueba triangular: se presentaron tres muestras, de las cuales dos eran iguales y se les
pidi que identificaran la muestra diferente.
- Prueba duo-tro: Se presentaron tres muestras, de las cuales dos eran iguales. Una de
las iguales se present como patrn y se les pidi que determinaran cul de las otras
dos es idntica al patrn.

B. Pruebas afectivas: El consumidor, en este tipo de pruebas, expresa su reaccin
subjetiva ante el producto, indicando si le gusta o le disgusta, si lo acepta o lo rechaza.
Realizados dos tipos de pruebas.
- Pruebas de preferencia: se les presentaron dos tipos de muestras, una de leche
desnatada enriquecida y otra de leche desnatada no enriquecida y se les pidi que
indicaran cul de las dos preferan.
- Pruebas de medicin del grado de satisfaccin: se les present una muestra de leche
desnatada enriquecida y se les pidi que valorasen una serie de descriptores,
caractersticos de cada atributo, de la leche segn la normativa de la International
Dairy Federation [1].


PRUEBAS ANALTICAS EN SANGRE

Obtencin de las muestras

La sangre se recogi por venopuncin tras ayuno de 8 horas, en tubos Vacutainer con
EDTA-Na2 (1 mg/ml, concentracin final), como anticoagulante y quelante de cationes
divalentes libres. Desde este momento, y durante su manipulacin, las muestras se
mantuvieron en bao de hielo. El plasma se separ del componente celular por centrifugacin
a 3000 g durante 20 minutos a 4C y se dividi en distintas alcuotas segn las
determinaciones a realizar, guardndose a -80C hasta el momento de su anlisis. El tiempo
que transcurri desde la obtencin de la muestra hasta la separacin del plasma fue inferior a
2 horas para evitar la degradacin de determinados analitos [2]. Aunque se ha descrito que la
purificacin de las lipoprotenas a partir de plasma congelado a -80C, no modifica la
estructura de las mismas [3-4] la alcuota de plasma destinada a la purificacin de
lipoprotenas se proces inmediatamente.

Aislamiento de las lipoprotenas

Las lipoprotenas se obtuvieron por ultracentrifugacin secuencial en equilibrio de
densidad a partir de plasma fresco (sin congelar) [5-6]. Para ello, la densidad del plasma se
fue ajustando a cada una de las densidades lmite entre las diferentes familias de
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lipoprotenas, de manera que al ultracentrifugar floten solamente aquellas cuya densidad sea
menor a la que se ajust el plasma. Brevemente, por ultracentrifugacin del plasma a su
densidad normal (d=1,006) durante 2 horas a 100.000 rpm, se obtienen los quilomicrones, si
los hubiera, y las VLDL. El infranadante de la anterior centrifugacin se ajusta con KBr a una
densidad de 1,063 g/ml y se somete a centrifugacin durante 3 horas y 100.000 rpm, lo que
permite separar las LDL. Finalmente, el infranadante resultante se lleva a una densidad de
1,215 g/ml para obtener las HDL; en esta ocasin, el proceso de ultracentrifugacin se
prolonga durante 6 horas, tiempo necesario para lograr una buena separacin entre las HDL y
el resto de los componentes plasmticos. Para minimizar la oxidacin de las mismas durante
su purificacin y en consecuencia su composicin lipdica, todas las soluciones utilizadas
contuvieron EDTA 1mmol/L [7-8].

Valoracin de los lpidos plasmticos

La concentracin de colesterol total, colesterol libre, triglicridos y fosfolpidos, tanto
en el plasma como en cada una de las fracciones lipoprotecas purificadas, se determin a
travs de mtodos enzimticos (Spinreact). La concentracin de colesterol esterificado se
estim como la diferencia entre el colesterol total y el colesterol libre (Wako). El colesterol
unido a HDL se determin mediante precipitacin con cido wolfrmico y la concentracin de
colesterol unido a LDL se estim a partir de la frmula de Friedewald
( cLDL=CT-(TG/5)-cHDL (mg/dl) [9]. En todas las valoraciones, la variacin inter-ensayo se
control a travs de sendos plasmas control de alta y baja concentracin (Spinreact).

Valoracin de vitaminas

La concentracin de vitaminas liposolubles A y E se evalu mediante HPLC en
gradiente y deteccin por UV/visibles, siguiendo el mtodo descrito [10]. Se determinaron
concentraciones plasmticas de retinol y retinol palmitato (vitamina A), R-caroteno
(carotenoide provitamina A), licopeno (carotenoide no provitamina A) y S-tocoferol y T-
tocoferol (vitamina E). Los resultados se validaron empleando en cada anlisis el suero
control Standard Reference Materials NIST.

cido Flico. Las muestras fueron analizadas mediante una tcnica de inmunoanlisis
quimioluminiscente de micropartculas (CMIA) de protena folato-ligante para la
determinacin cuantitativa de folato en plasma, utilizando un analizador ARCHITECT system
(Abbott).
Valoracin de otros marcadores de riesgo cardiovascular

Homocistena. Todas las muestras fueron analizadas mediante la tcnica de
inmunoensayo automtico basado en la fluorescencia polarizada y que utiliza un anticuerpo
monoclonal contra S-adensilhomocistena

[11], utilizando un analizador IMx (Abbott). La
sensibilidad del ensayo es de < 0,50mol/L.

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PRUEBAS DE ANTROPOMETRA

Se han realizado las siguientes medidas y pruebas antropomtricas:

- Peso y altura: se realizaron las medidas en una bscula romana con tallmetro
incorporado, con precisin de 200g para el peso y de 1mm para la altura. La altura de
vertex se realiz con el sujeto descalzo, en bipedestacin, con los talones juntos y
plano de Frankfurt en posicin horizontal.
- Indice de masa corporal: se determin a partir de stas de acuerdo a la frmula de
Quetelt.

[ ]
2
) (
) (
m altura
Kg peso
IMC =
El ndice de masa corporal es el mejor indicador de la relacin peso altura y los
valores de referencia utilizados son los establecidos por la OMS [12]:
Obesidad IMC>30
Sobrepeso 25<IMC<29,9
Normal 20<IMC<24,9
Desnutricin IMC<19,9

- Composicin corporal: para determinarla se realizaron las siguientes medidas:
Pliegues subcutneos: Todos los pliegues se midieron en la parte no dominante
del cuerpo, mediante lipocalibre de presin constante 10 g/mm2, tipo Holtain,
precisin 2 mm.
o Pliegue tricipital: se mide en el punto medio entre el borde inferior del
acromion y el olcranon, en la cara posterior del brazo.
o Pliegue bicipital: se mide en la cara anterior del brazo a nivel del punto medio
sobre el vientre del msculo bceps.
o Pliegue subescapular: se mide en la zona inmediatamente por debajo del borde
de la escpula, siguiendo una lnea imaginaria que forme un ngulo de 45 con
la columna vertebral.
o Pliegue suprailaco: se mide en la lnea media axilar por encima de la cresta
ilaca anterosuperior.
o Pliegue suprailaco espinal: se mide 2 cm superior a la espina ilaca anterior,
haciendo un ngulo de 45 con la lnea medioaxilar.

