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UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS
Programa de Ps-Graduao em Tecnologia Bioqumico-Farmacutica
rea de Fermentaes
Produo de biofilme (membrana de biocelulose) por
Gluconacetobacter xylinus em meio de resduos de frutas e
folhas de ch verde
VersooriginalencontrasedisponvelnoServiodePsGraduaodaFCF/USP.
Denise Cristina Moretti Vieira
Tese para obteno do grau de
DOUTOR
Orientadora:
Profa. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna
So Paulo
2013
Denise Cristina Moretti Vieira
Produo de biofilme (membrana de biocelulose) por
Gluconacetobacter xylinus em meio de resduos de frutas e
folhas de ch verde
Comisso Julgadora
da
Tese para obteno do grau de Doutor
Profa. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna
Orientadora / presidente
____________________________
1
o
. examinador
____________________________
2
o
. examinador
____________________________
3
o
. examinador
____________________________
4
o
. examinador
So Paulo, __________ de _____.
DEDICATRIA
Dedico este trabalho a minha famlia, especialmente aos meus
pais, Norberto Vieira e Manoela Regina Moretti Vieira, e aos
meus irmos, Daniela Regina Moretti Vieira e Norberto Vieira
Jnior.
AGRADECIMENTOS
Profa. Thereza Christina Vessoni Penna, pela orientao, pela dedicao e pela
amizade.
Aos funcionrios e colegas do Departamento de Tecnologia Bioqumica-
Farmacutica da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So
Paulo, pelo apoio e colaborao.
minha famlia, pelo apoio, pela colaborao, pela compreenso e pela dedicao.
Bruna Tavares Gomes Sena, aluna de iniciao cientfica, pela amizade e pela
ajuda nas realizaes dos experimentos.
A todas as pessoas, que direta ou indiretamente, contriburam para a execuo
deste trabalho.
CAPES, pela concesso da bolsa de doutorado e pelo suporte financeiro para a
realizao da pesquisa.
FAPESP, pelo auxlio financeiro para a realizao da pesquisa.
RESUMO
Vieira Denise Cristina Moretti. Produo de biofilme (membrana de biocelulose)
por Gluconacetobacter xylinus em meio de resduos de frutas e folhas de ch
verde. 2013. 176 p. Tese (Doutorado). Faculdade de Cincias Farmacuticas,
Universidade de So Paulo, So Paulo, 2013.
A biomembrana, que uma membrana de celulose bacteriana (C
6
H
10
O
5
)
n
formada
na superfcie do meio de cultivo durante a fermentao actica, foi obtida atravs do
cultivo associado de Gluconacetobacter xylinus (formalmente Acetobacter xylinum)
e Saccharomyces cerevisiae em meio de folhas de ch verde, resduos de frutas
(abacaxi, mamo, laranja), resduos de vegetais (beterraba), vinho e colgeno em
condies estticas a 28 2C de 7 a 30 dias de cultivo. Foi incorporado
biomembrana, extrato hidroalcolico de Calendula officinalis, devido as suas
propriedades anti-inflamatrias, antioxidantes e cicatrizantes.
A espessura, o dimetro e o peso da biomembrana foram mensurados e foram
calculados a produtividade, bem como o fator de converso de acar em celulose.
A caracterizao da biomembrana foi realizada por Differential Scanning
Calorimetric, espectroscopia infravermelho, BrunauerEmmettTeller, resistncia
trao e alongamento, microscopia eletrnica (Escola Politcnica - USP) e difrao
de raio-X. Atravs destas anlises verificou-se que a biomembrana obtida nos
diferentes meios de cultivo composta por celulose, o tamanho mdio dos poros
variou de 517,9 a 1582,0 nm, a resistncia trao variou de 0,76 a 4,32 kN/m e o
ndice de cristalinidade entre 75% e 91%, a espessura da biomembranas variou de
0,16 a 6,38 mm.
Foram realizados 576 experimentos, a maior produtividade (8,23 g de celulose/dia)
foi atingida no meio de mamo com suco de laranja (suco de mamo: 50% v/v e
suco de laranja: 19% v/v) em 7 dias de cultivo. O maior fator de converso (2,36 g
celulose/g de acar) foi obtido no meio de ch verde em 25 dias de cultivo. A
adio de 1,5% p/v de colgeno ao meio de ch verde dobrou a massa da
biomembrana. A incorporao do extrato de calndula aumentou a flexibilidade, a
cristalinidade e as propriedades mecnicas da biomembrana de ch verde.
Palavras-chave: Celulose; Resduos de fruta; Camellia sinensis (ch verde);
Gluconacetobacter xylinus e Saccharomyces cerevisiae.
ABSTRACT
LISTA DE ILUSTRAES
Figura 11. Massa da biomembrana com o respectivo desvio padro obtida em meio de
ch verde, utilizando diferentes concentraes de sacarose, em funo do tempo, pH
inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v).
A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B) Concentraes de sacarose: 50,
100 e 128 g/L....................................................................................................................59
Figura 12. Produtividade da biomembrana com o respectivo desvio padro, obtida
em meio de ch verde, utilizando diferentes concentraes de sacarose em funo
do tempo, pH inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo:
0,150 L (25% v/v). A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B)
Concentraes de sacarose: 50, 100 e 128 g/L........................................................61
Figura 13. Fator de converso de acar em celulose, em meio de ch verde,
utilizando diferentes concentraes de acar, em funo do tempo, pH inicial:
3,51, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v). A)
Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B) Concentraes de sacarose:
50, 100 e 128 g/L........................................................................................................62
Figura 14. Espessura da biomembrana obtida em meio de ch verde e seu
respectivo desvio padro, utilizando diferentes concentraes de sacarose, em
funo do tempo, pH inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v). A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B)
Concentraes de sacarose: 50, 100 e 128 g/L.........................................................63
Figura 15. Massa da biomembrana, produtividade e fator de converso de acar
em celulose com os respectivos desvios padres, em funo da concentrao de
inculo, em meio de ch verde com 50 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1,
temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.....................................64
Figura 16. Espessura da biomembrana em funo da concentrao de inculo, em
meio de ch verde com 50 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, temperatura de
cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias................................................................65
Figura 17. Massa da biomembrana, produtividade e fator de converso de acar
com os respectivos desvios padres em funo do pH inicial do meio, em meio de
ch verde com 50 g/L de sacarose, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v),
temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias......................................65
LISTA DE TABELAS
Tabela 1. Microrganismos produtores de celulose bacteriana...................................12
Tabela 2. Composio meios de cultivos...................................................................42
Tabela 3. Dados dos cultivos realizados em meio de abacaxi com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................62
Tabela 4. Dados dos cultivos realizados em meio de mamo com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................70
Tabela 5. Dados dos cultivos realizados em meio de colgeno com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................75
Tabela 6. Dados dos cultivos realizado em meio de vinho com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................81
Tabela 7. Dados dos cultivos realizados em meio de laranja com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................86
Tabela 8. Dados dos cultivos realizados em meio de beterraba com os respectivos
desvios padres.........................................................................................................90
Tabela 9. Capacidade de Absoro de gua (CAA), Calndula (CAC) e de
Transferncia (CT) de calndula da biomembrana de celulose obtida nos diferentes
meios de cultivo .........................................................................................................99
Tabela 10. Fora mxima, distncia, rea e mdulo de elasticidade puno da
biomembrana obtida nos diferentes meios de cultivo..............................................103
Tabela 11. Resistncia trao (mdia e desvios padro) e TEA da biomembrana
obtida nos diferentes meios de cultivo.....................................................................105
Tabela 12. Porcentagem de alongamento com as respectivas mdias e desvios
padres da biomembrana obtida nos diferentes meios de cultivo...........................106
Tabela 13. Mdia do tamanho dos poros das biomembranas obtidas em diferentes
meios de cultivo........................................................................................................114
Tabela 14. Picos endotrmicos das biomembranas obtidas nos diferentes meios de
cultivo.......................................................................................................................120
Tabela 15. Picos endotrmicos das biomembranas obtidas nos diferentes meios de
cultivo.......................................................................................................................123
g: Grama.
G. xylinus: Gluconacetobacter xylinus.
c-di-GMP: Guanosina monofosfato.
GTP: Guanosina trifosfato.
G1P: Glicose-1-fosfato.
G6P: Glicose-6-fosfato.
GYP: Meio de cultivo de glicose, extrato de levedura e peptona.
h: ngulo central do pico.
HBO: Oxignio hiperbrico .
HS: Hestrin schramm medium (meio hestrin schramm).
Iam: Intensidade basal a 2u.
IBGE: Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica.
IL-1: Interleucina 1.
I
200
: Intensidade mxima do pico a 2u.
IPT: Instituto de Pesquisas Tecnolgica.
J/m
2
: Joule/metro quadrado.
Kg: Quilo.
kN/m: Quilonewton /metro.
Kv: Quilovolt.
L: Litro.
Lo: Comprimento original da amostra.
MEV: Microscopia eletrnica de varredura.
mL: Mililitro.
mm: Milmetro.
mm
2:
Milmetro quadrado.
MOV: Me do vinagre.
mPa: Megapascal.
m: Micrmetro.
nm: Nanmetro.
N
0
:
Nmero de bactrias no tempo 0.
N
t
: Nmero de bactrias no tempo t.
PIB: Produto Interno Bruto.
PPi: Pirofosfato.
p/v: Peso/volume.
Q.S.P: Quantidade suficiente para.
r: Raio.
RNA: cido ribonucleico.
RTG: Regenerao tecidual guiada.
s: Segundo.
S. cerevisiae: Saccharomyces cerevisiae.
SCOBY: Cultura Simbitica de Bactria e Levedura.
TEA: Tensile energy absorbed (energia de tenso absorvida).
TPA: 12-O-tetradecanoilforbol-acetato.
TPR: Tetratric peptide repeat (peptdeo de repetio tetrtrico).
UDP-glicose: Uridina difosfato glicose.
USP: Universidade de So Paulo.
UTP: Uridina trifosfato.
v/v: Volume/volume.
VS: Versus.
Wd: Peso da biomembrana seca.
Wh: Peso da biomembrana hidratada.
W1a: Peso da membrana com calndula antes da transferncia.
W1b: Peso da membrana com calndula aps a transferncia.
Smbolos
o: Constante relativa ao tempo de gerao.
AEpunc: Energia de puno.
AI: Incremento no seu raio.
c
p
: Deformao puno.
o
punc
: Tenso de puno.
SUMRIO
INTRODUO .............................................................................................................. 1
1. REVISO ................................................................................................................ 6
1.1 Celulose bacteriana (CB) ................................................................................. 6
1.2 Produo de CB ............................................................................................... 9
1.3 Usos da membrana de celulose .................................................................... 20
1.4 Uso dos resduos ........................................................................................... 27
1.5 Ch verde (Camellia sinensis) ....................................................................... 30
1.6 Laranja (Citrus sinensis) ................................................................................ 30
1.7 Mamo (Carica papaya) ................................................................................ 32
1.8 Beterraba (Beta vulgaris) ............................................................................... 33
1.9 Colgeno ........................................................................................................ 34
1.10 Calndula ....................................................................................................... 35
1.11 Produo de vinho e vinagre ......................................................................... 38
2 OBJETIVOS .......................................................................................................... 39
2.1 Objetivo geral ................................................................................................. 39
2.2 Objetivos especficos ..................................................................................... 39
3 RACIONAL e JUSTICATIVA ................................................................................ 39
4 MATERIAL E MTODOS ..................................................................................... 40
4.1 Microrganismo / inculo ................................................................................. 40
4.1.1 Produo do inculo: cultura mista ......................................................... 41
4.1.2 Produo do inculo: vinagre forte ......................................................... 42
4.2 Meio de cultivo ............................................................................................... 42
4.3 Condies operacionais ................................................................................. 44
4.4 Caracterizao da pelcula de celulose ......................................................... 45
4.5 Descarte do material ...................................................................................... 50
4.6 Forma de anlise dos resultados ................................................................... 50
5 RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................ 51
5.1 Meio de cultivo de ch verde (Camellia sinensis) ......................................... 52
5.2 Meio de cultivo de abacaxi (Ananas comosus) ............................................. 67
5.3 Meio de cultivo de mamo (Carica papaya) .................................................. 69
5.4 Meio de cultivo de ch com adio de colgeno ........................................... 74
5.5 Meio de cultivo de manitol com ch verde .................................................... 79
INTRODUO
A celulose (C
6
H
10
O
5
)
n
um dos mais abundantes biopolmeros encontrados
na natureza. A celulose de grande interesse para a cincia dos materiais, por ter
grande potencial, como material de reforol. um polissacarideo composto por
cadeias lineares no ramificadas, formadas pela unio de molculas de -glicose
(uma hexosana), atravs de ligaes -1,4-glicosdicas, cuja unidade estrutural de
repetio a celobiose, que composta por duas molculas de glicose (BOBBIO e
BOBBIO, 2001). A celulose foi primeiramente caracterizada pelo qumico francs
Anselme Payen, em 1838.
O aumento de demanda gerou a necessidade de se buscar outras fontes de
celulose, alm da vegetal, para minimizar os danos ao meio ambiente. Pesquisas
tm sido desenvolvidas, visando produo de celulose de origem bacteriana, a
partir de resduos de alimentos e agroindustriais, devido composio nutritiva que
estes resduos apresentam.
Os polissacardeos microbianos, como a celulose, podem ser produzidos em
condies controladas, a partir de espcies selecionadas de microrganismos, o que
evita a variao da estrutura. A busca por novos microrganismos, que sejam
capazes de produzir polissacardeos de interesse econmico e em grandes
quantidades, tem sido um desafio enfrentado por grupos de pesquisa de vrios
pases, como Japo, EUA, Canad, Frana e Brasil. Embora essa rea de pesquisa
tenha avanado muito nos ltimos tempos, poucos microrganismos produtores de
biopolmeros, com potencial de aplicao industrial, foram estudados (SOUZA e
GARCIA-CRUZ, 2004).
A celulose de origem vegetal (proveniente das plantas) e a celulose de origem
bacteriana so quimicamente semelhantes (cadeias |-1,4-glicanas), porm diferem
quanto ao grau de polimerizao, que de 13.000 a 14.000 resduos de glicose, na
celulose vegetal, e de 2.000 a 6.000 na celulose bacteriana (CB). Os resduos de
glicose na CB formam uma rede reticulada de finas fibrilas, com dimetro menores
ou igual a 1m, com elevada pureza qumica (livre de lignina e hemicelulose) e
cristalinidade. As microfibras, em forma de fitas, conferem CB propriedades
mecnicas peculiares, como elevada fora de tenso, elasticidade, durabilidade,
elevada capacidade de reteno e absoro de gua. A CB biodegradvel,
2
biocompatvel, e no alergnica (MOON et al., 2006; IGUCHI, YAMANAKA e
BUDHIONO, 2000; KLEMM et al., 2001; KLEMM et al., 2006).
