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Armonizacin y estandarizacin. Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL)

Captulo 25.

Armonizacin y estandarizacin. Buenas prcticas de laboratorio (BPL)

ANTONIO VILUMARA TORRALLARDONA Jefe de la Unidad de Garanta de Calidad de I+D Laboratorios Dr. Esteve, S.A. Barcelona

LAS BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL). HISTORIA Y APLICACIN PARTES DE QUE CONSTAN LOS PRINCIPIOS DE LAS BPL ORGANIZACIN Y PERSONAL DEL LABORATORIO DE ENSAYO Direccin del laboratorio Director del estudio Investigador principal Personal del estudio PROGRAMA DE GARANTA DE CALIDAD INSTALACIONES Instalaciones del sistema experimental Instalaciones para la manipulacin de los productos de ensayo y de referencia Instalaciones de archivo Eliminacin de residuos APARATOS, MATERIALES Y REACTIVOS SISTEMAS EXPERIMENTALES PRODUCTOS DE ENSAYO Y DE REFERENCIA PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE TRABAJO (PNT) REALIZACIN DEL ESTUDIO Protocolo Recopilacin de datos INFORME FINAL ARCHIVO. ALMACENAMIENTO Y CONSERVACION RESUMEN BIBLIOGRAFA

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LAS BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL). HISTORIA Y APLICACION Las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL) son un sistema de calidad que recopilan los procesos organizativos y las condiciones bajo las cuales los estudios no-clnicos de seguridad sanitaria y medioambiental son planificados, realizados, controlados, registrados, archivados e informados. Su objetivo es asegurar la calidad e integridad de todos los datos obtenidos durante un estudio determinado, y su cumplimiento es necesario para todos aquellos estudios no clnicos de seguridad sobre productos farmacuticos, productos pesticidas, productos cosmticos, medicamentos veterinarios, as como, aditivos alimentarios, aditivos de piensos y productos qumicos industriales. La calidad comparable de datos experimentales constituye la base del reconocimiento mutuo entre los diferentes pases. Si cada uno de stos puede confiar en los datos experimentales obtenidos en otros pases, se evita la duplicidad o repeticin de los ensayos. De este modo, se ahorran gastos, tiempo y reduccin cuantitativa de animales destinados a experimentacin. La aplicacin de estos principios debe contribuir a eliminar barreras tcnicas en el comercio y continuar mejorando la proteccin de la salud humana y del medio ambiente. Histricamente, los pasos seguidos hasta las normas y disposiciones que rigen actualmente son los siguientes: Hasta mediados de los aos 70, las autoridades de la Food and Drug Administration (FDA) asuman que los estudios presentados para su aprobacin, cumplan con uno de los requisitos recomendados, que era el de la fiabilidad y exactitud de los datos obtenidos durante el experimento. Las autoridades observaron que en algunos estudios presentados por las compaas farmacuticas haba datos contradictorios y evidencias de prcticas de laboratorio inaceptables. Eso hizo que en los aos 1975 y 1976, los propios laboratorios farmacuticos solicitaran a la FDA la redaccin y el establecimiento de una normativa que regulase los ensayos toxicolgicos, a fin de corregir y evitar las anomalas observadas, anomalas que incluan fundamentalmente las siguientes deficiencias o errores: Insuficiente planificacin de los ensayos. El personal tcnico desconoca la importancia de atenerse exactamente a los protocolos experimentales. Los datos del estudio no estaban sujetos a una supervisin peridica. Deficiencias en la forma de tomar, valorar y archivar los datos primarios. Los protocolos no permitan la evaluacin de todos los datos disponibles. Imposibilidad de certificar la cualificacin cientfica y experiencia del personal implicado en el ensayo Aplicacin inadecuada de las tcnicas de laboratorio y del manejo de los animales de experimentacin. Los estudios contratados por terceros no eran supervisados por los centros encargados. Algunos datos obtenidos durante el ensayo, no constaban en el informe final.

A la vista de la baja calidad encontrada en algunos informes, despus de un programa de inspecciones llevado a cabo en todo el pas y a fin de intentar solucionar estas incorrecciones, el 19 de noviembre de 1976 se propuso un proyecto de norma que la FDA public en el Federal Register (FR), denominndolo Good Laboratory Practice Regulations for Nonclinical Laboratory Studies. A partir de este momento se sucedieron toda una serie de inspecciones, publicndose sus resultados. Despus de unos ligeros cambios sali la versin definitiva de las BPL en el Code of Federal Regulations (CFR) (21, Part. 58), para ser revisado con posterioridad (vase CFR, vol. n 42, n 172,1987). La Organizacin para la Cooperacin y Desarrollo Econmico (OCDE) a la vista de la divulgacin de dichas normas por la FDA, tom conciencia del problema y un grupo de expertos, elaboraron una gua sobre los Principios de las BPL muy parecida a la de la FDA, editndose en 1981 con el ttulo de OECD Principles of Good Laboratory Practice. Esta gua, a pesar de que no es de obligado cumplimiento, s que es una recomendacin a seguir para todos los pases que forman dicha

