Teresa Blandina Castro Ribas

UNIVERSIDADE DE TAUBAT
Teresa Blandina Castro Ribas

DISPOSIO NO SOLO DE EFLUENTES DE ESGOTO
TRATADO VISANDO A REDUO DE
COLIFORMES TERMOTOLERANTES

Taubat - SP
2008

UNIVERSIDADE DE TAUBAT
Teresa Blandina Castro Ribas

DISPOSIO NO SOLO DE EFLUENTES DE ESGOTO
TRATADO VISANDO A REDUO DE

Taubat SP
2008
Dissertao apresentada para obteno do Ttulo
de Mestre pelo Curso de Ps-graduao em
Cincias Ambientais do Departamento de
Cincias Agrrias da Universidade de Taubat.
rea de Concentrao: Gesto Integrada de
Resduos.
Orientador: Prof. Dr. Paulo Fortes Neto

Ficha catalogrfica elaborada pelo
SIBi Sistema Integrado de Bibliotecas / UNITAU

R482d Ribas, Teresa Blandina Castro
Disposio no solo de efluentes de esgoto tratado visando a
reduo de coliformes termotolerantes / Teresa Blandina Castro
Ribas. - 2008.
70f.: il.

Dissertao (mestrado) - Universidade de Taubat, Programa de Ps-
graduao em Cincias Ambientais, 2008.
Orientao: Prof. Dr. Paulo Fortes Neto, Departamento de Cincias
Agrrias.

TERESA BLANDINA CASTRO RIBAS

DISPOSIO NO SOLO DE EFLUENTES DE ESGOTO TRATADO
VISANDO A REDUO DE

Data: 12 de setembro de 2008
Resultado: APROVADA

BANCA EXAMINADORA

Prof. Dr. Paulo Fortes Neto Universidade de Taubat

Prof. Dr. Claudinei Fonseca Souza Universidade de Taubat

Prof. Dr. Jos Euclides Stipp Paterniani Universidade Estadual de Campinas

Prof. Dr. Paulo Fortes Neto
Orientador

Dissertao apresentada para obteno do Ttulo
de Mestre pelo Curso de Ps-graduao em
Cincias Ambientais do Departamento de
Cincias Agrrias da Universidade de Taubat.
rea de Concentrao: Gesto Integrada de
Resduos.

AGRADECIMENTOS

Aos meus pais Iria Otlia e Casimiro Ribas Serra, pela pacincia em me ouvir nos
momentos de euforia ou desnimo. Em especial, agradeo a minha me pelos
lanchinhos tarde da noite e por cuidar de meus 30 vira-latas, sempre que havia a
necessidade de me ausentar.

Ao meu Orientador Prof. Dr. Paulo Fortes Neto, por sua incomensurvel pacincia e
compreenso durante aqueles meus freqentes 5 minutos mal humorados. Agradeo
pela confiana e incentivo, nesta jornada que ainda est s comeando.
Repetindo o que me disse uma vez: - como diz o coelho na histria da Alice no
Pas das Maravilhas: parece no ter mais fim...

Ao Prof. Dr. Claudinei Fonseca Souza, pesquisador e pessoa da mais alta qualificao,
meu grande amigo e maior incentivador nestes meus primeiros passos de iniciante na
pesquisa.

Ao Prof. Dr. Marcelo dos Santos Targa, Coordenador do Programa de Ps-graduao
em Cincias Ambientais, pelo fundamental apoio e reconhecimento quando mais
precisei.

Ao meu grande amigo e sempre solidrio Prof. Dr. Getlio Teixeira Batista, pessoa e
profissional do mais alto nvel intelectual, dono de um enorme corao carregado de
bondade e ateno.

Tcnica de laboratrio e Mestre em Cincias Ambientais Eliana Maria de Arajo
Mariano da Silva, pela pacincia e informaes preciosas que possibilitaram a
realizao das anlises microbiolgicas.

Ao Sr. Domcio Sebastio da Silva e sua equipe, pela pacincia, dedicao e
fundamental apoio na estruturao do experimento em campo.

Ao Prof. Dr. Joo Luiz Gadioli e sua equipe, pelo apoio na realizao das anlises
qumicas no Laboratrio de Solos e Plantas.

A minha amiga Neide B. C. Marques, Mestre em Cincias Ambientais, pessoa
carismtica, doce, divertida. Uma amiga das horas felizes e difceis, que sempre me
incentivou e esteve presente mesmo quando ausente.

Aluna de Graduao em Engenharia Ambiental e Sanitria Roberta Eliza Marioto
Gonalves, pelo grande auxlio na realizao das anlises de laboratrio.

s meninas da Secretaria da Graduao, em especial a Marta, por sua simpatia,
pacincia e compreenso em me ouvir nos momentos de nervosismo...que no foram
poucos.

s meninas da Secretaria da Ps-graduao, em especial a Sra. Jeni Gondolo, por sua
pacincia em atender e socorrer a complicada aluna da ps-graduao.

A todos os demais funcionrios e professores do Departamento de Cincias Agrrias
da UNITAU e do Programa de Ps-graduao em Cincias Ambientais, pela simpatia
e colaborao, que de uma forma ou de outra contriburam para o sucesso deste
trabalho.

Ao Departamento de Cincias Agrrias, por ceder os laboratrios, equipamentos e
materiais para realizao das anlises qumicas e microbiolgicas.

O homem argumenta, a natureza age.

Voltaire (1694-1778).

RESUMO

Disposio no solo de efluentes de esgoto tratado visando a reduo de
coliformes termotolerantes

O lanamento indiscriminado nos corpos dgua de esgotos domsticos sem tratamento, ou
mesmo tratados, mas sem desinfeco apropriada, contribui com quantidade significativa de
organismos do chamado grupo coliforme, entre os quais agentes especficos de doenas de
veiculao hdrica podem estar presentes. A aplicao no solo de efluentes de esgotos
domsticos devidamente tratados, ao invs de sua disposio direta em cursos dgua, alm de
ser uma maneira alternativa para disposio de resduos e controle biolgico de poluentes,
constitui um modo adequado de fornecimento de nutrientes ao solo e plantas. Este trabalho
teve como objetivo avaliar a reduo de coliformes termotolerantes aps aplicaes no solo de
efluente de esgoto domstico tratado por um perodo de 60 dias, associando os valores obtidos
ao adensamento de rizobactrias Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. presentes nas
rizosferas de diferentes culturas. O experimento foi desenvolvido em rea da Fazenda Piloto
do Departamento de Cincias Agrrias da Universidade de Taubat e o Delineamento
Experimental constou de blocos casualizados com cinco tratamentos envolvendo o cultivo de
aveia, cevada, triticale, feijo preto e solo sem cultivo (Testemunha), totalizando 20 parcelas
de solo classificado como Latossolo Vermelho Amarelo Distrfico. Os resultados obtidos por
meio de anlises microbiolgicas de amostras de solo rizosfrico e no rizosfrico
apresentaram um maior adensamento de rizobactrias na rizosfera da aveia. Entretanto, a
maior eficincia obtida na reduo de coliformes termotolerantes foi alcanada nos
tratamentos envolvendo feijo preto e solo sem cultivo.

Palavras-chaves: Disposio no solo; fitorremediao; esgoto; coliformes; Pseudomonas;
Bacillus.

ABSTRACT

Controlled disposal of effluent domestic sewage in the ground a study of the reduction of
fecal coliforms

The indiscriminate launching in the water courses of sewers domestic without treatment, or
exactly treat, but without appropriate disinfection, contributes with significant amount of
organisms of the called "coliform group", between which specific agents of illnesses of water
propagation can be present. The application of the effluent in the ground, instead of its direct
disposal in water courses, beyond being an alternative way for the disposal of residues and
biological control of pollutants, constitutes an adequate way of supply of nutrients to the
ground and plants. So, this work had as objective to evaluate the reduction of fecal coliforms,
after controlled applications of effluent in ground cultivated, associating the values gotten to
the increase of fluorescent rhizobacterias Pseudomonas and Bacillus spp. presents in the
rhizospheres of different cultures. The project was developed in conditions of field in area of
the Pilot Farm of Department of Agrarian Sciences of the University of Taubat, city of
Taubat, SP. The Experimental Delineation consisted of some blocks, with five treatments
composites for culture of annual species: Oats, Barley, Wheat, Black Beans and ground
without culture (as Witness) and four repetitions, totalizing 20 ground parcels with area of 2m
x 1m and space among them of 50cm. Controlled applications of effluent had been carried
through in Red - Yellow Latossolo, in intervals of 20 days for a period of sixty days. From 60
days had been registered in all the treatments reduction of high values base 10
6
to high values
base 10
3
. One concludes that the technique of controlled application of effluent in ground
cultivated revealed efficient in the reduction of fecal coliforms, however, for a conclusive
evaluation of the capacity-support of the ground and performance of the rhizospheres of
cultures, it becomes necessary the continuity of the experiment for a bigger period of
applications, as well as, the job of other vegetal species in the treatment of domestic sewers.

Key words: Application in the ground; sewage; wastewater; coliforms; rhizobacterias.

