EL LMITE DE DETECCIN DE UN MTODO ANALTICO Ricard Boqu Grupo de Quimiometra y Cualimetra Universitat Rovira i Virgili Tarragona Introduccin El concepto

de lmite de deteccin ha sido y sigue siendo uno de los ms conflictivos en el rea de la Qumica Analtica. Las mltiples definiciones propuestas a lo largo de los aos, as como la diversidad de metodologas para su clculo han provocado sin duda esta situacin. Recientemente, organizaciones internacionales, como la ISO o la IUPAC, han tratado de consensuar sus definiciones y dar una serie de guas para la estimacin de este parmetro de calidad tan importante en anlisis qumico. En este artculo pretendemos aportar algo de luz sobre el tema y clarificar algunas de las dudas ms habituales al respecto. El concepto de deteccin El lmite de deteccin (LDD) se define habitualmente como la cantidad o concentracin mnima de sustancia que puede ser detectada con fiabilidad por un mtodo analtico determinado. Intuitivamente, el LDD sera la concentracin mnima obtenida a partir de la medida de una muestra (que contiene el analito) que seramos capaces de discriminar de la concentracin obtenida a partir de la medida de un blanco, es decir, de una muestra sin analito presente. El primer problema aparece en la palabra fiabilidad, puesto que sta implica la introduccin de la estadstica en la propia definicin de LDD y en su clculo posterior. Falsos positivos y falsos negativos Vamos a imaginar un determinado mtodo analtico y vamos a situarnos

mentalmente en el eje de las concentraciones. Vamos a suponer tambin que el mtodo analtico tiene una precisin conocida a lo largo de los diferentes niveles de concentracin y que los resultados obtenidos con dicho mtodo siguen una distribucin normal. Si analizramos blancos de muestra con el mtodo, bien seguro obtendramos una distribucin de valores como la que muestra la Figura 1. Figura 1. Distribucin de valores alrededor de cero y nivel crtico. Los valores de concentracin (en ausencia de un error sistemtico) se distribuiran alrededor de cero con una desviacin estndar s0. Quiere decir que como resultado de la medida de un blanco, y debido a los errores experimentales del mtodo (reflejados en s0) podramos obtener una concentracin que no fuese cero. Como responsables de los resultados generados en el laboratorio, lo que nos gustara es poder acotar la distribucin en algn punto. Dicho punto es el valor crtico, LC, que nos permitir, una vez medida la muestra, tomar la decisin de si el analito se halla presente o no. Si la concentracin obtenida es superior a LC entonces sin duda no corresponde a un blanco y podemos decir el analito est presente en la muestra. Existe, sin embargo, un riesgo al acotar la distribucin en LC, y es que existe una cierta probabilidad de que el anlisis de un blanco diese como resultado una concentracin superior a LC, con lo que falsamente concluiramos que el analito est presente. Dicha probabilidad, a, se denomina error de tipo I, error de 1 especie o, ms comnmente, probabilidad de falso positivo. Es decisin nuestra la eleccin del valor de a, en funcin al riesgo que queramos asumir de equivocarnos. Podramos establecer, por ejemplo, el valor crtico a concentracin cero. El riesgo en ese caso de cometer un falso positivo sera del 50% (cualquier valor de concentracin por encima de cero sera considerado como debido a la presencia de analito).