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organizacin. Durante los aos 1995 y 1996 se realiz una revisin, redactando una nueva versin a mediados de 1998. La Unin Europea (UE) asumi las BPL de la OCDE, publicando las siguientes directivas: 9 junio 1988: Directiva 88/320/CEE relativa a la inspeccin y verificacin de las BPL. 18 diciembre 1989: Directiva 90/18/CEE por la que se adapta al progreso tcnico el Anexo de la Directiva 88/320/CEE. Hay que indicar que las directivas de la UE para ser efectivas deben ser publicadas en cada uno de los pases que forman dicha Unin. En Espaa los dos Reales Decretos (RD) que establecen los principios de las BPL son: RD 822/1993, de 28 de mayo (BOE n 128) RD 2034/1994, de 14 de octubre (BOE n 281) Considerando las modificaciones realizadas por la OCDE y siendo estas publicadas en 1998, la UE ha revisado las dos directivas anteriormente sealadas, a fin de incorporar estas modificaciones, quedando reflejadas en las dos nuevas Directivas: 8 marzo 1999: Directiva 1999/11/CE 8 marzo 1999: Directiva 1999/12/CE Como consecuencia de estas publicaciones, Espaa tambin ha modificado sus dos RD, sustituyendo el anexo del RD 822/1993 por el RD 1369/2000 de 19 de julio (BOE nm. 173) y el RD 2043/1994 por la ORDEN del 14 de julio de 2000 (BOE nm. 103). La directiva 1999/11/CE, establece que las BPL deben aplicarse a los ensayos no clnicos de seguridad sobre productos de ensayo contenidos en productos farmacuticos, plaguicidas, cosmticos, medicamentos veterinarios, aditivos utilizados en la alimentacin humana y animal, y sustancias qumicas industriales. Estos productos de ensayo suelen ser sustancias qumicas sintticas, pero tambin pueden ser de origen natural o biolgico y, en algunas circunstancias, puede tratarse de organismos vivos. El propsito de los estudios con estos productos es obtener datos sobre sus propiedades y su inocuidad para la salud humana y medioambiente. En este contexto podramos considerar como estudios de seguridad, y por lo tanto realizarse conforme a las BPL, los siguientes tipos de estudios: Estudios de toxicidad aguda. Estudios de toxicidad por dosis repetidas (subagudas y crnicas). Ensayos de mutagnesis, "in vivo" e "in vitro". Estudios de carcinognesis. Estudios de fototoxicidad y estudios de ototoxicidad. Ensayos de tolerancia y ensayos de irritacin (ocular y drmica). Estudios de teratognesis. Efectos de la administracin perinatal y posnatal inmediata. Estudios de toxicocintica. Anlisis qumico de las nuevas sustancias. Ensayos de seguridad farmacolgica. PARTES DE QUE CONSTAN LOS PRINCIPIOS DE LA BPL Siguiendo lo establecido en la directiva 1999/11/CE, los principios de las BPL estn compuestos por los siguientes apartados: Seccin I Introduccin. Prefacio. mbito de aplicacin. Definicin de trminos.

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Seccin II Organizacin y personal del Laboratorio. Programa de garanta de calidad (PGC). Instalaciones. Aparatos, materiales y reactivos. Sistemas experimentales. Productos de ensayo y de referencia. Procedimientos normalizados de trabajo (PNT). Realizacin del estudio. Informe final. Archivo y conservacin de registros y materiales. Como muchas otras normas, las BPL son de difcil interpretacin ya que hay muchos aspectos prcticos del laboratorio que no estn claramente definidos en el texto. Pueden existir diferencias de criterio con los mismos tcnicos del laboratorio en el momento de su aplicacin. Para subsanar precisamente estas diferencias, los distintos organismos han publicado una serie de guas complementarias a las directivas que intentan aclarar aspectos confusos de dicha normativa. En este sentido la OCDE ha publicado hasta el momento, 11 monografas. Tambin en Espaa se han publicado cuatro documentos por parte del Ministerio de Sanidad y Consumo, que intentan mejorar y unificar la aplicacin de las BPL. Son guas de trabajo y deben ayudar a mejorar la interpretacin de los dos RD publicados en nuestro pas. Hay otras guas e incluso reglamentaciones que complementan tambin las BPL. Es el caso por ejemplo de la gua para el uso y cuidado de los animales de experimentacin y de las diferentes guas sobre higiene y seguridad en el laboratorio o manejo y tratamiento de residuos. ORGANIZACIN Y PERSONAL DEL LABORATORIO Las BPL recomiendan que las instalaciones dispongan de personal entrenado, cualificado y con suficiente experiencia, que les permita realizar el ensayo correctamente. Cada una de las personas involucradas en un estudio, tiene la responsabilidad de asegurar la calidad e integridad de los datos asociados con dicho estudio. Para la implantacin de las BPL y un buen funcionamiento del centro, es clave que la direccin del mismo asuma plenamente la decisin del cumplimiento y seguimiento de dichas normativas. Este apoyo es bsico ya que sin l es prcticamente imposible que dichas normas puedan llevarse a cabo en el laboratorio. Un primer punto es definir claramente el organigrama del laboratorio, en donde queden definidas las posiciones de todo el personal. Este organigrama debe ir acompaado de documentos en los que se detallen las titulaciones, capacitaciones, experiencia y descripcin del puesto de trabajo (job description) individualizado para cada profesional o tcnico. Estos registros deben estar descritos en tres documentos distintos: curriculum vitae, descripcin del puesto de trabajo y training o registros de entrenamiento y formacin. Direccin del laboratorio Se define as al grupo de persones o a la persona con la autoridad y responsabilidad formal de que el laboratorio est organizado y funcione de acuerdo con los principios de las BPL. La direccin es la responsable de la calidad e integridad de los estudios llevados a cabo en su centro, ya que es la que someter la aprobacin del informe final a las autoridades competentes. Las responsabilidades de la direccin expuestas en las BPL tienen un impacto sobre el cumplimiento de dichas normas. Como ms importantes se podran comentar las siguientes: debe asegurar la disponibilidad de suficiente personal cualificado, locales apropiados, equipos y materiales para la oportuna y adecuada realizacin del estudio. Antes del inicio de cada estudio, la direccin del laboratorio nombrar un director de estudio con la titulacin, capacitacin y experiencia apropiadas, debien-