NDICE DE TABELAS

Tabela 1 Eficincia alcanada por sistemas de tratamento de esgotos na reduo de
microrganismos patognicos e microrganismos indicadores............................16

Tabela 2 - Ocorrncias tpicas de microrganismos patognicos e microrganismos
indicadores em esgoto bruto..............................................................................17

Tabela 3 Perodos de sobrevivncia de alguns agentes patognicos no solo...................24

Tabela 4 - Caracterstica Qumica Natural do solo da rea experimental...........................32

NDICE DE FIGURAS

Figura 1 Vista geral da rea de desenvolvimento do experimento no Departamento
de Cincias Agrrias da UNITAU.............................................................31

Figura 2 - Vista do experimento, composto por cinco tratamentos com quatro
repeties................................................................................................. 34

Figura 3 Vista geral da aplicao controlada de efluente nas parcelas
de solo....................................................................................................... 35

Figura 4 Colnias de bactrias Pseudomonas fluorescens observadas sob
incidncia de luz ultravioleta ..................................................................36

Figura 5 Nmero mais provvel de Coliformes termotolerantes aps 60 dias......40

Figura 6 - Unidade formadora de colnias de P. fluorescens e Bacillus spp. antes
da primeira aplicao do efluente no solo............................................... 43

Figura 7 - Unidade formadora de colnias de P. fluorescens e Bacillus spp. aps
20 dias da primeira aplicao...................................................................45



SUMRIO

Pgina

RESUMO..........................................................................................................vi
ABSTRACT....................................................................................................viii
LISTA DE FIGURAS.......................................................................................ix
LISTA DE TABELAS.......................................................................................x
1 INTRODUO.......................................................................................11
2 REVISO DE LITERATURA................................................................13
2.1 Saneamento bsico um panorama.......................................................13
2.2 Sistema de tratamento de efluentes por leito de razes..........................15
2.3 Disposio de efluente tratado no solo..................................................17
2.4 Microrganismos patognicos relacionados a esgotos sanitrios............21
2.5 Efeitos da aplicao de efluente no solo................................................22
2.5.1 Aspectos fsico-qumicos.....................................................................22
2.5.2 Aspectos microbiolgicos....................................................................23
2.6 Relao solo-planta e o adensamento de bactrias nas rizosferas.........26
2.7 Taxonomia de Pseudomonas spp de Bacillus spp.................................28
2.8 Mecanismos de ao desenvolvidos por rizobactrias..........................28
3 MATERIAL E MTODOS......................................................................31
3.1 Localizao e conduo do experimento...............................................31
3.2 Monitoramento e anlises microbiolgicas...........................................35
3.2.1 Solo.......................................................................................................35
3.2.1.1 Contagem de bactrias Pseudomonas fluorescens...........................36
3.2.1.2 Contagem de bactrias Bacillus spp.................................................37
3.2.1.3 Contagem de Coliformes termotolerantes........................................37
3.2.2 Efluente.................................................................................................38
4 RESULTADOS E DISCUSSO.............................................................39
5 CONCLUSES .......................................................................................52
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................54

1 INTRODUO

O efluente domstico, por ser um resduo altamente poluidor, tem nos ltimos anos
demandado pesquisas com nfase ao desenvolvimento de tecnologias adequadas e de baixo
custo para o tratamento e disposio de guas residurias.
O lanamento indiscriminado nos corpos dgua de esgotos domsticos sem
tratamento, ou mesmo tratados, mas sem desinfeco apropriada, contribui com quantidade
significativa de organismos do chamado grupo coliforme, entre os quais agentes especficos
de doenas de veiculao hdrica podem estar presentes.
A aplicao do efluente no solo, ao invs de sua disposio direta em cursos
dgua, alm de ser uma maneira alternativa para disposio de resduos e controle biolgico
de poluentes, constitui um modo adequado de fornecimento de nutrientes ao solo
(FONSECA et al., 2000).
Ao entender o solo como um elemento depurador, e o sistema solo-planta como um
reator renovvel, reator este regido pelas leis da natureza, pode-se entender tambm, nesse
contexto, os esgotos como fonte de energia, e no como um grande problema ambiental.
O solo o habitat natural para uma grande variedade de organismos, tanto
microrganismos, quanto animais invertebrados. Esse conjunto que vive e responsvel por
inmeras funes do solo chamado de microbiota do solo, e apresenta uma grande variedade
de tamanhos e metabolismos.
Os microrganismos so extremamente diversos com vrias centenas de espcies de
fungos e uma grande diversidade de tipos de bactrias com populaes que variam de 10
6
a
10
9
clulas por centmetro cbico (SWIFT et al., 1979). Estudos constataram, ainda, que um
solo com a presena de razes promove seu adensamento em relao a um solo sem razes.
A colonizao da rizosfera - rea ao redor das razes - deve-se a uma maior
11

disponibilidade de nutrientes em relao ao solo no-rizosfrico.
Bactrias do grupo fluorescente do gnero Pseudomonas e gnero Bacillus spp.
caracterizam-se por serem os dois mais abundantes gneros de microrganismos presentes nos
solos, sendo considerados importantes agentes de controle biolgico, pois podem suprimir
patgenos da rizosfera, atravs de mecanismos de inibio que incluem predao, competio
por espao e nutrientes, produo de -1,3-glucanase, quitinases, antibiticos, cido ciandrico
e siderforos, que so compostos de baixo peso molecular, quelantes de ferro, produzidos pela
maioria das bactrias sob condies limitantes desse elemento. Podem ainda atuar como
biorremediadores de reas contaminadas, por degradarem substncias xenobiticas.
Na variedade de microrganismos conhecidos que sintetizam siderforos alm das
bactrias j mencionadas do gnero Pseudomonas e Bascillus spp., esto includas, tambm,
vrias bactrias entricas; bactrias patognicas de humanos do sub-grupo coliformes
termotolerantes, dentre elas Escherichia coli, Salmonella typhimurim e Aerobacter aerogenes
(BENITE et al., 2002).
Sendo assim, dada a relevncia e atualidade da problemtica da contaminao dos
recursos naturais pela prtica de descarte de efluentes domsticos no solo, o objetivo deste
trabalho foi verificar se a disposio no solo de efluentes de esgoto domstico tratado
cultivado favorece o adensamento de rizobactrias do gnero Pseudomonas do grupo
fluorescente e do gnero Bacillus spp., associando os valores obtidos na reduo de coliformes
termotolerantes presentes no efluente tratado.

12

2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Saneamento Bsico um panorama
Durante sculos a gua foi considerada um bem pblico de quantidade infinita;
estaria sempre disposio do homem, por se tratar de um recurso natural auto-sustentvel
em virtude de sua capacidade de autodepurao. No entanto, o crescimento populacional
aumentou de tal forma que os esgotos lanados nos crregos, rios, represas e lagos prximos
s aglomeraes humanas superaram a capacidade de autodepurao desses corpos receptores,
em decorrncia da carga poluidora dos efluentes.
A falta de saneamento bsico atualmente a causa de um dos mais srios
problemas ambientais o comprometimento dos recursos hdricos. Segundo Kresse (1997), os
esgotos domsticos so responsveis por 90% dos lanamentos que contaminam corpos
dgua. Sendo a gua um elemento essencial vida, pode vir a trazer riscos sade em face de
sua m qualidade, servindo de veculo para vrios agentes biolgicos e qumicos
(BARCELLOS et al., 2000).
Dados do Ministrio da Sade indicam que os grandes desafios da sade, ainda
so, principalmente, as hepatites, a malria, a febre amarela, a clera, a esquistossomose, a
dengue, as leishmanioses, a hantavirose, doenas de veiculao hdrica ou que tenham como
elo importante da cadeia, o ambiente.
No h como combater essas enfermidades deixando de lado as populaes rurais,
nas quais a adequada captao e uso da gua e destinao dos esgotos so sabidamente mais
negligenciados do que nos grandes centros urbanos (BARCELLOS et al., 2000). H grande
importncia em se buscar o conhecimento da realidade rural, caracterizada por populaes
com menor acesso s medidas de saneamento e pela presena de atividades agropecurias
altamente impactantes, podendo interferir na qualidade dos mananciais, muito desses
utilizados no abastecimento de gua nas cidades (AMARAL et al., 2003).
13

De acordo com o relatrio do PNUD - Programa das Naes Unidas para o
Desenvolvimento -, emitido pela CEPAL Comisso Econmica para a Amrica Latina e o
Caribe (2005), o Brasil regrediu na tarefa de reduzir pela metade a proporo da populao
rural sem acesso a saneamento adequado. Quase dois teros dos brasileiros que vivem fora de
reas urbanas ainda no contam com o servio de saneamento bsico. Isso significa que mais
de 20 milhes de pessoas o dobro da populao de uma cidade como So Paulo correm
maiores riscos de contrair doenas infecciosas ou parasitrias, que so adquiridas
principalmente pelo contato com o esgoto.
O relatrio do PNUD (2005), mostra que a proporo da populao rural brasileira
com acesso a saneamento adequado caiu de 37% em 1990 para 35% em 2002.
No contexto urbano, a situao do saneamento no Brasil melhor, mas no o
suficiente para que o pas avance nos Objetivos de Desenvolvimento do Milnio. De 1990 a
2002, a taxa de acesso ao benefcio se manteve praticamente estacionada, com um modesto
crescimento de 82% para 83%. Os Objetivos de Desenvolvimento do Milnio foram
adotados em 2000 pelos governos de 189 pases e elaborados pelos organismos das Naes
Unidas sob coordenao da CEPAL, como um compromisso para combater a desigualdade e
melhorar o desenvolvimento humano no mundo.
De acordo com o ltimo Censo Demogrfico do Instituto Brasileiro de Geografia e
Estatstica (IBGE, 2002), 81,38% da populao reside em rea urbana e 18,62% em zona rural.
Estudos de Bernardes e Soares (2005) mostram que as regies Norte e Nordeste do pas so as
mais atingidas pela falta de saneamento, principalmente na zona rural. Na regio Sul, por
exemplo, apenas 7,1% da populao rural no tem banheiro nem sanitrio, enquanto na regio
Nordeste, 61,4% da populao rural (8.979.301 moradores) no possui banheiro nem sanitrio.
Ao analisarmos a situao do saneamento no Brasil, pode-se afirmar que o modelo
de atendimento com sistemas de coleta e tratamento de esgotos sanitrios, centrados nas
14

companhias estaduais induziu a uma ateno macia nas sedes municipais, sem que a
populao rural tivesse recebido atendimento significativo.
Os altos custos dos sistemas convencionais de tratamentos e polticas pblicas
ineficientes so apontados como barreiras para resolver essa situao. No entanto, podem-se
adotar tecnologias que sejam apropriadas e de baixo custo para regies carentes desse servio,
principalmente as situadas em reas perifricas e zonas rurais, nas quais as distncias rea
urbana, a topografia irregular e o uso e ocupao do solo sem planejamento dificultam ainda
mais a implantao dos complexos sistemas centrais. Segundo Ambros (apud Kaick, 2002), as
estaes de coleta e tratamento de esgotos convencionais podem ser substitudas por sistemas
menores e mais flexveis, e at individuais, nas regies menos habitadas e perifricas. Esses
sistemas devem voltar-se para as necessidades reais, ou seja, serem instalados prximos do
cotidiano e de suas carncias, em locais onde predomine a demanda por sistemas naturais de
tratamento de esgotos realizados por processos biolgicos, por meio de microrganismos
decompositores presentes no solo ou na gua, responsveis pela degradao da matria
orgnica.