Con estos pliegues y utilizando la frmula de Durnin Womerley [13], se estim el porcentaje
de grasa corporal total

( )
|
.
|
\
|
SPIE SUB, BT, PT, log 0,074 - 1,7665 = (varon) d
100 4,5 -
d
4,95
= GC %
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GC: grasa corporal total
PT: pliegue tricipital (mm)
BT: pliegue bicipital (mm)
SUB: pliegue subescapular (mm)
SPIE: pliegue suprailaco espinal (mm)

Circunferencias: se tomaron con una cinta mtrica inextensible, de fibra de vidrio.
Recogimos las siguientes medidas:
o Circunferencia de la cintura: se mide en el punto medio entre el ltimo borde
costal y la cresta ilaca, aplicando la cinta mtrica horizontalmente.
o Circunferencia de la cadera: se mide en el punto de mxima circunferencia
sobre las nalgas.
o Circunferencia del brazo: se mide en el punto medio entre el borde inferior del
acromion y el olcranon. El brazo debe de estar relajado y con el codo
formando un ngulo de 90
o Circunferencia de la mueca: se mide donde se dobla, distal al proceso
estiloide, en el brazo derecho.

Se calcul el ndice Cintura/ Cadera a efectos de determinar si el acumulo de grasa era de
patrn central (ICC > 0,80) o perifrico [14].

ESTUDIO DE LA DIETA

En el momento de comenzar el estudio, se realiz a todas las mujeres participantes un
cuestionario de frecuencia de consumo de alimentos de tipo general (Cuestionario adaptado
de Martn Moreno [15]) con especial nfasis sobre el consumo de alimentos enriquecidos y/o
fuente de fitoesteroles y una Encuesta recuerdo de 24 horas. En cada visita se realiz
asimismo una Encuesta recuerdo de 24h. Todas las encuestas dietticas se realizaron mediante
entrevista personal.

El consumo de alimentos se transform, a travs del programa informtico
Alimentacin y Salud diseado por Jos Mataix Verd y comercializado por ASDE
informtica (versin 0698.0406), en ingesta de nutrientes para poder compararlos con las
ingestas recomendadas y los objetivos nutricionales [16-19].

2.3. TRATAMIENTO DE DATOS

El anlisis estadstico se realiz mediante el programa SPSS v. 11.5. Se determinaron
parmetros descriptivos de centralizacin, dispersin y la normalidad de la distribucin de
cada variable, mediante la prueba de Kolomogorov-Smirnov. Los resultados se compararon
mediante la aplicacin de la T de Student para datos apareados y prueba de Wilcoxon, en
aquellas variables cuya distribucin era no normal. Las pruebas de anlisis sensorial fueron
( )
|
.
|
\
|
SPIE SUB, BT, PT, log 0,0717 - 1,1567 = (mujer) d
100 4,5 -
d
5,01
= GC %
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analizadas mediante pruebas de _
2
. Las diferencias se consideraron estadsticamente
significativas cuando p<0,05.

3. RESULTADOS

Se han realizado las pruebas sensoriales en una muestra total de 102 catadores, cuyo
nico requisito era ser consumidor habitual y comprador potencial del producto a ensayar. A
continuacin se muestran los resultados obtenidos en las pruebas discriminativas, cuyo
objetivo es evaluar si los consumidores son capaces de diferenciar la leche enriquecida con
fitoesteroles de la no enriquecida. En las siguientes tablas se muestran los resultados
considerando el panel total de catadores, clasificndolo en cuanto a su forma habitual de
consumo de leche y teniendo en cuenta el sexo. No se llega a alcanzar el nmero de
respuestas mnima necesario para establecer una diferencia estadsticamente significativa en
ninguno de los casos. Por tanto, concluimos que el panel de catadores no logra diferenciar el
tipo de leche que se les presenta.

Tabla 1. Pruebas Discriminativas. Resultados del panel de catadores total (102
catadores)

Prueba Triangular Prueba Duo-Tro
NRespuestas 102 102
NRespuestas correctas 30 31
NRespuestas para exista
diferencia significativa
43 59
Tabla 2. Pruebas Discriminativas. Resultados en funcin de la forma de consumo
habitual de leche

Toman leche solaNo toman leche solaToman leche solaNo toman leche sola
NRespuestas 41 61 41 61
NRespuestas correctas15 15 17 14
NRespuestas para
exista diferencia
significativa
19 28 26 37
Tabla 3. Pruebas Discriminativas. Resultados en funcin del sexo

Hombres Mujeres Hombres Mujeres
NRespuestas 26 76 26 76
NRespuestas correctas 5 25 7 24
NRespuestas para exista
diferencia significativa
13 32 18 43
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En ningn caso se observan diferencias significativas, por tanto nuestro panel de
catadores no logra diferenciar los dos tipos de leche.

Las pruebas afectivas pretenden valorar la reaccin subjetiva del consumidor al
producto ensayado. En la Grfica 1 se representa la preferencia de los catadores al
presentarles la leche adicionada de fitoesteroles y la leche sin adicin de los mismos. En
conjunto se observa una marcada preferencia hacia la leche adicionada de fitoesteroles, siendo
sta estadsticamente significativa especialmente en la valoracin del aspecto y el color.

Grfica 1. Pruebas Afectivas de Preferencia: Leche desnatada enriquecida frente a leche
desnatada no enriquecida

Leche desnatada enriquecida vs Leche desnatada no enriquecida
0
20
40
60
80
Sabor
Color
Olor
Aspecto
Enriquecida No enriquecida
En las pruebas de medicin del grado de satisfaccin, se les present a los catadores
una muestra de leche desnatada enriquecida con fitoesteroles y se les pidi que valorasen una
serie de descriptores, caractersticos de cada atributo de la leche segn la normativa de la
International Dairy Federation nutricionales [1]. Los resultados se muestran en las siguientes
grficas. A la hora de valorar el olor de la leche en estudio destaca el olor a leche pero a otro
olor diferente, junto con un olor a nada o no claro. En cuanto al sabor, se ve una
tendencia clara a decir que les recuerda al sabor de la leche pero con un regusto diferente.
En el caso del aspecto, el panel de catadores destaca la presencia de una superficie
heterognea junto con grasa en la pared. Por ltimo, a la hora de valorar el color de la
leche estudio, hay una tendencia a declinarse por el color blanquecino o amarillento.

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Grfica 2. Pruebas de medicin del grado de satisfaccin de la leche enriquecida con
fitoesteroles. Valoracin del Olor

0
5
10
15
20
25
30
Me recuerda a leche habitual
A leche, pero olor diferente
Queso
Acaramelado
Acartonada
Aceite
Jabn Fruta
Mohoso
Rancio
No claro
Nada
Otros

fitoesteroles. Valoracin del Sabor

0
10
20
30
40
50
Me recuerda a leche habitual
A leche, pero regusto diferente
Aguado
Inspido
Amargo
Cocido
Acaramelado
Quemado
Acartonado
Sabor qumico
Sabor a comida
Sabor extrao
Fruta
Metlico Mohoso
Aceitoso
Jabonoso
Oxidado
Salado
cido
Agrio
Seboso
Levadura
Rancio
Aejo
No claro
Otros

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fitoesteroles. Valoracin del Aspecto

0
10
20
30
40
S. Heterogenea
Partculas extraas
Capa de crema
Masa de crema Sedimentacin
Multitud de partculas de grada
Grasa en la pared

fitoesteroles. Valoracin del Color

0
10
20
30
40
50
60
Blancecino
Grisceo
Amarillento Marrn
Color atpico


PRUEBAS ANALTICAS EN SANGRE

No se produjo hemlisis de las muestras ni transcurrieron ms de dos horas desde la
obtencin de la sangre hasta la separacin del plasma del componente celular, lo que permite
asegurar la estabilidad de los analitos valorados. Los resultados se encuentran avalados por el
empleo de dos sueros control (normal y patolgico) de concentracin certificada (Spinreact).
La variabilidad inter-ensayo e intra-ensayo para cada analito estudiado (tabla 4) se encuentra
dentro de lo aceptado por el Comit Cientfico de la Comisin de Lpidos y Lipoprotenas de
la Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular [20].