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do tambin asignar un suplente para su posible sustitucin. Si el estudio es multicntrico debe nombrarse un Investigador Principal con capacitacin y experiencia adecuadas. La direccin debe implementar y conducir un sistema efectivo de Garanta de Calidad realizado por personal asignado directamente por ella, a fin de asegurar que la responsabilidad de la garanta de calidad se ejerza en conformidad con los principios de las BPL. La direccin debe asegurarse que se han establecido y los PNT apropiados y previamente aprobados por ella, tanto originales como sus revisiones. Estos PNT junto con el protocolo aprobado por el director del estudio, deben ser los documentos bsicos y adecuados para obtener la calidad e integridad de los datos. La direccin debe mantener un listado actualizado de los estudios programados que se lleven en marcha en aquel momento (master schedule) y un archivo histrico de todos los PNT. Finalmente, la direccin debe nombrar un responsable para la gestin del archivo, en el cual se guarden todos los datos, especmenes y muestras procedentes de los estudios efectuados en el laboratorio en condiciones ptimas, y que segn las correspondientes regulaciones hay que archivar durante varios aos. Algunas de estas responsabilidades pueden ser delegadas a otras personas dentro de la organizacin, debiendo quedar claramente documentadas. Director del estudio Es la persona responsable de la realizacin del estudio no clnico sobre seguridad sanitaria o medioambiental. Tiene la responsabilidad principal de la realizacin del estudio, as como de la interpretacin, anlisis, documentacin e informe de los resultados del ensayo. Para cada estudio se debe nombrar un director, altamente cualificado, entrenado y con experiencia tcnica para llevar a cabo la investigacin. Tambin tiene toda una serie de responsabilidades y funciones dentro del laboratorio que debe asumir y cumplir. Antes del comienzo de un ensayo debe aprobar el protocolo, asegurndose tambin que la Unidad de Garanta de Calidad (UGC) disponga de una copia del mismo. Este protocolo y los correspondientes PNT estarn a disposicin del personal asignado al estudio. Debe asegurarse de que cualquier cambio del protocolo se haga mediante una modificacin o una enmienda, as como los datos primarios obtenidos se registren claramente e ntegramente. Tambin es responsable de que el estudio se realice de acuerdo con los principios de las BPL, por lo que debe firmar el informe final incluyendo en el mismo un certificado de cumplimiento de las BPL. Por ltimo, debe asegurarse que al trmino del estudio, el protocolo, informe final, datos primarios y todo material perteneciente al mismo, sea archivado adecuadamente. Investigador principal Tiene responsabilidades sobre la fase o fases del estudio que le han sido delegadas y debe asegurar que son seguidos los principios de las BPL. Personal del estudio Realizan in situ todo el procedimiento experimental del ensayo y son las responsables de asegurar que el estudio sea de calidad. Deben conocer claramente las BPL, as como el protocolo y los correspondientes PNT aplicables al estudio que estn realizando. El personal tomar las debidas precauciones sanitarias para minimizar los riesgos para su salud y asegurar la integridad de la investigacin. PROGRAMA DE GARANTA DE CALIDAD Este programa ha de ser independiente de la realizacin de los estudios y concebido para asegurar a la direccin que el laboratorio cumple con los principios de las BPL. La puesta en marcha y la formacin de este programa es un requisito fundamental para el establecimiento de las BPL. Todo este