2.2 Sistema de tratamento de efluentes por leitos cultivados

Uma das tecnologias para tratamento de efluentes sanitrios empregada, embora
no seja nova, mas que tomou impulso nos ltimos dez anos a Fitorremediao, pois a zona
radicular das plantas, chamada de rizosfera, apresenta uma capacidade de transformar
molculas orgnicas exgenas em fontes de nutrientes para os diversos microrganismos que
habitam nesta regio (DINARDI et al., 2005). Trata-se de uma estratgia in situ que envolve o
emprego de espcies vegetais adequadas e microrganismos a elas associados com o fim de
degradar, reter e remover poluentes orgnicos e inorgnicos do solo e gua.
Ribas et al. (2005), implantaram nos Municpios de Jacare e Taubat, Estado de
15

So Paulo, em 2004 e 2005, respectivamente, um sistema de tratamento de efluentes por leito
cultivado, o qual emprega a tcnica da Fitorremediao, atravs do uso da espcie
Zantedeschia aethiopica L., conhecida popularmente como Copo-de-leite.
Caracteriza-se por ser um sistema fsico-biolgico, constitudo por tanque sptico
onde ocorre o tratamento primrio do efluente bruto, cuja funo remover os slidos
sedimentveis e leito de razes, onde ocorre o tratamento secundrio. Nos dois municpios, os
sistemas alcanaram uma reduo de 99% de Coliformes Totais e Fecais entre o efluente bruto
e o tratado. Entretanto, segundo Chernicharo et al. (1997), embora a eficincia parea elevada,
de acordo com a Tabela 1, deve-se ressaltar que, em se tratando de coliformes, estes esto
presentes em quantidades muito elevadas (Tabela 2) e, portanto, so necessrias eficincias de
remoo tambm muito altas, usualmente na faixa de 99,99 a 99,999%, para o atendimento
aos padres de qualidade microbiolgica. Vale ressaltar que a concentrao de
microrganismos sobreviventes ou remanescentes vivos mais importante que a eficincia
em termos percentuais.

Tabela 1 Eficincia alcanada por sistemas de tratamento de esgotos na reduo de
microrganismos patognicos e microrganismos indicadores

Microrganismos Tratamento primrio (%) Tratamento secundrio (%)
Coliformes fecais 35 90 a 99
Shigella sp. 15 91 a 99
Salmonella sp. 15 96 a 99
Escherichia coli 15 90 a 99
Ovos de helmintos 50 a 90 70 a 99
Fonte: Adaptado de EPA (1986).

16

Tabela 2 Ocorrncias tpicas de microrganismos patognicos e microrganismos indicadores
em esgoto bruto

Microrganismo Contribuio per capta
(org/hab.d)
Concentrao
(org/100mL de esgoto bruto)
Coliformes totais 10
9
a 10
12
10
6
a 10
9
Coliformes fecais 10
8
a 10
11
10
5
a 10
8
Cistos de protozorios < 10
6
< 10
3
Ovos de helmintos < 10
6
< 10
3
Vrus 10
5
a 10
7
10
2
a 10
4
Fonte: Adaptado de VON SPERLING (1995) e ARCEIVALA (1981)

As diversas tecnologias de tratamento de esgotos, que atendem at a etapa de
tratamento secundrio, inclusive os sistemas por leito de razes, usualmente alcanam uma
remoo satisfatria de coliformes e organismos patognicos em termos percentuais, mas no
em concentraes reais. Apenas processos de tratamento de esgotos que incorporam: lagoas de
maturao, infiltrao no solo e desinfeco so capazes de alcanar nveis reduzidos de
coliformes no efluente.

2.3 Disposio de efluente tratado no solo Reso de gua

A aplicao de efluente no solo constitui uma das prticas mais antigas de
tratamento, destino final e/ou reciclagem de esgotos sanitrios. As fazendas de esgotos,
como ficaram conhecidas as primeiras experincias na Inglaterra, no incio do sculo XIX,
logo se disseminaram pela Europa e Estados Unidos. Entretanto, com o crescimento das
cidades, a valorizao das reas periurbanas e a seduo exercida pelo desenvolvimento de
alternativas tecnolgicas mais sofisticadas, a opo pela disposio no solo como mtodo de
tratamento foi praticamente abandonada por volta do final da primeira metade do sculo XX
(BASTOS et al, 2003).
17

Embora as primeiras experincias tivessem por objetivo inicial o tratamento dos
esgotos, a irrigao, como meio de reciclagem da gua e produo agrcola, tambm constituiu
uma prtica j centenria. Porm, o desenvolvimento da microbiologia sanitria e as
preocupaes crescentes com a sade pblica fizeram com que esta alternativa se tornasse
praticamente desaconselhada em meados do sculo XX (MARA e CAIRNCROSS, 1989).
Por outro lado, vrios fatores contriburam para que o interesse pela disposio no
solo, incluindo a irrigao, fosse renovado e se mostrasse cada vez mais freqente em todo o
mundo: a crescente escassez de recursos hdricos, a crescente deteriorao dos mananciais de
gua, as limitaes tcno-financeiras para implantar solues mais complexas de tratamento, o
elevado custo dos insumos agropecurios, o avano do conhecimento cientfico sobre o
potencial e as limitaes dessa alternativa como mtodo de tratamento e/ou reuso de gua,
incluindo os respectivos aspectos agronmicos, ambientais e, principalmente, sanitrios
(LUCAS FILHO et al., 2002).
Em certos pases, como Israel (PAGANINI, 2005) a preocupao com a escassez
de gua favorece o uso da tcnica de aplicao de resduos no solo ao invs de descarreg-los
nos corpos dgua (CAMERON et al., 1997). Em outros, como o Brasil, h falta de tradio
na reciclagem de resduos gerados, particularmente do efluente de esgoto (FONSECA, 2001).
Todavia, nos anos recentes, a aplicao de resduos orgnicos na agricultura tem
recebido ateno considervel pelo aumento crescente do requerimento de energia para
produo de fertilizantes minerais e por causa dos custos e problemas ambientais associados
com mtodos alternativos de disposio de resduos (CHAE e TABATABAI, 1986). Isso tem
levado a um aumento expressivo do nmero de publicaes relacionadas utilizao de
resduos orgnicos no solo. No entanto, no tm sido abordados os benefcios econmicos,
energticos e ambientais dos mesmos (SIMS, 1996).
Embora a aplicao de resduos no solo esteja se tornando mais difundida como
18

regulamento das autoridades para proteger a qualidade da gua, ainda no est bem claro se o
solo de fato, o local mais apropriado para receber todos os resduos gerados pela ao
antrpica (CAMERON et al., 1997).
O solo como elemento depurador, considerado como um sistema disperso,
polifsico e heterogneo, possui propriedades que possibilitam sua utilizao como meio de
tratamento de guas residurias (QUEIROZ et al., 2004). Sendo um meio fsico formado por
substncias minerais e orgnicas, cujas formas predominantemente granulares conferem-lhe
propriedades caractersticas como a porosidade, a permeabilidade, a textura e outras que o
tornam habitat natural de um grande nmero de seres vivos microscpicos, vegetais e animais
(PAGANINI, 2005). Os microrganismos se adaptam aos microhabitats interagindo uns com os
outros e com outras partes da biota do solo (TORSVIK e OVREAS, 2002).
A escolha do mtodo de disposio no solo est relacionada aos objetivos
pretendidos em primeira instncia: a disposio final dos esgotos, o tratamento dos esgotos
com posterior destino final em corpos receptores ou a produo agrcola (irrigao), os quais
devem ser compatibilizados s caractersticas do solo e da gua, como a topografia e a
composio fsico-qumica. Se o objetivo o tratamento de esgotos, pressupondo-se a
produo de um efluente tratado em condies de ser lanado em um corpo dgua como
disposio final, dependendo das caractersticas do solo e da taxa de aplicao predominaro a
infiltrao-percolao ou escoamento superficial. Normalmente, os esgotos so aplicados em
solos menos permeveis e de baixa declividade, em taxas mais reduzidas. Nos processos de
infiltrao-percolao pode haver ou no cobertura vegetal, enquanto nos processos de
escoamento superficial as gramneas so usualmente partes integrantes e importantes do
processo de tratamento. O tratamento se d tanto por processos fsico-qumicos no solo quanto
por processos biolgicos na interface do sistema solo-gua-planta, onde se forma o biofilme
(BASTOS et al, 2003).
19