As principais cepas de bactrias que produzem celulose durante o seu
crescimento celular so as taxomicamente relacionadas aos gneros Acetobacter,
Agrobacterium, Pseudomonas, Rhizobium e Sarcina.
Ateno especial tem sido dada cepa de Gluconacetobacter xylinus
(formalmente Acetobacter xylinum), descrita por Brown, em 1886 (JONAS e FARAH,
1998), e que produz grande quantidade de celulose, na forma de pelcula, na
interface da superfcie-ar, quando cultivada em laboratrio, sob condies
estticas (SILVA, 2003).
As clulas de G. xylinus podem (I) ser encontradas na superfcie de plantas,
frutas e flores; (II) constituir a microbiota secundria de material vegetal em
decomposio; (III) desenvolver a acidificao de sucos de frutas e bebidas
alcolicas, assim como (IV) produzir uma membrana de celulose na interface ar-
lquido desses sucos, ou na mistura de vegetais e frutas, em cultura esttica. A
membrana de celulose tem a funo de proteger as clulas do efeito letal da luz
ultravioleta e de outros microrganismos, de aumentar a colonizao celular, de
manter a umidade, prevenindo a desidratao e facilitando a adeso das clulas em
ambiente aerbico (SPINOSA, 2002; PACHECO, 2004; SETYAWATI et al., 2009).
A sntese de celulose por Gluconacetobacter xylinus ocorre entre a membrana
externa e a membrana citoplasmtica pela celulose-sintase, que est associada aos
poros da superfcie bacteriana. Durante o crescimento, as clulas do G. xylinus se
juntam com as nanofibrilas de celulose para formar uma pelcula. A faixa tima de
pH para a produo de celulose de 4 a 7 e a faixa tima de temperatura para o
crescimento e a produo de celulose de 25 a 30C (CASTRO et al., 2012).
A membrana de celulose, sintetizada pela bactria G. xylinus, estudada
desde os anos 1960. Na dcada de 1980, foi desenvolvida uma membrana de
celulose pura, microfibrilar, atravs de um processo fermentativo; desde ento, tem
sido considerada um material com grande potencial de aplicao. A CB foi
primeiramente utilizada como alimento (polpa de coco) pelos indgenas asiticos.
Atualmente, utilizada como substituta da pele (REBELLO et al., 2001), curativo de
feridas cirrgicas das papilas mamrias de vacas, curativo para cirurgias
periodontais (NOVAES JNIOR et al., 1993), reconstruo vascular (KLEMM et al.,
2001), substituta da dura-mter (MELLO et al., 1996), torniquetes, cobertura de
3
bactria com uma superfcie mediada por pilos e flagelos. Em contato com a
superfcie, as bactrias utilizam pilos para locomoverem-se at encontrarem outras
bactrias, formando colnias e iniciando a produo de exopolissacardeos (EPS).
Em estudos realizados por Costerton et al. (1999), verificou-se que, durante a fase
em que vivem associadas em um biofilme, as bactrias expressam genes que no
so observados quando estas vivem de forma isolada.
Os expolissacardeos secretados por bactrias possuem papel fundamental
na estrutura do biofilme bacteriano e tm demonstrado relao com a virulncia de
algumas bactrias (COSTERTON et al., 1999). Embora os expolissacardeos, como
o alginato, goma xantana, goma curdlana, gelana, succinoglicana, entre outros
sejam os componentes da matriz extracelular mais estudados, existe grande
variedade de expolissacardeos que permanece no caracterizada
(SUNTHERLAND, 2001). A celulose tem sido identificada como um dos EPS da
matriz extracelular, que produzido por vrias espcies de bactrias, durante a
formao dos biofilmes (SPIERS et al., 2003; ZOGAJ et al., 2001).
Os polissacardeos microbianos, como a celulose, podem ser produzidos sob
condies controladas e com espcies selecionadas, evitando-se os problemas de
variao da estrutura. A busca por novas variedades de microrganismos, que
produzam polissacardeos de interessante econmico e em grandes quantidades,
tem sido um desafio enfrentado por vrios grupos de pesquisa de vrios pases,
como Japo, EUA, Canad, Frana e Brasil. Embora essa rea de pesquisa tenha
avanado muito nos ltimos tempos, fato reconhecido que apenas poucos
microrganismos foram completamente estudados dentre a vasta gama de
microrganismos produtores de biopolmeros com potencial de aplicao industrial
(SOUZA e GARCIA-CRUZ, 2004).
Muitas bactrias so capazes de produzir celulose, principalmente as cepas
taxomicamente relacionadas aos gneros Acetobacter, Agrobacterium,
Pseudomonas, Rhizobium e Sarcina (Tabela 1).
12
Tabela 1. Microrganismos produtores de CB
Microrganismo
(gnero)
Celulose Obtida
Funo biolgica
Acetobacter Pelcula extracelular,
fitas de celulose
Manter o microrganismo em ambiente
aerbico
Achromobacter Fibrilas de celulose Floculao em guas residuais
Aerobacter Fibrilas de celulose Floculao em guas residuais
Agrobacterium Fibrilas curtas Fixar nos tecidos das plantas
Alcaligenes Fibrilas de celulose Floculao em guas residuais
Pseudomonas Fibrilas no distintas Floculao em guas residuais
Rhizobium Fibrilas curtas Fixar nos tecidos das plantas
Sarcina Celulose amorfa Desconhecido
Zoogloea Sem definio Floculao em guas residuais
Referncia: JONAS e FARAH, 1998
Ateno especial tem sido dada s cepas de Gluconacetobacter xylinus
(Figura 1) do gnero Acetobacter, da famlia Acetobacteriaceae, que foram
primeiramente descritas por Brown em 1886 (JONAS e FARAH, 1998). Elas
produzem cido actico na presena de oxignio. A faixa tima de temperatura de
reproduo est entre 15 e 34C. Outra propriedade interessante das cepas de
Gluconacetobacter xylinus a tolerncia a condies cidas, sendo capazes de
crescer em valores de pH menores que 5,0. As cepas de Gluconacetobacter xylinus
so aerbias obrigatrias, bacilos gram-negativos, bastonetes elipsoidais, retos ou
ligeiramente curvos, alongadas, mveis ou no, catalase positiva (so capazes de
decompor o perxido de hidrognio (H
2
O
2
) em gua (H
2
O) e oxignio (O
2
)),
incapazes de liquefazer gelatina e no reduzem nitratos e nitritos (bioqumica). A
temperatura de morte trmica das cepas de Gluconacetobacter xylinus est entre
65C e 70C. As cepas de Gluconacetobacter xylinus so comumente encontradas
na superfcie de plantas, frutas e flores e tambm constituem a microbiota
secundria de material vegetal em decomposio, estando envolvida na acidificao
bacteriana de sucos de frutas e bebidas alcolicas (SPINOSA, 2002; PACHECO,
2004). As cepas Gluconacetobacter xylinus produzem e excretam celulose
13
) no
tratamento de leso de furca, com resultados promissores. Lima e Passeri (1991),
com o propsito de minimizar algumas dificuldades inerentes ao procedimento de
enxerto gengival livre, utilizaram uma pelcula celulsica microfibrilar. Aps o
controle da hemorragia, vrias camadas da pelcula sinttica foram colocadas, com
intuito de revestir o leito receptor. A pelcula de celulose foi mantida na posio
correta pelo cogulo sanguneo. Aps avaliao clnica, apesar da pequena amostra
(cinco pacientes), os autores concluram que, ao final dos perodos de 15 e 30 dias,
a pelcula sinttica permitiu a substituio da camada superficial, sem interferir na
reparao do leito receptor.
A membrana de celulose tambm foi empregada como substituta da dura-
mter em ces, apresentando pouca reao fibrtica. A CB foi considerada um
material adequado para a realizao de enxerto dural (MELLO et al., 1996).
Em estudo desenvolvido por Salata et al. (2001), foi demonstrado que o
modelo de reparao ssea, com o uso da membrana de celulose, foi
predominantemente de ossificao endocondral. Em contraste, a membrana de e-
PTFE induziu formao ssea direta (ossificao intramembranosa). A formao de
cartilagem, durante a reparao ssea pela membrana de celulose, considerada
uma consequncia da baixa tenso de oxignio no tecido, gerada pelo selamento do
suprimento vascular periosteal (SANDBERG et al. 1993).
A CB tambm tem o potencial de ser usada como substrato na engenharia de
tecido cartilaginoso, devido sua elevada fora no estado seco, bem como sua
moldabilidade in situ, biocompatibilidade, relativa simplicidade e custo-eficincia de
produo. Svensson et al.(2005) relataram a resposta primria de condrcitos
bovinos naturais e quimicamente modificados na CB. A fosforilao e a sulfonao
das matrizes foram realizadas para adicionar carga aos glicoaminoglicanos na
cartilagem de tecido vivo. Os materiais foram analisados quanto s propriedades
mecnicas, microestrutura e interao clula-material. As respostas dos
condrcitos ao colgeno tipo II, celulose de origem vegetal, ao alginato de clcio e
22
ao tecido plstico de cultura foram comparadas matriz de CB. A expresso de
RNA na ECM, incluindo condrcito de colgeno especfico II e fibroblasto colgeno
especfico I, foi analisada para se estudar se a CB suporta a proliferao dos
condrcitos humanos. Adicionalmente, estudou-se o potencial da CB para suportar o
crescimento celular. Os dados indicaram que a celulose bacteriana no modificada
suporta a proliferao de condrcitos em nvel de 50% do tecido natural (colgeno
tipo II). Porm, quando comparada com alginato e com tecido de cultura plstico, a
CB no modificada demonstrou nveis significativamente maiores de crescimento
dos condrcitos e nvel similar de resposta imune in vitro. A fosforilao e a
sulfonao no melhoraram a produo dos condrcitos.
A membrana de celulose tambm pode ser utilizada como curativo oclusivo.
Esses curativos devem possuir caractersticas que melhorem a cicatrizao, como
permitir exsudao, manter umidade local, diminuir a dor, estimular a epitelizao e
evitar a contaminao. A partir da metade do sculo XX, demonstrou-se que os
curativos oclusivos podiam atuar como agentes farmacolgicos, interferindo direta e
favoravelmente na cicatrizao das feridas. Desde ento, as atenes se voltaram
para a cicatrizao mida das feridas com uso de curativos oclusivos e semi-
oclusivos (TOMAZ et al. 1977).
A utilizao dos curativos oclusivos e semi-oclusivos tem demonstrado
vantagens, como o aumento da velocidade de reepitelizao, reduo da dor e da
inflamao de lceras, bem como a possibilidade de formao de cicatrizes com
aspectos estticos melhores. Alm dessas vantagens, esses curativos podem ter
efeitos sobre a formao do tecido de granulao, favorecendo a reparao da
derme (FU, ZHANG e YANG, 2013; CASTRO, 2005; SULEWSKI, 1991, MAYALL et
al.,1990; PITANGUY, SALGADO e MARACAJ, 1988).
Os curativos oclusivos e semi-oclusivos: a) aumentam a concentrao local
de fatores de crescimento epitelial e plaquetrio e de interleucina-1, que facilitam e
aceleram a cicatrizao, por manter o fludo da lcera, que contm esses fatores,
em contato com a superfcie da ferida; b) mantm o potencial eltrico normal entre a
pele da lcera e a pele circundante, cuja manuteno importante para a migrao
epidrmica; c) mantm o ambiente da ferida mido, o que facilita a atividade
proteoltica, a fibrinlise, o desbridamento autoltico da leso, a migrao das clulas
epiteliais e evita a formao de crostas; d) tm efeitos favorveis da flora microbiana
local, uma vez que os metablitos produzidos pelas bactrias residentes nas lceras
23
Alm das aplicaes citadas, a CB tambm pode ser utilizada como papel,
torniquetes, aglomerantes, aditivo e espessantes de tintas, diafragmas acstico de
alta definio de alto-falante, vaso sanguneo artificial (REBELLO et al., 2001),
reconstruo vascular, revestimento de stent (uma pequena malha metlica
introduzida na artria durante a angioplastia, para impedir que a artria volte a se
fechar), biocombustvel, membrana inica de ultrafiltrao, substrato para cultura de
clulas mamrias, membrana de cobertura de biosensor de glicose, entre outros
usos (FONTANA et al., 1997; ERENO, 2004; SVENSSON et al., 2005, SETYAWATI
et al., 2009; FU, ZHANG e YANG, 2013).
1.4 Uso dos resduos
38
1.11 Produo de vinho e vinagre
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo geral
O objetivo deste projeto obter uma biomembrana de celulose, em meio de
cultura composto por folhas de ch verde (banch), sucos (resduos) de frutas
(laranja, mamo e abacaxi), legume (beterraba), vinho e colgeno, incorporando
extrato hidroalcolico de calndula biomembrana, para sua futura a aplicao no
tratamento de feridas da pele e queimadura, j que a calndula possui propriedades
cicatrizantes, antimicrobianas e anti-inflamatrias.
2.2 Objetivos especficos
- Avaliar a influncia da concentrao inicial de sacarose, da concentrao do
suco de fruta, do suco de beterraba e do vinho adicionado ao meio de ch
verde e a influncia da concentrao inicial de inculo, na massa da
biomembrana (g de celulose durante o cultivo), na produtividade de celulose
(g de celulose/dia) e no fator de converso de acar em celulose (g de
celulose/g de acar).
- Incorporar o extrato hidroalcolico (1:1) de calndula biomembrana de
celulose.
- Avaliar a influncia da adio de colgeno no meio de ch verde, na produo
da biomembrana.
- Caracterizar a biomembrana obtida nos diferentes meios de cultivo atravs
das anlises de FTIR, BET, DSC, Trao, Alongamento, Tenso a puno e
Absoro de gua e calendula
3 RACIONAL e JUSTICATIVA
Este projeto visou implantao de uma nova linha de pesquisa no
laboratrio, com a utilizao de tcnicas simples, que pudessem ser realizadas em
qualquer regio do pas, para obteno de um produto com alto valor agregado,
baixo custo e para sua futura aplicao clnica.
40
Com este intuito, o produto escolhido foi celulose bacteriana, que tem
propriedades qumicas, fsicas e biolgicas nicas, que possibilitam seu uso em
diversas aplicaes, j citados.
Neste projeto, optou-se pela utilizao de resduos de frutas e vegetais, para
a obteno de CB, por reduzir o custo da produo, para aproveitar a quantidade de
alimentos que so descartados, por auxiliar no desenvolvimento de regies com
baixo poder aquisitivo, por converter resduos em um produto com elevado valor
agregado, alm de contribuir para a conservao do planeta (ambientalmente
correto e sustentvel).
As folhas de ch verde foram utilizadas para obter CB, porque a Camellia
sinensis uma planta tradicionalmente usada no Oriente para produzir o Kombuch
(um ch fermentado com propriedades medicinais) e comercializada em todo
territrio nacional, ter baixo custo, produzir um meio de cultivo padronizado, possuir
substncias bacteriostticas. Os meios de cultivo de sucos de frutas e vegetais
foram utilizados por permitirem o aproveitamento dos resduos de frutas, por
reduzirem o custo e por aumentarem a quantidade de celulose.