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sistema debe efectuarse por una o ms personas designadas por la direccin y directamente responsables ante ella siendo, por tanto, orgnicamente independiente de todos los jefes de departamento o seccin, debiendo actuar con absoluta independencia. La direccin debe decidir y designar el personal que llevar a cabo el Programa de Garanta de Calidad (PGC), estableciendo de forma clara y concisa sus funciones y responsabilidades. Este personal, dada las caractersticas de su trabajo, debe poseer un perfil humano muy especfico con capacidad para el dilogo, flexibilidad y tolerancia, pero sin menoscabo de la calidad de los estudios y del recto cumplimiento de las normativas. Igualmente debe poseer capacidad de observacin y meticulosidad en su tarea de auditar y supervisar los ensayos, los datos producidos y los informes finales presentados. Asimismo, es necesario emprender una importante tarea de informacin y de formacin de todas las personas relacionadas con el programa, a fin de que se entienda, perfectamente, no slo su necesidad y beneficio, sino tambin hacer comprender que su implantacin necesita una sincera y decidida aceptacin por parte de todo el personal, ya que si esto no es posible puede comportar graves problemas y poner en peligro el xito esperado. Algunas de las dificultades de su aceptacin se originan por las inspecciones que el personal de la UGC realiza a los estudios que se estn realizando en el laboratorio y por la mayor cantidad de documentacin y por tanto de trabajo que ello origina en el personal. La finalidad de la UGC es monitorizar cada estudio para asegurar a la direccin que los laboratorios, instrumentos, personal, mtodos, prcticas, registros de datos y controles se realizan de acuerdo con los protocolos de los estudios y los PNT aprobados. Esta monitorizacin se realiza mediante inspecciones peridicas y auditora del informe final. Las inspecciones pueden ser de tres tipos: basadas en estudios, en instalaciones y en procesos. Una vez el personal de la UGC ha realizado la inspeccin debe realizar un informe de los resultados observados en la misma, informando de stos a la direccin y al director del estudio. Este debe indicar qu acciones correctoras tomar para solucionar las anomalas detectadas, si las hubiese habido. La auditora del informe final consiste en confirmar que los mtodos, procedimientos y observaciones se describen de manera exacta y completa, y que los resultados del informe reflejan los datos primarios del estudio. Cuando exista esta confirmacin, el responsable de la UGC debe elaborar y firmar una declaracin, que se incluir en el informe final. En la misma se especificaran los tipos de inspecciones realizadas y sus fechas, incluyendo la fase o fases del estudio inspeccionadas, y las fechas en que los resultados de las inspecciones se informaron a la direccin y al director del estudio. Esta declaracin tambin sirve para confirmar que el informe final refleja fielmente los datos primarios. INSTALACIONES Las instalaciones del laboratorio deben ser las adecuadas para satisfacer los requisitos del estudio, tanto en tamao, construccin como ubicacin, minimizando las posibles alteraciones que puedan interferir en la validez del estudio. Los materiales de la construccin deben ser de fcil limpieza. El tamao de las instalaciones, stas deben tener una suficiente capacidad para producir y mantener las condiciones ambientales requeridas. El diseo de las instalaciones debe proporcionar un adecuado grado de separacin entre las diferentes actividades para asegurar la realizacin correcta de cada estudio (vase Captulo 5). En el siguiente apartado, las BPL hacen referencia a los requisitos mnimos que deben cumplir ciertos tipos de instalaciones, ya que el estudio que se lleva a cabo puede verse afectado. Diferencian distintos tipos de instalaciones en funcin del uso al que estn destinadas.

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Instalaciones del sistema experimental El laboratorio debe tener un nmero suficiente de habitaciones o reas con el fin de asegurar la separacin de especies, aislamiento de proyectos individuales, salas de cuarentena o alojamiento especial de animales. Tambin debe tener salas para garantizar el aislamiento de los estudios en los que se utilicen sustancias u organismos de los que se conozca o sospeche que puedan comportar peligros biolgicos. Para ms informacin respecto a las instalaciones de animales, vase el Captulo 5. Deben estar diseadas, construidas y situadas de modo que se reduzcan al mnimo los trastornos que puedan influir desfavorablemente en el estudio. Evitar ruidos externos e internos, iluminacin difusa o pobre, olores que puedan proceder de otras salas, etc. La eleccin de buenos materiales es tambin importante. Estos han de proporcionar superficies lisas, no porosas, ser impermeables, resistentes a la corrosin y a los agentes qumicos, utilizando en la medida de lo posible aislantes trmicos y acsticos. Un elemento bsico e imprescindible en las instalaciones para animales, es el sistema de aire acondicionado. Las normas BPL no detallan las condiciones en que se deben mantener los animales y se fundamentan en el anexo II el artculo 5 de la Directiva 86/609/CEE (vase Anexo I). Instalaciones para la manipulacin de los productos de ensayo y de referencia Para prevenir contaminaciones o mezclas, debe haber salas o reas separadas para la recepcin y almacenamiento de los productos de ensayo y de referencia, y las operaciones de mezclas de los productos de ensayo con un vehculo. Estas salas o reas de almacenamiento de los productos de ensayo deben estar separadas de las salas o reas que contengan los sistemas experimentales, y deben de ser adecuadas para preservar la identidad, concentracin, pureza y estabilidad, as como garantizar un almacenamiento seguro de las sustancias peligrosas. Instalaciones de archivo Su funcin es ofrecer almacenamiento y una recuperacin segura de protocolos, datos primarios, informes finales, muestras de productos a ensayar y especmenes. El diseo y las condiciones del archivo protegern su contenido contra un deterioro prematuro. En el apartado de archivo, almacenamiento y conservacin, se detallan las condiciones que debe reunir este tipo de instalacin. Eliminacin de residuos Dentro del laboratorio, otro tipo de instalacin que actualmente tiene mucha importancia y que est sujeta a normativas especficas a seguir, son las salas o recintos para la recogida, almacenamiento y eliminacin de todos los residuos y animales sobrantes, de forma segura e inocua. La manipulacin y eliminacin de residuos debe ser efectuada de forma que no ponga en peligro la integridad del personal en los estudios que se estn realizando. APARATOS, MATERIALES Y REACTIVOS Los equipos destinados a la obtencin, almacenamiento, medida o recuperacin de datos, tienen que pasar por un proceso de validacin con el fin de asegurar que su diseo y capacidad sean adecuadas para las funciones que deben realizar en el estudio. Como ejemplos podramos incluir, balanzas, equipos analticos (HPLC, cromatografa, absorcin atmica, etc.), analizadores de sangre y orina, equipos informticos utilizados para la obtencin directa de datos, ordenadores para el clculo estadstico, etc. El buen funcionamiento de todos estos instrumentos es esencial para la obtencin de datos vlidos y de calidad.