O conjunto formado pelo solo, vegetao superior, energia solar e gua asseguram
a transformao da matria orgnica em energia renovvel (CAVINATTO, 2007). No sistema
solo-microrganismos-planta encontram-se os elementos que atuam no tratamento por
disposio no solo: solo e superfcie do solo, sistema foliar, colo da planta e sistema radicular.
Esses elementos iro atuar com maior ou menor intensidade dependendo do mtodo de
disposio adotado (PAGANINI, 1997).
A ao dos microrganismos presentes nos solos no estreis e nas plantas um dos
principais fatores de remoo de microrganismos patognicos que chegam com o esgoto ao
solo (ANDRADE NETO, 1997). A ao dos microrganismos na remoo de patognicos
tanto direta por competio vital, como indireta devido s transformaes bioqumicas do
substrato, principalmente a estabilizao (mineralizao) da matria orgnica (ANDRADE
NETO, 1997).
Estudos demonstram que o efluente domstico apresenta elevado potencial para
uso em reas agrcolas como condicionador das propriedades fsicas, qumicas e
microbiolgicas do solo e como fonte de nutrientes para as plantas. Entretanto, ainda h falta
de experimentos em condies de campo e de longa durao para solos e clima brasileiros,
que permitam o estabelecimento de uma legislao segura para regular tal destinao.
Uma das solues para o tratamento da gus de reuso seria sua utilizao na
irrigao de culturas. Segundo Bond (1998), se mal planejado poder causar problemas,
principalmente com respeito a contaminao do solo e lenol fretico por nitratos, compostos
orgnicos, sodicidade, salinidade, metais pesados e agentes patognicos. Contudo, os
benefcios e os riscos ambientais e sade do homem e dos animais alcanados em
decorrncia da disposio de efluentes no solo, iro depender da composio do efluente em
elementos txicos, patognicos, das condies edafoclimticas e da planta objeto. So esses
fatores que definiro, tambm, a dose a ser aplicada e por quantas vezes a aplicao poder
20

ser repetida.
O uso de gua residuria de forma irrestrita s culturas motivo de risco a sade
pblica pela grande variedade de patgenos, incluindo bactrias, vrus, cistos de protozorios
e ovos de helmintos. Quando utilizada a irrigao, esta pode ocasionar vrios problemas para
a planta, para o solo e para o prprio sistema de irrigao.

2.4 Microrganismos patognicos relacionados a esgotos domsticos

O lanamento indiscriminado de esgotos domsticos nos corpos dgua sem
tratamento, ou mesmo tratados, mas sem desinfeco apropriada, contribui com quantidade
significativa de organismos do chamado grupo coliforme, entre os quais agentes especficos
de doenas de veiculao hdrica podem estar presentes. A patogenia pode ser decorrente de
infeces ou intoxicaes. Uma infeco ocorre quando um patgeno penetra no trato
gastrointestinal e se multiplica, podendo provocar danos ao tecido colonizado, como
inflamaes e ulceraes, e, ainda, se disseminar por outros rgos: aes decorrentes das
caractersticas invasivas da bactria (FRANCI et al., 2003).
Em linhas gerais, as bactrias patognicas tm no trato gastrointestinal do
hospedeiro seu habitat, porm, a maioria delas s capaz de provocar doena acima de um
certo nmero, geralmente elevado; abaixo desta dose infectante o hospedeiro um portador
assintomtico, o que no deixa de ter sua importncia epidemiolgica como reservatrio do
agente etiolgico da doena. Como postulado geral, pode-se afirmar que as bactrias
patognicas no se reproduzem fora do organismo do hospedeiro; entretanto, algumas podem
faz-lo, temporariamente e em condies extremamente favorveis, como disponibilidade de
nutrientes, pouca competio e predao, e temperatura, pH e umidade adequados. Essas
condies determinam a capacidade de sobrevivncia das bactrias no meio ambiente, a qual
21

varia de acordo com a espcie, mas que de modo geral se situa em torno de duas semanas na
gua e no solo (BASTOS, 2000).
As doenas entricas causadas por cepas patognicas de Escherichia coli, bactria da
famlia Enterobacteriacea, do grupo coliforme e sub-grupo coliformes fecais ou
termotolerantes, como so classificados atualmente, so de reconhecida importncia
epidemiolgica. Comprovadamente, E. coli responsvel por boa parte das estatsticas de
morbidade infantil por doenas diarricas agudas em pases em desenvolvimento.

2.5 Efeitos da aplicao de efluente no solo
2.5.1. Aspectos fsico-qumicos

O esgoto sanitrio apresenta concentraes relativamente baixas de matria
orgnica, mas as aplicaes freqentes associadas s altas taxas, podem incorporar
quantidades apreciveis de matria orgnica ao solo (SOARES et al., 2005). O aumento da
matria orgnica exerce influncia nas propriedades fsicas do solo, dentre as quais se
destacam: a massa especfica, a estrutura de estabilidade dos agregados, a aerao, a
drenagem, a reteno de gua e a consistncia.
Coraucci Filho (1991) aplicou esgoto sanitrio em rampas de tratamento por
escoamento superficial e verificou que, a concentrao de carbono orgnico diminuiu com a
profundidade do solo, demonstrando que durante a passagem do esgoto atravs da superfcie
do solo (infiltrao), ocorre o processo de filtrao que influenciado pela taxa de aplicao e
declividade da superfcie do solo na rampa.
Elevadas concentraes de partculas orgnicas e inorgnicas dos esgotos
sanitrios obstruem os poros da superfcie do solo, reduzindo a taxa de infiltrao e a
condutividade hidrulica entre 20 e 30%, sendo os solos arenosos mais suscetveis ao
22

entupimento de poros que os solos argilosos (FEIGIN et al., 1991).
Falkiner e Smith (1997) no apenas observaram aumento no valor de pH de solos
fertirrigados com gua residuria, mas tambm, diminuio do teor de alumnio trocvel,
devido ao aumento dos ctions trocveis do solo (clcio, magnsio, potssio e sdio) e da
alcalinidade, adicionados pelo esgoto sanitrio tratado.
Estudos de Mikkelsen et al. (1997) mostram que a aplicao de guas residurias
no solo, por perodos longos, pode resultar em acmulo de nutrientes, excedendo as
exigncias nutricionais das plantas. Quin & Woods (1978) verificaram aumento na
concentrao de nitrognio total de pastagens fertirrigadas por mais de 16 anos com esgoto
sanitrio tratado. Quin & Forsythe (1978) constataram que a aplicao anual de 840mm de
esgoto domstico tratado, com concentraes de nitrognio total variando de 14 a 41mgL
-1
,
acarretou o aumento da concentrao de nitrato e de outros nutrientes, exceto o fsforo.
Entretanto, esse aumento de nitrato no atingiu concentraes perigosas na soluo do solo.
Estudos realizados por Lund et al. (1981) comprovaram que, 51% do nitrognio
presente no esgoto sanitrio aplicado foi lixiviado num perfil de solo de 0 a 6m de
profundidade. Tal lixiviao foi decorrente das altas taxas de aplicao da gua residuria e da
textura arenosa do solo.

2.5.2. Aspectos microbiolgicos

O lodo de esgoto quando aplicado ao solo, causa alteraes na estrutura e
funcionamento do agroecossistema, sendo a comunidade microbiana um dos componentes
mais sensveis, podendo ser utilizada como indicador da qualidade dos solos (BETTIOL e
FERNANDES, 2004).
23

Estudos de Lon Suematsu e Cavallini (1999), indicam que os microrganismos
podem sobreviver por perodos mais longos no solo do que nas superfcies das culturas onde
h maior exposio aos raios solares.
Na Tabela 3 esto apresentados os perodos de sobrevivncia de alguns agentes
patognicos encontrados no solo fertirrigados com guas residurias.

Tabela 3 Perodos de sobrevivncia de alguns agentes patognicos no solo para as condies
de clima quente com temperatura entre 20 e 30 C

Agentes patognicos Perodo de sobrevivncia no solo (dias)
Vrus
Enterovirus < 100, mais comum < 20
Bactrias
Coliformes fecais < 70, mais comum < 20
Salmonella spp < 70, mais comum < 20
Vibrio cholerae < 20, mais comum < 10
Protozorios
Entamoeba histolytica < 20, mais comum < 10
Helmintos
Acilostoma < 90, mais comum < 30
Fonte: Lon Suematsu e Cavallini (1999)

Soares et al. (2005) comprovaram que a umidade interfere na sobrevivncia de
Salmonella typhosa no solo. A persistncia da bactria nos solos arenosos, de baixa
capacidade de reteno de gua, foi de 4 a 7 dias durante o perodo seco, porm a
sobrevivncia da bactria nos solos argilosos, com alta capacidade de reteno de gua, foi
superior a 42 dias. Em geral, a persistncia da Salmonella typhosa em todos os tipos de
estudos foi maior durante o perodo chuvoso.
24

Van Donsel et al. (1967) encontraram reduo de 90% do nvel populacional de
coliformes fecais com 3,3 e 13,4 dias nas amostras de solo expostas ao ar livre, no vero e
inverno, respectivamente. Chandler & Craven (1978) constataram que perodos de 18 dias em
solo com 30% de umidade e de 2,5 dias em solo com 10% de umidade reduziram em 90% o
nvel populacional de Escherichia coli, para uma temperatura ambiente de 20C. O tempo de
sobrevivncia de Salmonella typhosa em solos cidos (pH de 3 a 5) bem menor do que em
alcalinos (SOARES et al., 2005).
Yitzhaki (1971), trabalhando com gua residuria contendo Salmonella
typhimurium em colunas preenchidas com solo arenoso verificou que a bactria no
reproduziu nestas condies, mas persistiu no solo por mais de 44 dias.
Quatro espcies da Bactria do gnero Shigella. podem causar uma grave
enfermidade intestinal nos humanos, denominada Shigelliose. A Bactria invade a mucosa do
intestino, provocando disenteria acompanhada de dor abdominal, febre e diarria. O nmero
de infeces por Shigella baixo, e em alguns casos a transmisso ocorre de pessoa para
pessoa. Quando ocorre um surto, ele normalmente associado contaminao fecal de
alimentos ou gua (Standard Methods, 2000).
Protozorios patognicos intestinais apresentam significativos problemas em guas
de abastecimento para consumo humano. Esses organismos causam diarrias ou
gastroenterites em nveis variados de gravidade. Numerosos surtos tm ocorrido. Durante o
ano de 1970, surtos por ingesto de gua contaminada por Giardia lamblia foram observados
com aumento de freqncia, especialmente em comunidades usando gua de fontes
superficiais.
Em meados de 1980, surtos por ingesto de gua contaminada por
Cryptosporidium parvum comearam a aparecer, e em 1993, este organismo foi responsvel
pelo maior surto de doenas devido ao consumo de gua contaminada da Histria dos Estados
25

Unidos (Standard Methods, 2000). O protozorio Cryptosporidium um patgeno emergente
que causa diarria em humanos. Muitos surtos graves de criptosporidiose tem a gua como
possvel origem da contaminao.
Estudos realizados por Gamba, Ciapina, Espindola et al., (2000) no municpio de
Itaquaquecetuba So Paulo, evidenciaram a presena de oocistos em duas fossas e em oito
poos analisados, mostrando o risco que esta gua representa para consumo humano e a
necessidade de prticas mais eficientes de desinfeco e monitorando em amostras de guas
no estado de So Paulo.

