CAPITULO I

EL NCLEO

1) Estructura Nuclear Alrededor del 10% del volumen celular esta ocupado por el Ncleo, en el cual se encuentra confinado el DNA. Este esta delimitado por una Bicapa lipdica, las que forman una envoltura nuclear, por la cual se produce el transporte activo de molculas, entre el ncleo y el citoplasma, a travs de unas perforaciones llamadas poros nucleares, que son protenas canal que atraviesan la membrana y se ubican a lo largo de esta. La membrana externa esta directamente conectada con el retculo endoplasmtico, y este esta mantenido por filamentos intermedios, llamados lamina nuclear, la cual es mas fina y recubre la membrana nuclear interna, y la otra de forma menos regular, recubre la externa. Por tanto, la membrana externa esta conectada con el RER, mientras que la interna por la Lmina nuclear. La funcin general de la envoltura nuclear, es la de proteger al DNA que se encuentra frgil dentro del ncleo, de las fuerzas mecnicas generadas por los filamentos citoplasmticos. Estos filamentos, correspondientes al citoesqueleto, estn formados por Microtbulos, filamentos intermedios, y micro filamentos. En el ncleo se lleva a cabo la sntesis de RNAr y ensamblaje de subunidades ribosomales, por lo que es la estructura ms grande de la clula. Una diferencia crucial entre las procariotas y las eucariotas, es que en las primeras, la sntesis de RNAm (transcripcin) y la sntesis de protenas (traduccin), se lleva a cabo simultneamente. Es decir, mientras se traduce el extremo 5 del RNA, aun se transcribe RNAm desde el extremo 3. En los eucariontes, la sntesis de protenas necesita un procesamiento previo del RNA. La etapa de transcripcin se realiza en el ncleo, mientras que la de traduccin en el citoplasma, por lo que estn separadas fsica y temporalmente entre si. Antes de ser transportados al exterior, los RNA transcritos son procesados en un proceso llamado Maduracin o splicing del RNA (visto ms adelante). 2) Estructura del DNA y su Empaquetamiento a. Caractersticas Generales La informacin gentica esta contenida en el DNA en secuencias lineales regulares no azarosas de millones de nucletidos unidos covalentemente entre si, de los cuales 3

de estos representa un AA a sintetizar. Estas secuencias son generalmente dextrogenas con surcos menores y mayores intercalados, donde se unen las protenas. Son 15 nucletidos por vuelta, un dimetro de 2 nm (20 A) y 3.4 nm de alto por vuelta. Cada DNA se empaqueta en un cromosoma, donde su informacin gentica total se denomina genoma. El genoma humano esta formado por alrededor de 3 x 109 parejas de nucletidos, en 24 cromosomas, de los cuales, 22 de estos son autosomas diferentes y los otros dos corresponden a los cromosomas sexuales. En los organismos diploides, como nosotros, los cromosomas se encuentran en pares, 22 de la madre y 22 del padre, los cuales son idnticos entre si y un cromosoma X, donde su par corresponder a otro X, procedente de la madre, o a un cromosoma Y, procedente del Padre, formando un total de 46 cromosomas por clula. En la fase mittica (fase M), de divisin celular, el DNA se encuentra en su mxima compactacin, los cromosomas, y son inactivos en trminos de transcripcin, mientras que en la fase mas larga, la interfase, el DNA que esta activo, se encuentra en su forma menos condensada. El DNA empieza en el extremo 5 de un nucletido, y termina en el 3 del ultimo, as se llevan a cabos los procesos de transcripcin, replicacin, etc. Los cuales solo ocurren en esta polaridad y direccin: de 5 a 3. b. Histonas y Empaquetamiento del DNA En el Ncleo, el DNA esta asociado a protenas histonas, levemente condensados en forma de cromatina y cuando se necesita codificar un gen, este se disocia temporalmente. Estas histonas, se agrupan en octmeros (8 protenas), y son ricos en aminocidos bsicos los que le otorgan una alta afinidad con las cargas negativas del DNA sin importar su secuencia nucleotdica. Esta afinidad se puede romper cambiando la fuerza inica del medio. En este octmero de histonas, el DNA da 1.7 vueltas, involucrando unos 147 residuos de pares de bases, interconectados entre si por DNA de conexin o Linker. Estos enrollamientos de 147 pb ms el DNA de conexin en octmeros de histonas forman un Nucleosoma, en forma de Cadena de Cuentas, de las cuales n Nucleosomas forman una Cromatina. Estas cuentas, pueden separarse