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Peridicamente, han de ser examinados y sometidos a una serie de operaciones de limpieza, mantenimiento y calibracin de acuerdo con los PNT. Se establecen en el laboratorio planes de accin para llevar a cabo todos estos procedimientos, muchas veces teniendo en cuenta las recomendaciones de los propios suministradores y otras con la experiencia del propio laboratorio. Debe prestarse especial atencin a la calibracin, sealando su periodicidad en el PNT del aparato siguiendo los criterios del suministrador o la experiencia del personal. Estar documentada, exigiendo un certificado o informe de calibracin si sta lo realiza un centro externo. Cualquier cambio de ubicacin u operacin distinta a la calibracin previa obligar a realizar una nueva. Cada aparato debe llevar una etiqueta con indicacin de: fecha de la calibracin, firma de la persona que haya realizado la calibracin y fecha de la prxima calibracin. Los patrones para realizar las calibraciones, deben estar certificados por organismos oficiales. Los equipos de ventilacin, aire acondicionado, iluminacin, filtros, etc., de las salas de los animales tambin son inspeccionados y mantenidos peridicamente. Otro punto que seala la normativa, es el mantenimiento de registros de todos estos controles y actividades lo que implica que cada instrumento deba poseer una documentacin propia en la que se indiquen todas y cada una de las operaciones realizadas en l. Todos los programas referentes a la inspeccin rutinaria, limpieza, mantenimiento y calibracin, de los equipos deben estar detallados en PNT especficos. En stos se escriben con todo detalle las operaciones que hay que realizar (puesta en marcha y apagado, , perodos de limpieza, calibraciones, conservacin, condiciones de los contratos de mantenimiento, etc.), nombrando previamente para cada aparato o conjunto de ellos a una persona responsable del control de las operaciones. En un laboratorio es importante que los productos qumicos, reactivos y soluciones estn etiquetados claramente, indicando la identidad (con su concentracin, si procede), fecha de caducidad y las instrucciones especficas de almacenamiento. La informacin referente a la procedencia, fecha de preparacin y estabilidad no es necesario que estn sealadas en la etiqueta, pero s debe estar disponible. La fecha de caducidad puede ser ampliada en base a nuevos ensayos, que demuestren que la estabilidad es correcta durante este nuevo perodo. SISTEMAS EXPERIMENTALES Son el sujeto de estudio con independencia de su origen biolgico, qumico o fsico o una combinacin de todos ellos. Normalmente el sistema biolgico ms utilizado en un laboratorio es el animal de experimentacin, sujeto a una amplia reglamentacin (vase Captulo 12). Otras normas que tambin regulan el uso, cuidado y las instalaciones del animal de laboratorio son las BPL. Un punto importante que debe incluirse dentro del PGC, es el de establecer y mantener las condiciones adecuadas para el alojamiento, manejo y cuidado de los reactivos biolgicos, asegurando la calidad de los datos. Actualmente el animal de laboratorio es objeto de una autntica prioridad y vigilancia en el campo de la experimentacin, ya que si queremos garantizar el nivel cientfico de los ensayos, debemos asegurar la calidad de los animales utilizados. Todos los animales procedentes del exterior del centro, deben ser aislados inmediatamente despus de su recepcin hasta que su estado sanitario haya sido evaluado, manteniendo registros de su procedencia, fecha y condiciones de llegada. Estos perodos de cuarentena vienen regulados para cada especie en al anexo II de la directiva 86/609/CEE y deben fijarse en los correspondientes PNT del laboratorio. Si durante este perodo se produjera alguna mortalidad, estos lotes no sern utilizados en estudios y cuando sea apropiado, sern sacrificados. El tratamiento de cualquier enfermedad que se produzca antes o durante un estudio debe ser registrado.

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Una vez terminado el perodo de cuarentena y siempre que las condiciones de trabajo o hbitat sean distintas a las del experimento, se aclimatarn durante un perodo adecuado, a las nuevas condiciones ambientales. Cuando se somete a los animales a un tratamiento u observacin, y especialmente cuando son retirados de su alojamiento o contenedores durante la realizacin del estudio, deben estar claramente identificados. Esta identificacin es doble, una sobre el mismo animal (vase mtodos en Captulo 2) y la otra mediante una etiqueta en la jaula. No se utilizar, en ningn caso, el mismo nmero o cdigo de identificacin para dos animales distintos en un mismo establecimiento. Antes del comienzo de un estudio se asigna a cada animal, grupo, dosis, sexo, etc. un nico cdigo que se indicar en el protocolo correspondiente. Existe toda una serie de factores de riesgo que pueden contaminar al colectivo animal y por tanto producir problemas durante la realizacin de un estudio. Destacan el alimento, debindose usar dietas completas, equilibradas y constantes (vase Captulo 4). El agua de bebida es tambin otro factor de riesgo. Para ello se deben establecer una serie de controles rutinarios tanto biolgicos como qumicos. Las jaulas y dems materiales que forman parte del ambiente de los animales, como por ejemplo, la cama, deben ser desinfectados o esterilizados y ser renovados en intervalos apropiados. Hay que tener en cuenta que este material est en contacto directo con el animal, por lo que puede ser un factor importante de contaminacin. PRODUCTOS DE ENSAYO Y DE REFERENCIA Las BPL requieren que antes de comenzar el estudio, se recopile toda la informacin del producto. Procedencia, identificacin qumica, forma y propiedades fsicas ms relevantes, su pureza y la identificacin de cualquier impureza significativa. Los productos han de ser almacenados en lugares adecuados, evitando el riesgo de cualquier posible contaminacin qumica o fsica. Los recipientes de contencin del producto tienen que identificarse de forma clara, y en ellos ha de figurar al menos la siguiente informacin: Nombre del producto. Nmero de lote. Suministrador. Fecha de recepcin. Condiciones de almacenamiento. Fecha de caducidad.