En la tabla 5 se muestran las concentraciones plasmticas de lpidos de cada perodo.
Los resultados encontrados en condiciones iniciales en la poblacin estudiada, coinciden con
lo descrito en la bibliografa. Inicialmente todas las mujeres analizadas mostraron una
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concentracin de colesterol superior a 200 mg/dl y de cLDL por encima de 100 mg/dl. En el
70% de los casos, la concentracin de triglicridos estuvo por debajo de 100 mg/dl, mientras
que la concentracin de cHDL fue en todos los casos superior a 40 mg/dl. En 3 mujeres la
relacin colesterol/cHDL fue menor de 3 y en el 65% se encontr por encima de 4.

Tabla 4. Coeficiente de variacin inter-ensayo de un suero control normal y patolgico

Control normal Control patolgico
n mg/dl C.V. n mg/dl C.V.
Colesterol 30 89,0 8,4 % 30 199,1 5,5 %
Triglicridos 20 97,1 4,4 % 27 168,1 5,0 %
Fosfolpidos 17 119,9 11,4 % 15 189,6 12,0 %
Colesterol libre 17 22,4 5,7 % 19 51,6 4,4 %
Apolipoprotena A 6 145,1 2,7 %
Apolipoprotena B 6 126,5 2,2 %
Tabla 5. Parmetros lipdicos en el plasma

INICIAL FITOESTEROLES I LAVADO FITOESTEROLES II
(mg/dl) n Media D.E.

n Media D.E.

n Media D.E.

n Media D.E.

p
Colesterol 24 250,6 27,3
a
23 224,6 25,0
b
23 220,9 31,7
b
22 218,9 31,9
b
0,0008
Triglicridos 24 78,2 36,4

23 78,1 34,0

23 68,1 30,7

22 78,3 48,5

n.s.
Fosfolpidos 24 184,4 50,3

23 191,9 22,5

23 173,8 31,4

22 173,1 24,1

n.s.
Colesterol libre 24 67,6 17,1

23 68,8 12,3

23 75,3 13,4

22 65,6 10,6

n.s.
Colest.esterificado 24 183,0 31,1
a
23 155,7 21,4
b
23 145,5 28,5
b
22 153,3 25,0
b
0,0000
cHDL
1
24 59,0 15,9
a
23 56,2 9,1
a
23 51,5 10,5
ab
22 46,0 9,1
a
0,0013
cLDL
2
24 176,0 22,1
a
23 152,7 22,0
b
23 155,7 30,9
b
22 157,3 29,5
ab
0,0132
Apolipoprot. A 24 146,6 23,3

23 143,0 20,9

23 139,0 20,1

22 141,1 20,0

n.s.
Apolipoprot. B 24 117,1 20,7

23 110,4 18,9

23 113,7 18,5

22 110,7 20,1

n.s.
col/cHDL 24 4,44 0,87
ab
23 4,08 0,74
a
23 4,43 1,00
ab
22 5,55 3,25
b
0,0337
cLDL/cHDL 24 1,43 0,78
ab
23 1,44 0,71
a
23 1,40 0,78
ab
22 1,95 1,34
b
0,0355
apoB/apoA 24 0,820 0,169

23 0,779 0,128

23 0,823 0,173

22 0,796 0,171

n.s.
cLDL/apoB 24 1,53 0,24

23 1,40 0,21

23 1,38 0,25

22 1,45 0,24

n.s.
Los resultados se expresan como media y desviacin estndar
1
cHDL: colesterol unido a HDL
2
cLDL: colesterol unido a LDL
Superndices con letras diferentes indican diferencias significativas
n.s.: no significativo

La administracin de 3 g diarios de fitoesteroles a travs de la ingesta de 750 ml de
leche fue capaz de inducir una reduccin de un 11% en la concentracin de colesterol total y
de un 14% en la concentracin de cLDL respecto a las concentraciones iniciales. El efecto de
los fitoesteroles tambin afect a la concentracin de colesterol esterificado, produciendo una
reduccin de un 10% respecto a los valores iniciales. Aunque la concentracin de cHDL al
final del estudio fue significativamente inferior a la presente el inicio del estudio, no se
apreci una reduccin significativa del mismo durante la primera fase de ingesta de
fitoesteroles ni posteriormente en la fase de lavado.

CARDIOVASCULAR
14
En las VLDL purificadas por ultracentrifugacin, la administracin de fitoesteroles no
ejerci ningn efecto estadsticamente significativo sobre su composicin lipdica (tabla 6).

Tabla 6. Parmetros lipdicos en las VLDL

INICIO FITOESTEROLES I LAVADO FITOESTEROLES II
n media D.E. n media D.E. n media D.E. n media D.E. p

23 16,4 8,3

23 13,7 10,2

22 16,9 17,1

n.s.

23 61,2 31,0

23 47,8 26,9

22 61,2 51,7

n.s.

23 19,0 10,5

23 16,9 12,0

22 18,5 20,3

n.s.

23 7,70 4,39

23 6,69 4,98

22 6,35 8,04

n.s.
Colesterol esterif. 24 9,77 7,74

23 8,72 6,77

23 7,03 6,21

22 10,5 10,2

n.s.
%Col. Libre 24 43,8 21,2
ab
23 54,1 33,1
a
23 47,8 16,9
ab
22 33,8 16,9
b
0,0289
%Col. Esterificado 24 56,2 21,2
ab
23 45,9 33,1
a
23 52,2 16,9
ab
22 66,2 16,9
b
0,0289

La ingesta de fitoesteroles produjo una reduccin significativa de la concentracin de
colesterol transportado en las LDL respecto a la existente en el plasma en las fases iniciales y
de lavado (tabla 7). No se apreci un "efecto rebote" como consecuencia de la retirada de los
fitoesteroles de la leche, como se deduce que tras el periodo de lavado la concentracin de
colesterol en las LDL no aument; al final del estudio el descenso en la concentracin de
colesterol lleg a ser de un 20%. La concentracin de colesterol esterificado disminuy tras la
ingesta de fitoesteroles en mayor proporcin que lo hizo la concentracin de colesterol libre.

Tabla 7. Parmetros lipdicos en las LDL

n media D.E. n media D.E. n media D.E. n media D.E. p
a
23 126,4 18,3
ab
23 120,2 23,4
b
22 112,6 19,3
b
0,0016
a
23 21,9 4,6
b
23 23,2 4,0
ab
22 27,6 10,6
a
0,0221
ab
23 69,8 11,1
ab
23 60,5 12,4
ab
22 59,7 11,3
b
0,0120

23 45,9 14,5

23 48,6 14,6

22 38,8 10,8

n.s.
a
23 80,5 12,6
ab
23 71,6 17,9
b
22 73,8 17,0
ab
0,0045
%Col. Libre 24 31,7 9,5
a
23 35,9 7,7
ab
23 40,3 8,7
b
22 34,8 9,2
ab
0,0138
%Col. esterificado 24 68,3 9,5
a
23 64,1 7,7
ab
23 59,7 8,7
b
22 65,2 9,2
ab
0,0138

Respecto a la concentracin de colesterol transportado en la fraccin de HDL, se
observa un incremento tras la administracin de fitoesteroles, aunque no alcanz significacin
estadstica (tabla 8). El incremento en la concentracin de triglicridos y colesterol
esterificado observado tras el tratamiento con fitoesteroles probablemente refleja un
incremento en el tamao de estas lipoprotenas.

