Tema: PROYECTO NOM 210 SSA1 2013 EQUIPO NO.

1: Aceves Mata, Gaona Alamilla, Ortiz Hernandez, Ramos Monjaraz y Rivera Carrera.
Objetivo y campo de aplicacin. Esta Norma tiene por objeto establecer los mtodos generales de prueba y alternativos para la determinacin de los siguientes indicadores microbianos y patgenos en alimentos y agua para uso y consumo humano que no cuentan con una norma especfica de producto:

APNDICE NORMATIVO A
Bacteria Mtodo aplicable Mtodos de determinacin presencia o ausencia Etapa de preenriquecimiento, Enriquecimiento selectivo, Aislamiento en medios de cultivos selectivos y diferenciales; y Identificacin bioqumica y confirmacin serolgica de los microorganismos. Equipo Materiales Medios de cultivo Reactivos

Salmonell a spp

En la deteccin de Salmonella spp en productos para consumo humano, as como de reas de produccin y manejo de alimentos especialmente en productos donde las condiciones ambien tales permiten la contaminacin de estos productos por mo de la familia Enterobacte riaceae

Aparato de esterilizacin de calor hmedo y calor seco. Incubadora capaz de operar a 37C 1C. Bao de agua capaz de operar a 41,5C 1C o incubadora capaz de trabajar a 41,5C 1C. Bao de agua capaz de operar a 45C 2C. Bao de agua capaz de operar a 37C 1C. Potencimetro. Balanza granataria con sensibilidad de 0,1g verificada el da de uso.

Asa de platino o nquel de aprox. 3mm de dimetro o 10. Pipetas graduadas o pipetas automticas, de diferentes capacidades 10mL, 5mL, graduadas respectiva mente en divisiones de 0.5mL y 0.1mL protegidas con tapn de algodn. Pipetas de 1mL, con graduaciones de 0.1mL o micropipetas calibradas y verificadas. Matraces Erlenmeyer de 500mL y/o capacidad apropiada. Cajas Petri estriles de vidrio o desechables de dimetro 15mm x

Agua Peptonada amortiguada, RVS. MKTTn, XLD, EH. ASB, Agar Verde Brillante, Agar nutritivo, TSI, LIA, Agar Urea de Christensen, Medio L-Lisina descarboxisol ato, Solucin salina fisiolgica, Medio Triptfano/Trip tona.

Reactivos para la reaccin VP. Reactivos para la reaccin de indol. Antisuero somtico (O) polivalente de Salmonella. Tolueno. a-naftol. Solucin de creatina. KOH. Salmonella Typhimuriu m (S. Typhimurium). Salmonella diarizonae ATCC 12325. (S. diarizonae). Salmonella abortus equi ATCC 9842. (S. abortus equi) ONPG. Novobiocina (sal sdica). Yodo. Yoduro de Potasio. Alcohol etlico 96%4Dimetilaminobenzaldeh

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Homogeneizador peristltico o licuadora de una o dos velocidades controladas por un restato, con vasos esterilizables (vidrio o aluminio). 100mm y/o de un dimetro mayor 140mm. Cucharas, bistures, cuchillos y pinzas. Tubos de ensaye de 16 x 150mm y de 20 x 100mm o de capacidades adecuadas. Gradillas para tubos de ensaye. Mecheros Bunsen o Fisher. do. cido hidroclrico, r = 1.18g/mL a 1.19g/mL. 2-metilbutan-2-ol. Cloruro de sodio. Monohidrato de creatinina.

Confirmacin bioqumica A partir del agar nutritivo, con un asa recta, estril tocar ligeramente el centro de la colonia seleccionada e inocular en tubos de agar inclinado de TSI y LIA. Sembrar por picadura en el fondo y estra en la superficie inclinada. Debido a que la reaccin de descarboxilacin de la lisina, es estrictamente anaerobia, el fondo del medio de LIA, debe medir 4cm. Mantener las placas de agares selectivos a 5-8C. Incubar los tubos de TSI y LIA a 37C 1C por 24 3h. Dejar los tapones flojos de los tubos para mantener condiciones de aerobiosis mientras se incuban evitando excesiva produccin de H2S. Interpretar los cambios de color como se describe a continuacin TSI: Fondo del medio Amarillo, glucosa positiva. Rojo o sin cambio de color, glucosa negativa. TSI: Superficie inclinada. Amarillo, lactosa y/o sacarosa positivas. LIA