entre si mediante Nucleasas Micrococales los cuales dejan solo los Nucleosomas de 11 nm de dimetro, mientras que todo el DNA de conexin queda separado. En este nivel de compactacin, es decir 11 nm, se encuentra la clula cuando esta en reposo y se denomina Fibra de Cromatina. El octmero de histonas, esta formado por 4 pares de protenas histonas distintas, denominadas H2A, H2B, H3 y H4, de los cuales las primeras dos corresponden a dmeros, mientras que las otras dos juntas a un tetrmero. Y la facilidad con la el DNA se puede enrollar en estos octmeros depende de su secuencia nucleotdica. Mientras mas rica en uniones A T se encuentre, ms fcil le es unirse al Octmero. El siguiente nivel de compactacin, formado para proteger ms el DNA y evitar que este se disponga en un collar de cuentas, los nucleosomas se condensan aun ms, enrollndose unos sobre otros, en una estructura llamada Solenoide de Cromatina de unos 30 nm de dimetro. Este solenoide, esta formado por otro tipo de Histona denominada H1, de las cuales 6 de estas, enrollan 6 octmeros, para formar este solenoide. Este se enrolla en un esqueleto proteico llamado Scaffold asocindose por regiones de DNA rica en T A denominada SAR (Scaffold Attachment Region) 3) Estructura Global de los Cromosomas

a. Partes de un Cromosoma Para que un DNA forme un cromosoma funcional que sea capaz de replicarse correctamente, este debe tener tres secuencias importantes las cuales le otorgan la habilidad de replicarse y segregarse en forma de cromosomas. La primera secuencia nucleotdica sirve para replicarse, y se denomina Origen de replicacin del DNA. La segunda secuencia corresponde a Centrmero, el cual le permite al DNA que lo contiene unirse al

Huso mittico durante la Divisin celular. Y una ltima secuencia corresponde al Telmero, los cuales se ubican en cada extremo del cromosoma lineal y sirve para acortar la cadena poco a poco y evitar que nucletidos se pierdan al duplicarse. Tanto los Centrmeros como los telmeros no poseen secuencias con informacin gentica, solo poseen secuencias altamente repetitivas de nucletidos para formarlos. Los primeros sirven para mantener unidas las copias del cromosoma, y las une, a travs de un complejo proteico denominado Cinetocoro, al Huso mittico, para distribuir equitativamente una copia de cada uno a las clulas hijas. Los cromosomas, son identificables por tintes que le otorgan distintos colores, dando as un patrn de bandeo, los cuales se reconocen al microscopio. b. DNA descondensado y Zonas de Genes En etapas de relajacin, el DNA se encuentra en forma de Cromosoma plumulado, el cual consta de un eje central formado por cromatina espaciadora de forma lineal, donde entre cada ciertos intervalos se condensa aun ms, formando lo que se llama Crommero, desde este Crommero se extiende un Bucle de Cromatina, el cual alcanza una altura de unos 10 nm. La cromatina extendida, es activa y se denomina eucromatina que esta menos condensada, mientras que la inactiva, la ms condensada, se denomina Heterocromatina. Algo si a recalcar, es que la eucromatina esta formada por dos partes: la Activa, que corresponde al 10% del genoma total, es la que esta completamente descondensado, mientras que una segunda parte, que esta ms condensada que la activa, pero menos que la heterocromatina, esta eucromatina Inactiva. El DNA esta formado por dos tipos de secuencias. Las que son codificables, es decir, los que sirven para transcribir una protena, se denominan Exones, las otras, que no sirven para codificar y son solo espaciadoras se denominan Intrones. En las eucariotas, no todos los genes tienen el mismo numero y % de exones, pero todos tienen, eso si, exones e Intrones, de los cuales solo los primeros quedan iguales en la secuencia final. Mientras que los segundos, tienen secuencias repetidas varias veces, que son identificadas y removidas cuando se necesita. Ahora, no todas las cromatinas estn compuestas por genes, de hecho, solo un 7% mximo de ella esta compuesta por genes. Esto significa que solo un 10% del Cromosoma contiene aproximadamente 40 genes codificables, correspondiendo a que un 1% de este, equivale a 4 genes.