CARDIOVASCULAR
15
Tabla 8. Parmetros lipdicos en las HDL

n media D.E. n media D.E. n media D.E. n media D.E. P

23 65,4 18,4

23 54,3 21,5

22 54,6 15,5

n.s.
a
23 5,47 0,87
a
23 5,52 4,63
b
22 5,90 3,57
b
0,0008

23 63,9 15,9

23 46,9 17,0

22 46,0 11,4

n.s.

23 17,3 4,2

23 16,3 7,8

22 13,8 3,8

n.s.

23 48,1 15,3

23 37,9 14,6

22 40,8 14,6

n.s.
%Col. Libre 24 27,1 8,4

23 27,1 5,3

23 29,7 5,8

22 26,2 7,9

n.s.
%Col. esterificado 24 72,9 8,4

23 72,9 5,3

23 70,3 5,8

22 73,8 7,9

n.s.

La concentracin de vitaminas liposolubles A y E encontrada en esta poblacin
coincide con la descrita por otros autores [21-23]. No se detect ningn caso con deficiencia
en ninguna de las vitaminas estudiadas. La administracin de fitoesteroles no afect a los
niveles de retinol (vitamina A) ni de su precursor carotenoide |-caroteno, que se mantuvieron
constantes a lo largo del estudio (tabla 9). Esto indica que con la concentracin empleada en
este estudio, la administracin de fitoesteroles no interfiere en la absorcin de vitamina A o
de |-caroteno, de carcter marcadamente apolar, contrastando con los resultados encontrados
en otros estudios en los que se aprecia una reduccin en la concentracin de carotenoides [23-
25]. Sin embargo, la ingesta durante un mes de fitoesteroles redujo significativamente la
concentracin de o-tocoferol (vitamina E) respecto a la encontrada inicialmente, reduccin
que se mantuvo durante la fase de lavado hasta el final del estudio; la misma tendencia se
observ con la concentracin de -tocoferol (vitamina E). As mismo, se apreci una
reduccin en la concentracin de licopeno (carotenoide no provitamina A) tras la
administracin de fitoesteroles respecto a los valores iniciales, reduccin que alcanz
significacin estadstica tras la segunda administracin de los esteroles (fitoesteroles II).

Tabla 9. Concentracin de vitaminas liposolubles A y E y carotenoides en plasma en las
distintas fases del estudio

(\mol/L) n mediaD.E. n mediaD.E. n mediaD.E. n mediaD.E.
Retinol 24 2,470,62 23 2,420,69 23 2,300,52 22 2,280,45 n.s.
-tocoferol 24 3,060,86
a
23 3,130,62
a
23 2,440,45
b
22 2,780,94
ab
0,0840
o-tocoferol 24 47,31,4
a
23 34,45,9
b
23 31,96,3
b
22 32,67,3
b
0,0000
retinol palmitato24 0,0700,040
ab
23 0,0630,035
ab
23 0,0350,029
a
22 0,0880,069
b
0,0029
Licopeno 24 0,6170,241
a
23 0,4500,173
ab
23 0,5130,340
ab
22 0,4180,219
b
0,0393
R-caroteno 24 1,091,07

23 0,3641,023 23 0,7910,516 22 0,7820,681 n.s.

Debido a la alta relacin existente entre los niveles de vitaminas liposolubles y de
lpidos, la concentracin de vitaminas se corrigi por la concentracin de lpidos (entendiendo
como tales la suma de colesterol y de triacilglicridos), con el fin de determinar si el efecto
CARDIOVASCULAR
16
observado sobre las vitaminas podra estar mediado por el efecto de los fitoesteroles sobre la
concentracin sangunea de otros lpidos. De hecho, para algunas vitaminas como el caso de
o-tocoferol, es ste valor el que define con ms precisin la existencia de una deficiencia
vitamina E [26]. Como se observa en la tabla 10, se confirma que la administracin de
fitoesteroles no altera la concentracin de vitamina A, ya que incluso tras corregir por la
concentracin de colesterol y triacilglicridos, no se apreciaron cambios en la concentracin
de retinol y |-caroteno a lo largo del estudio. Por su parte, las diferencias apreciadas en la
concentracin de licopeno desaparecieron al corregir por la concentracin de lpidos, lo que
indica que el descenso apreciado en trminos absolutos podra estar mediado por la reduccin
ejercida por los esteroles sobre la concentracin de colesterol y en especial de cLDL,
lipoprotena en la que principalmente se transporta el licopeno. Sin embargo, la
administracin durante un mes de la leche enriquecida en fitoesteroles redujo
significativamente la concentracin de o-tocoferol corregida por lpidos lo que indica que el
efecto producido por los fitoesteroles sobre la concentracin de vitamina E no est mediado
por la reduccin en la concentracin de colesterol. Este efecto se ha descrito en un trabajo,
atribuyndose especficamente a la accin de sitoestanol [27].

Tabla 10. Concentracin de vitaminas liposolubles A y E y carotenoides corregidas por
lpidos en plasma en las distintas fases del estudio.

(\mol/
mmol lpidos) n mediaD.E. n mediaD.E. n mediaD.E. n mediaD.E.
Retinol 24 0,3360,078 23 0,3640,106 23 0,3590,089 22 0,3550,085 n.s.
-tocoferol 24 0,4200,124
ab
23 0,4730,100
a
23 0,3780,068
b
22 0,4290,143
ab
0,0482
o-tocoferol 24 6,441,38
a
23 5,160,70
b
23 4,910,58
b
22 4,960,63
b
0,0000
retinol palmitato24 0,0090,005
ab
23 0,0090,004
ab
23 0,0050,004
a
22 0,0130,009
b
0,0005
Licopeno 24 0,0850,034 23 0,0680,027 23 0,0790,048 22 0,0660,036 n.s.
R-caroteno 24 0,1450,120 23 0,1310,141 23 0,1210,069

22 0,1160,077 n.s.
En cuanto a otros parmetros sanguneos indicativos de riesgo cardiovascular, se
determinaron las concentraciones plasmticas de Homocistena, aminocido recientemente
identificado como factor de riesgo en la enfermedad cardiovascular, y folato, principal
vitamina implicada en la regulacin nutricional de la homocisteinemia. El consumo de leche,
enriquecida o no enriquecida, vase Tabla 11, durante el estudio no provoc diferencias
estadsticamente significativas en cuanto a las concentraciones plasmticas de Homocistena a
lo largo del mismo. En cambio, en cuanto a las concentraciones de folato plasmtico, se
observa una disminucin estadsticamente significativa respecto a los valores iniciales. Este
resultado es difcil de explicar puesto que los fitoesteroles, de naturaleza liposoluble, no
tienen por qu interaccionar con los folatos, de naturaleza hidrosoluble. La modificacin en
las concentraciones de folatos en sangre podran deberse a una disminucin en la ingesta de la
vitamina, aunque en nuestro estudio la ingesta de folatos en el periodo experimental muestra
una tendencia a la disminucin, pero no es realmente estadsticamente significativa.