Prueba de ureasa

Salmonella produce reaccin alcalina (color prpura) Considerar como negativos los cultivos que produzcan claramente un color amarillo en el Rojo o sin cambio de color, lactosa fondo del tubo. La mayora de los cultivos y/o sacarosa negativa. de Salmonella producen H2S en LIA. Algunos cultivos que no son de Salmonella, producen un color rojo ladrillo en la parte inclinada del LIA. Con un asa estril inocular tubos de agar urea de Christensen. Debido a que algunas veces los tubos de agar urea de Christensen sin inocular, pueden virar a rojo prpura (prueba positiva),

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debe incluirse, un tubo de este agar sin inocular como control. Una prueba positiva est dada por el uso de la urea generando amoniaco produciendo un cambio en la coloracin del medio a color rojo rosado, una prueba negativa no se produce cambio en la coloracin (amarillo anaranjado). Incubar 24 2h a 37C 1C. la prueba de LIA fue satisfactoria, no es necesario repetirla. Si la reaccin de LIA fue dudosa, utilizar caldo lisina descarboxilasa para la determinacin final de lisina descarboxilasa. Inocular el caldo con pequea cantidad de cultivo. Cerrar la tapa fuertemente e incubar durante a 37C 1C por 24 3h. Las especies de Salmonella dan reaccin alcalina (color prpura del medio). La prueba negativa se interpreta por un color amarillo del medio. Si el medio aparece descolorido (ni prpura, ni amarillo), agregar unas gotas de colorante prpura de bromocresol al 0.2% y leer nuevamente la reaccin. Colocar la colonia seleccionada en un tubo conteniendo 0.25mL de solucin salina, agitar para obtener una suspensin homognea. Adicionar 1 gota de tolueno y agitar. Colocar el tubo en un bao de agua a 37C 1C dejar reposar por aproximadamente 5 min. Adicionar 0.25mL del agente de deteccin de la b-galactosidasa y mezclar. Colocar nuevamente el tubo en el bao de agua a 37C 1C y dejar por 24h 3h. Examinar el tubo a intervalos de tiempo. Un color amarillo es indicativo de reaccin positiva, la cual se hace evidente en aproximadamente 20 min. Inocular un tubo conteniendo 5mL del medio triptfano/triptona con una suspensin homognea de la colonia sospechosa. Incubar a 37C 1C por 24 3h despus de la incubacin adicionar 1mL de reactivo de Kovacs. La formacin de un anillo de color rojo indica una reaccin positiva. Un anillo de color amarillo indica una reaccin negativa. Prueba de VP. Re-suspender una asada de la colonia seleccionada en un tubo estril conteniendo 3mL del medio VP. Incubar 37C 1C por 24 3h. Despus de la incubacin adicionar 2 gotas de solucin de creatinina, 3 gotas de solucin 1naftol y al final 2 gotas de solucin de KOH, agitar despus de cada reactivo. dentificacin gnero Salmonella. presuntiva del Alternativamente se pueden utilizar pruebas bioqumicas miniaturizadas o mtodos de biologa molecular disponibles en el mercado para la identificacin presuntiva de gnero Salmonella, se deber utilizar un sistema adecuado basado en el sistema bioqumico descrito en esta seccin. Estos sistemas bioqumicos debern contar con validacin y no deben ser usados como sustitutos de las pruebas serolgicas. Inocular e incubar estos sistemas de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Caldo L-lisina descarboxilasa.

Deteccin de b-galactosidasa

Prueba de Indol.

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PENDICES NORMATIVOS B y C
BACTERIA CARACTERISTICAS METODO DE CONFIRMACIN Basado en la reaccin de la coagulasa. Uso de pruebas termonucleasas y produccin de cido a partir de manitol. Para las que tiene reaccin dbil de coagulasa CARACTERISTICAS DEL METODO Permite estimar S. aureusen productos de consumo En placas de medio selectivo y diferencial. PRUEBAS AUXILIARES Catalasa Utilizacin anaerbica de Manitol Utilizacin anaerbica de Glucosa Prueba de termonucleasa INTERPRETACIN DE RESULTADOS Si al menos el 80% de las colonias tpicas seleccionadas fueron coagulasa positiva, tomar el nmero total de las colonias contadas como presuntivas de S.aureus. En otros casos, calcular el nmero de colonias presuntivas de S. aureus a partir del porcentaje obtenido de colonias coagulasa positivas confirmadas.

S. aureus.

Vulnerable a tratamientos trmicos y agentes sanitizantes Produce enterotoxinas Indicador de sanitizacin inadecuada