Igualmente, hay que mantener registros de la caracterizacin de los productos, fechas de entrada y caducidad, cantidades recibidas y utilizadas durante estudio. Las caractersticas ms importantes del producto (identidad, lote, pureza, composicin, etc.), deben conocerse desde su inicio, aunque durante el transcurso del mismo podrn ampliarse sus parmetros, debiendo en todos los casos estar debidamente documentados. Es importante conocer la estabilidad tanto del producto a ensayar como el de referencia en las condiciones de almacenamiento y del estudio. En muchos ensayos el producto se mezcla en un vehculo, sea para administrar en forma de solucin o mezclado con la dieta. En estos casos las BPL indican que debe determinarse la homogeneidad, concentracin y estabilidad del producto a ensayar en ese vehculo. Todos estos procedimientos son indicados en los correspondientes PNT, en los que se describe la poltica del centro respecto a los parmetros mnimos que es necesario conocer antes de empezar un estudio. El laboratorio debe disponer de PNT sobre manejo, manipulacin, muestreo y almacenamien-

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to de los productos. En todos los estudios, excepto en los de corta duracin, hay que conservar una muestra de cada lote del producto de ensayo con fines analticos. PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE TRABAJO (PNT) En los PNT o procedimientos normalizados de trabajo, se describe de forma documentada el modo de realizar ensayos o actividades normalmente no detalladas en los protocolos o guas. Todo laboratorio debe contar con PNT escritos y aprobados por la direccin del laboratorio. Sus posibles revisiones han de ser aprobadas por la direccin del laboratorio y siempre se dispondr de los PNT correspondientes antes de aplicar una tcnica determinada, ya que este documento junto con el protocolo, constituyen la base para la realizacin del ensayo. Los objetivos principales de los PNT son: Estandarizar los mtodos, ya que permiten una continuidad en la realizacin del estudio, y de esta manera conseguir que los resultados obtenidos en el mismo laboratorio sean prcticamente siempre realizados en las mismas condiciones de trabajo. Reducir los riesgos de equivocacin por parte del personal que realiza el estudio, ya que en este sentido los PNT son un medio de formacin de las nuevas personas que se integran en el laboratorio. Los PNT disminuyen los errores sistemticos que puedan producirse normalmente y minimizan la influencia que pudiera existir por el cambio de personal en un momento dado, reduciendo por tanto la variacin de los resultados si estos han sido obtenidos por diferentes personas. Mejorar la calidad e integridad de los datos obtenidos en un estudio.

Es importante planificar y estructurar con todo detalle los PNT antes de escribirlos definitivamente, ya que son la pauta a cumplir en las diferentes reas del laboratorio. Los PNT son documentos tcnicos planificados y escritos con instrucciones para el personal, por tanto, son las referencias manuales de los procedimientos a seguir para asegurar que todas las operaciones se realizan correctamente. Deben ser vlidos para todo el personal cientfico y definir el conjunto de mtodos operatorios a emplear en un estudio. A pesar de que los procedimientos deben estar detallados al mximo, deben permitir una cierta flexibilidad cuando haya que realizar cualquier tipo de modificacin de la tcnica. Hay que tener en cuenta que los textos, separatas y mtodos analticos provenientes de la bibliografa no pueden ser en s mismos los PNT del estudio, sino que slo se pueden utilizar como complemento. Otro punto a considerar en los PNT es su distribucin, en el entorno del laboratorio. Es necesario que el personal que est realizando un determinado estudio, pueda consultar los mismos en cualquier momento y por tanto tenga acceso a ellos fcilmente, ya que precisamente su trabajo vendr regulado y estructurado por los PNT previamente escritos. Estos tambin sern usados para la confeccin del correspondiente protocolo experimental. REALIZACIN DEL ESTUDIO Protocolo Todo estudio ha de tener un protocolo escrito en el que se definan los objetivos y el diseo experimental. El protocolo debe ser aprobado y fechado por el Director del Estudio y verificado su cumplimiento de BPL por el personal de la UGC. En algunos pases las legislaciones indican que ste tambin debe ser aprobado por la direccin del laboratorio y el promotor, entendindose por promotor la entidad que encarga, financia y/o presenta un estudio no clnico de seguridad sanitaria o medioambiental. Es el documento bsico a seguir para la realizacin de un estudio y debe ser complementado por los PNT, los cuales expondrn con detalle todas las pautas a seguir y que de forma resumida estn

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indicadas en el protocolo. Estos dos documentos son la base para llevar a cabo el estudio por todo el personal implicado en el mismo y a su vez son los documentos que el personal de la UGC seguir para la realizacin de sus inspecciones o auditorias. Si durante el ensayo el director del estudio observa que no puede seguir exactamente el protocolo aprobado, las normas BPL establecen que cualquier cambio, modificacin o revisin del mismo estar documentada, aprobada, fechada y mantenida con el protocolo. Actualmente la normativa establece la posibilidad de poder realizar estos cambios mediante: a) Modificacin del protocolo despus de la fecha de inicio de un estudio. Es un cambio intencionado, que ser justificado, aprobado, fechado y firmado por el director del estudio, mantenindose siempre con el protocolo inicial. Desviacin del protocolo es un cambio no intencionado del protocolo despus de la fecha de iniciacin del mismo. Debe ser descrita, explicada, reconocida y fechada de manera oportuna por el director del estudio y/o investigador principal y mantenindose junto a los datos primarios del estudio.