Cuando uno de estos genes necesita ser codificado, en una cromatina Lineal, aquellos intervalos correspondientes al gen con la informacin gentica necesaria en aquel momento de transcripcin se descondensa temporalmente, siendo ms accesible para protenas y RNAr, as como para DNAnucleasas, las cuales solo cortan DNA descondensado. A este nivel de cromatina accesible, se le denomina cromatina Activa, y su nivel de empaquetamiento es menor a la de cromatina inactiva comn en reposo. c. Cromosoma Mittico Durante la interfase, y a excepcin de unos cuantos cromosomas como los plumulados, la mayor parte de los cromosomas estn completamente extendidos y son tan delgados que son indetectables. Por el contrario, cuando la clula entra en mitosis, el DNA se encuentra en su nivel de mxima condensacin, siendo completamente visible. Esta condensacin esta acompaada por una fosforilacin de todas las H1 de la clula, lo que al parecer, es crucial en esta compactacin. Durante la etapa S del ciclo celular, el material gentico fue duplicado, y en la fase mittica, el cromosoma Mittico, esta formado por Dos Cromtidas hermanas las cuales estn unidas entre si por un Centrmero. Para llegar a ese nivel de compactacin, el DNA se va enrollando en si mismo simultneamente, y cada nivel nuevo de condensacin se enrolla entre si nuevamente, hasta formar el cromosoma mittico (Figura 2). En este nivel de compactacin, el DNA es transcripcionlmente inactivo, lo que es lgico, puesto mientras mas condensado est, menos accesible es a protenas de RNA polimerasa. El conjunto de los 46 cromosomas mitticos, se denomina cariotipo Humano. Y al ser teidos, estos 46 cromosomas presentan una estructura de bandas, conteniendo millones de nucletidos, intercaladas entre si que permiten reconocerlos y diferenciarlos individualmente y sin ambigedades. 4) Envoltura Nuclear La envoltura nuclear encierra el DNA y le da la forma al ncleo. sta, est formada por dos membranas. La primera es la membrana nuclear interna, que esta formada por protenas especficas que actan como lugares de unin para la lmina nuclear la que soporta a esta membrana. La Lmina nuclear esta formada por protenas de filamentos intermedios, formados por protenas especificas para cada tipo celular, cuya funcin es la de otorgar fuerza de tensin a la clula y al ncleo. Forma parte de las fibras del citoesqueleto celular. Estas protenas especficas se denominan Lamininas, y existe tres tipos de estas: A, B

y C. Cuando el ncleo entra en mitosis, este se desarma en vesculas formadas por estas lamininas, las cuales han sido Fosforiladas en la Profase y as separadas. Estas vesculas de lamininas atrapan el material interno del ncleo, incluyendo los cromosomas condensados, y una vez a terminado la fase mittica y se debe rearmar el ncleo, una protena quinasa las desfosforila, y se juntan, armndolo nuevamente. La otra membrana que forma parte de la envoltura nuclear, es la membrana nuclear externa, la cual es muy parecida estructuralmente a la membrana del retculo endosplasmtico rugoso (RER), el cual, de echo, se encuentra unido a esta. Esta membrana se encuentra rodeada por ribosomas los cuales estn constantemente sintetizando protenas. Estas viajan de un extremo a otro desde un espacio intermembrana entre las membranas externas e internas denominado espacio perinuclear. Adems de estas membranas, el ncleo esta atravesado por Poros, los cuales son protenas canales altamente selectivas, que permiten el trfico ncleo citoplasma, desde ambos lados de la membrana. 5) Transporte a travs de la Membrana Nuclear Existe un alto flujo bidireccional de macromolculas y protenas desde el compartimiento nuclear al citosol, en donde protenas como DNA y RNA polimerasas, histonas, protenas reguladoras de genes y las protenas de procesamiento del RNA, entre otras, son importadas desde el citosol, donde son sintetizadas, a este compartimiento. Al mismo tiempo, los RNAt y RNAm son sintetizados en el compartimiento y luego son llevados al citosol. Este contra transporte acoplado entre RNA y protenas, es llevado a cabo a travs de los Poros antes mencionados que atraviesan la membrana. Pero este transporte es altamente selectivo, y no cualquier protena o RNA puede pasar por la membrana nuclear. Para ser transportadas, necesitan un previo procesamiento. a. Poros Nucleares Los poros nucleares que atraviesan la envoltura nuclear, estn formados por cientos de protenas ordenadas ortogonalmente, y de manera simtrica (anillos proteicos). Est compuesto por un Anillo, una espcula, un tapn y la envoltura nuclear. Posee tres subunidades, una luminal, una columnar y una anular. Adems de unas fibrillas que salen hacia el interior del ncleo formando una especie de Jaula nuclear.

