Reporte: Cromatografa en capa fina/columna.

Conocer y aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina, c.c.f., sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. Calcular valores de Rf de varias sustancias. Deducir, a travs del Rf la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados. Aplicar la tcnica de c.c.f. como criterio de pureza e identificacin de las sustancias.

cantidad de la disolucin pase a la placa. De esta manera, la muestra queda adsorbida por el soporte slido en la placa. La CCF se utiliza para determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separacin. 2. Realizacin del cromatograma: Correr una placa y columna. El cromatograma se realiza en una cmara cromatografica (vaso gerber) que contiene el eluyente elegido. El nivel del eluyente debe de ser menor que la separacin entre el borde de la placa y la lnea base el lugar donde se ha efectuado el pinchazo. La placa se introduce en la cmara en la que introducimos una placa base de papel filtro para evitar su movimiento de la placa y se tapa. El eluyente asciende por la placa por capilaridad, arrastrando a su paso a los componentes de la mezcla que nos dio una serie de colores (verde, amarillo, morado). Naturalmente los componentes de la mezcla son arrastrados con diferente velocidad, de acuerdo con su distinta polaridad. Cuando el frente del eluyente llega casi al borde superior de la placa, esta se extrae de la cmara. En la cual se traz una nueva lnea a lpiz indicando el nivel hasta donde ascender el eluyente. En la cromatografa en columna utilizamos una columna de vidrio vertical (pipeta paster) que se llena con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de slice (SiO2)). La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase mvil que en nuestro caso fue acetona) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As,

La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes. En toda separacin cromatogrfica hay dos fases (slida, lquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho ms lenta. Anlisis de Resultados 1. Aplicacin de la muestra La introduccin de la muestra se realiza utilizando un tubo capilar (en este caso una mezcla de tintas). Para ello se ha de disolver una pequea cantidad en seis cmaras diferentes de la muestra a analizar en un disolvente voltil. A continuacin, el extremo del tubo capilar se introduce en la disolucin y se coloca en una placa. La disolucin ascender por el tubo por capilaridad. En uno de los lados de la placa, aproximadamente a 5 mm del borde, se ha de trazar a lpiz una lnea recta, lnea base, y sobre ella unos puntos de referencia. Sobre dichos puntos se pincha con el tubo capilar, de modo que una pequea

las diferencias en las velocidades de desplazamiento a travs del medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de elucin por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que se recogi en Matraces Erlenmeyer en fracciones diferentes. La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten ms eficientemente con las molculas polares de una mezcla por los lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar las molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la columna. Si el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca separacin de los componentes de la mezcla. Por lo tanto, la eleccin del eluyente es crucial para el xito de la cromatografa en columna. A menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elucin. 3. Revelado del cromatograma. Una vez que el eluyente sobre la placa se ha secado se ha de proceder a la visualizacin del cromatograma. En determinados casos, si los compuestos son coloreados esto puede realizarse de forma directa. Sin embargo, para compuestos incoloros es necesario utilizar diferentes tcnicas de revelado. Las placas de cromatografa comerciales portan un agente fluorescente inorgnico en la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la placa con una lmpara de luz ultravioleta UV. Los diferentes compuestos aparecen en la placa como manchas circulares. Las distintas manchas deben de marcarse a lpiz sobre la placa para su estudio posterior, esto se utiliz para el compuesto problema ().

Hexano Acetona Acetato de Etilo Agua 50-50 % agua, acetona

2 2 2 2 2

A, M V, Am, M Am, M M M, V

0.8888 5 Acetona 0.2666

M. Problema

0.5

0.5

CONCLUSIONES: En esta prctica logramos conocer y aplicar la cromatografa por capa fina y en columna, sus caractersticas y los factores que influyen en la separacin por cromatografa, adems de aprender a calcular los valores del factor de retencin de las sustancias para poder deducir la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan con la de los eluyentes que se utilizan con ellas y as mismo poder aplicar un criterio para identificar la pureza de sustancias de acuerdo con la pigmentacin (es) que estas presenten al realizar la cromatografa.

Resultados (Tabla y Fotos) Eluyentes Nm. De gotas 2 2 Color

Etanol Metanol

A, V, M Am, A M