b)

El contenido mnimo de un protocolo, debe reunir la siguiente informacin, sin limitarse a ella: Ttulo descriptivo. Descripcin, indicando la naturaleza y objetivo del estudio. Identificacin del producto del ensayo. Producto de referencia que se va a utilizar. Nombre y direccin del promotor. Nombre y direccin de cada uno de los laboratorios y centros de ensayo que intervienen. Nombre y direccin del director del estudio. Nombre y direccin del investigador o investigadores principales, y la fase o fases del estudio delegadas por el director del estudio y sometidas a la responsabilidad del investigador principal. Fecha de aprobacin del protocolo con la firma del director del estudio. Fechas propuestas de inicio y finalizacin del experimento. Referencia a las guas de la OCDE, otras guas o mtodos usados. Justificacin de la eleccin del sistema experimental. Caractersticas del sistema experimental, como especie, cepa, subcepa, suministrador, nmero, rango de peso, sexo, edad y cualquier otra informacin relevante. Mtodo de administracin y la razn de su eleccin. Niveles de dosis o concentraciones, frecuencia y duracin de la administracin o aplicacin. Informacin detallada del diseo experimental, incluyendo una descripcin del desarrollo cronolgico del estudio, todos los mtodos, materiales y condiciones, tipo y frecuencia de los anlisis, medidas, observaciones y exmenes que se van a realizar y, si los hubiese, los mtodos estadsticos utilizados. Una lista de los registros que se van a conservar.

Recopilacin de datos Otro punto al que hace referencia las BPL, es el de recopilacin de datos durante el estudio. Todos los registros y documentacin original del laboratorio, o sus copias compulsadas, que son el resultado de las observaciones y actividades originales de un estudio, se denominan datos primarios Estos tambin pueden incluir fotos, copias de microfilm o microfichas, datos obtenidos de instrumentos automatizados, o cualquier otro medio que sea reconocido como capaz de proporcionar seguridad en el almacenamiento de la informacin por un perodo determinado.

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Las BPL recomiendan que todos los datos generados durante la realizacin del estudio sean registrados inmediatamente de forma directa, exacta y legible por la persona encargada de realizarlo. Estas anotaciones deben firmarse con rbrica o iniciales y fecharse. Cualquier modificacin de los datos primarios debe efectuarse de manera que no oculte la lectura de la entrada previa, debindose indicar la razn del cambio y ser fechado y firmado (con rbrica o iniciales) por la persona que haya realizado la modificacin. Actualmente, y en la ltima revisin de las BPL, se ha incluido un apartado que hace referencia a la obtencin de datos primarios a travs de sistemas informatizados, por lo que el vaco reglamentario existente hasta ahora ya est regulado. A este respecto la normativa indica: los datos obtenidos como entradas directas de ordenador deben ser identificados en tiempo y fecha de su introduccin por la persona responsable de su entrada. Los sistemas informatizados debern disearse para poder posibilitar en todo momento la conservacin de datos que permitan realizar auditoras retrospectivas que muestren todos los cambios de los datos sin ocultar los datos originales. Debe ser posible asociar todos los cambios de datos con las personas que los han realizado, por ejemplo por medio de firmas electrnicas con hora y fechas. Las modificaciones debern justificarse en todos los casos. INFORME FINAL Es un documento en el que se describe el desarrollo del estudio, sus resultados y conclusiones. El responsable de elaborar este informe al finalizar el estudio es el director del estudio. Adems de la informacin mnima que debe contener un informe, las BPL tambin dan toda una serie de recomendaciones a seguir para la cumplimentacin y presentacin del mismo. Para cada estudio se preparar un informe final. Se utilizar el sistema internacional de unidades. Habr de estar firmado y fechado por el director del estudio, aceptando la validez de los datos. El director del estudio certificar el cumplimiento de las BPL. Asimismo, estar firmado y fechado por el investigador principal u otros cientficos, si los hubiese. Las correcciones o adiciones del informe final se incorporarn mediante modificacin. El contenido mnimo del informe final, sin limitarse a ellos, incluye los siguientes datos: Ttulo descriptivo (el mismo que el del protocolo). Identificacin del producto a ensayar. Identificacin del producto de referencia. Caractersticas del producto (pureza, estabilidad y homogeneidad). Informacin sobre el promotor y laboratorio, indicando: nombre y direccin del promotor, laboratorio, director del estudio, investigador principal (si lo hubiese), y de las personas que han contribuido a la realizacin del informe. Fechas de comienzo y finalizacin de la fase experimental. Declaracin de la UGC. Descripcin de mtodos y materiales usados. Referencias bibliogrficas. Resumen de resultados. Informaciones y datos requeridos en el protocolo. Exposicin de resultados (clculos y mtodos estadsticos). Discusin y conclusiones. Archivo.