Ahora bien, podemos adoptar el valor de LC de la Figura 1 como el lmite de deteccin de nuestro mtodo analtico? Supongamos que es as y que dicho valor corresponde a una concentracin de 2 ppb. En ese preciso momento, el laboratorio est asumiendo que es capaz de detectar analitos en muestra a un nivel de concentracin igual o superior a 2 ppb. Imaginemos que un cliente del laboratorio le suministra un lote de muestras con un contenido de 2 ppb de analito. El laboratorio analiza dichas muestras y obtiene una distribucin de valores semejante a la mostrada en la Figura 2 (en rojo): Figura 2. Nivel crtico y lmite de deteccin para una probabilidad a. El riesgo de cometer un falso negativo es del 50%. Las concentraciones se distribuiran aproximadamente alrededor de 2 ppb, mitad hacia arriba y mitad hacia abajo. Cul sera la consecuencia? Pues que aproximadamente en la mitad de los casos el laboratorio dira que no hay analito en la muestra, o que no puede detectarlo, puesto que las concentraciones caen por debajo del valor crtico, LC. Cmo es posible? El laboratorio haba asegurado que es capaz de detectar a un nivel de 2 ppb y ahora, a este nivel de concentracin, se equivoca la mitad de las veces! Existe pues un riesgo de concluir errneamente que el analito no est presente cuando en realidad si lo est. Dicha probabilidad, b, se denomina error de tipo II, error de 2 especie o, ms comnmente, probabilidad de falso negativo. Es nuevamente decisin del laboratorio la eleccin del valor de b. Podemos permitirnos un 50% de errores? En caso negativo, la nica alternativa para reducir el riesgo de falsos negativos es aumentar el lmite de deteccin, como en el ejemplo de la Figura 3. Figura 3. Nivel crtico y lmite de deteccin para a = b (pequeos). Al aumentar el LDD el laboratorio se protege contra los falsos negativos. Imaginemos que ahora el LDD = 4 ppb. Claramente, si un cliente enva muestras conteniendo 4 ppb de analito, el laboratorio ahora corre un riesgo mucho menor

de asegurar que el analito no est presente cuando en realidad s lo est y a una concentracin de 4 ppb. Definicin moderna del lmite de deteccin En una definicin ms reciente, la ISO [ISO, 1997] introduce el trmino general concentracin neta mnima detectable (equivalente al lmite de deteccin), comola concentracin (o cantidad) neta verdadera de analito en el material sujeto a anlisis que conducir, con una probabilidad (1-b), a la conclusin de que la concentracin (o cantidad) de analito en el material analizado es mayor que la de un blanco. La IUPAC [IUPAC, 1995], en un documento preliminar, proporcionaba una definicin similar y adoptaba el trmino valor (verdadero) mnimo detectable, como equivalente al lmite de deteccin. De acuerdo con las definiciones de la ISO y la IUPAC, el LDD es un parmetro del mtodo analtico definido a priori, porque se fija antes de que se realice la medida. El LDD es pues esencialmente diferente a la decisin sobre si se detecta un analito o no, puesto que dicha decisin se toma una vez se conoce el resultado de la medida. En otras palabras: a posteriori. Expresiones para el clculo del valor crtico y del lmite de deteccin La decisin de si un determinado analito est presente o no en una muestra se basa en la comparacin de la concentracin predicha del analito con el nivel crtico, LC , que se define como: Lc= z(1-a)s0 donde z(1-a)es el valor de la distribucin normal de una cola para y para un nivel de significacin a y s0 es la desviacin estndar de la concentracin neta cuando el analito no est presente en la muestra. LC se define para marcar un valor mnimo a partir del cual una concentracin predicha se considera causada por el analito. De esta forma, existe un riesgo a de cometer un error de tipo I (o falso positivo). Sin embargo, si queremos mantener un riesgo (llamado b )

