PCTICA N 4 LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 21 de marzo 2013, Barranquilla Colombia

TECNICA DE COLORACION BACTERIANA (TENCION DIFERENCIAL) NOMBRES: Margareth Prez, Johana lvarez, Jorge Montoya. Universidad del Atlntico Programa de Qumica Farmacia RESMEN La tincin de Gram es una prueba til y de fcil realizacin que permite diferenciar las dos principales clases de bacterias con el objeto de instaurar un tratamiento Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algn otro modo y se tien con cristal violeta, una solucin yodada, el decolorante (acetona) y por ltimo se cubre con un colorante de contraste, safranina, para teir de rojo las clulas que no hayan retenido el cristal violeta. Palabras clave: Pared celular, Gram positiva, Gram negativa. OBJETIVO Comprender los pasos necesarios para realizar la tincin de Gram Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual de la aplicabilidad clnica de la tincin. Mostrar la importancia de una tincin para la diferenciacin de bacterias basndose en las propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la coloracin de Gram, con microorganismos conocidos o desconocidos. INTRODUCCIN La tincin es una tcnica en la que se utilizan diferentes colorantes, que son captados por las estructuras de las muestras biolgicas que se observan al microscopio, siendo cada estructura a fin a un tipo determinado de colorante, por lo que se pigmentan de diferente color y se pueden diferenciar e identificar. Dado que las bacterias no tienen color y por lo general invisible para la microscopa de luz, diferentes tcnicas de tincin se han desarrollado para visualizarlas. La ms til es la tincin de Gram. La tincin de Gram: Hans Cristian Gram en l884 invent un mtodo de tincin diferencial es uno de los mtodos ms importantes en el laboratorio Se utilizan varios colorantes combinados, donde separa los organismos en 2 grandes grupos: gram-positivos y gram-negativas. Esta tincin tambin permite que el

clnico pueda determinar si el organismo es redondo o en forma de varilla, etc. Las estructuras celulares se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin qumica. En lo relativo a la coloracin, de microorganismos son Gram positivos cuando aparecen teidos de color

azul-violeta y de Gram negativo cuando se visualizan de color rojo-rosado.

La Tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR): Es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a1926), un bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo. Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cido graso o cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cidoalcohol resistencia a bacilos; cido-alcohol resistente o BAAR. Las Mycobacterium o micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y los parsitos coco (bacteria) coccdeos como Cryptosporidium.

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Se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.

RESULTADO Figura 1(x) ____________________________ ____________________________ ____________________________ ____________________________ ____________________________ ______ Figura 2 (y) _______________________ _______________________ _______________________ _______________________ _______________________ _______ DISCUSION Hemos podido reconocer a travs del mtodo de tincin Gram el nombre, las formas bien definidas y diferenciadas etc. las cuales fueron bacilos y cocos, tambin pudimos diferenciar las Gram positivas (+) y las Gram negativas (-) por el color que tomaron las bacterias. En nuestro caso solo pudimos ver las Gram positivas en los 2 portaobjetos porque presentaba un color violeta, en cambio el grupo anterior por motivos de clculos en la tincin con el alcohol ambos presentaron Gram negativa (-) de un color fucsia. Tambin pudimos diferenciar que las Gram + eran cerradas y las Gram - un poco ms abiertas. CONCLUSION Podemos concluir que la tcnica de tincin tiene como finalidad crear un contraste entre la clula y el medio que la rodea, y una de las ms importantes, tanto por su aplicacin clnica para hacer una identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin y por su practicidad, es la tincin de Gram. El estudio de la literatura acerca de la tincin de Gram nos permite tener un prembulo para poder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos. Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener un completo estudio previo de los organismos y su reaccin a la tincin para poder dar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de un microorganismo.

METODOLOGIA Tomamos una lminas portaobjetos y en ella colocamos con la ayuda de un asa que previamente fue esterilizado una gota de salina, luego en forma de estra con el asa, nuevamente despus de haberla esterilizado en la flama, tome una pequea asada del microorganismo (x) lo colocamos sobre la solucin salina colocada anteriormente en el portaobjetos. Hacemos el mismo para el cultivo del microorganismo (Y) en el otro portaobjetos. Luego fijamos la preparacin al calor, pero sin calentar demasiado el portaobjetos, le agregamos una gota hasta cubrirlo con cristal violeta durante 1 min retiramos el exceso de colorante y lavar con agua, secamos al aire, despus agregamos lugol dejndolo sobre la preparacin durante 1 min lavamos con agua y secamos al aire, luego decoloramos con ayuda del alcohol-acetona durar mnimo 30 seg., quitamos con agua y secamos al aire, y por ultimo aplicamos el colorante de contraste (Safranina o fucsina) y lo dejamos actuar durante 1 min. Retiramos con agua y secamos al aire. Observamos en el microscopio y con ayuda del aceite de inmersin miramos las 2 preparaciones, dibujamos y anotamos los resultados.

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