A incorporao de fitoterpicos, como a calndula, foi realizada com o
objetivo de adicionar propriedades farmacolgicas membrana de celulose,
permitindo seu uso como substituto da pele, auxiliando na cicatrizao de feridas da
pele e no tratamento de queimaduras.
A membrana de celulose bacteriana obtida na superfcie do meio de cultivo, no
projeto, foi denominada biomembrana ou biomembrana de celulose.
4 MATERIAL E MTODOS
4.1 Microrganismo / inculo
Os microrganismos utilizados para produo da biomembrana de celulose
foram o Gluconacetobacter xylinus (ATCC 23769), procedentes da Fundao Andr
Tosselo, localizada em Campinas, So Paulo, Brasil, e o Saccharomyces cerevisiae
(fermento biolgico fresco, Fermix, lote: 293746 2 04, validade Fevereiro/2014),
adquirido em um supermercado de So Paulo, So Paulo, Brasil.
41
Os meios de cultivo (600 mL) foram inoculados com 5 - 50% v/v de cultura
mista em condies asspticas (todos os cultivos forma realizados em triplicata).
Somente para inocular o meio de vinho foi utilizado vinagre forte (inculo produzido
em meio de vinho). Os frascos, contendo o meio de cultivo e o inculo, foram
fechados com gazes e um elstico. O recipiente fechado foi colocado em uma estufa
e mantido a 28 2C, por diferentes intervalos de tempo (5, 7, 10, 15, 20, 25 e 30
dias), em condio esttica.
45
Parmetros utilizados:
- Velocidade da fase pr-teste: 1,0 mm/s
- Velocidade da fase teste: 0,2 mm/s
- Velocidade da fase ps-teste: 2,0 mm/s
- Distncia: 25 mm
O equipamento fornece a curva: fora X deslocamento. A fora at a
perfurao da amostra (F), o deslocamento mximo da biomembrana (D) e a rea
sobre a curva (A
sc
) foram determinados (BORGOGNONI, 2010).
4.4.3.2 Teste de trao e alongamento
Os testes de trao e alongamento foram realizados de acordo com a norma
ABNT NBR NM ISO 1924-2:2012 (Anexo 2), pelo laboratrio SINPACEL, em
Curitiba, no Paran.
Os testes foram realizados em triplicata, em um dinammetro digital DI-500,
sendo a distncia entre as garras de 100 mm, a largura das amostras de 15 mm, a
espessura das amostras de 1 mm e a velocidade de 10 mm/min.
Calculou-se a resistncia trao (kN/m), o alongamento (%) e a TEA (J/m
2
)
(Tensile energy absorbed, que representa a quantidade de trabalho realizado para
romper a amostra, calculada atravs da rea sob a curva e a rea da tira alongada).
4.4.5 Anlise de superfcie BrunauerEmmettTeller (BET)
O tamanho dos poros e a rea da superfcie da biomembrana de ch verde
foram determinados em um analisador de rea de superfcie BET. Para remover a
umidade, as amostras foram colocadas nas clulas de amostragem, aquecidas a
75C, por 3 horas, e resfriadas temperatura ambiente (25C 30C) antes da
anlise por BET. O tamanho dos poros e da rea da superfcie foi determinado pela
adsoro de N
2
a 350C (SAIBUATONG et al., 2010).
4.4.6 Capacidade de Absoro de gua (CAA)
Para determinar a CAA, a biomembrana liofilizada (rea: 10 mm
2
, espessura 1
0,5 mm) foi imersa em gua destilada, em estufa 35 2 C, at o equilbrio (48
horas). Depois, a biomembrana foi removida da gua, e o excesso de gua retirado
da superfcie. A biomembrana foi pesada, em balana analtica. O processo foi
repetido at peso constante (SAIBUATONG et al., 2010).
48
O contedo de gua foi calculado utilizando a seguinte frmula:
CAA (%) = Wh Wd X 100 (Frmula 1)
Wd
Sendo: Wh o peso da biomembrana hidratada e Wd o peso da biomembrana
seca (SAIBUATONG et al., 2010).
Este teste foi realizado em triplicata.
4.4.7 Capacidade de Absoro de Calndula (CAC)
Para determinar a CAC, a biomembrana liofilizada (rea: 10 mm
2
, espessura
1 0,5 mm) foi imersa no extrato hidroalcolico de calndula (tintura de calndula
diluda 1:1 com lcool etlico 70%(v/v)), em estufa 35 2 C, at o equilbrio (48
horas). Depois, a biomembrana foi removida do extrato e o excesso de extrato foi
removido da superfcie. A biomembrana foi pesada, em balana analtica e o
processo foi repetido at no haver alterao de peso da biomembrana
(SAIBUATONG et al., 2010).
O contedo de calndula foi calculado de acordo com a seguinte frmula:
CAC (%) = Ch Cd X100 (Frmula 2)
Cd
Sendo: Ch o peso da biomembrana com calndula e Cd o peso da
biomembrana seca (SAIBUATONG et al., 2010).
Este teste foi realizado em triplicata.
4.4.8 Teste de transferncia
Este teste foi realizado, para verificar a porcentagem de extrato hidroalcolico
de calndula, que a biomembrana com calndula transfere para a biomembrana
liofilizada. Para realizar este teste, uma biomembrana com extrato hidroalcolico de
calndula (10 mm
2
e 10,5 mm de espessura) foi colocada em com uma
biomembrana liofilizada (10 mm
2
e 10,5 mm de espessura) em uma estufa
352C, at atingir o equilbrio (aproximadamente 48 horas). As biomembranas
foram pesadas em balana analtica antes e depois de serem colocadas em contato,
at no haver mais variao de peso.
49
5 RESULTADOS E DISCUSSO
A seguir, so apresentados e discutidos os dados, referentes produo e
caracterizao da biomembrana obtida nos diversos meios de cultivo (ch verde,
abacaxi, mamo, ch com adio de colgeno, manitol com ch verde, vinho, laranja
e beterraba).
Todos os cultivos foram conduzidos em condio esttica, a 28 2C,
inoculando-se o meio de ch verde com cultura mista. O sistema se tornou turvo
depois de 3 a 4 dias de fermentao, uma pelcula (biomembrana) se formou na
superfcie do meio de cultivo.
No estgio inicial da fermentao, a concentrao de bactria aumenta,
consumindo o oxignio dissolvido e produzindo celulose na fase lquida do meio de
cultivo, tornando o meio de cultivo turvo. Quando termina o oxignio dissolvido no
meio, somente as clulas prximas superfcie continuam a produzir celulose,
formando uma pelcula (IGUCHI, YAMANAKA e BUDHIONO, 2000).
Esta pelcula serve para manter a posio da clula na superfcie do meio de
cultivo, para proteger as clulas do efeito letal da luz ultravioleta e dos outros
microrganismos e aumentar a colonizao celular, reter a umidade, prevenindo a
desidratao, alm de permitir a adeso das clulas em um ambiente aerbio e
facilitar a difuso dos nutrientes (IGUCHI, YAMANAKA e BUDHIONO, 2000).
As bactrias abaixo da superfcie esto apenas inativas e podem ser usadas
para inocular novas culturas (IGUCHI, YAMANAKA e BUDHIONO, 2000).
Uma tendncia observada durante os cultivos foi que houve um perodo de
induo de 10 dias aps esse perodo notou um aumento da produo de celulose,
isso porque o inoculo foi composto por dois microorganismos (G. xylinus e S.
cerevisiae) que atuam em simbiose, o S. cerevisiae acidifica o meio de cultivo
aumentando e facilitando a produo de celulose por G. xylinus.
52
5.1 Meio de cultivo de ch verde (Camellia sinensis)
O meio de ch verde foi utilizado como meio padro para obteno da
biomembrana e serviu de base para comparao da obteno de celulose nos
demais meios por possuir substncias bacteriostticas, baixo custo, facilidade de
obteno e preparo, alm de ser utilizado a milhares de anos para a obteno da
celulose bacteriana
A Figura 6 mostra o aspecto da biomembrana obtida em meio de ch verde
em 10 dias de cultivo
Tabela 2. Dados dos cultivos realizados em meio de ch verde com os respectivos desvios padres
Tempo
de
cultivo
(dias)
Sacarose
(g/L)
Inculo
(% v/v)
Ch
verde
(% v/v)
Dimetro
(cm)
Espessura
(mm)
Peso
(g)
Produdtividade
(g celulose/dia.L)
Fator de Converso
(g celulose/ g acar)
pH
inicial
pH
final
Brix
inicial
Brix
final
5 128 25 100 11 1 0,66 0,04 7,50,5 2,500,09 0,0590,004 3,51 3,01 11 10
7 128 25 100 11 1 1,07 0,07 10,10,5 2,400,09 0,0790,005 3,40 3,12 12 10
10 128 25 100 11 1 1,13 0,05 14,50,9 2,420,09 0,1130,007 3,39 3,00 12 11
15 128 25 100 11 1 2,08 0,12 31,21,9 3,470,12 0,2440,015 3,40 3,20 12 10
20 128 25 100
11 1
4,76 0,29 50,33,0 4,190,15 0,3930,024 3,47 2,95 12 9
5 100 25 100
11 1
0,660,04 8,00,4 2,670,08 0,0800,004 3,60 3,20 10 8
7 100 25 100
11 1
1,200,08 10,30,7 2,450,07 0,1030,005 3,43 3,32 9 8
10 100 25 100
11 1
1,500,09 16,70,8 2,780,08 0,1670,008 3,59 3,10 10 8
15 100 25 100
11 1
1,700,08 18,80,9 2,080,06 0,1880,009 3,50 3,41 4 4
20 100 25 100
11 1
3,950,24 44,12,2 3,680,11 0,4410,022 3,44 2,90 10 8
5 50 25 100
11 1
0,870,04 4,40,2 1,450,04 0,0870,004 3,80 3,52 5 4
10 50 25 100
11 1
1,150,16 22,20,5 3,690,29 0,4430,058 3,33 3,58 5 4
15 50 25 100
11 1
1,670,15 33,50,2 3,720,23 0,6690,035 3,50 3,47 4 4
20 50 25 100
11 1
3,02 0,21 42,40,2 3,530,18 0,8480,106 3,44 3,00 5 4
5 25 25 100
11 1
0,480,02 5,20,4 1,730,04 0,2050,010 3,50 3,10 3 1
7 25 25 100
11 1
0,500,03 8,70,4 2,070,10 0,3430,017 3,42 3,21 3 2
10 25 25 100
11 1
0,760,05 20,51,0 3,420,17 0,8090,040 3,52 3,13 3 1
15 25 25 100
11 1
1,500,08 25,61,3 2,840,14 1,0110,051 3,50 2,92 3 1
20 25 25 100
11 1
2,000,10 41,52,1 3,460,17 1,6380,082 3,62 3,10 3 1
7 12 25 100
11 1
0,450,03 3,80,2 0,540,03 0,3170,016 3,57 3,27 3 2
10 12 25 100
11 1
1,070,05 10,20,5 1,020,05 0,8500,043 3,58 3,08 2 1
15 12 25 100
11 1
1,100,06 11,50,6 0,770,04 0,9580,048 3,57 3,07 2 1
25 50 25 100
11 1
2,110,10 35,61,2 2,3730,051 0,7120,0256 3,51 2,81 5 4
54
25 128 25 100
11 1
3,960,10 47,42,4 3,160,16 0,3700,019 3,60 3,15 13 10
25 100 25 100
11 1
3,570,13 37,51,9 2,500,08 0,3750,019 3,60 3,08 10 8
25 25 25 100
11 1
1,930,13 40,03,0 2,670,12 1,6000,118 3,62 3,20 3 1
7 9 25 100
11 1
0,300,02 2,40,2 0,440,02 0,2670,013 3,55 3,57 3 2
10 9 25 100
11 1
1,000,06 6,50,4 1,200,07 0,7220,051 3,60 3,16 2 1
12 9 25 100
11 1
1,190,07 8,00,5 1,480,09 0,8890,062 3,57 3,14 2 1
15 9 25 100
11 1
1,290,07 15,70,9 2,910,17 1,7440,122 3,40 2,97 2 1
18 9 25 100
11 1
1,000,08 14,80,9 2,740,16 1,6440,115 3,64 3,15 2 1
20 9 25 100
11 1
0,830,09 13,70,8 2,540,15 1,5220,107 3,63 3,07 2 1
7 18 25 100
11 1
0,400,02 3,90,2 0,920,05 0,2160,011 4,15 3,80 2 1
7 18 25 100
11 1
0,400,02 3,50,2 0,830,04 0,1940,010 4,15 3,80 2 1
10 18 25 100
11 1
0,540,04 5,30,4 0,880,06 0,2940,021 3,65 3,06 3 2
12 18 25 100
11 1
1,000,05 8,10,4 1,130,06 0,4500,023 3,67 3,02 3 2
15 18 25 100
11 1
1,500,11 9,60,7 1,070,07 0,5330,037 3,66 3,09 3 2
18 18 25 100
11 1
3,000,15 16,40,8 1,520,08 0,9110,046 3,54 2,97 3 2
20 18 25 100
11 1
2,700,19 15,51,1 1,290,09 0,8610,060 3,63 3,07 3 2
7 40 18 100
11 1
1,500,20 6,30,6 1,500,08 0,1580,014 3,40 2,98 4 2
7 50 35 100
11 1
1,330,08 7,80,4 1,860,06 0,1560,060 3,50 3,30 5 4
7 50 20 100
11 1
0,650,03 8,00,8 1,900,12 0,1600,044 3,50 3,20 5 4
7 50 25 100
11 1
1,430,05 13,60,1 3,240,09 0,2720,020 3,60 3,30 5 4
7 50 50 100
11 1
0,810,08 3,90,3 0,930,06 0,0120,007 3,60 3,10 5 4
10 60 50 100
11 1
1,770,09 13,40,7 2,230,11 0,2230,011 3,40 3,10 5 4
15 60 25 100
11 1
0,690,03 8,80,4 0,980,05 0,1470,007 3,93 3,50 5 4
7 50 25 100
11 1
0,650,05 5,70,02 1,360,11 0,1150,065 5,50 4,90 5 4
26 60 28 100
11 1
1,450,07 12,40,6 0,790,04 0,2070,010 4,27 3,71 6 5
7 50 25 100
11 1
1,030,13 14,81,0 3,520,28 0,2960,024 3,50 3,20 5 4
7 50 25 100
11 1
1,300,18 11,90,7 2,830,18 0,2380,010 3,20 2,90 5 4
7 50 25 100
11 1
1,030,20 8,30,8 1,970,06 0,1660,059 4,00 3,52 5 4
55
10 70 17 100
11 1
1,500,30 13,62,5 2,270,60 0,1940,050 4,00 3,60 7 6
15 70 17 100
11 1
1,200,10 14,00,3 1,560,04 0,2000,020 3,60 3,19 7 6
7 50 40 100
11 1
1,100,04 6,10,7 1,450,03 0,1220,006 3,70 3,20 5 5
10 50 25 100
11 1
0,960,05 5,60,5 0,930,10 0,1120,022 4,16 3,52 5 4
15 50 25 100
11 1
1,390,07 5,81,4 0,640,09 0,1160,007 3,99 3,25 5 4
20 50 25 100
11 1
2,960,15 10,31,2 0,860,12 0,2060,012 3,97 3,22 5,5 5
10 50 25 100
11 1
0,620,03 6,61,4 1,090,09 0,1310,028 3,77 3,61 5 4
12 50 25 100
11 1
0,340,02 2,50,5 0,350,10 0,0500,003 3,77 3,18 4 4
7 50 25 100
11 1
0,900,07 6,40,8 2,500,05 0,0960,048 4,20 3,97 5 2
7 33 25 100
11 1