pequeo de cometer un falso negativo, el LDD del mtodo, LD , debe ser mayor. As pues, tomando en consideracin ambas probabilidades de error: Ld= z(1-a)s0+z(1-B)s D donde z(1-b) es el valor de la distribucin normal de una cola para y para un nivel de significacin b y s D es la desviacin estndar de la concentracin neta cuando el analito est presente en la muestra al nivel del LDD. En las ecuaciones (1) y (2) se ha asumido que las concentraciones siguen una distribucin normal con varianza conocida. Tomando como valores por defecto para a = b = 0.05, y asumiendo que la varianza es constante entre c = 0 y c = LD, la ecuacin (2) se transforma en: Ld=3.3s0 Si no se conocen las varianzas y deben estimarse a partir de anlisis replicados, entonces los valores de s0 y sD en (1) y (2) deben ser reemplazados por sus correspondientes estimaciones, s0 y sD. De la misma forma, los valores de z, basados en distribuciones normales deben ser reemplazados por los correspondientes valores t de una distribucin t-Student con n grados de libertad. Tomando a = b las expresiones para LC y LD (asumiendo varianza constante) son: Lc=t(1-a,n)s0 Ld=2t(1-a,n)s0 La ecuacin (5) es una aproximacin que tiende al valor verdadero de LD a medida que el nmero de grados de libertad aumenta. Cuando el nmero de replicados en la estimacin de s0 es pequeo, el trmino 2t1-a,n debe ser corregido por los grados de libertad [Currie, 1997]. Como se puede observar, las ecuaciones para el clculo de LC y LD son bastante simples. La dificultad mayor proviene de la estimacin de s0.

La medida del blanco Ya se ha mencionado que la decisin de si un determinado analito est presente o no en una muestra se basa en la comparacin con el valor crtico. Como en cualquier otra situacin, este proceso de comparacin implica errores experimentales (en la medida del blanco y en la de la muestra analizada). Dichos errores asumimos que son aleatorios y que siguen una distribucin normal. Al nivel de concentracin cero, la desviacin estndar de la concentracin (neta) se expresa de forma general como: s 0 = s Bf sB es la desviacin estndar del blanco y f = 1 / m + 1 / n , donde m y n son el nmero de replicados sobre la muestra analizada y sobre el blanco, respectivamente. f = 1 (s0 = sB) en el caso especial cuando m=1 y n es elevado. En un experimento pareado, es decir, cuando la concentracin neta se calcula como la concentracin en la muestra menos el blanco, entonces f = raiz de 2 . Si no se conoce sB, entonces debe reemplazarse por la estimacin correspondiente, sB, en la Eq. (6). Para obtener una estimacin fiable del LDD, se sugiere realizar un mnimo de 10 determinaciones sobre el blanco. Deben especificarse claramente las condiciones de precisin (repetibilidad, precisin intermedia) en las que se analiza el blanco. Alternativas para el clculo del lmite de deteccin La recta de calibrado del mtodo analtico utilizada para cuantificar tambin se puede utilizar para calcular el LDD, siempre que se haya construido en un intervalo de concentraciones restringido y prximo al LDD esperado. En el caso que a = b las expresiones para LC y LD (asumiendo varianza constante) son equivalentes a (4) y (5), con s0: foto cel donde:

sy/x: es la desviacin estndar de los residuales de la recta de calibrado b1: es la pendiente de la recta de calibrado N: es el nmero de patrones de calibrado xi: es cada una de las concentraciones de los patrones de calibrado x : es la media de las concentraciones de los patrones de calibrado. En mtodos cromatogrficos de anlisis, en los que el pico correspondiente al analito debe ser distinguido de la lnea de base cromatogrfica, el LDD puede calcularse midiendo el ruido del cromatograma de diversos (normalmente tres) blancos de muestra que han sido sometidos a todo el proceso analtico. Finalmente, y de forma general, es recomendable que cuando se reporte el lmite de deteccin de un determinado mtodo de anlisis se especifique la aproximacin utilizada para su clculo. Conclusiones Cuando un mtodo analtico se utiliza para anlisis de trazas o en casos (p.e. anlisis alimentario, farmacutico, antidopaje,...) donde la legislacin requiere la ausencia de ciertos analitos, el lmite de deteccin debe estimarse de forma rigurosa, tal como se describe en el documento de la IUPAC (IUPAC 1995). Su clculo debe contemplar la totalidad del proceso analtico y considerar las probabilidades a y b de tomar decisiones falsas. En este artculo hemos tratado de contribuir a dicho rigor