2.6 Relao solo-planta e o adensamento de bactrias nas rizosferas

Estudos constataram que um solo com a presena de razes possui muito mais
bactrias do que um solo sem razes. Sabe-se que a rea ao redor das razes a rizosfera
pode aumentar a densidade de bactrias. A influncia das razes e as modificaes bioqumicas
e fsicas ocasionadas pela presena destas, promovem habitats especializados para os
microrganismos do solo. A rizosfera, como definida por Zago et al. (2003), a regio do solo
sob influncia das razes.
Uma extensiva colonizao por microrganismos essencial para alcanar um
eficiente controle biolgico e estimular o crescimento das plantas (SOTTERO, 2003). A
colonizao da rizosfera deve-se a uma maior disponibilidade de nutrientes em relao ao solo
no-rizosfrico. Esta disponibilidade resultado da translocao de fotossintatos da parte
area das plantas, via floema, para as razes, onde sustentam os processos biossintticos,
sendo uma parte liberada para o solo rizosfrico. A quantidade de fotossintatos
rizodepositados varivel em funo da espcie vegetal e dos fatores ambientais, sendo os
valores mais comuns entre 10 e 100 mg de carbono/grama de raiz seca ou, aproximadamente
26

20% dos fotossintatos (WHIPPS, 1985).
As bactrias so os organismos mais abundantes na rizosfera das plantas, mas no
esto distribudas aleatoriamente, e sim agregadas, principalmente nas regies intercelulares
da epiderme, por serem reas de ativa exsudao (BOWEN e ROVIRA, 1976). A colonizao
de razes recm formadas mnima, mas aps alguns dias, microcolnias aparecem em
associao com a matria orgnica que as pontas das razes encontram medida que crescem
(STIRLING, 1991).
A capacidade da bactria crescer e se multiplicar na rizosfera tem sido chamada de
competncia da rizosfera e este atributo influenciado por uma srie de fatores, tais como a
textura do solo, a percolao de clulas bacterianas com gua da chuva ou irrigao, e a
influncia de fungos ou bactrias que venham a apresentar antibiose. Alguns gneros de
microrganismos que conhecidamente produzem antibiticos so Streptomyces, Bacillus,
Pseudomonas, Penicillium, Trichoderma e Aspegillus. Estes organismos so abundantes na
rizosfera na maioria das plantas cultivadas, o que indica que antibiose um pr-requisito
importante para a competncia de rizosfera. Dentre as rizobactrias, o grupo das
Pseudomonas fluorescentes o mais consistentemente isolado, principalmente durante os
perodos de grande produo de exsudatos radiculares (STIRLING, 1991).
Bacillus outro gnero de bactria que vem sendo considerado como forte agente
de controle biolgico de fitonematides devido sua capacidade de produo de substncias
txicas (WELLER, 1988).
Grande nfase tem sido dada ao estudo do gnero Pseudomonas em sistemas de
produo agrcola devido a grande versatilidade nutricional, habilidade de crescer em uma
ampla variedade de ambientes e grande potencial de colonizao de razes. Estas bactrias so
encontradas em solos, folhagens, guas e sedimentos e, principalmente as bactrias
pertencentes a este gnero, so de muita importncia em diversas reas como Fitopatologia,
27

Tecnologia de alimentos e Controle Biolgico.

2.7 Taxonomia de Pseudomonas e de Bacillus

Pseudomonas spp. fluorescentes so bactrias Gram-negativas e produzem um
pigmento verde-amarelo fluorescente em meio B de King (KING et al., 1954), observado sob
luz com comprimento de onda na faixa do ultra violeta (COELHO, 2006). De acordo com
Stainer et al. (1966), esses organismos podem ser encontrados na gua e no solo. As espcies
mais importantes desse grupo so Pseudomonas fluorescens e Pseudomonas putida,
geralmente estudadas com o objetivo de avaliar a promoo de crescimento em plantas, e
Pseudomonas aeruginosa, considerada patognica a animais.
Segundo Coelho (2006), a diversidade metablica de bactrias do grupo
fluorescente do gnero Pseudomonas d a essas bactrias uma grande habilidade para
adaptao a vrios ambientes, tais como solo e rizosfera.
Bactrias do gnero Bacillus so Gram-positivas e podem ser aerbias, facultativas
ou anaerbias. So resistentes ao calor e a outros agentes destrutivos (STAINER, 1966).
Formam endsporos caracterstica que as coloca entre os esporulados e apresentam a
habilidade de produzir antibitico (FREITAS e PIZZINATTO, 1997). A formao de
endsporos aumenta a resistncia aos fatores adversos. Dessa forma, podem ser armazenados,
como inoculantes, por um perodo mais longo, e possuem maior tempo de permanncia no
solo, alm da facilidade de aplicao.

2.8 Mecanismos de ao desenvolvidos por rizobactrias

So descritos vrios mecanismos de ao dos antagonistas para controlar o
desenvolvimento de patgenos. Algum destes so antibiose, competio por espao e por
28

nutrientes, interaes diretas com o patgeno (microparasitismo e lise enzimtica) e
resistncia induzida a doenas (FERNANDEZ e VEGA, 2001). As bactrias podem
apresentar efeito antagnico a vrios patgenos, inclusive aos nematides (ZAVALETA-
MEJIA e VAN GUNDY, 1982; BECKER et al., (1988 ). Os agentes inibidores causam danos
parede celular, destroem parcial ou totalmente a membrana citoplasmtica, causam danos s
protenas e aos cidos nuclicos, interferem na sntese e na replicao do DNA e podem
provocar a lise ou a morte das clulas. No necessariamente as bactrias morrem, mas tm
suas funes metablicas comprometidas; por isso usualmente se emprega o termo inativao
de bactrias (FRANCI et al, 2003).
Dentre as rizobactrias, o grupo das Pseudomonas fluorescentes o mais
consistentemente isolado, principalmente durante perodos de grande produo de exsudados
radiculares (STIRLING, 1991), talvez porque seja melhor colonizadora de razes do que
outros gneros.
Compostos como siderforos, reguladores de crescimento e centenas de diferentes
metablicos secundrios, incluindo antibiticos e HCN (cido ciandrico) so produzidos por
Pseudomonas spp. fluorescentes. Algumas bactrias do gnero Pseudomonas produzem
siderforos amarelo-esverdeados solveis em gua denominados pioverdinas ou
pseudobactinas. Kloepper et al. (1980) demonstraram que um isolado de Pseudomonas
fluorescens apresentou antagonismo contra a bactria Escherichia coli em meio B de King et
al. (1954), que deficiente em ferro.
A antibiose a produo de compostos bactericidas, fungicidas e nematicidas. Os
antibiticos so compostos orgnicos de baixo peso molecular que, em baixas concentraes,
so deletrios ao crescimento ou a atividades metablicas de outros organismos
(FRAVEL, 1988).
Os siderforos (do grego sideros = ferro, foros = transportador) so compostos de
29
29

baixo peso molecular, queladores de ferro, produzidos pela maioria das bactrias e fungos sob
condies limitantes deste elemento (BENITE e MACHADO, 2002). Embora o ferro seja
abundante em solos aerados (1-6%), freqentemente indisponvel para as plantas devido a
sua solubilidade, que dependente do pH e controlada pela baixa solubilidade de xidos de
ferro (POWELL et al., 1980).
A medida em que o pH do solo decresce, a disponibilidade de ferro aumenta e os
siderforos se tornam menos efetivos. De fato, quase todas as bactrias aerbias e anaerbias
facultativas produzem siderforos, deferindo, contudo, na eficincia de produo.
As espcies pertencentes ao grupo das Pseudomonas spp. fluorescentes produzem
siderforos verde-amarelados, fluorescentes solveis em gua, como a pioverdina, cujo nome
comum pseudobactina, que apresenta alta afinidade com Fe
+++
e transporta esse elemento
para o interior das clulas. Dessa maneira, os microrganismos fixam Fe
+++
, tornando-o menos
disponvel a outros incapazes de produzir agentes similares de transporte de ferro, ou cuja
produo comparativamente menor, ou ainda que produzam siderforos que tm menos
afinidade que as rizobactrias promotoras de crescimento de plantas
(ROMBEL e LAMONT, 1992).
30
3 MATERIAL E MTODOS
3.1 Localizao e instalao do experimento

O experimento foi conduzido em condies de campo na Fazenda Piloto do
Departamento de Cincias Agrrias da Universidade de Taubat (Figura 1), Municpio de
Taubat, Estado de So Paulo. Localizado nas Coordenadas Geogrficas 230234S e
453102W, com altitude mdia de 577m e distante 140 Km da Cidade de So Paulo.

31
Figura 1 Vista geral da fazenda piloto do Departamento de
Cincias Agrrias da UNITAU. Em destaque, v-se a rea de
desenvolvimento do projeto.

