http://www.santafe-conicet.gov.ar/servicios/comunica/petroleo.

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DEGRADACIN DEL PETRLEO Y DETERGENTES CON MICROORGANISMOS La degradacin de contaminantes no es nada nuevo; la que s es novedosa es la degradacin del petrleo y detergentes por medio de microorganismos. De hecho, las grandes compaas petroleras transnacionales se han interesado cada vez ms en un campo de estudio llamado la Microbiologa del Petrleo, que tiene, entre otras lneas de investigacin, la degradacin microbiana de este combustible fsil. Si bien la degradacin del petrleo y sus derivados es un proceso natural, pero muy lento por la complejidad molecular de sus compuestos, la acumulacin de los contaminantes en la bisfera va en aumento debido a la utilizacin, por ejemplo, de hidrocarburos como fuente de energa. Pero tambin debido a derrames marinos de petrleo, por accidentes, cada vez ms frecuentes, de buques- tanque; a derrames de petrleo crudo en las zonas de donde se lo extrae; o a los mltiples talleres de automotores que dejan al aire libre residuos de derivados del "oro negro" y que carecen de mtodos de reciclaje. Estudios actuales pretenden implementar una tecnologa que comprende la liberacin de los microorganismos al medio ambiente para llevar a cabo "in situ", en el mismo lugar, los procesos de recuperacin de metales o la eliminacin de contaminantes, ya sean derivados del petrleo, metales pesados o detergentes. Una de las consecuencias ms interesantes de las investigaciones es que se ha logrado una coleccin de microorganismos, aislados de fuentes petroleras, de casi 200 variedades, que abren un enorme potencial para estudiar el metabolismo de hidrocarburos del petrleo con microorganismos nativos. El obtener microorganismos capaces de crecer en condiciones ambientales que puedan facilitar la eliminacin de contaminantes, y capaces de degradar hidrocarburos, representa una serie de retos y problemas como son las condiciones ambientales de temperatura. Sobre todo, deben poder crecer y vivir con petrleo como nica fuente de carbono y energa en condiciones de alta temperatura, salinidad y baja tensin de oxgeno. Para degradar detergentes se busca una especie de Pseudomonas capaces de degradarlo. Un estudio sostiene que la mayor parte de los detergentes de uso domstico e industrial utilizados en Mxico se preparan con derivados llamados "de cadenas ramificadas" de alki-bencen-sulfonato de sodio; molculas muy resistentes a la accin de los microorganismos y que causan un grave problema ecolgico de aguas y campos. De hecho, en muchos pases est prohibida su utilizacin, pero en el pas azteca contina en aumento. Por eso es importante encontrar los microorganismos que, en medio natural, puedan degradar a niveles aceptables los contaminantes que se acumulan y empeoran la situacin ambiental. Esta molcula de los detergentes es orgnica y es derivada del petrleo, y su uso desmedido causa trastornos irreversibles en la calidad del agua y suelo. Una solucin sera que PEMEX (la enorme petrolera estatal mexicana) dejara de producir los precursores ramificados, pero, o no tienen la tecnologa o no quieren incrementar el costo del producto con precursores lineales que son biodegradables. Cabe sealar que los microorganismos del estudio son de los gneros Bacilus y