0,900,06 6,30,4 1,500,05 0,1890,048 3,57 3,05 3 2
15 33 25 100
11 1
0,160,01 3,40,2 0,380,02 0,1020,005 3,80 3,73 4 2
15 33 25 100
11 1
0,530,03 3,50,2 0,390,02 0,1050,005 3,78 3,70 4 2
7 67 25 100
11 1
1,300,06 10,90,8 2,600,05 0,1640,048 3,67 3,70 8 4
7 67 25 100
11 1
0,300,02 3,30,2 0,790,04 0,0500,002 3,75 3,65 5 3
10 100 25 100
11 1
0,850,04 7,00,4 1,170,06 0,0700,004 4,18 3,24 9 9
10 100 25 100
11 1
0,640,03 4,00,2 0,670,03 0,0400,002 4,12 3,33 8 8
7 150 36 100
11 1
0,570,03 5,50,03 2,500,03 0,0370,029 6,00 4,58 5 4
7 165 17 100
11 1
0,870,05 8,92,7 2,120,15 0,0540,003 4,30 4,70 12 10
7 175 25 100
11 1
0,570,04 10,00,7 2,390,07 0,0570,003 3,50 3,00 15 13
7 50 25 100
11 1
0,530,04 9,50,8 2,260,02 0,1900,420 2,50 2,38 5 4
7 50 45 100
11 1
0,960,05 4,00,2 0,960,03 0,0110,001 3,50 3,20 5 4
7 50 10 100
11 1
0,520,03 3,40,1 0,810,05 0,0680,001 3,50 3,10 4 1
7 230 7 100
11 1
0,500,03 2,50,1 0,600,03 0,0110,001 3,00 2,70 20 18
7 50 5 100
11 1
0,500,03 3,00,2 0,700,02 0,0590,003 3,50 3,15 5 4
7 50 15 100
11 1
0,570,03 5,10,2 1,210,04 0,1020,001 3,50 3,20 5 4
7 230 15 100
11 1
0,500,03 2,50,1 0,600,03 0,0110,001 3,00 2,80 20 18
7 230 20 100
11 1
0,750,45 6,80,4 1,610,05 0,0290,001 4,20 4,12 20 15
7 50 25 100
11 1
0,750,05 6,10,1 1,440,10 0,1210,008 5,00 4,60 5 4
56
7 230 25 100
11 1
0,530,04 9,50,8 2,260,07 0,0410,002 3,60 3,20 20 12
7 245 18 100
11 1
0,420,25 3,60,9 0,860,06 0,0150,004 4,30 4,20 22 20
7 50 25 100
11 1
0,930,07 6,40,1 1,520,03 0,1280,010 3,00 2,58 5 4
7 285 36 100
11 1
1,100,06 10,00,5 2,380,12 0,0350,002 3,52 3,24 27 22
25 12 25 100
11 1
1,70,09 9,50,5 0,630,03 0,7920,040 3,48 3,12 5 4
20 12 25 100
11 1
0,970,08 10,10,4 0,840,02 0,8400,030 3,57 3,22 5,5 5
20 25 25 100
11 1
1,60,08 7,40,4 0,620,03 0,2960,015 3,57 3,02 5 4
20 315 17 100
11 1
0,800,04 2,60,1 0,220,01 0,0080,001 3,40 3,20 29 27
7 75 17 100
11 1
1,450,31 12,24,3 2,920,31 0,1630,029 3,58 3,50 8 5
15 75 30 100
11 1
0,590,03 5,50,3 0,610,03 0,0730,004 4,22 4,00 8 5
7 50 25 100
11 1
1,030,30 8,80,8 2,080,07 0,1750,095 3,70 3,48 5 4
15 75 17 100
11 1
1,260,20 14,10,5 1,560,03 0,1870,007 3,69 3,50 8 5
15 75 22 100
11 1
1,270,06 9,80,5 1,090,05 0,1310,007 4,04 3,70 8 5
15 85 11 100
11 1
0,630,03 6,00,3 0,670,03 0,0710,004 4,22 4,00 9 4
7 50 25 100
11 1
0,370,01 3,90,4 0,930,05 0,0780,004 3,79 3,10 5 4
7 50 25 100
11 1
0,880,16 6,10,7 1,450,17 0,1220,029 4,50 4,18 5 4
30 85 17 100
11 1
5,000,25 71,33,6 3,960,20 0,8390,042 5,00 4,30 7 2
15 85 22 100
11 1
1,570,08 12,10,6 1,340,07 0,1420,007 4,19 3,57 9 4
15 95 13 100
11 1
1,250,06 14,20,7 1,580,08 0,1490,007 4,19 3,42 10 7
15 95 22 100
11 1
0,970,05 6,00,3 0,670,03 0,0630,003 4,01 3,57 10 8
10 100 20 100 11 1 1,000,05 8,90,4 1,480,07 0,0890,004 3,52 3,52 8 7
57
o
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
g
a
c
a
r
)
M
a
s
s
a
(
g
)
Tempo (dias)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Massa (g)
Fator de Converso ( g celulose/ g acar)
Figura 7. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar em
celulose e da produtividade com o respectivo desvio padro em funo do tempo,
em meio de ch verde com 100 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, temperatura de
cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v).
Na Figura 7, observa-se que a massa da biomembrana aumenta linearmente
em funo do tempo, atingindo seu valor mximo (45 g) em 20 dias de cultivo; aps
este perodo, a massa diminui, porque, toda a sacarose (100 g/L) do meio de cultivo
foi consumida e a celulose no mais formada.
A produtividade aumentou linearmente at o quinto dia de cultivo. Em meio de
ch verde, a produtividade mxima (4,0 g celulose/dia.L) alcanada no vigsimo
dia de cultivo. Aps este perodo de cultivo, a produtividade diminui de maneira
linear.
Para esta condio estudada (meio de ch verde, concentrao de acar:
100 g/L, pH: 3,5 1 e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v)), o fator de converso
aumenta linearmente com o tempo e atinge o valor mximo (0,5 g celulose/g acar)
em 20 dias de cultivo. Aps este perodo, o fator diminuiu.
Uma tendncia geralmente observada que a espessura da biomembrana, em
condies estticas, assim como a produo de celulose, aumenta aps um perodo
de induo. A espessura aumentou de 0 a 1 mm, em 7 dias de cultivo. A espessura
58
mxima de 4 mm foi alcanada 20 dias de cultivo. Aps este perodo, a espessura
tende a diminuir (Figura 8).
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
4,00
4,50
0 5 10 15 20 25
E
s
p
e
s
s
u
r
a
(
m
m
)
Tempo (dias)
Espessura (mm)
Figura 8. Variao da espessura com o respectivo desvio padro em funo do
tempo, em meio de ch verde com 100 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1,
temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v).
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
0 50 100 150 200 250
P
r
o
d
u
t
i
v
i
d
a
d
e
(
g
c
e
l
u
l
o
s
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.
L
)
F
a
t
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C
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n
v
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r
s
o
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
g
a
c
a
r
)
M
a
s
s
a
(
g
)
Concentrao de sacarose (g/L)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 9. Massa da biomembrana, produtividade e fator de converso de acar em
celulose com os respectivos desvios padres em funo da concentrao de
sacarose, em meio de ch verde, volume de inculo: 0,150 L (25 % v/v), pH inicial:
3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
Na Figura 9, observa-se que a massa da biomembrana aumenta com o
aumento da concentrao de sacarose, atingindo o valor mximo (15 g) com 50 g/L
de sacarose. Quando a concentrao de sacarose maior que 50 g/L, a massa
59
(
g
)
Tempo(dias)
[Sacarose]=9g/L
[sacarose]=12g/L
[sacarose]=18g/L
[Sacarose]=25g/L
A
60
0
10
20
30
40
50
60
0 5 10 15 20 25
M
a
s
s
a
(
g
)
Tempo(dias)
[Sacarose]=50g/L
[sacarose]=100g/L
[sacarose]=128g/L
Figura 11. Massa da biomembrana com o respectivo desvio padro obtida em meio
de ch verde, utilizando diferentes concentraes de sacarose, em funo do tempo,
pH inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L
(25% v/v). A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B) Concentraes de
sacarose: 50, 100 e 128 g/L.
A concentrao de sacarose que produziu a biomembrana com maior massa
(50 g de celulose) foi de 128 g/L, em 20 dias de cultivo (Figura 11 B). A massa
aumenta em funo do tempo; porque a biomembrana formada at que toda a
sacarose seja consumida. Aps 20 dias de cultivo, a biomembrana obtida em meio
de ch verde, com concentraes de sacarose de 100 g/L, 50 g/L e 25 g/L, atingiram
aproximadamente a mesma massa (45 g de celulose). A maior massa obtida em
meio de ch verde, com concentrao de sacarose de 18 g/L e 9 g/L, foi de 16 g
(Figura 11 A).
A maior massa da biomembrana em meio de ch verde com a concentrao
de 25 g/L de sacarose foi 2,7 vezes maior que a obtida com 18 g/L de sacarose.
Em 25 dias de cultivo, houve uma diminuio da massa de todas as
biomembranas para todas as concentraes de sacarose estudadas.
B
61
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
0 5 10 15 20 25
P
r
o
d
u
t
i
v
i
d
a
d
e
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
d
i
a
.
L
)
Tempo(dias)
[Sacarose]=9g/L
[Sacarose]=12g/L
[Sacarose]=18g/L
[Sacarose]=25g/L
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
0 5 10 15 20 25
P
r
o
d
u
t
i
v
i
d
a
d
e
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
d
i
a
.
L
)
Tempo(dias)
[sacarose]=50g/L
[sacarose]=100g/L
[sacarose]=128g/L
Figura 12. Produtividade da biomembrana com o respectivo desvio padro, obtida
em meio de ch verde, utilizando diferentes concentraes de sacarose em funo
do tempo, pH inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo:
0,150 L (25% v/v). A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B)
Concentraes de sacarose: 50, 100 e 128 g/L.
Na Figura 12, verifica-se que a maior produtividade (4 g celulose/dia.L),
ocorreu com a concentrao de sacarose de 128 g/L, em 20 dias de cultivo. Para a
concentrao de sacarose de 100 g/L, a maior produtividade foi tambm atingida no
vigsimo dia. J com a concentrao de sacarose de 50 g/L, a produtividade
aumentou linearmente com o tempo, atingido a produtividade mxima de 3,5 g
celulose/dia.L no stimo dia. A menor produtividade (1,0 g celulose/dia.L) foi obtida
com a concentrao de sacarose de 12 g/L, no dcimo dia de cultivo. A maior
A
B
62
produtividade atingida nos meios com concentrao de sacarose de 25 g/L, foi 3,5 g
celulose/dia.L (10 dias de cultivo), este valor est muito prximo do mximo obtido.
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
2,0
0 5 10 15 20 25
F
a
t
o
r
d
e
c
o
n
v
e
r
s
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
g
c
a
r
)
Tempo(dias)
[sacarose]=9g/L
[sacarose]=12g/L
[sacarose]=18g/L
[Sacarose]=25g/L
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
0 5 10 15 20 25 30
F
a
t
o
r
d
e
c
o
n
v
e
r
s
(
g
c
e
l
u
l
o
s
e
/
g
c
a
r
)
Tempo(dias)
[sacarose]=50g/L
[sacarose]=100g/L
[sacarose]=128g/L
Figura 13. Fator de converso de acar em celulose, em meio de ch verde,
utilizando diferentes concentraes de acar, em funo do tempo, pH inicial:
3,51, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de inculo: 0,150 L (25% v/v). A)
Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B) Concentraes de sacarose:
50, 100 e 128 g/L.
Na Figura 13, verifica-se que o maior fator de converso (1,7 g celulose/g
celulose) ocorre no meio de cultivo com concentrao de sacarose de 9 g/L, em 15
dias de cultivo. Nos meios de cultivo, com concentraes de sacarose de 50 g/L, 100
g/L e 128 g/L, o maior fator de converso foi alcanado no vigsimo dia. No meio de
cultivo com concentrao de sacarose 12 g/L, o maior fator de converso foi atingido
A
B
63
no dcimo quinto dia de cultivo, enquanto que, no meio de cultivo com concentrao
de sacarose de 18 g/L, o maior fator de converso foi alcanado no dcimo stimo
dia de cultivo. No meio de cultivo com concentrao de sacarose de 25 g/L, o fator
de converso aumentou linearmente com o tempo, atingindo o valor mximo de 1,6
g celulose/g sacarose no vigsimo dia de cultivo.
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
0 5 10 15 20 25
E
s
p
e
s
s
u
r
a
(
m
m
)
Tempo(dias)
[sacarose]=9g/L
[sacarose]=12g/L
[sacarose]=18g/L
[Sacarose]=25g/L
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
0 5 10 15 20 25
E
s
p
e
s
s
u
r
a
(
m
m
)
Tempo(dias)
[sacarose]=50g/L
[sacarose]=100g/L
[sacarose]=128g/L
Figura 14. Espessura da biomembrana obtida em meio de ch verde e seu
respectivo desvio padro, utilizando diferentes concentraes de sacarose, em
funo do tempo, pH inicial: 3,5 1, temperatura de cultivo: 28 2C e volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v). A) Concentraes de sacarose: 9, 12, 18 e 25 g/L e B)
Concentraes de sacarose: 50, 100 e 128 g/L.
Na Figura 14, verifica-se que a espessura mxima (5 mm) foi atingida no meio
com concentrao de sacarose de 128 g/L, no vigsimo dia de cultivo. Nos meios de
cultivo com concentraes de sacarose de 50 g/L, 100g/L e 128g/L, a maior
B
A
64
espessura (3 mm, 4 mm e 5 mm, respectivamente) foi alcanada no vigsimo dia.
J nos meios de cultivo, com concentraes de sacarose de 9 g/L e 12 g/L, a maior
espessura (1,3 mm e 1 mm, respectivamente) foi atingida no dcimo quinto dia e,
enquanto que, no meio de cultivo com concentrao de sacarose de 18 g/L, a maior
espessura (3 mm) foi alcanada no dcimo stimo dia de cultivo.