O clima local de acordo com a Classificao de Kpen (1948) do tipo Cwa
(Sub-tropical), com chuvas de vero e com uma precipitao mdia anual de 1300mm.
O solo da rea experimental classificado como Latossolo Vermelho-Amarelo
distrfico, de textura argilo-arenosa, constitudo por perfil no hidromrfico, profundo, de
fertilidade natural baixa, cuja caracterstica qumica determinada na camada de 0-20 cm de
profundidade est apresentada na Tabela 4:

Tabela 4 Caracterstica Qumica Natural do solo da rea experimental

pH MO
(a)
P

K

Ca

Mg

H+Al

SB
(b)
CTC
(c)
B Cu Fe Mn Zn
g/dm mg/dm ------------------------mmolc/dm--------------------- -----------------mg/dm---------------
7,1 15 8 1,4 95 12 11 108,4 119,4 0,13 0,8 25 6,0 1,4
Fonte: Laboratrio de Anlises de Solos e Plantas Depto. de Cincias Agrrias da UNITAU.
(a) MO = Matria Orgnica; (b) SB = Soma de bases; (c) CTC = Capacidade de troca catinica.

O delineamento experimental foi composto por blocos casualizados, com cinco
tratamentos e quatro repeties (Figura 2), perfazendo assim um total de 20 parcelas. As
parcelas de 2 x 1m foram construdas com 50cm de distncia entre si e os blocos separados
com distncia de 1m.
Os estudos foram iniciados em maio de 2007, com a demarcao das 20 parcelas
e coletas de amostras de solo na camada de 0-20cm em todas as parcelas para realizao de
anlise de propriedades qumicas antes da aplicao do efluente. A semeadura foi realizada
em junho com o cultivo de quatro culturas.
Das quatro culturas utilizadas no experimento trs espcies foram da famlia das
Gramneas, a aveia (Avena fafua) - Tratamento 1; a cevada (Hordum vulgar) - Tratamento 2
e o triticale (Triticosecale Wittmack) Tratamento 4. A quarta espcie utilizada foi da
famlia das Leguminosas, o feijo preto (Phaseolus vulgaris L.), Tratamento 3. Como
Testemunha foi utilizado solo sem cultivo - Tratamento 5.
32

O espaamento utilizado para cultivo das gramneas dentro de cada parcela foi de
20cm e para a leguminosa o espaamento foi de 40cm. A irrigao das culturas com gua
encanada foi realizada duas vezes por semana e teve como objetivo favorecer a germinao
das sementes e, posteriormente, manuteno das plantas. A aplicao do efluente de esgoto
tratado seguindo a tcnica de irrigao superficial foi realizada com periodicidade de 60 dias
e com intervalos de vinte dias entre cada aplicao, totalizando trs aplicaes. A primeira
aplicao ocorreu 30 dias aps a semeadura.
O efluente de esgoto utilizado no experimento foi proveniente do sistema de
tratamento por leito cultivado implantado no Departamento de Cincias Agrrias UNITAU,
o qual trata o esgoto dos sanitrios, laboratrios e cozinha existentes no prdio central do
Departamento. A composio do efluente basicamente advinda da higiene humana, tendo
pouca contribuio de produtos qumicos das atividades laboratoriais. Apresentou pH de 7,2
e Demanda Qumica de Oxignio (DQO) de 324 mg.L
-1
.
O Sistema de tratamento de esgoto por leito cultivado estruturalmente composto
por um tanque sptico (Tratamento primrio), construdo em concreto armado e com 30m de
capacidade, dois filtros anaerbios compartimentados, instalados em duas caixas dgua de
cimento amianto de 1m cada e preenchidos com brita n 2. Sendo o primeiro filtro de fluxo
descendente seguido do segundo por fluxo ascendente (Tratamento secundrio) e o leito de
razes (Tratamento secundrio), construdo em concreto armado, preenchido com brita n 2 e
capacidade de 15m.
A espcie vegetal utilizada para compor o leito e cultivada diretamente sobre a
brita foi a Zantedeschia aethiopica, conhecida popularmente como Copo-de-leite.
33

O volume de efluente de esgoto tratado aplicado em cada tratamento foi de 170
litros/parcela de solo. Utilizou-se uma mangueira de conectada a sada do leito cultivado
para o enchimento de 20 tambores de 200 litros, posicionados a frente de cada uma das
parcelas (Figura 3). Dos tambores o efluente foi distribudo superficialmente por meio de
mangueiras de com taxa de aplicao de 25 litros/hora em cada parcela, totalizando
aproximadamente 7 horas de irrigao para cada tratamento.

Figura 2 Vista do experimento, composto por cinco tratamentos com
quatro repeties. Sendo quatro tratamentos com solo cultivado (aveia,
cevada, triticale e feijo preto) e um tratamento sem cultivo
(Testemunha).
34

3.2 Monitoramento/ Procedimentos para amostragens e Anlises microbiolgicas
3.2.1 Solo

Para coletas de amostras de solos rizosfricos, foram retiradas de cada parcela
cultivada 6 (seis) plantas com torro de solo aderido s razes, acondicionadas em sacos
plsticos identificados e levadas ao Laboratrio de Microbiologia Agrcola e Fitopatologia do
Depto. de Cincias Agrrias da UNITAU.
As razes de cada uma das 6 amostras por parcela foram agitadas vigorosamente
para desprender o solo que estava aderido e homogeneizadas formando uma amostra
composta por parcela. Das parcelas no cultivadas foram retiradas amostras de solo na
camada de 0-20cm e realizados os mesmos procedimentos descritos acima.
Foram pesadas 10g de cada amostra composta e colocadas em frascos com
capacidade de 90 2 mL com tampa de rosca contendo soluo salina esterilizada (soluo
tampo de Fosfato Monopotssico e Cloreto de Magnsio). A partir da prepararam-se
Figura 3 Vista geral da irrigao superficial das parcelas de
solo cultivado e Testemunha.
35

diluies em srie de fator 10 da suspenso de solo obtida para anlises de bactrias dos
gneros Pseudomonas spp., Bacillus spp. e Coliformes termotolerantes (Escherichia coli).
Para anlise qumica do solo foram pesadas novamente 10g de cada amostra de
solo, acondicionadas em sacos plsticos identificados e levadas ao Laboratrio de Anlises
de Solo e Plantas do Depto de Cincias Agrrias da UNITAU para realizao da avaliao
das caractersticas qumicas do solo aps aplicao do efluente.

3.2.1.1 Contagem de bactrias do grupo fluorescente do gnero Pseudomonas

Alquotas de 0,1mL de cada diluio 10
-2
, 10
-3
e 10
-4
, foram transferidas para as
placas de Petri contendo meio de cultura B de King (King et al., 1954) e espalhadas com ala
de Drigalski em triplicata. As placas foram mantidas a 28C2C por 72 horas. Aps o
perodo de incubao as colnias foram observadas sob incidncia de luz ultravioleta no
interior da cmera negra, para avaliao da presena ou no de um halo esverdeado
fluorescente, caracterstico das Pseudomonas fluorescens. Na Figura 4 mostrada uma placa
de Petri contendo trs colnias de bactrias do grupo fluorescente do gnero Pseudomonas
com halos esverdeados fluorescentes.

Figura 4 Colnias de bactrias Pseudomonas
fluorescens observadas sob incidncia de luz
ultravioleta Laboratrio de Microbiologia
Agrcola e Fitopatologia UNITAU.
36

3.2.1.2 Contagem de bactrias do gnero Bacillus

O procedimento utilizado para contagem de Bacillus spp. foi semelhante ao
descrito no item 3.2.1.1, para contagem de Pseudomonas s que as diluies em srie foram
colocadas em banho Maria a 80C por 20 minutos e resfriadas a temperatura ambiente antes
de serem transferidas para as placas de Petri.
Alquotas de 0,1mL das diluies 10
-3
, 10
-4
e 10
-5
, com trs repeties, foram
transferidas para placas de Petri contendo meio de cultura BDA (Batata Dextrose Agar). A
contagem de colnias que cresceram em meio de cultura BDA foi feita aps incubao a
28C por 72 horas. Os resultados esto expressos em unidades formadoras de colnias por
grama de solo seco (UFC/g solo seco).

3.1.1.3 Contagem do NMP de Coliformes termotolerantes

A metodologia empregada para a contagem do nmero mais provvel (NMP) de
Coliformes termotolerantes seguiu o preconizado no Standard Methods for the
Examination of Water and Wastwater. 20 ed
th
, utilizando-se a Tcnica de Tubos Mltiplos
(TTM).
Para o Teste Presuntivo para contagem de bactrias do grupo coliformes utilizou-
se meio de cultura Caldo Lactosado e para o Teste Confirmativo para Coliformes
termotolerantes, especificamente para Escherichia coli, o meio E.C..
Alquotas de 1 mL dos frascos contendo amostras de solo dos 20 Tratamentos
diludas em soluo salina nas sries 10
-1
, 10
-2
, 10
-3
, 10
-4
, 10
-5
e 10
-6
, foram inoculadas na
srie de 5 tubos para cada diluio contendo meio caldo lactosado. Foi efetuada a incubao
35C 0,5C durante 24/48 horas e ao final feita a 1 leitura ainda do ensaio presuntivo.
Considera-se o resultado positivo a fermentao do meio evidenciada pela
37

produo do gs. Com o uso de ala de platina fez-se a inoculao do material dos tubos
positivos para cada tubo correspondente do meio E.C. Aps a transferncia, os tubos
contendo amostras positivas em meio E.C. foram transferidos para incubadora a 44,5C 0,5
por um perodo adicional de 24 2 horas.
A densidade de coliformes foi expressa em N.M.P. de coliformes termotolerantes
por 100mL de gua, o qual obtido atravs de tabela no Standard Methods 20 ed
th
.

3.2.2 Efluente de esgoto tratado

Para amostragem de efluente proveniente da ETE por leito de razes, procedeu-se
coleta de 100mL de gua residuria em frasco com tampa esterilizado na sada do sistema.
A amostra foi levada ao Laboratrio de Microbiologia Agrcola e Fitopatologia para
realizao dos procedimentos para as anlises microbiolgicas para contagem de unidades
formadoras de colnias de rizobactrias Pseudomonas fluorescens, Bacillus spp. e o nmero
mais provvel de coliformes termotolerantes.
A realizao das anlises microbiolgicas do efluente de esgoto tratado seguiram
os mesmos procedimentos e tcnicas descritos nos itens acima para anlises microbiolgicas
de solo.