CARDIOVASCULAR
17
Tabla 11. Concentraciones plasmticas de Homocistena y cido Flico

Homocistena (mol/L) 9,48 2,35 9,29 2,00 9,48 2,99 9,63 3,31
cido flico (ng/mL) 7,33 3,43 6,28 2,90 ** 6,10 2,87 ** 5,78 2,90 **
Valores expresados como la media desviacin estndar.
--Diferencias significativas (p<0,01) respecto a la concentracin inicial.

PRUEBAS DE ANTROPOMETRA

En la Tabla 12 se presentan las caractersticas iniciales de las 23 mujeres, en estado de
menopausia, que participaron en el estudio.

La edad, peso, talla e ndice de Masa Corporal del grupo de voluntarias se corresponde
con valores habituales obtenidos en nuestro laboratorio y correspondientes a mujeres
espaolas en estado de menopausia (edad superior a 45 aos, ndice de masa corporal con
tendencia al sobrepeso y obesidad).

Se estudiaron los posibles cambios en la composicin corporal inducidos por la
intervencin nutricional con leche adicionada de fitoesteroles, haciendo hincapi en el
porcentaje de masa grasa corporal y en la distribucin del tejido adiposo. En la Tabla 13
observamos los parmetros antropomtricos medidos y su comparacin entre valores basales
y valores finales. No se produjo ganancia ni prdida de peso ni variaciones en el
compartimiento graso de forma estadsticamente significativa. Luego el consumo de 750 ml
de leche estudio al da durante un periodo total de tres meses no produce variaciones en la
composicin corporal.

CARDIOVASCULAR
18
Tabla 12. Caractersticas del grupo de voluntarias

N media D.E.
Edad (aos) 23 54,78 5,04
Peso ((kg) 23 69,87 9,17
Talla (cm) 23 159,74 0,04
IMC (kg/m
2
) 23 27,31 3,43
Tabla 13. Antropometra en mujeres antes de comenzar el estudio y al final del mismo

Basal Final
Peso (kg) 70,18 9,53 69,81 10,06
Talla (cm) 159,74 0,05 159,65 0,05
Pliegue bicipital (mm) 25,87 4,56 25,24 5,14
Pliegue tricipital (mm) 13,20 4,91 13,42 4,29
Pliegue subescapular (mm) 24,80 5,57 26,05 6,48
Pliegue suprailiaco (mm) 23,29 5,44 21,89 5,67
Permetro del brazo (cm) 30,61 2,32 30,11 2,10
Permetro de cintura (cm) 88,61 10,20 89,21 9,85
Permetro de la cadera (cm) 106,96 8,11 107,38 7,27
Permetro de la mueca (cm) 16,46 1,39 16,38 1,24
IMC
1
(kg/m
2
) 27,31 3,43 27,24 3,75
ICC
2
0,83 0,05 0,83 0,06
Grasa corporal (%) 40,19 2,29 39,95 3,33
No existen diferencias significativas en la prueba de comparacin de medias.
1
ndice de Masa Corporal
2
ndice Cintura Cadera

ESTUDIO DE LA DIETA

El estudio de la dieta se valor bajo dos premisas fundamentales:
o Determinar si las voluntarias modifican sus hbitos alimentarios en el
transcurso del periodo experimental,
o Evaluar la repercusin de introducir una ingesta habitual de 750 ml de la leche
experimental en los hbitos dietticos y la calidad nutricional de la dieta de las
voluntarias.

La tabla 14 muestra el consumo individual de leche antes de comenzar el estudio y
durante los tres periodos experimentales. Para obtener la cantidad de fitoesteroles deseada, se
recomend el consumo de 750 ml diarios de leche experimental. Puede observarse que
durante el periodo experimental, el consumo de leche es el recomendado en la mayor parte de
las voluntarias, a pesar de que supone un incremento del 87 % en su consumo habitual de
leche.

CARDIOVASCULAR
19
Tabla 14. Consumo diario individual de leche, antes de iniciar el estudio y durante los
tres periodos experimentales

CODIGO
INICIO
(ml/da de leche)
FITOESTEROLES I
(ml/da de leche)
LAVADO
(ml/da de leche)
FITOESTEROLES II
(ml/da de leche)
1 200 750,00 750,00 750,00
2 600 642,86 669,64 669,64
3 200 535,71 562,50 508,93
4 450 750,00 508,93 589,29
5 200 642,86 709,82 776,79
6 600 830,36 723,21 736,61
7 100 750,00 750,00 750,00
8 200 750,00 750,00 750,00
9 400 750,00 750,00 750,00
10 200 883,93 776,79 723,21
11 300 642,86 669,64 696,43
12 600 696,43 723,21 750,00
13 400 776,79 750,00 803,57
14 400 750,00 750,00 616,07
15 450 750,00 750,00 750,00
18 300 830,36 696,43 750,00
19 500 776,79 723,21 723,21
20 200 750,00 750,00 750,00
21 600 723,21 723,21 294,64
22 200 750,00 723,21 750,00
23 800 750,00 776,79 750,00
24 500 669,64 696,43 750,00
25 400 750,00 750,00 750,00
Media 382,608696 734,86 714,48 701,67
D.E. 177,915891 71,45 62,40 108,35
Con el fin de determinar si las modificaciones obtenidas en los parmetros sanguneos
analizados se deben nicamente al consumo de la leche experimental, es necesario controlar
la dieta de las voluntarias durante el periodo experimental, con especial nfasis en aquellos
parmetros dietticos que tambin puedan influir en las determinaciones sanguneas
analizadas. En el presente estudio se opt por permitir a la voluntarias que mantuvieran su
dieta habitual, recomendndolas que no modificasen sus hbitos durante el periodo de
intervencin nutricional. Para comprobar que las voluntarias no modifican su dieta, sta se
analiz peridicamente y se compararon los datos correspondientes de la Encuesta recuerdo
de 24h, realizado al comienzo del estudio, con las tres Encuestas recuerdo de 24h, realizados
en el transcurso del mismo. La Tabla 15 muestra los resultados obtenidos.

CARDIOVASCULAR
20
Tabla 15. Ingesta media diaria de Energa y Nutrientes antes y durante el periodo
experimental, valorada a travs de las Encuestas Recuerdo de 24 horas

INICIAL

FITOESTEROLES I LAVADO FITOESTEROLES II
N Media D.E.

Media D.E.

Media D.E.

Media D.E.

p
Energa (kcal) 23 1818,7 427,6
a
1722,4 448,8
a
2073,4 550,3
b
2026,2 518,7
a,b
<0,05
Protena (% ETC)
1
23 19,4 5,6

23,6 9,6

22,4 9,6

23,7 7,3

n.s.
Lpidos (% ETC)
1
23 39,8 8,0

35,4 12,7

35,6 8,1

34,4 8,4

n.s.
Carbohidratos (% ETC)
1
23 38,2 7,7

43,4 8,7

39,3 9,6

39,6 9,0

n.s.
AGS
2
(% ETC)
1
23 8,9 3,4

8,1 4,7

8,2 2,8

8,5 3,8

n.s.
AGM
3
(% ETC)
1
23 17,2 5,0

14, 7 5,4

15,6 4,4

14,7 3,7

n.s.
AGP
4
(% ETC)
1
23 5,4 2,3

4,7 1,5

4,8 1,8

4,8 1,4

n.s.
Protena (g) 23 87,4 30,6
a
92,2 22,5
a
112,9 35,3
b
116,0 41,6
b
<0,05
Lpidos (g) 23 81,6 25,1

62,6 17,7

83,0 32,5

79,3 38,4

n.s.
Hidratos de carbono (g) 23 188,7 64,7

211,1 69,1

221,3 77,9

207,5 54,34

n.s.
AGS
2
(g) 23 18,4 9,1

13,5 4,7

19,2 10,5

19,8 13,5

n.s.
AGM
3
(g) 23 35,3 12,7

26,2 9,2

36,6 15,4

33,2 14,2

n.s.
AGP
4
(g) 23 11,2 5,8

8,5 2,9

11,1 4,7

11,3 6,1

n.s.
Colesterol (mg) 23 293,2 186,5

317,6 296,3

393,2 245,7

373,9 109,7

n.s.
Fibra (g) 23 18,0 7,6

18,4 6,9

19,7 8,7

21,8 13,1

n.s.
Vitamina A (ER
5
, g) 23 663,6 634,4 520,5 505,7 743,2 527,7

933,8 677,1 n.s.
Vitamina B1 (mg) 23 1,5 0,5

1,7 0,7

1,7 0,8

1,7 0,4

n.s.