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 10 20 30 40 50
P
r
o
d
u
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i
v
i
d
a
d
e
(
g
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g
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g
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)
M
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s
s
a
(
g
)
Concentrao de inculo (%)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 15. Massa da biomembrana, produtividade e fator de converso de acar
em celulose com os respectivos desvios padres, em funo da concentrao de
inculo, em meio de ch verde com 50 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1,
temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
Na Figura 15, observa-se que, a curva da massa em funo do volume de
inculo uma parbola. A massa atinge o valor mximo (13,9 g) com 25% v/v. Isso
ocorre, porque o aumento do volume de inculo gera uma competio entre os
microrganismos pela sacarose e, diminui a quantidade de celulose obtida, j que a
produo de celulose est relacionada com o crescimento celular. O efeito do
volume de inculo na produtividade e no fator de converso igual ao observado
para a massa. A produtividade mxima (3,2 g celulose/dia.L) e o maior fator de
converso (0,21 g celulose/g acar) foram atingidos com volume de inculo de
0,150 L (25% v/v). Portanto, nesta condio estudada (meio de ch verde, pH inicial
3,5 1, concentrao de sacarose 50 g/L e tempo de cultivo: 7dias), o melhor
volume de inculo foi de 25% v/v.
65
Figura 16. Espessura da biomembrana em funo da concentrao de inculo, em
meio de ch verde com 50 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, temperatura de
cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias
Na Figura 16, observa-se que a curva da espessura da biomembrana, em
funo do volume de inculo, uma parbola. A espessura atinge o valor mximo
(1,4 mm) com 25% v/v de inculo. Isso ocorre, porque o aumento do volume de
inculo gera competio entre os microrganismos pela sacarose, diminuindo a
quantidade de celulose obtida, uma vez que, a produo de celulose est
relacionada com o crescimento celular.
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0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
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4,00
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2,00 3,00 4,00 5,00 6,00
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(
g
)
pH inicial
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 17. Massa da biomembrana, produtividade e fator de converso de acar
com os respectivos desvios padres em funo do pH inicial do meio, em meio de
ch verde com 50 g/L de sacarose, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v),
temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
66
Na Figura 17, observa-se que a curva da massa da biomembrana, em funo
do pH inicial do meio de cultivo, uma parbola. O maior valor da massa da
biomembrana (15 g) atingido quando o pH inicial do meio de cultivo 3,5. O efeito
do pH inicial na produtividade e no fator de converso igual ao observado na
massa da biomembrana. A produtividade mxima (2,2 g celulose/dia.L) e o valor
mximo do fator de converso (0,25 g celulose/g acar) so alcanados quando o
pH inicial 3,5.
Portanto, nas condies estudadas (meio de ch verde, 7 dias de cultivo,
concentrao de sacarose de 50 g/L e 25 % v/v de inculo), o melhor valor de pH
inicial 3,5. Isso est de acordo com a literatura, pela qual a melhor faixa de pH
inicial para o crescimento de Acetobacter xylinum est entre 3 e 6 (IGUCHI,
YAMANAKA e BUDHIONO, 2000), enquanto que 80% dos dados observados para
produo de celulose foram obtidos quando o pH estava entre 3,5 e 7. Para a
produo industrial, o pH entre 4 e 4,5 forneceu os melhores resultados,
especialmente por evitar contaminao (CASTRO et al., 2012).
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
1,60
1,80
2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00 6,50
E
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a
(
m
m
)
pH inicial
Espessura (mm)
Figura 18. Espessura da biomembrana e seu respectivo desvio padro em funo
do pH inicial do meio, em meio de ch verde com 50 g/L de sacarose, volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7
dias.
Na Figura 18, observa-se que a curva da espessura da biomembrana, em
funo do pH inicial do meio, uma parbola. A espessura atinge o valor mximo
(1,7 mm), quando o pH inicial do meio 3,5.
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(
g
)
Tempo (dias)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 21. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar
em celulose e da produtividade com os respectivos desvios padres em funo do
tempo, em meio de mamo com 100 g/L de sacarose, concentrao de suco de
laranja: 13% v/v, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v) e
temperatura de cultivo: 28 2C.
Na Figura 21, observa-se que a massa da biomembrana aumenta linearmente
em funo do tempo, atingindo o valor mximo (65 g), em 15 dias de cultivo. Este
valor 3,25 vezes maior que a massa da biomembrana obtida em meio ch de
verde, no mesmo perodo e com a mesma concentrao de sacarose.
Aps 15 dias de cultivo, a massa diminuiu, porque toda a sacarose (100 g/L)
do meio de cultivo foi consumida e a celulose no mais formada. Portanto, para
esta condio estudada, o melhor tempo de cultivo para a massa foi de 15 dias.
Assim como a massa, a produtividade tambm aumenta linearmente com o
tempo e atinge o valor mximo de 7,2 g celulose/dia.L, em 15 dias de cultivo. Aps o
dcimo quinto dia de cultivo, a produtividade diminui de maneira linear. Para a
produtividade, o melhor tempo de cultivo foi 15 dias.
O fator de converso aumenta linearmente com o tempo, atingindo o valor
mximo (0,5 g celulose/g acar) em 15 dias de cultivo. Aps este perodo, o fator
de converso diminui. Para esta condio estudada, o melhor tempo de cultivo para
o fator de converso foi de 15 dias.
Os valores mximos da massa, da produtividade e do fator de converso em
meio de mamo, nestas condies estudadas (concentrao de acar: 100 g/L, pH
72
inicial: 3,5 1, volume de inculo 0,150 L (25% v/v) e concentrao de laranja 13%
v/v), foram aproximadamente 3,2 vezes maiores do que os obtidos em meio de ch
verde (concentrao de acar: 100 g/L, pH inicial: 3,5 e volume de inculo 0,15 L
(25% (v/v)) em 15 dias de cultivo.
Assim como as demais variveis estudadas, a espessura da biomembrana
aumentou com o tempo, atingindo o valor mximo de 5,5 mm, no dcimo quinto dia
de cultivo; aps este perodo, a espessura diminuiu (Figura 22).
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0 5 10 15 20 25
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Tempo (dias)
Espessura (mm)
Figura 22. Variao da espessura da biomembrana em funo do tempo, em meio
de mamo com 100 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L
(25% v/v), concentrao de suco de laranja: 13% v/v e temperatura de cultivo: 28
2C.
O suco de laranja foi adicionado ao meio de mamo, para ajustar o pH inicial
do meio de cultivo e por possuir cido ctrico, que aumenta a produo de celulose.
A Figura 23 mostra a influncia da adio do suco de laranja na obteno de
celulose, em meio de cultivo de mamo.
73
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g
)
Concentrao do suco de laranja (%)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 23. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar
em celulose e da produtividade padres com os respectivos desvios em funo da
concentrao de suco de laranja, em meio de mamo com 100 g/L de sacarose, pH
inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28
2C e tempo de cultivo: 7 dias.
Na Figura 23, observa-se que quanto maior a concentrao de suco de
laranja no meio de mamo, maior a massa, maior a produtividade e maior o
fator de converso, atingindo os valores mximos de 55 g de celulose, 14 g
celulose/dia.L e 1,5 g celulose/g acar, respectivamente. Os valores mximos
destas variveis foram alcanados quando a concentrao do suco de laranja no
meio de mamo foi de 17% v/v. O aumento da produtividade e da massa se deve ao
fato do cido ctrico, presente no suco de laranja, aumentar a produo de celulose
(DANESI, 1998).
Os valores das variveis estudadas se mantiveram constantes, quando a
concentrao de suco de laranja, no meio de mamo, foi maior que 17% v/v.
A espessura da biomembrana aumenta linearmente, com o aumento da
concentrao do suco de laranja no meio de mamo. O valor mximo da espessura
(5,7 mm) foi atingido com a concentrao de suco de laranja no meio de mamo de
17% v/v. Acima desta concentrao, a espessura diminuiu (Figura 24).
74
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Concentrao do suco de laranja (%)
Espessura (mm)
Figura 24. Variao da espessura da biomembrana com os respectivo desvio
padro, em funo da concentrao de suco de laranja em meio de mamo com 100
g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v),
temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
5.4 Meio de cultivo de ch com adio de colgeno
O colgeno foi adicionado ao meio de ch verde, visando melhorar a massa,
a produtividade, o fator de converso e a espessura da biomembrana.
A Figura 25 mostra o aspecto da biomembrana obtida em meio de colgeno
1% p/v, em 10 dias de cultivo.
Tabela 5. Dados dos cultivos realizados em meio de colgeno com os respectivos desvios padres
Tempo
de
cultivo
(dias)
Acar
(g/L)
Inculo
(% v/v)
Ch
verde
(% v/v)
Colgeno
(% p/v)
Dimetro
(cm)
Espessura
(mm
Peso
(g)
Produdtividade
(g celulose/dia.L)
Fator de Converso
(g celulose/ g acar)
pH
inicial
pH
final
Brix
inicial
Brix
final
7 50 25 100 0,5 111 0,960,05 5,50,5 1,310,10 0,1100,020 3,98 3,17 5 4
7 50 25 99 1,0 111 1,390,07 6,31,4 1,490,09 0,1250,017 4,21 3,58 5 5
7 50 25 99 1,2 111 2,960,15 7,91,2 1,880,12 0,1580,015 3,98 3,50 5 5
7 50 25 99 1,5 111 0,620,03 10,91,4 2,600,09 0,2180,011 4,10 3,50 5 5
7 50 25 98 2,5 111 0,340,02 5,40,5 1,290,10 0,1080,005 3,97 3,67 5 5
Os resultados das biomembranas obtidas em meio de ch verde com adio de colgeno esto descritos na Tabela 5.
Os grficos da obteno da biomembrana de celulose, no meio de ch com adio de colgeno, so mostrados abaixo.
76
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
Massa da Biomembrana (g)
Figura 26. Variao da massa da biomembrana com o respectivo desvio padro, em
funo da concentrao de colgeno em meio de ch verde, com 50 g/L de
sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de
cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
O colgeno utilizado nestes experimentos foi proveniente da gelatina sem
sabor, adquirida de um supermercado de So Paulo, So Paulo, Brasil.
Na Figura 26, nota-se que a adio do colgeno no meio de ch verde teve a
tendncia de aumentar a massa da biomembrana, provavelmente devido
incorporao do colgeno na estrutura da biomembrana, fazendo com que o G.
xylinus produzisse uma biomembrana mais robusta. Alm disso, o colgeno, assim
como outros aditivos polimricos (gar, acetato, xantana e CMC), possui a
habilidade de impedir a formao de grandes aglomerados de CB, de aumentar a
viscosidade do meio e de aumentar a produo de CB, durante o processo de
fermentao por submerso, uma vez que uma fonte de protena e serve como
nutriente para o microrganismo produzir a CB.
Comparou-se a obteno de CB por A. xylinum, em meio de ch verde com
adio de diferentes concentraes de colgeno (0,5%, 1%, 1,2%, 1,5% e 2,0%
(p/v)). A quantidade de CB do controle (meio de ch verde) foi de 8 g/L, que 6
vezes maior que a encontrada por Cheng, Catchmark e Demirci (2009). A
quantidade de CB obtida em meio de ch verde com adio de 0,5% (p/v) e 1,0%
(p/v) de colgeno foi muito similar ao controle (7,73 g/L), igual a encontrada por
77
Cheng, Catchmark e Demirci (2009), com 0,5% (p/v) CMC (7,2 g/L), e
aproximadamente, o dobro da relatada por eles, quando utilizaram celulose
microcristalina (0,5% - 4,73 g/L) e gar (0,2% - 4,49 g/L),
A mxima quantidade de celulose bacteriana obtida foi 15 g/L, com a
concentrao de colgeno de 1,5%, que foi 2,3 vezes maior que o controle e o dobro
da relatada por Cheng, Catchmark e Demirci (2009) (8,2 g/L), com a concentrao
tima de CMC. Efeito semelhante foi observado por Bae et al. (2004), quando
adicionaram gar (0,2%, 0,4%, 0,6 e 1%) em meio CSL-FRU (gua de milho com
frutose), para produo de celulose bacteriana por A. xylinum BPR 2001. Eles
relataram aumento de 42% na produo de celulose, quando adicionaram 0,6% de
gar no meio de CSL-FRU.
No houve diferena significante na quantidade de CB obtida no meio de ch
verde com as concentraes de colgeno de 0,5 e 1,0% p/v.
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
Produtividade (g celulose/dia.L )
Figura 27. Variao da produtividade da biomembrana com o respectivo desvio
padro, em funo da concentrao de colgeno, em meio de ch verde, com 50 g/L
de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura
de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
78
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 28. Variao do fator de converso da biomembrana com o respectivo desvio
padro, em funo da concentrao de colgeno, em meio de ch verde, com 50 g/L
de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura
de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
Efeito semelhante observado no fator de converso (Figura 28) e na
produtividade (Figura 27). A maior produtividade (2,7 g celulose/dia.L) e o maior fator
de converso (0,22 g celulose/g acar) foram obtidos quando a concentrao de
colgeno no meio de ch verde foi de 1,5% p/v. Estes valores foram o dobro dos
valores observados no controle. Acima dessa concentrao tanto a produtividade,
quanto o fator de converso, diminuram.
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
Espessura (mm)
Figura 29. Variao da espessura da biomembrana com o respectivo desvio padro,
em funo da concentrao de colgeno em meio de ch, com 50 g/L de sacarose,
pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28
2C e tempo de cultivo: 7 dias.
79
Figura 31. Biomembrana obtida em meio de vinho com 100 g/L de sacarose, pH
inicial: 3,5, concentrao de vinho: 33% v/v, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v),
temperatura de cultivo: 28 2C e 15 dias de cultivo.(Autor: Denise Vieira, Ano:
2012)
Abaixo, so apresentados os grficos da obteno da biomembrana no meio
de vinho. Os dados da obteno de celulose no meio de vinho tambm esto
descritos na Tabela 6.
