Caso 10: Farmacodinmica de un analgsico

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Caso 10. Estimar el modelo ptimo que caracteriza la respuesta farmacodinmica de dos frmacos analgsicos y comparar las curvas dosis-respuesta de ambos frmacos.
(REGRESIN NO-LINEAL SIN PESOS ESTADSTICOS)(J. MARTNEZ LANAO, USAL)

CASO PRCTICO
Se han hecho dos estudios, uno con cada analgsico en dos animales de experimentacin supuestamente iguales. Los datos correspondientes a la concentracin del frmaco en el compartimento biofsico y el correspondiente efecto analgsico se encuentran recogidos en el fichero caso10.xls que tiene la siguiente forma:

El error asociado a la medida de la respuesta farmacolgica present una varianza constante, por lo que a efectos de ponderacin consideramos Desviacin estndar = 1 y haremos una regresin no-lineal sin pesos estadsticos. El objetivo de este ejercicio es ajustar, mediante regresin no-lineal, la variacin del efecto analgsico de los 2 frmacos en funcin de la concentracin de los mismos en el compartimento de efecto o biofsico. Se trata de caracterizar las curvas dosis-respuesta de ambos frmacos, estimar sus DE50 y comparar finalmente las curvas dosis-respuesta de ambos analgsicos para concluir si son significativamente diferentes.

TEORA
El anlisis de la variacin de la respuesta farmacolgica frente a las dosis o concentraciones de frmacos administrados, recurre a la utilizacin de distintos tipos de modelos de respuesta o modelos farmacodinmicos. En la prctica, resulta ms correcto relacionar la respuesta farmacolgica con las concentraciones del frmaco en los diferentes compartimentos corporales, especialmente en los llamados compartimentos de efecto o compartimentos biofsicos, que es donde se localizan los receptores relacionados con la respuesta farmacolgica. Dependiendo del experimento, la concentracin del frmaco en este tipo de compartimentos puede ser medida experimentalmente o predecirse adecuadamente mediante la utilizacin de un modelo farmacocintico adecuado.

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Dos modelos farmacodinmicos que se utilizan habitualmente para correlacionar la respuesta farmacolgica con las concentraciones del frmaco, son el modelo hiperblico y el modelo sigmoide o modelo de Hill, cuyas ecuaciones se recogen a continuacin. Modelo hiperblico

E=

E max C CE 50 + C
Emax

Efecto

Concentracin

o o

Ntese que esta ecuacin y la forma de su curva coincide con la conocida ecuacin de Michaelis-Menten, donde Emax sera la Vmax y CE50 sera la Km. Modelo sigmoide o modelo de Hill

E max C E=   CE 50 + C
Emax

Efecto

Concentracin

o o

Ntese que esta ecuacin difiere de la ecuacin hiperblica anterior en que algunos trminos estn elevadas a un parmetro  . Para el caso particular de  = 1 ambas ecuaciones coincidiran, por lo que en este ejercicio ajustaremos slo el modelo de Hill que incluye tambin como caso particular al modelo hiperblico. Los parmetros de las ecuaciones matemticas correspondientes a estos modelos pueden estimarse mediante regresin no-lineal con la ayuda de SIMFIT. El programa que utilizaremos para resolver este problema es el programa avanzado denominado QNFIT, localizado en el men Fit de SIMFIT, el cual permite ajustar los parmetros de la ecuacin de Hill a las 2 curvas dosis-respuesta de nuestro estudio y luego compararlas entre si.

PROCEDIMIENTO PASO A PASO

1.- Abrir el archivo caso10.xls
Una vez abierto el archivo caso10.xls, proceda a copiar al portapapeles la matriz de datos correspondiente al primer frmaco, con el fin de pegar estos datos en Simfit en su momento.

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2.- Ajuste de los datos a ecuaciones farmacodinmicas 2a.- Ajuste de los datos correpondientes al frmaco 1
En la barra de opciones del men principal despliegue la opcin Fit y dentro de ella seleccione Advanced: QN/library/user-defined model-qnfit y luego Run the program y despus OK y Yes en las pantallas siguientes. A continuacin aparece un men para elegir el tipo de funcin a ajustar:

elegimos la opcin por defecto de Function of 1 variable: u = f(x). Seguidamente aparece la pantalla ya familiar para importar los datos, pulsar en el botn Paste para pegar los datos que tenemos en el portapapeles. A continuacin pulsar en OK y despus en Open. Luego a la pregunta de si usamos la opcin de experto (estimas de los parmetros en el archivo) contestaremos No, y en el men que aparece a continuacin elegiremos la opcin por defecto Fit current data. A continuacin aparece un men con toda la librera de ecuaciones disponibles en Simfit:

aqu elegiremos la opcin de Empirical models , apareciendo el men:

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En este men seleccionar la opcin Hill equation: n variaded. Seguidamente el programa pregunta Include a constant term in this model?, contestaremos NO. Luego pregunta Is this the correct model?, contestaremos YES. Despus aparece un men donde aceptaremos la opcin por defecto: Set all parameters limits individually, y en el men siguiente elegiremos la opcin por defecto Parameter 1 constrained between limits, apareciendo la siguiente pantalla donde teclearemos una horquilla razonable para el parmetro 1 (nuestro Emax), por ejemplo: 0.01, 1, 100:

De manera anloga introducimos las mismas estimas iniciales para el parmetro 2 (nuestro CE50) y para el parmetro 3 (nuestro exponente ). En el men siguiente seleccionaremos Proceed to curve-fitting y en el que aparece despus elegiremos la opcin por defecto Fit now with no random search. Luego aparecer un contandor con detalles del ajuste donde pulsaremos OK, despus aparece una pantalla con ms detalles del ajuste y tambin pulsaremos OK. En la pantalla siguiente pulsaremos Full analysis, apareciendo la siguiente pantalla con los resultados:

conviene fijarser en las 3 columnas de la derecha de la tabla que son las que contienen los parmetros reales, sus desviaciones estndar y las p de redundancia del parmetro. Al salir pulsando OK, el programa pregunta Plot data and best fit curve?, contestaremos YES y luego elegiremos la opcin por defecto Original plot axes obteniendo la siguiente grfica:

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En esta grfica pulse en el botn Advanced y aparecer un men que le permite guardar en archivo los datos (circles) y la curva de ajuste (solid line), pulse sobre ellos y guarde los archivos con unos nombres (ej: farmaco1_datos.sim y farmaco1_ajuste.sim). Pulsando luego Return to default graph volver a la grfica anterior. Finalmente abandonamos pulsando Cancel > Cancel this plot. A las preguntas que siguen podemos contestar NO para no alargar el ejercicio. Finalmente aparecer el siguiente men de opciones avanzadas:

En este men elegiremos la opcin Store parameters/tests y en el siguiente Store current parameters/covariance matrix, con el fin de guardar en un archivo (parametros_1.sim) los parmetros y la matriz de covarianza de este ajuste, que nos harn falta luego para comparar las curvas de los dos frmacos que estamos estudiando. El programa pregunta el nombre del archivo, un ttulo y si queremos aadir este archivo a un proyecto, aqu contestaremos que YES. En la pantalla siguiente elegiremos Cancel.

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De vuelta al men general elegiremos ahora la primera opcin de New model and/or new data. El programa nos traslada ahora al comienzo del programa QNFIT (epgrafe 2a-2) donde procederemos de manera anloga para tratar los datos del frmaco 2.

2b.- Ajuste de los datos correpondientes al frmaco 2

Para realizar el ajuste del segundo frmaco, debemos ir primero al archivo caso10.xls para copiar al portapapeles la matriz de datos correspondiente al segundo frmaco (la tabla de la derecha). Luego se tratara de seguir la misma secuencia de pasos del epgrafe 2a-2 en delante. Los parmetros del ajuste para el frmaco 2 son los siguientes:

conviene fijarser de nuevo en las 3 columnas de la derecha de la tabla. La grfica con el ajuste para el frmaco 2 ser la siguiente:

En esta grfica, pulse como antes en el botn Advanced y aparecer un men que le permite guardar en archivos los datos (circles) y la curva de ajuste (solid line), pulse sobre ellos y guarde los archivos con unos nombres (por ej: farmaco2_datos.sim y

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farmaco2_ajuste.sim). Luego elija Return to default graph y volver a la grfica anterior. Para salir pulse Cancel > OK. Finalmente abandonaremos pulsando Cancel > Cancel this plot. A las preguntas que siguen podemos contestar NO para no alargar el ejercicio y finalmente aparecer el men que ya conocemos de opciones avanzadas:

En este men elegiremos la opcin Store parameters/tests y aparecer el men:

Elijamos ahora Store current parameters/covariance matrix, con el fin de guardar en un archivo (por ej.: parametros_2.sim) los parmetros y la matriz de covarianza de este ajuste. De vuelta al men anterior, y con el fin de comparar los parmetros de las curvas de los 2 frmacos, elija ahora Compare parameters/covariance matrices, aparecer la siguiente pantalla que le permite capturar los 2 archivos a comparar, la mejor opcin es Add n files from archive file y cargar los dos archivos previamente all almacenados (parametros_1.sim y parametros_2.sim):

Pulsando al final en la opcin Accept aparecer la siguiente tabla de comparacin de los parmetros de las dos curvas:

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Que se podra concluir acerca de la igualdad de las dos curvas dosis-respuesta? Los parmetros de la ecuacin de Hill son significativamente diferentes en ambos frmacos? Segn la comparacin conjunta de todos los parmetros mediante el test Mahalanobis- ji-cuadrado, que es el test ms riguroso porque tiene en cuenta las matrices de covarianza, se puede rechazar la hiptesis nula de igualdad de todos los parmetros con un riesgo p < 0.01. Los test t de Student que figuran al final, hacen comparaciones de los parmetros por parejas, all puede verse que el parmetro 2 (CE50) tiene una p de 0.1228 que vendra a decirnos que ese es el parmetro ms diferente. Hay que tener en cuenta que los tests t por parejas no incluyen toda la matriz de covarianza y se deben considerar ms aproximados que el Mahalanobis-ji-cuadrado. En resumen, la propuesta ms adecuada sera admitir diferencia significativa para los parmetros en conjunto entre las 2 curvas de ajuste, recayendo la principal diferencia en la DE50.

3.- Composicin de una grfica conjunta que superponga las curvas

dosis-respuesta de los 2 frmacos.

Para ello siga los siguientes pasos. En la pantalla principal de SIMFIT elija Plot y luego vaya haciendo: Interactively or from Files - Simplot > Run the program > Standard x,y axes > OK > Input graphs project files > Add n files (importe aqu los cuatro archivos farmaco1_datos.sim, farmaco1_ajuste.sim, farmaco2_datos.sim y farmaco2_ajuste.sim > ....etc > Accept.

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Esta comparacin grfica parece confirmar el anterior test de Mahalanobis-ji-cuadrado acerca de que existiran diferencias significativas entre los 2 frmacos. Se podra apuntar la hiptesis de que los dos frmacos tendran aproximadamente el mismo efecto mximo (Emax) pero distinta CE50.