Universidad sur colombiana

Programa de ingeniera agrcola Asignatura: bioqumica Informe: Reconocimiento de Proteinas Enzimas Integrantes: Edwin Fernando bahamon

uis enrique !erez "atiana salas calder#n

$uan Feli!e mendez

%eiva&'uila

(ndice: )* Introducci#n +* Elementos te#ricos ,* -ateriales .* ob/etivos 0* E1!eriencia ) 2* E1!eriencia + 3* E1!eriencia , 4* E1!eriencia . 5* 6onclusiones )7* 8ibliografa Introduccin A La Prctica 9urante esta !r:ctica hemos de realizar ; a!licar los conce!tos que hemos venido estudiando acerca de las !rotenas ; sus caractersticas ; !ro!iedades que abarca* En los monta/es que se realizaron se intentaron realizar logramos observar algunas de las !ro!iedades que se dan en las !rotenas contenidas en la clara de huevo ; que hemos de e1!licar mas adelante* Elementos tericos: Protenas: as !rotenas son los materiales que desem!e<an un ma;or n=mero de
funciones en las c>lulas de todos los seres vivos* Por un lado? forman !arte de la estructura b:sica de los te/idos @m=sculos? tendones? !iel? u<as? etc*A ;? !or otro? desem!e<an funciones metab#licas ; reguladoras @asimilaci#n de nutrientes? trans!orte de o1geno ; de grasas en la sangre? inactivaci#n de materiales t#1icos o !eligrosos? etc*A* "ambi>n son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo? ;a que son la base de la estructura del c#digo gen>tico @A9%A ; de los sistemas de reconocimiento de organismos e1tra<os en el sistema inmunitario* Bon macromol>culas org:nicas? constituidas b:sicamente !or carbono @6A? hidr#geno @'A? o1geno @CA ; nitr#geno @%AD aunque !ueden contener tambi>n azufre @BA ; f#sforo @PA ;? en menor !ro!orci#n? hierro @FeA? cobre @6uA? magnesio @-gA? ;odo @IA? etc*** Estos elementos qumicos se agru!an !ara formar unidades estructurales llamados A-I%CE6I9CB? a los cuales !odramos considerar como los Fladrillos de los edificios moleculares !roteicosF*

Be clasifican? de forma general? en 'olo!roteinas ; 'etero!roteinas seg=n est>n formadas res!ectivamente s#lo !or amino:cidos o bien !or amino:cidos m:s otras mol>culas o elementos adicionales no aminoacdicos* Funciones y ejemplos de protenas

as !rotenas determinan la forma ; la estructura de las c>lulas ; dirigen casi todos los !rocesos vitales* as funciones de las !rotenas son es!ecficas de cada una de ellas ; !ermiten a las c>lulas mantener su integridad? defenderse de agentes e1ternos? re!arar da<os? controlar ; regular funciones? etc*** "odas las !rotenas realizan su funci#n de la misma manera: !or uni#n selectiva a mol>culas* as !rotenas estructurales se agregan a otras mol>culas de la misma !rotena !ara originar una estructura ma;or* Bin embargo? otras !rotenas se unen a mol>culas distintas: los anticuer!os? a los antgenos es!ecficosD la hemoglobina? al o1genoD las enzimas? a sus sustratosD los reguladores de la e1!resi#n gen>tica? al ADND las hormonas? a sus rece!tores es!ecficosD etc*** Estructura primaria

a estructura !rimaria es la secuencia de amino:cidos de la !rotena* %os indica qu> amino:cidos com!onen la cadena !oli!e!tdica ; el orden en que dichos amino:cidos se encuentran* a funci#n de una !rotena de!ende de su secuencia ; de la forma que >sta ado!te*

Estructura secundaria a estructura secundaria es la dis!osici#n de la secuencia de amino:cidos en el es!acio* os amino:cidos? a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de !rotenas ; gracias a la ca!acidad de giro de sus enlaces? adquieren una dis!osici#n es!acial estable? la estructura secundaria* E1isten dos ti!os de estructura secundaria:

1. La a!al"a# $%lice Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura !rimaria* Be debe a la formaci#n de enlaces de hidr#geno entre el &6GC de un amino:cido ; el &%'& del cuarto amino:cido que le sigue*

&. La con"ormacin 'eta En esta dis!osici#n los amino:cidos no forman una h>lice sino una cadena en forma de zigzag? denominada dis!osici#n en l:mina !legada* Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona*