81
Tabela 6. Dados dos cultivos realizado em meio de vinho com os respectivos desvios padres
Tempo
de
cultivo
(dias)
Acar
(g/L)
Inculo
(% v/v)
Ch
verde
(% v/v)
Vinho
(% v/v)
Agua
(% v/v)
Dimetro
(cm)
Espessura
(mm)
Peso
(g)
Produtividade
(g celulose/dia.L)
Fator de
Converso
(g celulose/
g acar)
pH
inicial
pH
final
Brix
inicial
Brix
final
7 50 33 33 33 33 111 0,430,08 4,00,8 0,940,11 0,0790,016 3,22 3,25 5 4
7 100 25 33 33 33 111 0,550,02 4,60,1 1,100,02 0,0460,001 3,15 3,40 11 7
7 50 25 39 22 39 51 1,60,11 7,20,5 1,710,12 0,1440,010 3,57 3,21 6 4
7 50 25 42 17 41 51 0,970,07 6,80,5 1,620,11 0,1360,010 3,60 3,10 6 4
10 50 25 27 40 33 111 1,650,12 20,20,6 3,370,08 0,4040,008 3,38 2,48 8 8
20 100 33 34 33 33 111 6,10,54 52,04,2 4,330,21 0,5200,042 3,51 2,98 8 7
25 100 33 34 33 33 111 5,90,20 47,03,4 3,130,13 0,4200,034 3,27 2,71 8 7
30 100 25 34 33 33 111 5,670,15 41,00,9 2,280,03 0,1100,009 3,37 2,46 8 8
10 50 25 36 19 45 111 3,810,08 55,62,4 9,260,23 1,1110,040 3,30 2,62 6,0 5,0
10 50 25 34 24 43 111 1,250,06 7,20,4 1,200,06 0,1440,007 3,37 2,56 7 7
10 50 25 30 33 38 111 1,560,08 6,40,3 1,070,05 0,1280,006 3,40 2,51 8 8
10 50 25 28 37 35 111 0,900,05 4,90,2 0,820,04 0,0980,005 3,35 2,62 8 8
10 50 25 24 46 30 111 0,970,05 5,40,3 0,900,05 0,1080,005 3,39 2,67 9 9
15 50 25 34 33 33 111 6,380,32 47,62,4 5,290,26 0,9520,048 3,74 3,31 7 4
10 83 25 34 33 33 111 2,690,13 17,30,9 2,880,14 0,2080,010 3,57 3,21 9 7
7 100 33 34 33 33 111 1,800,19 16,40,2 3,890,03 0,1640,002 3,54 3,14 7 4
7 50 25 34 33 33 111 1,650,12 20,20,6 4,810,08 0,4040,008 3,12 2,97 5 4
10 100 25 34 33 33 111 2,680,94 30,63,2 5,100,32 0,3060,028 3,31 3,23 9 5
15 100 25 34 33 33 111 5,370,39
42,91,4
4,760,50 0,4290,020 3,48 3,15 9 5
7 50 25 29 42 29 111 1,650,15 18,20,7 4,340,10 0,1650,010 3,36 3,31 5 4
10 50 25 25 50 25 111 1,340,07 6,00,3 1,000,05 0,1200,006 3,39 2,90 10 10
82
0
1
2
3
4
5
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20
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40
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0 5 10 15 20 25 30
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Tempo (dias)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
0
1
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5
6
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0 5 10 15 20 25 30
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r
a
(
m
m
)
Tempo (dias)
Espessura (mm)
Figura 33. Variao da espessura da biomembrana e seu respectivo desvio padro
em funo do tempo, em meio de vinho com 100 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1,
concentrao de vinho 33% v/v, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v) e temperatura
de cultivo: 28 2C.
Conforme observado na Figura 33, a espessura aumenta linearmente com o
tempo, atingindo o valor mximo de 6 mm, em 20 dias de cultivo. Aps este perodo,
h diminuio da espessura.
0
1
2
3
4
5
6
0
5
10
15
20
25
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
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(
g
)
Concentrao de vinho (%)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 34. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar
em celulose e da produtividade com os respetivos desvios padres em funo da
concentrao de vinho, em meio de vinho, concentrao de acar: 50 g/L, pH
inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/) e tempo de cultivo: 7 dias
84
Na Figura 34, observa-se que a melhor concentrao de vinho 33 % v/v
para os 3 parmetros avaliados: massa da biomembrana (20 g), fator de converso
de acar em celulose (0,5 g celulose/g acar) e produtividade (4,7 g
celulose/dia.L). Uma vez que, acima desta concentrao, o teor alcolico pode inibir
o crescimento dos microrganismos. A concentrao de cido actico presente no
meio de vinho (concentrao de vinho: 33% v/v) aumenta a produo de celulose
(DANESI, 1998).
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
2,0
0 10 20 30 40
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Concentrao de vinho (%)
Espessura (mm)
Figura 35. Variao da espessura da biomembrana com o respectivo desvio padro,
em meio de vinho com 50 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo:
0,150 L (25% v/v) temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
A espessura da biomembrana (Figura 35), obtida em meio de vinho, tambm
aumenta a concentrao de vinho. A maior espessura (1,65 mm) obtida com a
concentrao de vinho de 33% v/v. Acima dessa concentrao, a espessura se
manteve constante.
5.7 Meio de cultivo de laranja (Citrus sinensis)
O meio de laranja foi usado para obter a biomembrana de celulose, por ser
um meio nutricionalmente rico, possuir pH adequado (3,5 - 4,0), alm de conter
cido ctrico, que em concentrao adequada, aumenta a produo de celulose
(DANESI, 1998).
85
Figura 36. Biomembrana obtida em meio de laranja com 100 g/L de sacarose, pH
inicial: 3,5, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28 2C e
10 dias de cultivo.(Autor: Denise Vieira, Ano: 2012).
Abaixo, so apresentados os grficos da obteno da biomembrana, no meio
de laranja. Os dados da obteno de celulose, no meio de laranja, tambm esto
descritos na Tabela 7.
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
12,00
14,00
16,00
18,00
0 5 10 15 20 25 30
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(
g
)
Tempo (dias)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 37. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar
em celulose e da produtividade com os respectivos desvios padres em funo do
tempo, em meio de laranja com 100 g/L de celulose, pH inicial: 3,5 1, concentrao
de suco de laranja: 15% v/v, volume de inculo: 0,150 L ( 25% v/v) e temperatura de
cultivo: 28 2C.
86
Tabela 7. Dados dos cultivos realizados em meio de laranja com os respectivos desvios padres
Tempo de
cultivo
(dias)
Acar
(g/L)
Inculo
(% v/v)
Ch
verde
(% v/v)
Suco de
Laranja
(% v/v)
Dimetro
(cm)
Espessura
(mm)
Peso
(g)
Produdtividade
(g celulose/dia.L)
Fator de
Converso
(g celulose/
g acar)
pH
inicial
pH
final
Brix
inicial
Brix
final
10 50 25 92 8 111 0,730,03 7,80,1 1,300,01 0,1560,003 3,90 4,30 6 8
7 100 25 92 8 111 1,340,25 12,70,8 3,020,08 0,0770,008 3,91 3,98 10 14
10 50 25 85 15 111 0,640,46 8,30,6 1,380,06 0,1650,013 3,97 4,35 6 8
10 100 25 85 15 111 0,490,14 6,93,5 1,150,35 0,0690,035 4,06 4,19 10 15
10 100 25 85 15 111 0,580,04 12,20,8 2,030,08 0,2440,016 3,89 3,35 6 5
10 50 25 85 15 111 0,320,02 8,20,4 1,370,07 0,1640,008 3,91 3,41 7 6
10 100 25 85 15 111 0,170,06 3,41,2 0,560,12 0,0340,012 3,92 4,15 8 8
10 50 25 85 15 111 0,230,01 2,50,1 0,420,02 0,0500,003 3,94 4,00 11 3
10 50 25 85 15 111 0,330,02 7,40,4 1,230,06 0,1480,007 3,81 3,91 7 10
10 100 25 85 15 111 0,630,03 5,20,3 0,870,04 0,0520,003 3,87 3,89 8 8
7 100 25 85 15 81 0,210,01 9,90,5 2,360,07 0,1000,005 3,73 3,20 7 5
15 65 13 90 10 111 5,760,29 56,72,8 6,300,32 0,8790,044 3,75 3,50 7 5
26 69 21 90 10 111 1,790,09 23,11,2 1,480,07 0,3350,017 4,13 3,70 7 4
7 100 25 85 15 61 2,050,36 24,13,6 5,740,57 0,2410,176 3,87 4,00 7 3
7 100 25 90 10 111 1,780,12 20,51,4 4,880,21 0,2050,014 4,29 3,80 7 5
26 100 25 85 15 71 1,840,50 12,80,9 0,820,04 0,2300,041 3,35 2,92 6 5
7 100 25 85 15 81 2,730,25 16,80,7 4,000,10 0,1680,105 4,05 3,85 6 3
15 100 25 85 15 81 3,520,31 15,50,1 1,720,04 0,1760,001 3,97 3,57 7 5
7 100 25 80 20 111 0,640,03 8,60,4 2,050,10 0,0860,004 3,62 2,63 5 3
7 100 25 75 25 111 0,750,04 17,10,9 4,070,20 0,1710,009 3,68 2,61 5 3
7 50 25 75 25 51 0,520,03 3,40,2 0,810,04 0,0680,003 3,53 3,23 5 2
7 100 25 75 25 111 1,440,12 6,00,4 1,430,06 0,0600,004 4,62 4,10 18 12
10 100 25 85 15 111 0,710,04 7,60,4 1,270,06 0,0760,004 3,76 3,75 9 10
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)
Concentrao de suco de laranja (%)
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
Figura 39. Variao da massa da biomembrana, do fator de converso de acar
em celulose e da produtividade com os respectivos desvios padres em funo da
concentrao de suco de laranja, em meio de laranja com 50 g/L de sacarose, pH
inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28
2C e tempo de cultivo: 7 dias.
Na Figura 39, observa-se que a melhor concentrao de suco de laranja
15% v/v para os 3 parmetros: massa da biomembrana (25 g), fator de converso de
acar em celulose (0,3 g celulose/g acar) e da produtividade (6,0 g
celulose/dia.L). Acima desta concentrao, o cido ctrico inibe o crescimento celular
e, consequentemente, inibe a formao de celulose (DANESI, 1998).
0
0,5
1
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3
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)
Concentrao de suco de laranja (%)
Espessura (mm)
Figura 40. Variao da espessura da biomembrana com o respectivo desvio padro
em funo da concentrao de suco de laranja, em meio de laranja com 50 g/L de
sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), temperatura de
cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 7 dias.
89
Com a concentrao de suco de laranja de 15% v/v, obteve-se a maior
espessura (2 mm). Isto demonstra que a concentrao tima de suco de laranja no
meio de laranja, para obteno de celulose, nestas condies estudadas, de 15%
v/v (Figura 40).
5.8 Meio de cultivo de beterraba
O meio de beterraba foi utilizado para produzir a biomembrana de celulose,
pelo fato da beterraba possuir alta concentrao de sacarose, sendo uma fonte
alternativa de carboidrato. A utilizao de suco de beterraba tambm permite a
reduo do custo na obteno de celulose, porque possibilita o uso da beterraba
descartada
A Figura 41 mostra o aspecto da biomembrana obtida em meio de beterraba,
em 15 dias de cultivo.
(
g
)
Tempo(dias)
[acardebeterraba]=9g/L
[acardebeterraba]=18g/L
Figura 42. Variao da massa da biomembrana com o respectivo desvio padro em
funo do tempo, em meio de beterraba com concentrao de suco de beterraba
equivalente a 9 g/L e 18 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo:
0,150 L (25% v/v) e temperatura de cultivo: 28 2C.
Na Figura 42, observa-se que o maior valor de massa da biomembrana obtida
em meio de beterraba (com concentrao de suco de beterraba equivalente a 9 g/L
de sacarose), foi de 11 g de celulose, em 10 dias de cultivo, que cerca de 60%
maior que a massa da biomembrana obtida em meio de ch verde, com
concentrao de sacarose de 9 g/L.
A massa da biomembrana obtida em meio de beterraba, com concentrao
de suco de beterraba equivalente a 9 g/L de sacarose, aumenta linearmente com o
tempo, atingindo o valor mximo de 11 g, no dcimo dia de cultivo.
No stimo dia de cultivo, a massa da biomembrana obtida em meio de
beterraba (com concentrao de suco de beterraba equivalente a 9 g/L de sacarose)
2,6 vezes maior que a massa da biomembrana obtida no meio de ch verde com
concentrao de sacarose de 9 g/L.
Observou-se tambm que, aps atingirem o valor mximo, as massas das
biomembranas, obtidas no meio ch verde, e no meio de beterraba diminuem.
92
A maior massa da biomembrana obtida em meio de ch verde com 18 g/L de
sacarose foi de 16,4 g de celulose, em 18 dias de cultivo. Este valor cerca de 30%
maior do que a massa da biomembrana obtida em meio de beterraba (concentrao
de suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose), no mesmo tempo de
cultivo, e muito semelhante ao valor mximo da massa obtida no meio de ch verde,
com 9 g/L de sacarose, e no meio de beterraba com concentrao de acar
equivalente a 18g/L de sacarose.
Em meio de beterraba (concentrao de suco de beterraba equivalente a 18
g/L de sacarose), a maior massa (15,30 g), em 10 dias de cultivo, equivale a 3 vezes
a massa da obtida em meio de ch verde (18 g/L de sacarose), no mesmo perodo
(10 dias). Aps o stimo dia de cultivo, a massa obtida no meio de beterraba
(concentrao de suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose) 63% maior
que a massa obtida no meio de beterraba, (concentrao de suco de beterraba
equivalente a 9 g/L de sacarose). O valor mximo da massa obtida no meio de
beterraba (concentrao de suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose),
no meio de ch verde, (9 g/L de sacarose), e no meio de ch verde (18 g/L de
sacarose), foi de 15,5 g de celulose em 10, 15 e 18 dia cultivo, respectivamente.
Isto torna vivel a substituio da sacarose (acar cristal), pela sacarose
proveniente do suco de beterraba.
Tanto a adio de 15% v/v, quanto de 8% v/v de suco de beterraba no meio
de ch verde aumentou em 5 vezes a produtividade e a massa da biomembrana, em
relao ao acar cristal.
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0,5
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)
Tempo(dias)
[acardebeterraba]=9g/L
[acardebeterraba]=18g/L
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)
Tempo(dias)
[acardebeterraba]=9g/L
[acardebeterraba]=18g/L
Figura 44. Fator de converso com o respectivo desvio padro em funo do tempo,
em meio de beterraba com concentrao de suco de beterraba equivalente a 9 g/L e
18 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v) e
temperatura de cultivo: 28 2C.
94
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
0 5 10 15 20
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(
m
m
)
Tempo(dias)
[acardebeterraba]=9g/L
[acardebeterraba]=18g/L
Figura 45. Espessura da biomembrana com o respectivo desvio padro em funo
do tempo, em meio de beterraba com concentrao de suco de beterraba
equivalente a 9 g/L e 18 g/L de sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo:
0,150 L (25% v/v) e temperatura de cultivo: 28 2C.
Na Figura 45, observa-se que a espessura mxima da biomembrana obtida
em meio de beterraba, com concentrao de suco de beterraba equivalente a 9 g/L
de sacarose, foi de 1,7 mm, em 12 dias de cultivo. Este valor muito semelhante
espessura mxima (1,5 mm) obtida em meio de beterraba, com concentrao de
suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose, em 10 dias de cultivo.
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0,5
1
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2
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3
0
2
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12
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0 10 20 30 40 50 60 70 80
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g
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Concentrao de sacarose (g/L))
Massa (g)
Produtividade (g celulose/dia.L)
Fator de converso (g celulose/g acar)
A maior produtividade (2,5 g celulose/dia) e a maior massa (15 g) foram
obtidas no meio de beterraba, com concentrao de suco de beterraba equivalente a
18 g/L de sacarose. O maior fator de converso (1,2 g celulose/g acar) foi obtido
em meio de beterraba, com concentrao de suco de beterraba equivalente a 9 g/L
de sacarose (Figura 46).