38

4 RESULTADOS E DISCUSSES

A temperatura mdia e umidade relativa do ar registradas durante o perodo de
desenvolvimento do experimento foram de 32C e 28%, respectivamente. Estes valores
indicam a predominncia de dias quentes e baixa umidade do ar durante o desenvolvimento do
projeto. No houve ocorrncia de chuvas na poca de coletas de amostras de solo para anlises
microbiolgicas do solo nos 20 e 40 dias aps o incio das aplicaes de efluente. Entretanto,
na poca de realizao da coleta de amostras de solo 60 dias aps a primeira irrigao foram
registradas chuvas de baixa intensidade.
Estes fatores fsicos, como elevada temperatura ambiente, baixa umidade do ar e
baixa precipitao pluviomtrica podem ter interferido significativamente na sobrevivncia
de coliformes termotolerantes no solo, inviabilizando condies favorveis ao seu
crescimento. J a ocorrncia de chuvas aumentando a umidade do solo associada a matria
orgnica proveniente do efluente pode ter criado condies favorveis sobrevivncia de
coliformes termotolerantes, inclusive, possibilitando o aumento de sua concentrao.
Os resultados da densidade de colnias de Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp.
em unidades formadoras de colnias por grama de solo seco (UFC.g
-1
) e do nmero mais
provvel de coliformes termotolerantes por grama de solo seco (NMP.g
-1
), obtidos em cada
tratamento foram submetidos ao Teste de Duncan a 5% de probabilidade e so apresentados a
seguir nas Figuras 5, 6, 7, 8 e 9, e discutidos ao longo deste captulo.
As anlises microbiolgicas do efluente de esgoto tratado realizadas antecedendo
as amostragens de solo, respectivamente aos 20, 40 e 60 dias apresentaram valor mdio de
concentrao de coliformes termotolerantes de 1 x 10
6
NMP/100 mL de efluente.
A Figura 5 apresenta a concentrao de coliformes termotolerantes verificada em
cada um dos tratamentos, aps a terceira aplicao de efluente, o que corresponde a 60 dias
39

aps a primeira aplicao e perodo de 120 dias do ciclo vegetativo das culturas.

4500(C)
5500(C)
19250(A)
27000(B)
17500(A)
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
Aveia Cevada Feijo preto Triticale Testemunha
Tratamentos
N
m
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m
a
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p
r
o
v
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g
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o

(
N
M
P
/
g

s
o
l
o
)
Coliformes termotolerantes

Figura 5 Valores Mdios do Nmero Mais Provvel de coliformes
termotolerantes na camada de 0-20 cm de profundidade de solo cultivado
com diferentes culturas e testemunha, tratado com aplicaes de efluente de
esgoto domstico, 60 dias aps a primeira aplicao.
Mdias seguidas de letras maisculas iguais, no diferem
significativamente entre si pelo teste de Duncan a 5% de
probabilidade.

Nas anlises microbiolgicas de amostras de solo realizadas 20 e 40 dias aps a
primeira aplicao de efluente no foi constatada a existncia de coliformes termotolerantes
no solo em todos os tratamentos, o que pode ser entendido como resultado da atuao das
rizobactrias Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp., entre outros microrganismos presentes
no avaliados neste trabalho, por meio de mecanismos antagonistas, predao, competio,
40

antibiose e produo de siderforos, visto o teor de ferro presente no solo no local do
experimento ser de 25 mg/dm, considerado pelo Sistema IAC como baixo teor.
A reduzida concentrao de matria orgnica no solo variando de 15 a 19 mg/dm,
pode ser considerado como fator de competio por nutrientes entre a populao de
rizobactrias e coliformes. Assim, como investigado por Butler et al. (1954) ao aplicarem
esgoto sanitrio tratado na superfcie de um solo argilo-arenoso e verificaram que, a partir de
3m no perfil do solo, os coliformes fecais no conseguem sobreviver, provavelmente em
razo da ausncia do material orgnico, fundamental para a sua sobrevivncia.
Entretanto, nas anlises microbiolgicas 60 dias aps as trs aplicaes verificou-
se que os tratamentos envolvendo a aveia e o triticale apresentaram valores de coliformes
termotolerantes entre 17,5 x10

e 19,0 x10

NMP/100ml de gua residuria, o que resultou
numa eficincia de 98,0% na reduo de coliformes termotolerantes; a cevada apresentou
valor de 27 x10
3
NMP/100mL de gua, o que corresponde a uma eficincia na reduo de
coliformes termotolerantes de 97,0%; e o feijo preto e testemunha apresentaram valores
entre 6,0 x10
3
e 9,0 x10
3
NMP/100mL registrando uma eficincia de 99,4% na reduo
de coliformes termotolerantes. As diferenas de valores obtidos nos tratamentos aveia e
triticale no foram significativos, j a cevada mostrou a menor eficincia e os melhores
resultados na reduo de coliformes termotolerantes foram obtidos nos tratamentos com feijo
preto e solo sem cultivo.
Observa-se que os melhores resultados na reduo de coliformes termotolerantes
foram obtidos at 40 dias aps as aplicaes de efluente coincidindo com o pleno
desenvolvimento vegetativo das culturas utilizadas, ou seja, 90 dias, em que h a maior
produo de exsudados pelas razes das plantas e, conseqentemente, maior adensamento de
microrganismos nas rizosferas e no solo.
Estes resultados esto de acordo com estudos de Zavaleta-Mejia & Van Gundy,
41

(1982); Becker et al., (1988) os quais mostram que as bactrias so os organismos mais
abundantes na rizosfera das plantas e podem apresentar efeito antagnico a vrios patgenos.
Resultados similares foram obtidos por McGauher & Krone (1967)ao estudaram a
remoo de coliformes fecais durante a percolao de gua residuria atravs do perfil do
solo, identificando confinamento das bactrias na camada de 0,0 a 0,9m e a reduo de 64%
no nvel populacional, aps 12 dias.
J a constatao de coliformes aps 60 dias coincide com o trmino do ciclo, no
qual o nmero de colnias de bactrias nas rizosferas se encontrava muito reduzido. Nesse
perodo a maior eficincia na reduo de coliformes foi alcanada nos tratamentos
envolvendo feijo preto, o qual apresenta ciclo vegetativo de 90 dias em relao a aveia,
cevada e triticale que de 120 dias e testemunha.
Em concordncia com Chernicharo (1997), o qual menciona sobre a atuao de
fatores fsicos, tais como: umidade, pH, radiao solar, temperatura e concentrao de matria
orgnica influenciando no tempo de sobrevivncia dos coliformes no ambiente, acredita-se
que os resultados obtidos neste experimento estejam tambm relacionados a fatores fsicos,
como temperatura e umidade. J que a arquitetura da planta do feijo confere menor
sombreamento, assim como, o solo sem cobertura vegetal (testemunha) propiciam maior
exposio solar, elevando a temperatura e reduzindo a umidade no solo, resultando em
condies desfavorveis a sobrevivncia e desenvolvimento de coliformes termotolerantes.
O controle biolgico de nematides no restrito apenas s interaes entre estes
fitopatgenos e seus antagonistas, mas ambos so influenciados pela planta, pelo ambiente
fsico e pelas microflora e microfauna do solo (STIRLING, 1991).
Uma rizobactria do grupo das fluorescentes, trs Pseudomonas no fluorescentes
e uma Bacillus spp. reduziram em at 53% o nmero de galhas de M. incgnita em
tomateiros, sendo as mais eficientes entre as 156 testadas por Habte (1997). Rizobactrias do
42

gnero Bacillus tambm esto freqentemente associadas ao controle de nematides, mas
outros gneros tambm se mostram promissores (SIKORA, 1988).
A Figura 6 apresenta os valores mdios obtidos em quatro repeties dos cinco
tratamentos da quantidade de colnias de Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. presentes
nas rizosferas das culturas e testemunha, antes da primeira irrigao.

0 (C)
36(B)
47(B)
78(A)
88(A)
704 (C)
1350 (B)
1170 (B)
350 (A)
408 (A)
1
10
100
1000
10000
Tratamentos
U
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a
d
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c
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(
U
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C
s
/
g
)
Pseudomonas fluorescens Bacillus spp

Figura 6 Valores mdios de Unidades formadoras de colnias de
Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. na camada de 0-20 cm de
profundidade de solo cultivado com diferentes culturas e testemunha,
antes da aplicao de efluente domstico tratado. Mdias seguidas de
letras maisculas iguais no diferem significativamente entre si pelo
teste de Duncan a 5% de probabilidade.

Antecedendo a aplicao de efluente tratado no solo, verificou-se a inexistncia
43
x10
4

de colnias de Pseudomonas fluorescens no tratamento testemunha. Contrariamente, a
quantidade de Bacillus spp. presente foi a maior em relao aos demais tratamentos
envolvendo solos cultivado.
Nos tratamentos com aveia e triticale registraram-se os maiores valores entre 78
x10
4
e 88 x10
4
unidades formadoras de colnias por grama de solo seco (UFCs.g
-1
) de
Pseudomonas fluorescens; nos tratamentos com cevada e feijo preto registraram-se
quantidades menores entre 36 x10
4
e 47 x10
4
UFCs.g
-1
. Estes resultados indicam que as
rizosferas da aveia e triticale possibilitam uma maior colonizao de rizobactrias
Pseudomonas fluorescens, o que possivelmente esteja relacionado as substncias exsudadas
por suas razes.
Em relao a quantidade de Bacillus spp. observou-se uma maior quantidade
populacional na rizosfera da Cevada com valores mdios prximos dos valores mdios da
testemunha. Os demais tratamentos apresentaram valores mdios aproximados.
De qualquer forma, em todos os tratamentos verificou-se que a quantidade de
colnias de Bacillus spp. antes mesmo da aplicao de efluente j era superior ao nmero de
colnias de Pseudomonas. Estes dados esto de acordo com Stanier (1969), de que os
Bacillus spp. so resistentes ao calor e a outros agentes destrutivos devido a sua
caracterstica de formar endsporos. A maioria deles tem exigncias nutricionais simples,
requerendo no mximo alguns aminocidos ou vitaminas B como fatores de crescimento.
Na Figura 7 verificam-se os valores mdios do adensamento de colnias de
Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. por tratamento, 20 dias aps a primeira irrigao
com o efluente e com 80 dias de ciclo vegetativo das culturas.
44

profundidade de solo cultivado com diferentes culturas e testemunha, 20 dias
aps a primeira aplicao de efluente de esgoto domstico tratado.
Mdias seguidas de letras maisculas iguais, no diferem significativamente
entre si pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade.