2,6 1,2

2,5 0,7

2,4 0,6

n.s.
Niacina (EN
6
, mg) 23 29,5 7,7

31,4 9,3

29,0 11,7

33,4 10,7

n.s.

2,3 1,0

2,1 0,9

2,2 0,8

n.s.
Folatos (g) 23 389,4 544,1 279,3 131,4 377,2 222,4

316,8 172,4 n.s.
Vitamina B12 (g) 23 10,6 15,5

13,2 13,7

10,2 11,7

14,3 15,1

n.s.
Vitamina D (g) 23 4,4 6,9

5,0 5,9

5,2 6,2

6,4 10,9

n.s.
Vitamina E (mg) 23 9,9 6,0

8,0 4,4

9,0 3,3

8,4 4,0

n.s.
Vitamina C (mg) 23 182,0 131,0 178,5 90,5

242,9 109,6

198,3 118,7 n.s.
Sodio (mg) 23 1476,1 764,1 1443,1 637,2 2322,5 1523,3

2547,8 3497,8 n.s.
Potasio (mg) 23 3436,2 1266,7 3216,7 1005,1 3733,2 932,2

3447,5 1054,6 n.s.
Calcio (mg) 23 1013,2 387,6
a
1118,0 374,8
a
1525,6 425,8
b
1334,2 317,9
b
<0,05
Fsforo (mg) 23 1421,5 507,3 1524,1 544,7 1775,4 741,3

1811,5 720,2

n.s.
Yodo (g) 23 132,0 118,1 151,4 104,2 166,1 54,0

148,0 43,2

n.s.
Zinc (mg) 23 10,4 3,2
a,b
9,7 3,0
b
11,9 4,1
a
12,3 4,7
a
<0,05
Magnesio (mg) 23 352,6 144,0
a
397,7 112,3
a
446,9 137,4
a,b
450,5 82,3
b
<0,05
Hierro (mg) 23 25,2 25,8

30,0 44,6

24,0 27,6

18,4 4,9

n.s.
1
ETC: Energa total consumida
2
AGS: cidos grasos saturados
3
AGM: cidos grasos monoinsaturados
4
AGP: cidos grasos poliinsaturados
5
ER: equivalentes de retinol
6
EN: equivalentes de niacina

CARDIOVASCULAR
21
La comparacin de los resultados obtenidos a travs de las encuestas Recuerdo de 24
horas muestran muy pocas diferencias en cuanto a la dieta de las voluntarias antes de iniciar el
estudio y durante la fase experimental. Concretamente, no se observan diferencias
significativas en la ingesta media de aquellos nutrientes que pueden modificar los valores
sanguneos de colesterol (ingesta de energa, lpidos, colesterol, tipos de cidos grasos, etc).
Por tanto, puede concluirse que el efecto observado sobre los parmetros sanguneos
estudiados se debe slo a la intervencin nutricional con la leche experimental, es decir, al
efecto de los fitoesteroles adicionados a la leche, y no a modificaciones en la dieta de las
voluntarias por efecto de la intervencin nutricional. No obstante, para confirmar est
hiptesis se hizo una nueva comparacin: se tomaron los resultados obtenidos en el
Cuestionario de Frecuencia de Consumo de Alimentos, que refleja la dieta habitual de las
voluntarias durante el ao anterior, y se compararon con los resultados obtenidos con la media
de las tres encuestas Recuerdo de 24 horas, que pretenden reflejar la dieta de las voluntarias
durante el periodo de intervencin. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 16.

En este caso s pueden observarse diferencias significativas en cuanto a la ingesta de
algunos nutrientes. Por ejemplo, se observa una disminucin significativa de la ingesta de
protenas, lpidos e hidratos de carbono y, en consecuencia, de energa. La disminucin en la
ingesta de lpidos se aprecia tanto en cuanto al contenido total de lpidos de la dieta como en
cuanto al porcentaje de energa procedente de estos lpidos en relacin con los otros nutrientes
energticos. No obstante, no se modifica cualitativamente la dieta en referencia al tipo de
lpidos consumidos. Estas diferencias pueden deberse a que la toma de datos sobre ingesta
alimentaria se lleva a cabo a travs de metodologas diferentes (Cuestionario de Frecuencia de
Consumo de Alimentos y Encuesta Recuerdo de 24 horas). No obstante, con el fin de
determinar si los cambios en los parmetros sanguneos se deben al efecto de los fitoesteroles
o a que las voluntarias modifican su dieta al participar en el estudio, se estimaron los cambios
que podran introducir los cambios dietticos obtenidos en esta comparacin sobre los valores
sanguneos. Para ello se utilizaron las Ecuaciones de Keys, Hegsted y Katan, que estiman el
cambio en los valores sanguneos de colesterol que tericamente puede inducir una
modificacin diettica. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 17.

CARDIOVASCULAR
22
Tabla 16. Ingesta media diaria de Energa y Nutrientes antes y durante el periodo
experimental, valorada a travs de Cuestionario de Frecuencia de Consumo de
Alimentos y Encuestas Recuerdo de 24 horas

Dieta inicial
1
Dieta del periodo experimental
2
Energa (kcal/da) 2625,79 643,41 1960,96 294,30 -
Protenas (g/da) 146,22 41,84 109,91 20,16 -
Lpidos (g/da) 112,20 31,95 75,56 17,39 -
Hidratos de carbono (g/da) 273,31 86,96 213,15 48,85 -
Fibra (g/da) 31,33 10,55 20,22 6,05 -
Protenas (% ETC)
3
22,37 3,16 23,09 4,35
Hidratos de carbono (% ETC)
3
39,09 7,48 41,52 6,74
Lpidos (% ETC)
3
38,47 1,25 35,27 5,28 -
Fitosteroles (mg/da) 392,58 300,80 584,12 305,43 -
Colesterol (mg/da) 398,35 168,84 331,64 124,67
AGS
4
(g) 26,96 9,41 18,70 6,92 -
AGM
5
(g) 46,17 13,66 33,96 10,49 -
AGP
6
(g) 18,45 16,46 10,50 3,51 -
AGS
4
(% ETC)
3
9,18 2,20 8,37 2,39
AGM
5
(% ETC)
3
15,94 3,34 15,28 3,34
AGP
6
(% ETC)
3
5,99 3,65 4,74 1,33
Ca (mg/da) 1436,10 424,91 1426,02 169,64
Hierro (mg/da) 29,75 28,93 23,77 20,48
Yodo (g/da) 119,50 37,04 167,43 44,51 -
Magnesio (mg/da) 489,09 127,72 454,71 53,76
Zinc (mg/da) 29,75 28,93 11,89 2,19 -
Sodio (mg/da) 2900,51 1176,51 2353,97 20,48 -
Potasio (mg/da) 4688,71 1221,43 3522,46 750,97 -
Fosforo (mg/da) 1886,57 526,75 1718,57 84,84
Vitamina B1 (mg/da) 2,28 0,95 1,70 0,36
Vitamina B2 (mg/da) 2,78 0,79 2,60 0,46
Equivalentes de Niacina (mg/da) 45,81 12,05 30,85 5,99 -
Vitamina B6 (mg/da) 3,31 0,10 2,26 0,60
cido Flico (g/da) 453,03 141,82 323,06 108,36 -
Vitamina B12 (g/da) 16,84 + 7,44 12,26 8,19
Vitamina C (mg/da) 263,05 130,84 220,06 91,80
Equivalentes de Retinol (g/da) 1273,61 754,79 738,26 368,22
Vitamina D (g/da) 6,24 3,40 4,42 4,41
Vitamina E (mg/da) 12,12 4,44 8,01 3,01 -
1
Corresponde con la dieta habitual de las voluntarias valorada a travs de Cuestionario de Frecuencia de
Consumo de Alimentos
2
Corresponde con la dieta de las voluntarias durante el periodo experimental, valorada a travs de la media de
los tres Recuerdos de 24 horas
3
4
5
6
- Diferencias significativas (p<0,05), dieta inicial vs. dieta en el periodo experimental