Pseudomonas, en algunos casos modificados genticamente y manejados de tal forma que no causen daos a la salud humana, es decir, que no sean patgenos; por otro lado, se debe tratar de encontrar un microorganismo que degrade a los contaminantes, pues hay mtodos que eliminan contaminantes pero producen algo peor. Por el momento, los investigadores han clasificado algunos microorganismos capaces de crecer a expensas de algn hidrocarburo; hasta ahora, se est trabajando con Diesel. Los microorganismos producen una enzima que degrada o rompe algn enlace molecular de los compuestos y los utiliza como fuente de carbono. Lo que para todos es un contaminante, para el microorganismo es un alimento, ya sea la molcula completa o parte de ella; o la actividad propia del microorganismo en el ambiente tiene la capacidad colateral de actuar sobre la molcula indeseable, aunque no la pueda utilizar, pero la modifica para que otro microorganismo, que exista en el mismo medio, la utilice. De esta manera, existen muchas posibilidades. Hay que ver cmo actan los microorganismos y cul es la factibilidad de usarlos. Al respecto, en principio, se trat de obtener microorganismos capaces de producir sustancias viscosas que ayudaran a la extraccin del petrleo, y se encontr un organismo til, pero es ms importante en este momento encontrar la degradacin de los contaminantes que obtener mayor cantidad de crudo. El petrleo tiene cientos de sustancias diferentes en proporciones variables, y se est trabajando para encontrar un microorganismo ideal para la degradacin de los contaminantes mayoritarios, como la gasolina. Por ello, en la actualidad, el grupo de investigadores trabaja con el Diesel para despus intentarlo con los aceites lubricantes. En cuanto a los detergentes, es un poco ms fcil pues se trata de un grupo muy definido de molculas no tan variadas como en el caso del petrleo. El problema fundamental del detergente es su molcula ramificada que cuenta con ramificaciones de tomos de carbono, elemento difcil de descomponer. Los microorganismos se han obtenido tanto de pozos petroleros como de aguas negras o de tierra contaminada de talleres de automotores. De acuerdo a la experiencia de investigaciones de otros pases en microbiologa, se seala que as se pueden encontrar en la naturaleza, aunque no son muy abundantes. Todos los microorganismos que se cuentan en el laboratorio de microbiologa se estn sometiendo a pruebas bioqumicas para caracterizarlos y saber bajo qu condiciones pueden trabajar y reproducirse mejor. Una vez que se tiene el microorganismo, se ve el medio de cultivo en el que mejor se desarrolla de acuerdo al medio ambiente en el que se lo va a liberar. Este proceso es muy lento y a largo plazo, pues para cultivar los microorganismos se necesitan, por lo menos, ocho horas de "reproduccin". Si bien esta lnea de investigacin es abordada en muchos pases, sobre todo Estados Unidos y Europa, en Mxico se cuenta con condiciones diferentes. Pinsese tan slo en la temperatura ambiente en la que se desarrollan y queremos que acten: mientras en esos pases se trata de condiciones cercanas a los 0 C aqu se habla de entre 18 y 25 C. Por eso no ha convenido esperar a que otros hicieran sus microorganismos para luego comprrselos, pues en tierras mexicanas no funcionaran. (C) CERIDE - "Investigacin Hoy" (Mxico)

http://bioinformatica.uab.es/biocomputacio/treballs0203/rburgos/dades/degradaci%C3%B3 n_de_hidrocarburos.htm

DEGRADACIN DE HIDROCARBUROS
Como se ha comentado en la introduccin debido a la amplitud del tema vamos a centrarnos mas concretamente en la bioremediacin de hidrocarburos del petrleo el cual es un producto natural que se origina por la transformacin anaerbica de la biomasa en condiciones de temperatura y presin elevadas. El petrleo, debido a la existencia de filtraciones naturales, ha mantenido siempre contacto con la biosfera. Sin embargo, la magnitud de este fenmeno natural es pequea si se compara con la cantidad de crudo extrado en las perforaciones petrolferas, que se calcula en unos 2000 millones de toneladas anuales. Por eso de la preocupacin actual. An as podemos decir que los componentes del petrleo son biodegradables gracias a la accin de los microorganismos aunque su degradacin es relativamente lenta. Tambin decir que los vertidos accidentales de petrleo en tierra suelen ser ms fciles de contener y limpiar que si se producen en agua. Es importante mencionar primero antes de describir en general como se degradan los hidrocarburos, que el petrleo es una mezcla compleja de hidrocarburos alifticos, alicclicos y aromticos. Tambin contiene una menor proporcin de compuestos que no son hidrocarburos como cidos naftnicos, fenoles, tioles, compuestos heterocclicos de nitrgeno, compuestos de azufre y metaloporfirinas. Adems cada tipo de crudo tiene varios cientos de componentes diferentes. Por todo ello hay que tener en cuenta que se necesitan muchas vas catablicas diferentes, por lo tanto muchas poblaciones diferentes que puedan utilizar estos compuestos como fuente de energa y carbono. A continuacin se contempla de manera breve y general los sistemas que utilizan los microorganismos para degradar los diferentes tipos de hidrocarburos: 1-Degradacin de hidrocarburos alifticos en presencia de oxigeno: 2-Degradacin de hidrocarburos aromaticos en presencia de oxigeno: 3-Degradacin anaerbica:

1- Degradacin de hidrocarburos alifticos en presencia de oxigeno: Los hidrocarburos alifticos los podemos clasificar en alcanos, alquenos y alquilos dependiendo de lo saturados que estn sus enlaces. Como norma general decir que como mas insaturado sea una cadena carbonatada ( ms dobles y triples enlaces) ms difcil o lenta ser su degradacin. De igual manera los alcanos de cadena larga son ms resistentes a la biodegradacin a medida que la longitud de su cadena aumenta. Cuando alcanzan un peso molecular superior a 500 dejan de servir como fuente de carbono para el crecimiento microbiano. En general tambin la presencia de ramificaciones reduce la tasa de biodegradacin porque los tomos de carbono terciarios y cuaternarios interfieren con los mecanismos de degradacin o lo bloquean totalmente. Los microorganismos que utilizan hidrocarburos como sustrato deben de tener enzimas denominada monooxigenasas que son dependientes de oxigeno. La mayora de los microorganismos en teora si son capaces de sobrevivir en ese ambiente pueden degradar sin mas problemas hidrocarburos de cadena larga. Para que sea de fcil comprensin y sin entrar en demasiados detalles metablicos podemos decir que para que los microorganismos puedan degradar alcanos primero deben de oxidar con oxigeno el ltimo carbono de la molcula gracias al complejo multienzimtico que no hacen mas que incorporar esta molcula de oxigeno. As se obtiene un hidrocarburo con un grupo alcohol siendo as una molcula mas reactiva. Mediante otras enzimas este grupo alcohol se oxida mas hasta grupo aldhedo y finalmente carboxlico. As se obtiene una molcula similar a un cido graso y puede ser degradado a acetil-CoA por -oxidacin. Este proceso de oxidacin tambin puede darse en carbonos no terminales dando lugar a dos cidos grasos que se procesarn por -oxidacin. Todo este proceso se puede ver representado esquematizado en la imagen de la izquierda.