Cada complejo de poro representa un canal abierto por el que pueden pasar determinadas molculas de pequeo tamao por difusin simple. A medida que aumenta la complejidad del soluto a transportar, ms lento es el transporte de este, hasta llegar a protenas grandes que simplemente no pueden pasar. El dimetro del poro es de 9 nm aproximadamente, por lo que por ejemplo ribosomas citoplasmticos maduros de 30 nm, simplemente no puede pasar por el. Para realizar este transporte de protenas de mayor tamao, existen sealizadores, los cuales marcan estas protenas y se les es permitido el ingreso o salida del ncleo, lo que ser revisado ms adelante. b. Seales de localizacin Nuclear Durante el crecimiento celular, por ejemplo la replicacin del DNA, se necesita una vasta cantidad de Histonas para compactar el DNA lo ms posible hasta el mximo nivel de compactacin. Cuando esto ocurre, se necesitan aproximadamente un milln de estas protenas por cada 3 minutos, por lo que los miles de poros que rodean al ncleo, cuyo nmero varia segn la actividad de transcripcin que tenga la clula, transportan aproximadamente 100 protenas histonas por minuto. Para que este enorme transporte se lleve a cabo de manera ordenada, las protenas nucleares poseen lo que se denomina Seales de localizacin Nuclear (NLS) las cuales corresponden a una secuencia amino acdica de entre 4 y 8 AA que difieren entre si dependiendo de la protena que se transporta, pero que se asemejan en que todas son ricas en AA cargados positivamente (bsicos) Lisina y Arginina, y en ocasiones prolina. c. Transporte Activo a travs de los Complejos de Poro Cuando una de estas protenas marcadas con NLS desea entrar al Ncleo, otra protena llamada Importina ab, las captan al identificar esta seal. La subunidad a de la Importina se asocia a la protena a transportar, mientras que la b interacciona con el complejo de poro. Una vez que la protena a ingresado al ncleo, esta se disocia de la subunidad a de la Importina, y continua su camino. Este es un transporte Activo, y requiere de la Hidrlisis de ATP, y el cual cuya direccin y sentido esta dirigido por las Fibrillas de Jaula, que reciben a la protena ya dentro del ncleo. La energa aportada por el ATP

permite que el poro se dilate hasta casi unos 26 nm de dimetro, lo que permite el ingreso de estas protenas de mayor tamao a travs de el. Otros estudios han demostrado que el sentido esta determinado tambin por las seales. Protenas marcadas con NLS son transportadas desde el citosol al Ncleo, y aquellas que estn rodeadas de RNA de cualquier tipo, son transportadas desde el Ncleo al Citosol. Si se ingresa artificialmente alguna protena marcada con RNA al Ncleo, este inmediatamente es importado de este hacia el citosol. En cambio, si el mismo procedimiento se realiza dejando la protena marcada en el citosol, esta permanecer ah y no ser nunca transportada al Ncleo. La nica forma al parecer, es marcar una protena tanto con NLS como con RNA, lo que le otorga un flujo bidireccional a travs de las membranas de ste. Cuando el ncleo se desarma al entrar en mitosis, y las Lamininas forman las vesculas que lo contienen, todos los poros se desarman y las protenas quedan en el citosol. Una vez terminado el ciclo y ensamblado nuevamente el ncleo, los poros se rearman y todas aquellas protenas con seales de localizacin del Ncleo son transportadas inmediatamente al interior, y las que deben quedarse en el citosol, lo hacen. d. Regulacin del Transporte nuclear Para evitar que las protenas ingresen al ncleo innecesariamente, sus NLS deben ser inactivadas por fosforilacin. Otros mtodos involucran otras protenas las cuales se unen a estas bloqueando su seal, o enmascarndola, o retenindolas en el citosol. Esto permite que las protenas sean utilizadas e ingresadas al ncleo solo cuando realmente se necesitan y as evitar un gasto energtico innecesario. Con un determinado estmulo, la protena que bloquea la seal deja de hacerlo y as la bloqueada puede ingresar nuevamente al ncleo. Respecto al RNA, el sistema es semejante para la exportacin de estas macro molculas desde el ncleo. El transporte esta controlado mediante una secuencia especial llamada estructura de caperuza desde el extremo 5. Estos RNA estn inmaduros, y solo una vez que se haya completado su procesamiento entonces es transportado. Tambin pueden unirse en una etapa inmadura a protenas que tengan una seal que les permita salir del ncleo. 6) Sntesis y Procesamiento del RNA A partir de los cromosomas, se puede sintetizar el RNA usndolos como molde, puesto que solo as es como la clula puede utilizar el material gentico almacenado en estos. El proceso de sntesis de RNA se denomina Transcripcin del RNA, el cual es un proceso altamente selectivo, puesto solo el 1% de las secuencias nucleotdicas del DNA son utilizados para esto. Esta seleccin especial de secuencias del DNA se lleva a en dos niveles: El primero se transcribe solo una parte del RNA, produciendo RNA nucleares. Mientras que el segundo, se refiere a la pequea porcin de nucletidos en el RNA nuclear