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ARCHIVO. ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIN El archivo es el lugar donde se guarda de forma segura todo el material (datos primarios, especmenes, muestras, etc.) procedente de un estudio y que dispone de acceso controlado. Los archivos deben ser concebidos y equipados para acoger y almacenar de forma segura durante el perodo reglamentado, el siguiente material. Protocolo y enmiendas. Datos primarios. Productos a ensayar y de referencia. Documentacin relativa a los sistemas experimentales. Especmenes. Informes finales. Informes de las inspecciones de la UGC. Lista de estudios programados (master schedules). Documentacin de personal. Revisiones del Programa de garanta de calidad. Registros e informes del mantenimiento y calibracin de los aparatos. Documentacin de la validacin de los sistemas informticos. Fichero cronolgico de los PNT. Registros de los controles ambientales. Soportes magnticos.

Debido a que el tiempo de conservacin del material es muy largo, el archivo debe cumplir un nmero bsico de condiciones a fin de mantener en el mejor estado posible todo este material archivado. Ello hace que en el diseo del archivo se deban tener en cuenta los siguientes factores: medidas de proteccin contra robo y actos vandlicos, proteccin contra incendios (detectores de humo), extintores de dixido de carbono o no acuosos, circuitos elctricos de seguridad, evitar entrada de luz solar directa, evitar el paso de conducciones de agua, barreras contra animales e insectos, sistemas ambientales controlados y sala adyacente para consultas. Todos estos factores podrn variar segn la cantidad y material a archivar. El funcionamiento de los archivos debe estar documentado mediante los correspondientes PNT. El acceso a los mismos debe estar limitado slo a las personas autorizadas por direccin. Estos son los que llevarn el control de entrada y salida del material y slo ellos tendrn acceso al archivo. Todas estas operaciones deben registrarse. El archivero debe tener indexado todo el material existente en el mismo, a fin de conocer en cualquier momento su estado y poder buscarlo o recuperarlo. RESUMEN Las normas BPL son, en esencia una filosofa de trabajo. No regulan propiamente la parte cientfica de los ensayos, sino que son las exigencias generales a seguir respecto a la calidad de los mismos. No son ms que un sistema de garanta de calidad cuyo objetivo principal es mejorar el funcionamiento de los laboratorios y la idoneidad de los datos obtenidos en los estudios. La finalidad de la aplicacin de las BPL es la aceptacin mutua de resultados entre diferentes pases, por lo que es obvio que todos intenten unificar el contenido de las mismas a fin de que no haya diferencias significativas entre ellas. Es importante poder demostrar a las autoridades de los otros pases a los que se presenta la posible aprobacin del nuevo producto, que los resultados obtenidos en los correspondientes ensayos preclnicos, han sido generados cumpliendo con normas de trabajo que merecen la garanta y aceptacin mutua de los mismos. Con ello se obtienen toda una serie de beneficios importantes en el comercio internacional de sustancias qumicas, como son la reduccin del n-

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mero de animales, facilitar tcnicas alternativas y evitar en lo posible la repeticin innecesaria de estudios, todo ello con el consiguiente ahorro de tiempo y recursos. BIBLIOGRAFIA Carson PA, Dent NJ: Good laboratory and clinical practices. Heinemann Professional Publishing Ltd. Oxford, 1990. Directiva 86/609/CEE de 24 de noviembre de 1986. Proteccin de los animales utilizados para experimentacin y otros fines cientficos. DOCE L358 de 18.12.86. Directiva 1999/11CE de 8 de marzo de 1999. Principios de las Buenas Prcticas de Laboratorio. DOCE L 77 de 23.3.1999. Garfield FM: Quality assurance principles for analytical laboratories, AOAC, Arlington, Virginia, 1984. Garfield, F.M. Principios de Garanta de Calidad para Laboratorios Analticos. Ed. Espaola. AOAC 1993. Good Laboratory Practice Regulations. Final Rule. Federal Register,52:33768-33782. September 4, 1987. Nonclinical Laboratory Studies. Proposed Regulations for Good Laboratory Practice Regulations. Proposed Rule. Federal Register 41: 51206-51228. November 19, 1976. OECD. Principles of Good Laboratory Practice. Pars 1998. OECD Series on Principles of Good Laboratory Practice and Compliance Monitoring N 1 OECD Principles of Good Laboratory Practice. 1998 N 2 Revised guides for compliance monitoring procedures for Good Laboratory Practice,1995 N 3 Revised guidance for the conduct of Laboratory inspections and study audits,1995 N 4 Quality Assurance and GLP, 1992 N 5 Compliance of Laboratory suppliers with GLP Principles, 1992 N 6 The application of the GLP Principles to field studies, 1992 N 7 The application of the GLP principles to short-term studies,1993 N 8 The Role and Responsibilities of the Study Director in GLP Studies ,1993 N 9 Guidance for the Preparation of GLP Inspection Reports ,1995 N 10 The application of the principles of GLP to computerised systems,1995 N 11 The Role and Responsabilities of the Sponsor in the Application of the Principles of GLP. Real Decreto 883/1998, relativo al manejo y tratamiento de residuos txicos y peligrosos. Real Decreto 822/1993 de 28 de mayo, por el que se establecen los principios de buenas prcticas de laboratorio y su aplicacin en la realizacin de estudios no clnicos sobre sustancias y productos qumicos. BOE n 128 de 29 mayo de 1993. Sabater-Tobella J., Vilumara A., Buenas prcticas de laboratorio. Ed. Daz de Santos, Madrid, 1988. Sabater-Tobella J: Implementation of GLP in the analytical service laboratory. Chapter 4: Implementing International Good Practices: GAPs, GCPs, GLPs, GMPs. Ed. Dent NJ Interpharm Press, Inc.1993.