Os resultados obtidos mostraram um adensamento significativo de P. fluorescens
em todos os tratamentos, inclusive o surgimento de colnias na testemunha de 48 x10
4

unidades formadoras de colnias por grama de

solo (UFCs.g
-1
). A cevada apresentou uma
quantidade de 903 x10
4
(UFC.g
-1
)

e o triticale de 750 x10
4
UFC.g
-1
; a aveia e o feijo preto
apresentaram valores mdios aproximados de 318 x10
4
UFC.

g
-1
e 226 x10
4
UFC.g
-1
,
respectivamente.

Acredita-se que os adensamentos verificados em todos os tratamentos
estejam relacionados ao aporte de matria orgnica ao solo aps a irrigao com o efluente
48(C)
750(B)
903(B)
226(A)
318(A)
1140(D)
2500(C)
2260(C)
10900(B)
426 (A)
1
10
100
1000
10000
100000
Tratamentos
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(
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45

de esgoto, alm da liberao de grande quantidade de exsudados pelas rizosferas das plantas
durante o desenvolvimento de seus ciclos vegetativos.
Estes resultados confirmam a afirmao de Stirling (1991), de que dentre as
rizobactrias, o grupo das Pseudomonas fluorescentes o mais consistentemente isolado,
principalmente durante os perodos de grande produo de exsudados radiculares.
Em relao ao adensamento de Bacillus spp. verificou-se um notvel crescimento
do nmero de colnias nos tratamentos envolvendo solos cultivados, o que no ocorreu na
testemunha. Uma possvel hiptese para entendimento deste resultado a de que o
surgimento de colnias e P. fluorescens no solo sem cultivo tenha promovido uma
competio, j anteriormente descrita, no somente entre P.fluorescens e Bacillus spp. e
coliformes termotolerantes, como tambm, entre os dois gneros de rizobactrias.
A Figura 8 mostra os valores mdios de unidades formadoras de colnias de
Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp., obtidos 40 dias aps a primeira irrigao com o
efluente de esgoto tratado e com desenvolvimento de 100 dias de ciclo vegetativo das
culturas.

41(C)
1790(C)
62(B) 61(B)
640(A)
8560(D)
1020(C)
18660(B)
25370(B)
1850(A)
1
10
100
1000
10000
100000
Tratamentos
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e
c
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(
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C
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g
)

Figura 8 - Valores mdios de Unidades formadoras de colnias de
profundidade de solo cultivado com diferentes culturas e testemunha,
40 dias aps a primeira aplicao de efluente de esgoto domstico
tratado.
significativamente entre si pelo teste de Duncan a 5% de
probabilidade.

Os resultados obtidos 40 dias aps a primeira irrigao, equivalente a vinte dias
aps a segunda aplicao de efluente, mostraram que os tratamentos envolvendo a aveia e o
triticale continuaram apresentando um aumento no adensamento de colnias de P.
fluorescens, enquanto as rizosferas da aveia e feijo preto tiveram seu nmero de colnias
significativamente reduzido, sendo de 903 x10
4
para 61 x10
4
UFc.g
-1
solo para a aveia e de
226 x10
4
para 62 x10
4
UFC.g
-1
solo para o feijo preto. Na testemunha no ocorreu
alterao significativa de valores mdios.
47
x 10
4

Uma das hipteses para a interpretao destes resultados seja a de que as anlises
realizadas 40 dias aps a primeira aplicao coincidiu com 100 dias do ciclo vegetativo das
culturas empregadas no experimento, sendo que a famlia das gramneas possui um ciclo de
120 dias e as leguminosas de 90 dias. Sendo assim, o feijo preto j se encontrava com seu
ciclo vegetativo encerrado, enquanto a aveia, a cevada e o triticale ainda encontravam-se na
fase de amadurecimento. Porm, os resultados obtidos com a cevada, apesar de espcie
vegetal da famlia das gramneas, deve ter relao com uma reduo acentuada e antecipada
na produo de exsudados em relao a aveia e ao triticale.
Estes resultados atendem ao descrito por Clays-Josserand et al., (1995) de que o
favorecimento de uma determinada espcie fluorescente de Pseudomonas spp. depende das
caractersticas do solo e da espcie da planta e que seu desenvolvimento maior na regio
das rizosferas do que me solos sem cultivo.
Coelho et al. (2007) detectaram que a rizosfera da alface favoreceu o crescimento
de bactrias fluorescentes do gnero Pseudomonas, em comparao com o crescimento de
Bacillus spp., que no foi beneficiado. Esse favorecimento foi detectado por comparao da
rizosfera da alface com a da chicria (Cicorium endiva), rcula (Eruca sativa), salsa
(Petrosolium sativum) e tirica (Cyperus rotundus). Apenas a rizosfera da alface teve esse
favorecimento. No entanto, a diversidade tanto de Bacillus spp. quanto de Pseudomonas spp.
influenciada pela rizosfera em que se desenvolvem (Coelho, 2006). A mesma concluso
chegaram Freitas & Aguilar-Vildoso (2004), em trabalho com trs espcies ctricas
(Citrus spp.).
Em relao a Bacillus spp. manteve-se o adensamento em quase todos os
tratamentos, aps aplicao do efluente no solo, excluindo-se o feijo preto que apresentou
uma reduo de 50% no valor mdio de quantidade e colnias. Para este resultado ainda no
temos uma interpretao.
48

Acredita-se que a maior quantidade de rizobactrias Bacillus spp. verificada
mesmo aps o encerramento do ciclo das plantas, uma resposta direta a maior resistncia
desse gnero formao de endsporos - exposio aos raios solares.
Na Figura 9 so apresentados os resultados dos valores mdios de unidades
formadoras de colnias por grama de solo obtidos nas anlises microbiolgicas de amostras
de solo, 60 dias aps a primeira irrigao com o efluente e com desenvolvimento de 120 dias
de ciclo vegetativo das culturas.

54(C)
68(C)
32(B) 32(B)
143(A)
2940(A)
8245(C)
264(B)
147(B)
2963(A)
1
10
100
1000
10000
Aveia Feijo preto Testemunha
Tratamentos
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Pseudomonas fluorescens Bacillus spp.

profundidade de solo cultivado com diferentes culturas e testemunha, 60
dias aps a primeira aplicao de efluente de esgoto domstico tratado.
significativamente entre si pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade.

49
x 10
4

Os resultados obtidos 60 dias aps a primeira irrigao, ou seja, vinte dias aps a
terceira aplicao de efluente, indicaram uma notvel reduo no nmero de colnias de
Pseudomonas fluorescens em quase todos os tratamentos, excluindo-se o tratamento
testemunha, o qual no apresentou alteraes significativas. Nesta poca, todas as culturas j
haviam encerrado seu ciclo vegetativo de 120 dias, portanto, prontas para a colheita.
De acordo com estudos de Gamliel & Katan, (1991) a solarizao do solo em
campo reduziu significativamente populaes de Pseudomonas fluorescens, entretanto, aps
o semeio de tomateiros em solos solarizados a bactria rapidamente colonizou a rizosfera e as
razes das plantas. Desta forma, pode-se deduzir que a seo de produo de exsudados pelas
rizosferas aliada a reduo do sombreamento causado pelo secamento da plantas possibilitou
uma maior exposio de rea de solo a radiao solar, elevando a temperatura e colaborando
para a reduo de P.fluorescens.
Em relao a quantidade de Bacillus spp., assim como aconteceu com
Pseudomonas fluorescens, verificou-se uma elevada reduo de unidades formadoras de
colnias nos tratamentos, excluindo-se a aveia, na qual registrou-se um acrscimo de 1.8
x10
4
para 2,9 x10
4
UFC.g
-1
. Este resultado tambm exige maior investigao para se chegar a
uma interpretao conclusiva.

50
4 CONCLUSES

Concluiu-se com este experimento que o adensamento das rizobactrias
Pseudomonas fluorescens e Bacillus spp. em unidades formadoras de colnias por grama de
solo (UFCs.g
-1
) est diretamente relacionado a aplicao do efluente de esgoto tratado e,
tambm, ao ciclo vegetativo das plantas.
A eficincia alcanada na reduo da concentrao de coliformes termotolerantes
em nmero mais provvel por 100mL de gua residuria (NMP.100mL
-1
), aps aplicao do
efluente de esgoto no solo pode estar relacionada a atuao das rizobactrias, por meio de
predao, competio por espao e nutrientes e atuao de siderforos; estar relacionada as
substncias exsudadas pelas rizosferas de diferentes culturas e, ainda, estar relacionada a
influncia de fatores fsico externos, principalmente, temperatura ambiente elevada e baixa
umidade do solo.
Sendo assim, dar-se- continuidade ao experimento aqui apresentado, com a
finalidade de obter-se um maior entendimento da dinmica das interaes solo rizosfera
microrganismos, aps sucessivas aplicaes de efluentes domsticos no solo por um maior
perodo de tempo, objetivando apresentar uma tecnologia adequada de biorremediao de
solos contaminados por guas residurias.

51

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