que sobrevive, despus de ser transportados al citoplasma, a todas las etapas de su maduracin. a. RNA polimerasas Las RNA polimerasas son las protenas encargadas de la transcripcin del DNA, y esta inicia con la unin de esta protena polimerasa a la cadena de doble hlice de DNA en su secuencia Promotora. Inmediatamente despus, la doble hlice se abre formando un complejo abierto, donde queda expuesta la secuencia a transcribir, convirtindose esta en una Cadena Molde por la que se le puede comenzar a unir nucletidos complementarios a esta mediante la accin de la RNA polimerasa. La unin de los nucletidos complementarios, y as la extensin de la cadena, se realiza desde el extremo 5 al extremo 3 por esta protena, la cual se desliza a lo largo de la secuencia Molde. Este proceso termina cuando la protena alcanza una seal de paro, en la que se suelta del DNA y deja de transcribirse RNA. As, el RNA ahora transcrito, es una copia casi exacta de la cadena molde de DNA, a excepcin de los nucletidos T que son cambiados por U. b. Nuclolo y sntesis de Ribosomas La continua transcripcin de RNAr permite que estos rpidamente se empaqueten con protenas ribosomales formando los llamados Ribosomas. Este empaquetamiento se realiza en el nuclolo que es una estructura ubicada en el ncleo que no es considerada como un organelo y cuyo tamao tiene relacin con la actividad transcriptora de la clula. Este posee una amplia cantidad de bucles de DNA proveniente de varios cromosomas, donde cada uno de estos posee varios grupos de genes que sintetizan RNAr, genes transcritos por la RNA polimerasa I. Estos grupos de genes se denominan Regin organizadora Nuclear (NOR). Uno de los sintetizados o transcritos por el nuclolo es el RNAr 45S, el cual se empaqueta con protenas formando un gran complejo por el cual proceden todas las protenas citoplasmticas. (El s corresponde al coeficiente de sedimentacin por el que fueron separados) Las protenas Ribosomales o ribosomas, estn compuestas por varias protenas y RNA ribosomal, dando una protena de dos subunidades, una mayor y otra menor. Ambas, forman una protena de 80s, en donde la mayor corresponde a una de 60s y la menor a una de 40s. Estas subunidades se juntan al transcribir un gen para formar una protena. La formacin de esta protena ribosomal de dos subunidades, comienza entonces, como antes mencionado, con la sntesis del RNA precursor 45S en los NOR de los bucles de DNA en el nuclolo. A partir de aqu, protenas ribosmicas citoplasmticas y RNAr

y protenas recicladas en los procesos que le siguen a este, se unen al precursor formando una Unidad superior. A partir de esta, engendran las subunidades mayor y menor inmaduras, cada una conteniendo distintos RNAr. La subunidad menor, contiene RNAr 18s, mientras que la subunidad Mayor, contiene RNAr 28s, 5,8s y 5s. Este ultimo, RNAr 5s, no proviene del precursor 45s, sino que es sintetizado en otra parte del ncleo. Para finalizar con la maduracin de la subunidades, estas deben abandonar el ncleo por Transporte activo, donde recin ah tras un cierto tiempo son maduradas solo en el citoplasma. El resultado final, es una subunidad Mayor de 60s (formada por 48 protenas) y una menor de 40s (formada por 33 protenas), que juntas dan una protena ribosomal de 80s. Cuando la clula entra en divisin, el nuclolo va disminuyendo su tamao a medida que el DNA se va condensando cada vez ms, hasta que simplemente ste desaparece. Por lo general, en la metafase ya no existe nuclolo. Cuando comienza nuevamente la sntesis de RNA ribosmico, a finales de la telofase, entonces pequeos fragmentos de nuclolo se vuelven a formar, hasta que termina la divisin y este esta nuevamente armado por completo.