EMBARAZO Y NEONATOLOGA 1. 2. 3. 4.

Introduccin Diagnstico del embarazo Parmetros bioqumicos alterados durante el embarazo Estudio del lquido amnitico para la deteccin y prevencin de alteraciones

1. INTRODUCCIN Embarazo: estado fisiolgico durante el cual se producen cambios metablicos y bioqumicos reversibles tras el parto Muchas de las determinaciones que vamos a comentar se efectan por tcnicas ya descritas. 2. DIAGNSTICO DEL EMBARAZO -La gonadotropina corinica humana (hCG) es una protena compuesta por dos subunidades (a y ). -Subunidad : es caracterstica de esta hormona por tanto se utiliza para el diagnostico del embarazo. - [hcG] aumenta rpidamente al comienzo de la gestacin y ms tarde disminuye, especialmente en el tercer trimestre. -El anlisis de -hCG se puede hacer en orina o en suero En orina: se puede detectar unos das despus de la falta de la mestruacin En suero: un da despus de la implantacin en el tero

2.1. Anlisis en orina -Determinacin cualitativa: rpido, fcil y fiable -Conviene realizarlo en la primera orina de la maana Pruebas de inhibicin de la aglutinacin: o Se utiliza un anticuerpo anti-hCG que se aade a la orina, despus se aaden unas partculas recubiertas de hCG. o Si hay hCG en la muestra, sta se une a los anticuerpos formando un complejo antgeno-anticuerpo, no queda por tanto anticuerpo para unirse al antgeno de las partculas por lo stas no se aglutinan. Ausencia de aglutinacin: prueba positiva. o Si no hay hCG en la muestra, o hay poca, el anticuerpo puede reaccionar con las partculas produciendo aglutinacin: prueba negativa. Pruebas de aglutinacin directa de partculas de ltex: o Se utilizan partculas de ltex recubiertas de anticuerpo anti- hCG.

Si la muestra contiene hCG, se produce la aglutinacin (resultado positivo). Pruebas de anticuerpos monoclonales inmovilizados:

2.2. Anlisis en suero Anlisis cuantitativos Mtodos ms utilizados: RIA y ELISA BIOQUMICOS ALTERADOS DURANTE EL

3. PARMETROS EMBARAZO

3.1. Protenas totales 3.2. Inmunoglobulinas 3.3. Fracciones lipdicas 3.4. Fosfatasa alcalina 3.5. Hormonas: LH y FSH T3 y T4 PTH y vitamina D Estrgenos 3.6 Glucosa: Test de OSullivan 4. ESTUDIO DEL LQUIDO AMNITICO PARA LA DETECCIN Y PREVENCIN DE ALTERACIONES -El lquido amnitico baa el interior de la membrana interna de la placenta, el amnios -Amniocentesis: La cavidad amnitica puede someterse a puncin con seguridad (amniocentesis) a partir de la semana 14 Procedimiento Tubos de muestra: sellados y protegidos de la luz (bilirrubina). Muestra: conservacin en frigorfico o congelacin Antes del anlisis centrifugar

4.1 BILIRRUBINA EN EL LQUIDO AMNITICO -Utilidad: prever incompatibilidad de Rh fetomaterna (enfermedad hemoltica del recin nacido) -Procedimiento: Barrido entre las longitudes de onda 350 y 750 nm. El lquido amnitico sin bilirrubina tiene una absorbancia alta a 350nm que va disminuyendo al aumentar la longitud de onda (lnea basal). Si hay bilirrubina: aparece un pico ancho alrededor de 450-455 nm. La diferencia entre la absorbancia de ese valor y la lnea basal a esa misma longitud de onda indica la concentracin de bilirrubina.