Estructura terciaria a estructura terciaria informa sobre la dis!osici#n de la estructura secundaria de un !oli!>!tido al !legarse sobre s misma originando una conformaci#n globular* En definitiva? es la estructura !rimaria la que determina cu:l ser: la secundaria ; !or tanto la terciaria*

Esta conformaci#n globular facilita la solu'ilidad en a(ua ; as realizar funciones de transporte) en*imticas) $ormonales? etc* Esta conformaci#n globular se mantiene estable gracias a la e1istencia de enlaces entre los radicales + de los amino:cidos* A!arecen varios ti!os de enlaces: )*& el puente disul"uro entre los radicales de amino:cidos que tienen azufre* +*& los puentes de $idr(eno. ,*& los puentes el%ctricos. .*& las interacciones $idr"o'as*

Estructura cuaternaria Esta estructura informa de la uni#n? mediante enlaces d>biles @no covalentesA de varias cadenas !oli!e!tdicas con estructura terciaria? !ara formar un com!le/o !roteico* 6ada una de estas cadenas !oli!e!tdicas recibe el nombre de protmero* El n=mero de !rot#meros vara desde dos) como en la $e,o-uinasa. cuatro) como en la hemoglobina? o muchos? como la c:!sida del virus de la !oliomielitis? que consta de sesenta unidades !roteicas*

DE/NA01+ALI2A3I4N DE LA/ P+50E6NA/

Be llama desnaturali*acin de las !rotenas a la p%rdida de las estructuras de orden superior @secundaria? terciaria ; cuaternariaA? quedando la cadena !oli!e!tdica reducida a un !olmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fi/a* Estado nati7o Estado desnaturali*ado

6ualquier factor que modifique la interacci#n de la !rotena con el disolvente disminuir: su estabilidad en disoluci#n ; !rovocar: la !reci!itaci#n* As? la desa!arici#n total o !arcial de la envoltura acuosa? la neutralizaci#n de las cargas el>ctricas de ti!o re!ulsivo o la ru!tura de los !uentes de hidr#geno facilitar: la agregaci#n intermolecular ; !rovocar: la !reci!itaci#n* a !reci!itaci#n suele ser consecuencia del fen#meno llamado desnaturali*acin ; se dice entonces que la !rotena se encuentra desnaturali*ada

materiales aA clara de huevo bA tubos de ensa;o ; gradilla cA trozos de hgado dA !i!etas eA soluci#n de fheling fA soluci#n de lugol gA vinagre

Cb/etivos

aA identificar el !roceso !or el cual una !rotena es desnaturalizada ; realizar el monta/e res!ectivo* bA a!licar soluciones a la clara de huevo !ara !roceder con la desnaturalizaci#n* cA reconocer e identificar la !resencia de !rotenas de clara de huevo en una soluci#n con '%C,* dA identificar enlaces !e!tidicos ; otras !rotenas mediante la realizaci#n de la reacci#n del biuret* eA formar una soluci#n de coloraci#n oscura con acetato de !lomo ; clara de huevo ; reconocer las !rotenas que contienen amino:cidos azufrados* fA obtenci#n e identificaci#n de la enzima catalasa en te/idos de c>lulas animales como el hgado* gA realizar el !roceso de desnaturalizaci#n de la !rotena catalasa*

E,periencia 1: !Protenas coa(uladas# en tubos de ensa;o a!licamos clara de huevo* A esta sustancia le a!licamos gotas de acido ac>tico @vinagreA 6alentamos la mezcla durante unos segundos

H finalmente logramos obtener las !rotenas coaguladas:

E,periencia &: o'tencin de coloraciones !reaccin ,antoproteica# Be de!ositaron en un tubo de ensa;o + gotas de clara de huevo Be adicionaron un )cc de '%C, concentrado* Be dis!uso en ba<o de maria a )77I Posteriormente se enfri# en agua fra H !or ultimo se adiciono en goteo una disoluci#n de %aC' al .7J*

os resultados que se obtuvieron fueron:

E,periencia 8: +eaccion del 9iuret En un tubo de ensa;o de!ositamos ,cc de clara de huevo* Be a<adieron +cc de hidr#1ido s#dico al +7J Posteriormente se agregaron 0 gotas de sultato c=!rico diluido al )J

H asi obtuvimos los siguientes resultados em!ricos:

E,periencia :: reaccin de aminocidos con a*u"re %uevamente dis!usimos en un tubo de ensa;o ,cc de clara de huevo Be a<adieron +cc de soluci#n de hidr#1ido s#dico al +7 J uego se agregaron )7 gotas de solucion acetato de !lomo al 0J

Be es!eraba una solucion oscura ; eso fue lo que logramos obtener:

3onclusiones:
)* Be !udo realizar el !roceso de desnaturalizaci#n con la clara de huevo en solucion con el vinagre dando como resultados los co:gulos !resentes en la mezcla* +* ogramos obtener la coloraci#n amarilla que se !resenta en una solucion de clara de huevo ; acido ntrico concentrado que nos !rueba la !resencia en esta !rotena de gru!os benc>nicos ; la formaci#n de :lcalis en su estructura al someterse a este !roceso* ,* Be logro una !erfecta reacci#n biuret formada !or clara de huevo e hidr#1ido s#dico al +7J .* H !or ultimo se logro la obtenci#n de amino:cidos que contienen azufre en su estructura mediante la mezcla de acetato de !lomo? hidr#1ido s#dico ; clara de huevo*

9i'lio(ra"a:
htt!s:KKattachment*fbsb1*comKmessagingLattachment*!h!M aidG0beb2)02b+cd3+e)344c04023540.2++NmidGid*.570..+332,0734NuidG),4720,345Na

ccidG),4720,345Ne1tG),0.+.3720NhashGAO92-& q,)aP5,-r!dL+QuOwu9+8!R7FsQ+US$!7E'RL6.w htt!:KKwww*aula+)*netK%utriwebK!roteinas*htm htt!:KKwww*angelfire*comKscifiKanarSimiaKReconocimientoJ+7deJ+7Protenas*htm

Practica de En*imas 6ndice: )* Introducci#n +* Elementos te#ricos ,* -ateriales .* ob/etivos 0* E1!eriencia ) 2* E1!eriencia + 3* E1!eriencia , 4* 6onclusiones 5* bibliografa
Introduccion: En esta !ractica trataremos de conocer em!ricamente los conce!tos? caractersticas? funciones de las enzimas en te/idos de animales @hgadoA * all nos concentraremos b:sicamente en la obtenci#n de una de las enzimas o1idoreductasas denominada catalasa ; tambi>n nos centraremos en la desnaturalizaci#n de la misma enzima e hidrolizar el almidon* Elementos teoricos: Enzimas: a Enzima 6omo Unidad Fundamental 9e Pida 6ada c>lula ; cada te/ido tienen su actividad !ro!ia? lo que com!orta continuos cambios en su estado bioqumico? en la base de la cual est:n las enzimas? que tienen el !oder de catalizar? facilitar? ; agilizar determinados !rocesos sint>ticos ; analticos* os !ro!ios genes son reguladores de la !roducci#n de las enzimasD !or tanto? genes ; enzimas !ueden considerados como las unidades fundamentales de la vida*

Caracteristicas de las enzimas Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono (C), Hidrgeno (H), o igeno (!), "itrgeno ("i), # $zufre (%) combinados, pero siempre con peso molecular bastante elevado # com&n propiedades catlicas especificas' %u importancia es tal que puede considerarse la vida como un (orden sistemtico de enzimas funcionales(' Cuando este orden # su sistema funcional son alterados de alg&n modo, cada organismo sufre mas o menos gravemente # el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de accin como por un e ceso de actividad de enzima' )as enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por los organismos vivos' *n consecuencia, las deficiencias en la funcin enzimtica causan patologas' )as enzimas, en los sistemas biolgicos constitu#en las bases de las comple+as # variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales' )a fi+acin de la energa solar # la sntesis de sustancias alimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las enzimas presentes en las plantas' )os animales, a su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten aprovec,ar los alimentos con fines energ-ticos o estructurales. las funciones del metabolismo interno # de la vida de relacin, como la locomocin, la e citabilidad, la irritabilidad, la divisin celular, la reproduccin, etc' *stn regidas por la actividad de innumerables enzimas responsables de que las reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para el individuo, sin liberaciones bruscas de energa a temperaturas fi+as en un medio de pH, concentracin salina, etc'. prcticamente constante' $ diferencia de un catalizador inorgnico que interviene en numerosas reacciones las enzimas producidas por los organismos vivos ,abitualmente solo catalizan un tipo de reaccin o solo una reaccin determinada. la especificidad de las enzimas es tan marcadas que en general act&an e clusivamente sobre sustancias que tienen una configuracin precisa. por e+emplo, si solo atacan a los aminocidos que tienen su carbono a , asim-trico, con estructura )-, no muestran la menor actividad sobre formas id-nticas de dic,os aminocidos, pero que sean del tipo D-' *n los sistemas biolgicos se llevan a cabo diversas reacciones a partir de la misma sustancia. por e+emplo algunos microorganismos convierten la glucosa en alco,ol # bi ido de carbono, al paso que otros g-rmenes la convierten en cido lctico o cido pir&vico o acetalde,ido' *sto quiere decir que la glucosa puede descomponerse en distintos productos # aunque todas las posibilidades son tericas # prcticamente posibles la presencia de ciertas enzimas favorece uno de los caminos que llevan a la acumulacin de determinados compuestos' )as enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente especficos que/

0odifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas' Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras distintas son las que van a sufrir los cambios' 1mpulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una sustancia, cual de ellos en especial, ser el utilizado'

clasificacin de las enzimas Grupo Accion Ejemplos

2' ! idoreductasas

Catalizan reacciones de o ido reduccin' 3ras la De,idrogenasas accin catlica quedan modificados en su grado de o idacin por lo que debe ser transformados $minoo idasa antes de volver a actuar de nuevo' Deaminasas Catalasas

4' 3ransferasas

3ransfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas mol-culas)a otras sustancias receptoras' %uelen actuar en procesos de interconversiones de azucares, de aminocidos, etc

3ransaldolasas 3ranscetolasas 3ransaminasas

5' Hidrolasas

6erifican reacciones de ,idrlisis con la 7lucosidasas consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros' %uele ser de tipo digestivo, por lo que )ipasas normalmente act&an en primer lugar 8eptidasas *sterasas 9osfatasas

:' 1somerasas

$ct&an sobre determinadas mol-culas 1somerasas de az&car obteniendo de ellas sus ismeros de funcin o de *pimerasas posicin' %uelen actuar en procesos de interconversion 0utasas <ealizan la degradacin o sntesis (entonces se $ldolasas llaman sintetasas) de los enlaces denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor Decarbo ilasas energ-tico' <ealizan la degradacin o sntesis de los enlaces Carbo ilasas fuertes mediante el acoplamiento a sustancias 8eptidosintetasas ricas en energa como los nucleosidos del $38

;' )iasas

=' )igasas

;ateriales:
Qradilla Pi!etas Boluciones de fheling

ugol "ubos de ensa;o 8a<o de mara -echero Agua o1igenada Almid#n "e/ido animal @carneA

5'jeti7os:
aA Cbtenci#n e identificaci#n de la enzima catalasa en te/idos de c>lulas animales como el hgado* bA realizar el !roceso de desnaturalizaci#n de la !rotena catalasa* cA obtener a !artir de una soluci#n de almidon ; saliva @enzimas de amilasa A contenidos de glucosa @monosac:ridosA tras descom!oner el almidon @!olisac:ridoA*

E1!eriencia ): @identificaci#n de la enzima catalasaA

Iniciamos agregando trocitos de carne en un tubo de ensa;o uego a<adimos 0mm de agua o1igenada* 6on esta mezcla de te/ido animal ; agua o1igenada logramos obtener que a!arecieran burbu/as:

E1!eriencia +: @desnaturalizaci#n de la 6atalasaA

Ahora en este !roceso de!ositamos en un tubo de ensa;o trocitos de carne* 9es!u>s se a<adi# agua !ara hervir la carne Be hierve durante unos minutos* Posterior al tiem!o de hervido se retiro el agua sobrante ; se a<adi# agua o1igenada H se mostro que no ha; reacci#n* o que nos !ermiti# deducir que ;a la catalasa se desnaturalizo*

E1!eriencia ,: @descom!osici#n de !olisac:ridos de almidon en monosac:ridos de glucosaA

"omamos + tubos de ensa;o* uego de!ositamos en cada uno 0mm de soluci#n de almidon diluida* le agregamos un !oco de saliva* 'acemos reacci#n de fheling en el tubo ) ; el tubo + hacemos soluci#n de lugol* Por ultimo obtuvimos que en el tubo con reacci#n de Fheling ; la saliva rom!ieron la estructura del almidon de/ando solo glucosa? en cambio? en el tubo + no ocurri# nada ;a que el almidon con la saliva forman glucosa ; ;a el lugol no !roduce !or decirlo de esta forma TT %I%QU% EFE6"CTT:

3onclusiones: )* Be logro obtener ; observar la catalasa contenida en la carne +* Be logro efectuar el !roceso de desnaturalizaci#n de la catalasa ; mostrar las ilustraciones res!ectivas* ,* Be logro efectuar la hidrolisis del almidon !ero hubo fallas res!ecto a los resultados !ositivos de la reacci#n de Fheling ;a que no se !udo llegar al color ro/o o rosado que se es!eraba**