CARDIOVASCULAR
23
Tabla 17. Prediccin de las variaciones en valores sanguneos de colesterol total,
colesterol unido a LDL y colesterol unido a HDL inducidas por variaciones en la dieta

Dieta Inicial
1
Dieta Experimental
2
Incremento
3
P
ndice de Keys
4
OCho (mg/dl)
48,54 24,48 37,94 14,95 -7,50 29,71 0,081 n.s.
ndice de Hegsted
5
OCho (mg/dl)
54,76 28,16 45,52 16,42 -9,23 32,29 0,184 n.s.
ndice de Katan
6
OCho-LDL (mg/dl)
0,35 0,28 0,27 0,16 -0,08 0,31 0,191 n.s.
ndice de Katan
7
OCho-HDL (mg/dl)
-0,22 0,15 -0,15 0,07 0,06 0,16 0,062 n.s.
1
Dieta Inicial: hace referencia a la dieta habitual de las voluntarias, medida a travs de Cuestionario de
Frecuencia de Consumo de Alimentos
2
Dieta Experimental: hace referencia a la dieta de las voluntarias durante el periodo experimental, medida a
travs de Recuerdo de 24 horas
3
Incremento: modificacin del parmetro sanguneo en funcin de la diferencia entre la dieta experimental y la
dieta inicial
4
ndice de Keys:
Acolesterol = 1,26 (2 Asaturados Apoliinsaturados) + (100 Acolesterol diettico/AEnerga total)
1/2

Acolesterol: cambio en la concentracin de colesterol en sangre producido al pasar de una dieta a otra de
distinta composicin en cidos grasos (mg/dl)
Asaturados: cambio en el contenido de glicridos saturados (expresado como porcentaje en energa)
Apoliinsaturados: cambio en el contenido de glicridos poliinsaturados (expresados como porcentaje en energa)
Acolesterol diettico: cambio en el contenido de colesterol en las dietas (expresado en mg)
5
ndice de Hegsted
Acolesterol = 2,16 Asaturados 1,65 Apoliinsaturados + 0,0677 Acolesterol diettico
Acolesterol: cambio en la concentracin de colesterol producido al pasar de una dieta a otra de distinta
composicin en cidos grasos (mg/dl)
Asaturados: cambio en el contenido de glicridos saturados (expresados como porcentaje en energa)
Acolesterol diettico: cambio en el contenido de colesterol en las dietas (expresado en mg/100 kcal)
6
ndice de Katan
Acolesterol-LDL = 0,033 Asaturados 0,006 Amonoinsaturados + 0,014 Apoliinsaturados
Acolesterol-LDL: cambio en la concentracin de colesterol unido a LDL producido al pasar de una dieta
a otra de distinta composicin en cidos grasos (mg/dl)
Amonoinsaturados: cambio en el contenido de glicridos monoinsaturados (expresados como porcentaje
en energa)
7
ndice de Katan
Acolesterol-HDL = 0,012 Asaturados 0,009 Amonoinsaturados + 0,007 Apoliinsaturados
Acolesterol-HDL: cambio en la concentracin de colesterol unido a HDL producido al pasar de una
dieta a otra de distinta composicin en cidos grasos (mg/dl)
Amonoinsaturados: cambio en el contenido de glicridos monoinsaturados (expresados como porcentaje
en energa)

Al aplicar las ecuaciones observamos que la modificacin de la dieta de las voluntarias
debida a la intervencin nutricional podra dar lugar a una ligera disminucin de los valores
de colesterol sanguneo total y de colesterol unido a LDL, adems de un ligero aumento en el
colesterol unido a HDL, aunque las diferencias no son estadsticamente significativas. Por
tanto, esta nueva comparacin nos permite concluir que las modificaciones en los parmetros
CARDIOVASCULAR
24
sanguneos observados en nuestras voluntarias se deben nicamente al efecto de los
fitoesteroles aadidos a la leche experimental.

Finalmente, con los datos obtenidos a partir del estudio de la dieta pudimos evaluar la
repercusin de introducir una ingesta habitual de 750 ml de la leche experimental en los
hbitos dietticos y la calidad nutricional de la dieta de las voluntarias. Para ello, se tomaron
los datos de dieta habitual recogidos a travs del Cuestionario Frecuencia de Consumo de
Alimentos y se analiz el patrn de consumo de alimentos (tabla 18) adems de la ingesta
media diaria de energa y nutrientes (tabla 19). A partir de estos datos se estim la repercusin
de introducir la leche experimental sobre la calidad nutricional de la dieta sustituyendo el
consumo habitual de leche en las voluntarias con el consumo recomendado de 750 ml diarios
de leche aadida de fitoesteroles. Los resultados se muestran en las tablas 18 y 19.

Tabla 18. Patrn de Consumo Alimentario habitual en las voluntarias comparado con el
Patrn de Consumo Recomendado

Patrn de consumo habitual Patrn de consumo recomendado
1
Grupo de Alimentos g/da Raciones/da g/da Raciones/da
Cereales y derivados 156,71+ 63,73 2,76 226,66-339,96 4-6
Leche y derivados lcteos 590,86+ 238,09 5,56 212,5-425 2-4
Huevos 19,13+ 7,92 0,27 20-30 0,28-0,43 (2-3 semana)
Aceite de oliva 26,30+ 5,48 2,63 30-50 3-5
Otros aceites y grasas 24,75+ 34,23 0,93 Ocasional Ocasional
Frutas frescas 251,81+ 136,02 1,43 > 525 > 3
Frutos secos 21,70+ 24,30 0,72 8,57-12,86 0,28-0,43 (2-3 semana)
Verduras y hortalizas 541,36+ 261,27 2,41 > 450 > 2
Legumbres 33,17+ 19,19 0,47 20-30 0,28-0,43 (2-3 semana)
Carnes y derivados crnicos 212,57+ 102,03 1,70 35,71-53,57 0,28-0,43 (2-3 semana)
Pescados 138,79+ 121,19 0,92 42,86-64,29 0,28-0,43 (2-3 semana)
Bebidas alcohlicas 136,46+ 167,07 1,81 - -
Refrescos 204,93+ 157,14 1,02 Ocasional Ocasional
Dulces y azcar 72,66+ 51,22 2,20 Ocasional Ocasional
1
Adaptado de la Pirmide de la Alimentacin saludable diseada por la SENC (Sociedad Espaola de Nutricin
Comunitaria) [16].