4.2. FOSFOLPIDOS TENSIOACTIVOS EN EL LQUIDO AMNITICO -Para que el nio respire tras el nacimiento es necesario que los pulmones hayan madurado adecuadamente durante la gestacin desarrollando una especie de detergente que cubre los alvolos, el surfactante pulmomar (disminuye la tensin superficial permitiendo el llenado de los alvolos). -Principales componentes del surfactante pulmomar: fosfatidilcolina (lecitina) y fosfatidilglicerol. -Se sintetizan de manera apreciable, a partir de la semana 34-38 la cantidad de surfactante es suficiente para la respiracin del nio. -Nios prematuros: sndrome de insuficiencia respiratoria. -Los fosfolpidos tensioactivos presentes en el lquido amnitico son un indicador de la madurez pulmonar fetal - En lugar de calcular la concentracin de lecitina, se calcula la relacin lecitina/esfingomielina (L/S). La esfingomielina es un fosfolpido cuya tasa de produccin es bastante constante durante el tercer trimestre, por ello se usa como referencia. Mtodos analticos: Anlisis cromatogrfico de fosfolpidos

-Extraccin de fosfolpidos de lquido tensioactivo y concentracin del extracto -Separacin de los fosfolpidos de la muestra por cromatografa en capa fina, as conseguimos que se separen la lecitina y la esfingomielina. -Relado de la placa: pulverizacin con cido sulfrico + sulfato amnico y revelado por calor. Aparecen manchas que corresponden a los distintos fosfolpidos. Con un densitmetro se calcula la concentracin relativa de lecitina y esfingomielina, resultado: L/S L/S > 2: madurez pulmonar
L/S < 1,5 inmadurez pulmonar

El fosfatidilglicerol contribuye a las propiedades del surfactante, su presencia mejora el diagnstico de la relacin L/S. Test de estabilidad de la espuma Muy utilizado: anlisis cualitativo Fundamento: propiedad del surfactante de formar espuma estable cuando se agita en presencia de metanol o etanol. Mtodo: mezclar partes iguales de lquido amnitico sin centrifugar y etanol al 95%, agitar 15, dejar en reposo 15 minutos. Si aparece un anillo completo de espuma con burbujas: madurez pulmonar.

Inmunoensayo de fluorescencia de polarizacin (FPIA) Se basa en la medida de la microviscosidad de los lpidos del lquido amnitico que est relacionada con la tensin superficial. La fluorescencia de polarizacin se basa en la medida de la cantidad de luz fluorescente polarizada que se detecta cuando un marcador fluorescente es excitado con luz polarizada, El grado de fluorescencia est relacionado con la velocidad de rotacin del marcador fluorescente (a menor velocidad mayor fluorescencia). Al aadir el marcador fluorescente al lquido amnitico, su velocidad de rotacin depender de la viscosidad del medio. A ms surfactante, mayor microviscosidad del lquido, ms se opondr a la rotacin del marcador por lo que ste girar ms lentamente y mayor ser la fluorescencia.

PROBLEMAS NEONATALES: BILIRRUBINA -Existen diversas causas que favorecen la elevacin de los niveles plasmticos de bilirrubina en los recin nacidos. -La bilirrubina puede atravesar la barrera hematoenceflica y originar lesiones neurolgicas produciendo una alteracin que se denomina kernicterus - Determinacin de bilirrubina urgente :determinacin directa de la bilirrubina total midiendo la absorbancia a 455nm mediante un espectrofotmetro dicromtico llamado bilirrubinmetro.

Preguntas de revisin 1. Complete: El diagnstico del embarazo se basa en la presencia, en sangre o en orina, de... 2. Suponga que est realizando una prueba de inhibicin de la aglutinacin para diagnosticar un embarazo. Si se produce aglutinacin el resultado es positivo? Justifique su respuesta. 3. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados participan tres anticuerpos diferentes. Identifquelos. Cul de ellos est marcado con partculas de color? Cul es mvil? 4. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados, debe aparecer siempre al menos una lnea para qu sirve? cmo se forma? 5. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados Cmo se forma la banda que nos indica que el resultado es positivo? 6. Cmo se lleva a cabo el anlisis cromatogrfico de la relacin L/S? 7. En qu se basa el test de estabilidad de la espuma para determinar la madurez pulmonar?