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
0 20 40 60 80
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m
)
Concentrao de sacarose (g/L)
Espessura (mm)
Figura 47. Variao da espessura da biomembrana em funo da concentrao de
suco beterraba equivalente sacarose, pH inicial: 3,5 1, volume de inculo:0,150
L (25% v/v), temperatura de cultivo: 28 2C e tempo de cultivo: 10 dias.
Na Figura 47, observa-se que a maior espessura (1,5 mm) foi obtida quando a
concentrao do suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose. Acima desta
concentrao, a espessura diminui.
5.9 Massa da biomembrana, espessura, produtividade e fator de converso
na biomembrana de celulose obtida nos diferentes meios de cultivo
Os dados referentes aos cultivos realizados so apresentados nas Tabelas 2,
3, 4, 5, 6 7 e 8. Abaixo, so discutidos e comparados os dados da massa da
biomembrana (g celulose), da espessura (mm), da produtividade (g celulose/dia) e
do fator de converso (g celulose/g acar), nos diferentes meios de cultivo, nas
96
seguintes condies: pH inicial: 3,5 0,6, volume de inculo: 0,150 L (25% v/v) e
tempo de cultivo: 7 dias.
A espessura, assim como a obteno de celulose, aumenta depois de um
perodo de induo de 3 a 5 dias, porque aps este perodo que o G. xylinus
produz a celulose em forma de pelcula, alm disso, o G. xylinus e o S. cerevisiae
formam uma cultura simbitica que favorece a produo de celulose aps esse
perodo. Esta taxa tende a diminuir aps 15 - 20 dias (IGUCHI, YAMANAKA e
BUDHIONO, 2000).
O sistema se torna turvo e depois de um perodo de 3 a 4 dias, uma pelcula
se forma na superfcie. Durante o processo de formao da pelcula, a bactria
aerbica gera celulose nas reas prximas superfcie. A pelcula se mantm
suspensa parede interior do frasco, por coeso, enquanto o sistema for mantido
imvel. Nesta condio, a espessura da biomembrana tende a aumentar
continuamente at que toda a sacarose seja consumida ou, at que o frasco de
fermentao seja agitado, e uma nova pelcula comece a se formar, na superfcie do
meio de cultivo (IGUCHI, YAMANAKA e BUDHIONO, 2000).
A espessura mxima atingida nessas condies estudas (pH inicial: 3,5 0,6,
volume de inculo: 0,150 L (25% v/v) e tempo de cultivo: 7 dias) foi de 6,38 mm, em
15 dias de cultivo, em meio de cultivo de vinho (concentrao de vinho: 33% v/v,
concentrao de ch verde: 34% v/v, concentrao de sacarose: 50 g/L, volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v e temperatura de cultivo: 28 2C). Observa-se que, no
meio de mamo (suco de mamo: 50% v/v e suco de laranja: 19% v/v) e no meio de
colgeno (concentrao de colgeno: 1,2% p/v), a espessura foi, respectivamente,
3,5 vezes e 1,77 vezes maior que no meio de ch.
A espessura da biomembrana obtida em meio de ch verde e em meio de
vinho (concentrao de vinho: 33% v/v) foram praticamente iguais.
A espessura da biomembrana obtida em ch verde foi 3,2, vezes maior que
no meio de laranja (suco de laranja: 19% v/v); 1,70 vezes maior que no meio
colgeno 0,5% p/v; 1,20 vezes maior que no meio de colgeno 1,0 % p/v; 2,7 vezes
maior o meio de colgeno 1,5% p/v; 4,9 vezes maior que o meio de colgeno 2,5%
p/v; 1,20 vezes maior que no meio de beterraba (concentrao de suco de beterraba
equivalente a 9 g/L de sacarose); e 6,4 vezes maior que o meio de beterraba
(concentrao de suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose),
97
meio ch verde, respectivamente. Isto indica que, nestes meios, h substncias que
aumentam a formao da celulose bacteriana (DANESI, 1998).
Considerando todas as condies estudadas:
- A maior produtividade foi de 13,71 g de celulose/dia.L no meio de
mamo (pH inicial: 4,11, concentrao de acar: 50 g/L, volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v), concentrao de suco de laranja: 19% v/v,
concentrao suco de mamo: 50% v/v) em 7 dias de cultivo.
- A maior massa (78 g de celulose) tambm foi alcanada no meio de
mamo (pH inicial de 4,48, concentrao de acar de 50 g/L, volume
de inculo de 0,150 L (25% v/v), concentrao de suco de laranja de
17% v/v, concentrao de suco de mamo de 50% v/v) em 15 dias de
cultivo.
- O maior fator de converso (2,36 g celulose/g de acar), foi obtido em
meio de ch verde (pH inicial de 3,62, concentrao de acar de 25
g/L, volume de inculo de 0,150 L (25% v/v)), em 25 dias de cultivo.
5.10 Capacidade de Absoro de gua (CAA), Calndula (CAC) e Capacidade
de Transferncia (CT)
A seguir, so apresentados os dados sobre a CAA (%), a CAC (%) e a
Capacidade de Transferncia da biomembrana de celulose obtida nos diferentes
meios de cultivo.
Tabela 9. Capacidade de Absoro de gua (CAA), Calndula (CAC) e de
Transferncia (CT) de calndula da biomembrana de celulose obtida nos diferentes
meios de cultivo
Biomembrana
CAA
(%)
CAC
(%)
CT
(%)
Beterraba 73,08,0 2.367,547,0 27,03,0
Manitol 122,515,0 75,3 5,0 25,02,0
Colgeno 1,2% p/v 1.191,213,0 1502,7 5,0 26,03,0
Vinho 227,320,0 250,4 25,0 28,04,0
Ch verde 529,04,0 667,3 90,0 24,03,0
Laranja 1.125,4115,0 769,2116,0 29,04,0
Mamo 2.144,0217,0 1.217,5 29,0 26,033,0
100
As condies de obteno da biomembrana para este teste foram:
- Volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), tempo de cultivo: 7 dias e pH
inicial: 3,5:
- Meio de cultivo de beterraba (suco de beterraba: equivalente a 18 g/L
de acar),
- Meio de cultivo de manitol (extrato de levedura (5g/L), peptona (3,0
g/L), manitol (25 g/L), gar (15 g/L),
- Meio de cultivo de colgeno (colgeno: 1,2% p/v e concentrao de
acar: 50 g/L),
- Meio de cultivo de vinho (vinho: 33% v/v, gua destilada: 33% v/v, ch
verde: 34% v/v e concentrao de acar: 50 g/L ),
- Meio de cultivo de ch verde (concentrao de acar: 50 g/L),
- Meio de cultivo de laranja (concentrao de suco de laranja: 25% v/v,
concentrao de ch verde: 75% v/v e concentrao de acar: 50 g/L)
- Meio de cultivo de mamo (suco de mamo: 50% v/v, suco de laranja:
19% v/v, ch verde: 31% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
O efeito da composio do meio de cultivo, na capacidade de absoro de
gua (CAA), pode ser constatado na Tabela 9.
A biomembrana obtida em meio de mamo apresentou a maior CAA
(2.144,0%), que aproximadamente 4 vezes maior que a CAA da biomembrana
obtida em meio de ch verde (529,0%).
A suplementao do meio de ch verde com laranja aumentou a CAA de
529% para 1.125 % (596%), dobrando a CAA da biomembrana obtida em meio de
ch verde.
A substituio de acar cristal por suco de beterraba reduziu a CAA de 529%
para 73% (456%), ou seja, a biomembrana obtida em meio de beterraba
aproximadamente 7 vezes menor que a CAA no meio de ch verde, isso ocorre
devido os nutrientes presentes no suco de beterraba.
A CAA da biomembrana obtida em meio de manitol e em meio de vinho foram
122% e 227%, respectivamente, e so aproximadamente 4,30 e 2,31 vezes menores
que a CAA da biomembrana obtida em meio de ch verde, respectivamente.
A adio de 1,2% p/v de colgeno ao meio de cultivo de ch verde aumentou
o CAA da biomembrana de 529% para 1.191% (2,25 vezes), isso porque a
101
Frmula 9
Frmula 10
Sendo: A rea da seco transversal da amostra no orifcio cilndrico do dispositivo
que a segura.
A Tabela 10 mostra os valores de fora mxima, distncia, rea e mdulo de
elasticidade puno das amostras testadas e seus respectivos desvios padro.
Tabela 10. Fora mxima, distncia, rea e mdulo de elasticidade puno da
biomembrana obtida nos diferentes meios de cultivo
Biomembranas
Fora
(N)
Distncia
(mm)
rea
(mm2)
Mdulo de
elasticidade
puno
(mPa)
Laranja 1,02 0,10 9,93 0,99 46,73 4,70 0,11 0,01
Calndula 0,20 0,02 7,22 0,75 3,06 0,32 0,03 0,01
Mamo 0,98 0,12 9,15 0,93 6,88 0,71 0,10 0,01
Liofilizada 1,75 0,25 7,91 0,82 9,98 0,95 0,55 0,05
Reidratada* 2,04 0,23 9,80 0,95 16,26 1,72 0,09 0,01
Ch verde 0,30 0,03 5,30 0,53 1,69 0,17 0,12 0,01
Vinho 0,88 0,09 2,81 0,31 2,74 0,30 0,17 0,02
*Biomembrana foi rehidratada com gua por 48 horas em estufa a 35C
As condies de obteno da biomembrana para este teste foram:
- Volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), tempo de cultivo: 7 dias e pH
inicial: 3,5:
- Meio de cultivo de beterraba (suco de beterraba: equivalente a 18 g/L
de acar).
- Meio de cultivo de manitol (extrato de levedura (5g/L), peptona (3,0
g/L), manitol (25 g/L), gar (15 g/L).
- Meio de cultivo de vinho (vinho: 33% v/v, gua destilada: 33% v/v, ch
verde: 34% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de ch verde (concentrao de acar: 50 g/L).
104
- Meio de cultivo de laranja (concentrao de suco de laranja: 25% v/v,
concentrao de ch verde: 75% v/v e concentrao de acar: 50
g/L).
- Meio de cultivo de mamo (suco de mamo: 50% v/v, suco de laranja:
19% v/v, concentrao de ch verde: 31% v/v e concentrao de
acar: 50 g/L).
- Biomembrana com calndula (biomembrana obtida em meio de ch
verde liofilizada e com 3 mL de extrato hidroalcolico de calndula).
Embora a celulose bacteriana seja um gel altamente higroscpico, a sua
textura nica e diferente dos hidrogis tpicos, sendo que a elasticidade original
no se recupera se a estrutura do gel for danificada. Esta caracterstica se deve ao
fato do gel ser constitudo por microfibrilas e no por segmentos de cadeia
molecular, como nos gis de gar ou gelatina, que podem assumir forma
termodinamicamente estvel. O mdulo de elasticidade inversamente proporcional
elasticidade.
Na Tabela 10, verifica-se que a flexibilidade da biomembrana reidratada e da
biomembrana com adio de calndula (0,03 Mpa) maior que a das demais. Por
outro lado, a biomembrana liofilizada mostrou-se mais rgida (0,55 MPa) do que as
demais biomembranas. Portanto, a adio do extrato hidroalcolico da calndula
biomembrana liofilizada aumentou a flexibilidade de 0,55 mPa para 0,03 mPa. Isto
indica que a interao entre o extrato hidroalcolico de calndula e as fibras de
celulose foi positiva para a flexibilidade da biomembrana. A adio de vinho ao meio
de cultivo de ch verde aumentou o mdulo de elasticidade puno de 0,09 para
0,27 mPa. Isto significa que a biomembrana obtida em meio de vinho menos
flexvel que a biomembrana obtida em ch verde. A suplementao de laranja
tambm aumentou o mdulo de elasticidade puno de 0,09 para 0,11 mPa. A
biomembrana de laranja mais flexvel que a de vinho e 20% menos flexvel que a
de ch verde. O mdulo de elasticidade puno da biomembrana obtida em meio
de laranja, em meio de ch verde e em meio de mamo foi similar. A biomembrana
mais flexvel foi aquela obtida em meio de ch verde, qual foi incorporada extrato
hidroalcolico de calndula. Dados similares foram descritos por Saibuatong et al.
(2010), para a obteno de celulose bacteriana com aloe vera.
105
As Figuras 49, 50, 51, 52, 54, 55 mostram as fotos da microscopia eletrnica
de varredura das biomembranas obtidas em diferentes meios de cultivos.
Figura 49. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
colgeno (concentrao de colgeno: 1,2% p/v e concentrao de sacarose: 50 g/L),
aumento 20.000 X (A) e aumento 5.000 X (B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
A
Fibrade
celulose
Colgeno
B
Fibrade
celulose
Colgeno
108
Figura 50. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
beterraba (concentrao de suco de beterraba: equivalente a 18 g/L de acar),
aumento 30.000 X (A) e (B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
Figura 51. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
mamo (concentrao de suco de mamo: 50% v/v, concentrao de suco de
laranja: 19% v/v, concentrao de ch verde: 31% v/v e concentrao de sacarose:
50 g/L), aumento 30.000 X (A) e (B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
A
Fibrade
celulose
B
Fibrade
celulose
Gluconacetobacter
xylinus
Fibrade
celulose
A B
Fibrade
celulose
109
Figura 52. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
vinho (concentrao de vinho: 33% v/v, gua destilada: 33% v/v, concentrao de
ch verde: 34% v/v e concentrao de sacarose: 50 g/L ), aumento 1.000 X (A) e
aumento 5.000 X(B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
Figura 53. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
ch verde (concentrao de sacarose: 50 g/L), aumento 30.000 X (A) e aumento
10.000 X(B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
A
Camadade
celulose
B
Camadade
celulose
A
Fibrade
celulose
Camadade
celulose
B
110
Figura 54. Microscopia eletrnica de varredura da biomembrana obtida em meio de
laranja (concentrao de suco de laranja: 25% v/v, concentrao de ch verde 75%
v/v e concentrao de sacarose: 50 g/L), aumento 30.000 X (A) e aumento 10.000 X
(B). (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
As fotos de microscopia eletrnica da biomembrana obtida nos diferentes
meios de cultura mostram que, morfologicamente, a biomembrana constituda por
finas camadas de fibras de celulose, independentemente da regio analisada. A
microscopia da biomembrana obtida em meio de ch verde (Figura 53) mostra a
estrutura das fibras e a homogeneidade da biomembrana. Esta estrutura similar a
estrutura da membrana de celulose bacteriana com aloe vera obtida por Saibuatong
et al. (2010). A estrutura da biomembrana obtida em todos os meios de cultivos foi
semelhante. Dados similares foram reportados por Ruka et al. (2012).
A estrutura das biomembranas semelhante estrutura da polpa de papel. As
pontes de hidrognio entre as fibrilas so responsveis pela resistncia da
biomembrana, no caso da celulose bacteriana, a densidade das pontes de
hidrognio interfibrilas muito maior e o dimetro das fibrilas muito menor do que
os das fibras de papel (YAMANAKA e BUDHIONO, 2000).