En cuanto al Patrn de Consumo de Alimentos habitual en las voluntarias y
comparando con el patrn de consumo recomendado [16] es destacable un muy alto consumo
de carnes y derivados crnicos, adems de un alto consumo de leche y derivados lcteos,
legumbres y pescados. El consumo de aceite de oliva est por debajo de lo recomendado y es
sustituido por otras grasas y aceites, cuyo consumo se recomienda que sea slo ocasional. Es
bajo el consumo de cereales y derivados y frutas frescas, aunque el consumo de verduras y
hortalizas coincide con el recomendado. Tambin se observa en el grupo estudiado un
consumo moderado de bebidas alcohlicas y refrescos.

En la situacin de menopausia en la que se encuentran las voluntarias del estudio, se
recomienda especialmente el consumo de leche y derivados lcteos, fundamentalmente por su
contenido en calcio y vitamina D y la posible relacin de estos nutrientes con el problema de
la osteoporosis. Nuestras voluntarias consumen una cantidad importante de este grupo
alimentario, por encima de las raciones recomendadas. Si se sustituye su consumo habitual de
leche por 750 ml de leche aadida de fitoesteroles, el consumo de leche y derivados lcteos
CARDIOVASCULAR
25
pasara a ser de 925,26 150,59, es decir, en torno a 8,71 raciones diarias, bastante por
encima de las 2 a 4 raciones diarias recomendadas. Por tanto, la inclusin de 750 ml de leche
aadida de fitoesteroles aumenta el consumo de un grupo alimentario muy importante para
este grupo de edad, pero no supone una mejora notable en la calidad de la dieta. No obstante,
se podra recomendar a las voluntarias que sustituyeran no slo la leche habitual, sino tambin
parte de los derivados lcteos que habitualmente consumen (yogures, quesos) por la leche
adicionada de fitoestroles, lo que seguramente mejorar su consumo diettico de lpidos.

Tabla 19. Calidad nutricional de la dieta habitual de las voluntarias y de la dieta
estimada introduciendo el consumo diario de 750 ml de leche adicionada de fitoesteroles

Dieta habitual
1
Dieta estimada
2
Recomendacin nutricional
3
Energa (kcal/da) 2625,79 643,41 2762,03 618,07 - 2075
Protenas (% ETC)
4
22,34 3,16 22,98 2,82 - <15
Hidratos de carbono (% ETC)
4
39,09 7,48 39,75 7,16 - 55-60
Lpidos (% ETC)
4
38,47 5,60 35,05 5,44 - 30-35
Fitosteroles (mg/da) 379,88 304,91 667,19 312,41- -
Colesterol (mg/da) 398,14 168,70 389,52 165,37 <300
AGS
5
(% ETC)
4
9,18 2,20 7,91 2,02 - 7-10
AGP
6
(% ETC)
4
5,99 3,65 5,75 3,52 - 8-10
AGM
7
(% ETC)
4
15,94 3,34 14,90 3,11 - 10-15
Equivalentes de Retinol (g/da) 1273,61 754,79 1205,82 719,09 - 800
Vitamina B1 (mg/da) 2,28 0,95 2,42 0,92 - 0,8
Vitamina B2 (mg/da) 2,78 0,79 3,30 0,59 - 1,2
Equivalentes de Niacina (mg/da) 45,81 12,05 44,40 11,66 - 14
Vitamina B6 (mg/da) 3,31 0,99 3,41 0,94 - 1,6
Vitamina B12 (g/da) 16,84 7,44 17,92 7,42 - 2
Vitamina C (mg/da) 263,05 130,84 271,90 129,74 - 60
Vitamina D (g/da) 6,24 3,40 6,19 3,40 - 10
Vitamina E (mg/da) 12,12 4,44 11,97 4,39 - 12
cido flico (g/da) 453,03 141,82 478,00 137,54 - 400
Ca (mg/da) 1436,10 424,91 1841,65 349,32 - 800
Hierro (mg/da) 35,24 40,05 36,45 39,85 - 10
Yodo (g/da) 119,50 37,04 166,58 27,18 - 110
Magnesio (mg/da) 489,09 127,72 624,56 108,59 - 300
Zinc (mg/da) 14,99 3,74 17,24 3,51 - 15
Sodio (mg/da) 2900,51 1176,51 2784,42 1204,81 - 1300
Potasio (mg/da) 4688,71 1221,43 4365,89 1070,85 - 4700
Fosforo (mg/da) 1886,57 526,75 1578,35 498,49 - 700
1
Corresponde con la dieta habitual de las voluntarias valorada a travs de Cuestionario de Frecuencia de
Consumo de Alimentos
2
Corresponde con la dieta estimada al sustituir el consumo de leche habitual de las voluntarias por el consumo
diario de 750 ml de leche adicionada de fiteoesteroles
3
Recomendaciones nutricionales adaptadas de Moreiras y col. [17], SENC [16] y DRI [18-19]
4
5
6
7
- Diferencias significativas (p<0,05), dieta habitual vs. dieta estimada

La introduccin de 750 ml diarios de leche adicionada de fitoesteroles en la dieta
habitual de las voluntarias estudiadas produce un ligero incremento en la energa consumida,
CARDIOVASCULAR
26
bsicamente porque supone un incremento en el consumo de leche total. Este incremento en
la energa se acompaa, sin embargo, de un decremento en la ingesta lipdica: al tratarse de
una leche desnatada, disminuye el consumo de lpidos totales en la dieta habitual, lo que
supone un acercamiento a la recomendacin nutricional para los lpidos. Este cambio en la
ingesta lipdica no se acompaa de una modificacin en la distribucin del tipo de cidos
grasos consumido, ya que disminuye la ingesta de los tres principales tipos de cidos grasos,
mantenindose una distribucin muy prxima a la recomendada. El consumo de fitoesteroles,
como era de esperar, se incrementa en un 75%. En cuanto a las vitaminas, la introduccin de
la leche con fitoesteroles en la dieta habitual de las voluntarias supone algunas diferencias,
pero ninguna de importancia nutricional, ya que la ingesta vitamnica se encuentra por encima
o prxima a las recomendaciones nutricionales. nicamente cabe destacar que la ingesta de
vitamina D es deficitaria en estas mujeres, tanto en su dieta habitual como en la dieta
estimada. En lo que respecta a la ingesta mineral, la introduccin de 750 ml diarios de leche
adicionada de fitoesteroles produce un notable incremento en la ingesta de calcio (un 28%) en
las voluntarias. Aunque en ambos casos las ingestas de calcio se encuentran por encima de la
ingesta recomendada establecida para la poblacin espaola (800 mg/da), posiblemente esta
recomendacin se incremente a cifras en torno a 1200-1500 mg diarios [19], fruto de los
resultados obtenidos en las investigaciones relativas al efecto de la ingesta de calcio en la
salud sea. En conclusin, la introduccin del consumo diario de 750 ml de leche adicionada
con fitoesteroles mejora la calidad nutricional de la dieta en lo que respecta a la ingesta
lipdica total, que se reduce, as como a la ingesta de calcio, que se incrementa.

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