Pero como deca aunque la mayora de microorganismos en teora sean capaces de utilizar este mecanismo pocos pueden vivir en esas condiciones. Para hacerlo deben ser capaces de vivir en un medio muy hidrfobo como es el petrleo. Por lo tanto para colonizar las interfases petrleo-agua tienen que variar sustentiblemente la membrana. Adems para introducir los hidrocarburos en la clula lo hacen va vescula. Por lo tanto si hablamos de requerimientos genticos no solo es necesario el sistema monooxigenasa sino otros genes que permitan variar la envoltura y formacin de esas vesculas. Por esta razn son pocos las especias que puedan realizar esta biodegradacin. Sin duda la especie con mas posibilidades y la mas estudiada en el campo es Pseudomonas. (Arriba) 2-Degradacin de hidrocarburos aromaticos en presencia de oxigeno: En el caso de los hidrocarburos aromticos, el principal problema para degradarlos es romper este anillo aromtico que pueden ser muy variados. Los microorganismos que utilizan estos compuestos aromticos como fuente de carbono ,lo que hacen es que en lugar de utilizar una enzima monooxigenasa especfica para cada molcula diferente, utilizan unas vas bioqumicas llamadas vias altas o perifricas que consisten en modificar los diferentes anillos aromticos absorbidos en protocatechuate y catechol. Es decir, la gran variedad de compuestos aromticos que se pueden encontrar son modificados y convertidos a estas dos molculas. A partir de estas dos molculas que convergen todos los compuestos, ya se puede llevar a cabo el rompimiento del anillo mediante enzimas especficas. Esta segunda fase en la degradacin seria lo que

se conocera como vas bajas. La imagen de la derecha ilustra la ruta metablica de estas vas bajas. A nivel gnico decir que los genes que intervienen en las vas bajas suelen encontrarse a nivel cromosmico. Sin embargo los genes que intervienen en las vas altas debido a su gran variedad, suelen codificarse en plsmidos, aumentando as la probabilidad de adquirir nuevas vas por transferencia gnica horizontal. Por ejemplo, el plsmido TOL ( pWWO) contiene los genes implicados en transformar el tolueno a protocatechuate o catechol.( En el apartado de regulacin gnica se hace un esmento especial).

(Arriba)

3-Degradacin anaerbica: El hecho que en todos los ambientes donde los hidrocarburos naturales se forman el oxigeno no esta presente, ha hecho pensar a la comunidad cientfica que los hidrocarburos no podran ser degradados anaerbicamente. Pero a finales de 1980s se descubrieron algunos microorganismos que si tenan cierta actividad degradadora bajo condiciones totalmente extrictas. Este conocimiento es tan reciente que an no se comentan ni en los libros de textos mas especializados en el tema ni siquiera la posibilidad. Actualmente se est trabajando mucho en este inslito campo por la importancia que tiene y las aplicaciones potenciales que pueda tener en la biorremediacin. Hay que tener en cuenta que en la mayora de los lugares contaminados donde se quiere aplicar estas tcnicas de biorremediacin hay condiciones anoxignicas o de seguida se consume el oxigeno. Lo que se hacia hasta ahora en estas situaciones es insuflar aire en estos ambientes mediante una bomba para favorecer la degradacin aerbica. Evidentemente esta tcnica hace encarecer el proceso aparte que a veces la difusin de oxigeno no puede ser posible. Los pocos estudios realizados hasta ahora han desvelado que los mecanismos de degradacin en estas condiciones son totalmente diferentes a los utilizados en presencia de oxigeno excepto la -oxidacin que tambin se da en condiciones anxicas. En general se dan procesos de reduccin o condensacin con otras molculas para activar primero los compuestos. Como en esta pagina se quiere dar una idea general sobre el campo de la biorremediacin si se desea saber mas sobre mecanismos de degradacin de diferentes compuestos aromaticos en condiciones anaerbias se recomienda la lectura del siguiente review. y para los mecanismos que se utilizan para degradar compuestos recalitrantes se recomienda este otro review.