A estrutura das fibras de CB consiste em uma rede tridimensional no
reticulada, compartilhando estrutura qumica semelhante celulose vegetal, cuja
interao entre as pontes de hidrognio inter e intrafibrilar resulta em um hidrogel
com elevada fora (FU, ZHANG e Yang, 2013).
K L
G.xylinus
Fibrasde
celulose
Fibrasde
celulose
111
84
86
88
90
92
94
96
98
100
102
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
ComprimentodeOnda() ( cm
1
)
T
r
a
n
s
m
i
t
n
c
i
a
Vi nho
Mani tol
Cal endul a
Laranja
Chverde
Beterraba
Mamo
Figura 55. Espectroscopia (FTIR) da biomembrana obtida nos diferentes meios de
cultivo.
112
As condies de obteno da biomembrana para este teste foram:
- Volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), tempo de cultivo: 7 dias e pH
inicial: 3,5:
- Meio de cultivo de beterraba (suco de beterraba: equivalente a 18 g/L
de acar).
- Meio de cultivo de manitol (extrato de levedura (5g/L), peptona (3,0
g/L), manitol (25 g/L), gar (15 g/L).
- Meio de cultivo de vinho (vinho: 33% v/v, gua destilada: 33% v/v, ch
verde: 34% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de ch verde (concentrao de acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de laranja (concentrao de suco de laranja: 0, 150 L
(25% v/v), concentrao de ch verde 75% v/v e concentrao de
acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de mamo (concentrao de suco de mamo: 50% v/v,
concentrao de suco de laranja: 19% v/v, concentrao de ch verde:
31% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
- Biomembrana com calndula (biomembrana obtida em meio de ch
verde liofilizada e com 3 mL de extrato hidroalcolico de calndula).
A FTIR da biomembrana de celulose obtida nos diferentes meios de cultivo foi
feita para se determinar a ocorrncia de novos picos ou a alterao de qualquer pico
que pudesse ser atribuda interao entre os componentes do meio de cultivo e a
celulose (Figura 55). O espectro de absoro da celulose a banda 1.642,9 cm
-1
,
que tem sido designada para o grupo carbonila, e a banda 1.090 cm
-1
, que designa a
ligao entre os grupos C-O.
Os espectros FTIR de todas as amostras foram conduzidos na faixa de
comprimento de onda de 400 a 4.000 cm
-1
e esto descritos na Figura 55. Na regio
de 1.800 a 1.500 cm
-1
, a absoro da celulose ocorreu na banda de 1.642,9 cm
-1
(grupo carbonila) (KLEMM et al., 2006). A banda 1.650 1.578 cm
-1
, que
caracteriza
a ligao C-O, se sobrepe com a ligao N-H. A absoro na banda 1.565 1.540
cm
-1
foi ocasionada pela deformao NH. Todas as biomembranas tiveram espectro
FTIR semelhante. Os espectros FTIR demonstram que as biomembranas so
compostas por celulose e que no houve interao entre os componentes do meio
113
5.14 Porosidade
d
o
p
o
r
o
(
c
c
1
)
Dimetrodoporo(Angstrons)
Figura 56. Volume do poro em funo do dimetro dos poros da biomembrana
obtida em meio de ch verde (anlise BET)
A rea de superfcie total e a mdia do tamanho dos poros da biomembrana
obtidas em meio de ch verde liofilizado foram 2,07 m
2
/g e 158,2 Angstrons,
respectivamente (determinada por BET). A Figura 56 mostra que a curva do volume
114
do poro pelo tamanho do poro uma parbola, com ponto de mximo em 148
Angstrons (dimetro do poro) e volume de poro de 0,08 cc/g. O tamanho do poro da
biomembrana obtida em meio de ch verde 33% menor que o tamanho do poro
(224 Angstrons) da membrana de celulose seca desenvolvida por SAIBUATONG et
al., 2010 e, semelhante ao da membrana de celulose reidratada com 10% de aloe
vera (154 Angstrons) obtida por Saibuatong et al. (2010). A rea da superfcie total
da biomembrana de ch verde (2,07 m
2
/g) cerca de 6 vezes menor, que a rea da
superfcie total (12,6 m
2
/g) da membrana de celulose seca, desenvolvida por
Saibuatong et al. (2010).
Tabela 13. Mdia do tamanho dos poros das biomembranas obtidas em diferentes
meios de cultivo
Biomembrana
Mdia dos
poros (nm)
Desvio
Padro
Beterraba 517,9 71,2
Colgeno 425,4 80,4
Mamo 315,1 66,0
Laranja 1123,8 9,2
Ch 1582,0 16,2
As condies de obteno da biomembrana para este teste foram:
- Volume de inculo: 0,150 L (25% v/v), tempo de cultivo: 7 dias e pH
inicial: 3,5;
- Meio de cultivo de beterraba (suco de beterraba: equivalente a 18 g/L
de acar).
- Meio de cultivo de colgeno (concentrao de colgeno: 1,2% p/v e
concentrao de acar: 50 g/L)
- Meio de cultivo de ch verde (concentrao de acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de laranja (concentrao de suco de laranja: 25% v/v,
concentrao de ch verde 75% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
- Meio de cultivo de mamo (concentrao de suco de mamo: 50% v/v,
concentrao de suco de laranja: 19% v/v, concentrao de ch verde:
31% v/v e concentrao de acar: 50 g/L).
115
Figura 57 A. Microscopia eletrnica da Figura 57 B. Microscopia eletrnica
da biomembrana de beterraba, aumento da biomembrana ch verde, 30.000X
30.000 X (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012) (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
Figura 57 C. Microscopia eletrnica da Figura 57 D. Microscopia eletrnica
da biomembrana de colgeno, aumento da biomembrana de laranja, 10.000X
20.000 X (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012) (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
116
Figura 57 E. Microscopia eletrnica da Figura 57 F. Microscopia eletrnica
da biomembrana de mamo, aumento da biomembrana de vinho, 1.000X
30.000 X (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012) (Autor: Denise Vieira, Ano: 2012)
A mdia do tamanho dos poros da biomembrana obtida em meio de ch verde (1582
nm) e a mdia do tamanho dos poros da biomembrana obtida em meio de laranja
(1123 nm) so semelhantes. A mdia do tamanho dos poros das biomembranas
obtidas nos meios de laranja e ch verde maior que a mdia do tamanho dos
poros daquelas produzidas nos demais meios (beterraba, colgeno e mamo). A
biomembrana obtida em meio de beterraba apresenta mdia de tamanho de poros
(517,9 nm), que metade da mdia do tamanho dos poros da daquela obtida em
meio de ch verde e, aproximadamente 21% maior do que a mdia do tamanho dos
poros da biomembrana obtida em meio de colgeno (425,4 nm). A biomembrana
obtida em meio de mamo apresenta a menor mdia do tamanho de poros (315
nm), sendo 5 vezes menor que a mdia do tamanho dos poros da obtida em meio de
ch verde. A biomembrana obtida em meio de vinho muito densa e no foi
possvel medir o tamanho dos poros. Estes resultados esto de acordo com os
dados da microscopia eletrnica de varredura.
117
5.15 DSC
Figura 58 F. Curva de DSC da biomembrana obtida em meio de vinho (vinho: 33%
v/v, ch verde: 34% v/v, gua destilada: 33% v/v e concentrao de acar: 50 g/L),
faixa de temperatura: -100C a 450C.
Figura 58 G. Curva de DSC da biomembrana obtida em meio de ch verde com
calndula, faixa de temperatura: -100C a 450C.
As condies de obteno da biomembrana para este teste foram: volume de
inculo: 0,150 L (25% v/v), tempo de cultivo: 7 dias e pH inicial: 3,5.
A curva de DSC (Figura 58 A) da biomembrana de ch verde mostra que o
ponto de vitrificao est em torno de -20C, que o ponto de cristalizao est em
torno de 10C e que no h degradao trmica at 137C. Esta curva foi realizada
para verificar se a biomembrana no sofreria degradao durante a esterilizao em
autoclave (121C por 30 minutos).
A Figura 58 B mostra que a biomembrana em meio de ch verde apresenta 2
picos endotrmicos: um a 10C e outro a 180C. A biomembrana liofilizada de ch
verde com calndula (Figura 58 G) apresentou 2 picos endotrmicos, sendo um a
120
200C e outro a 325C. A biomembrana de vinho apresentou 2 picos endotrmicos,
um a 110C e outro, 10C (Figura 58 F).
A Figura 58 C mostra que a biomembrana de mamo apresenta 2 picos
endotrmicos, um a 10C e o outro a 180C.
A biomembrana de laranja (Figura 58 D) possui 2 picos endotrmicos (10C e
110C). A biomembrana de beterraba tem 3 picos endotrmicos, sendo um a 10C,
outro em 75C e o ltimo a 110C. Estes dados indicam que a estabilidade trmica
das biomembranas obtidas nos diferentes meios de cultivo diferentes
Tabela 14. Picos endotrmicos das biomembranas obtidas nos diferentes meios de
cultivo
Biomembrana 1 pico 2 pico 3 pico
Beterraba 10C 75C 110C
Vinho 10C 110C ---
Laranja 10C 110C ---
Mamo 10C 180C ---
Ch verde 10C 180C ---
Calndula 180C 325C ---
Conforme se observa na Tabela 14, a maioria das biomembranas apresentou 2
picos endotrmicos. O primeiro pico endotrmico, da curva de DSC das
biomembranas de ch verde, de mamo, de laranja, de beterraba e de vinho,
ocorreu em torno de 10C. Enquanto que o primeiro pico endotrmico da
biomembrana de ch verde com calndula ocorreu em torno de 180C, mostrando
que a interao da calndula com as fibras de celulose da biomembrana de ch
verde foi positiva, aumentando a estabilidade trmica da biomembrana formada em
meio de ch verde. O segundo pico endotrmico da biomembrana de mamo e de
ch verde foi em torno de 180C. O segundo pico endotrmico da biomembrana de
laranja e de vinho ocorreu em torno de 110C, enquanto que o segundo pico da
biomembrana de beterraba foi em 75C, e o da biomembrana de ch verde com de
calndula foi a 320C. A biomembrana de beterraba ainda apresentou um terceiro
pico endotrmico, a 110C. A diferena no comportamento trmico das
biomembranas obtidas nos diferentes meios de cultivo so devidas interao dos
componentes dos meios de cultivo com a fibra de celulose.
121
(
C
P
S
)
2 u
BiomembranadeChVerde
(
C
P
S
)
2 u
BiomembranadeLaranja
Figura 59 B. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
laranja (concentrao de suco de laranja: 25% v/v, concentrao de ch verde: 75%
v/v e concentrao de acar: 50 g/L), 2u (5 a 90).
122
0
5
10
15
20
25
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
C
P
S
)
2u
BiomembranadeBeterraba
Figura 59 C. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
beterraba (suco de beterraba equivalente a 18 g/L de sacarose), 2u (5 a 90).
0
5
10
15
20
25
30
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
C
P
S
)
2u
BiomembranadeCalndula
Figura 59 D. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
ch verde incorporada com calndula, 2u (5 a 90).
600
850
1100
1350
1600
1850
2100
2350
2600
2850
0 20 40 60 80 100
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
C
P
S
)
2 u
BiomembranadeMamo
Figura 59 E. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
mamo (suco de mamo: 50% v/v, suco de laranja: 19% v/v, ch verde: 31% v/v e
concentrao de acar: 50 g/L), 2u (5 a 90).
123
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
0 20 40 60 80 100
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
C
P
S
)
2 u
Biomembranadevinho
Figura 59 F. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
vinho (vinho: 33% v/v, gua: 33% v/v, ch verde: 34% v/v e concentrao de acar:
50 g/L), 2u (5 a 90).
300
500
700
900
1100
1300
20 40 60 80 100
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
C
P
S
)
2 u
Biomembranadecolgeno
Figura 59 g. Espectro da difrao de Raio-X da biomembrana obtida em meio de
colgeno (colgeno: 1,2% v/v, ch verde: 98% v/v e concentrao de acar: 50
g/L), 2u (5 a 90).
Tabela 15. ndice de cristalinidade (%) das biomembranas de celulose obtidas em
diferentes meios de cultivo.
Biomembrana
ndice de
Cristalinidade (%)
Ch verde 60
Beterraba 70
Calndula 72
Laranja 61
Vinho 50
Mamo 59
Colgeno 47
124
O espectro de difrao de Raio-X da biomembrana de celulose obtida nos
diferentes meios de cultivo apresentaram um pico em torno de 22,4, que o pico
caracterstico da celulose. Devido celulose bacteriana no ser um material
completamente cristalino, os espectros de difrao apresentam picos largos. As
biomembranas obtidas nos diferentes meios de cultivo apresentaram ndices de
cristalinidade diferentes. O ndice de cristalinidade da biomembrana obtidas nos
diferentes meios de cultivo, foi calculado de acordo com a frmula 5, descrita na
seco 4.4.9 e esto resumidos na Tabela 15.
Na Tabela 15, observa-se que a membrana de calndula apresenta o maior
ndice de cristalinidade (72%), que 20% maior que o ndice de cristalinidade da
biomembrana obtida em meio de ch verde, 18% menor que o da membrana de
celulose sem adio de CMC obtida por Cheng, Catchmark e Demirci (2009) e
similar ao ndice de cristalinidade da membrana de celulose sem aloe vera obtida
por Saibuatong et al. (2010). A adio de laranja ao meio de ch verde praticamente
no alterou o ndice de cristalinidade.
O ndice de cristalinidade da biomembrana de beterraba 17% maior que da
biomembrana de ch verde e praticamente igual a membrana de celulose com aloe
vera obtida por Saibuatong et al. (2010). Enquanto que, o ndice de cristalinidade da
biomembrana de vinho 17% menor que o da biomembrana de ch verde.
A alta intensidade dos picos pode ser resultado da densa estrutura,
principalmente no caso da biomembrana de beterraba e da biomembrana de ch
verde liofilizada com calndula.
No geral, os parmetros, como composio do meio de cultivo, pH e
temperatura, podem influenciar o crescimento bacteriano e a biossntese de celulose
bacteriana. O aumento do ndice de cristalinidade da biomembrana pode ser devido
ao aumento da organizao das cadeias polimricas.
A adio de colgeno 1,2% diminuiu o ndice de cristalinidade da
biomembrana de ch verde em 21%, resultados semelhantes foram encontrado por
Cheng Cheng, Catchmark e Demirci (2009) com a adio de CMC ao meio de
cultivo. Estes resultados indicam que os meios utilizados com exceo do colgeno
aumentaram a organizao das fibras de celulose, de modo a uniformizar e a formar
uma rede de fibra de celulose mais estruturada que as fibras da biomembrana de
ch verde.
125
(membrana de celulose), que comercializado a R$ 12,00/g (valor obtido no site
www.membracel.com.br).
131
6 CONCLUSO
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