MANUAL DE MICROBIOLOGA

PRACTICA 7 Pruebas de diferenciacin bioqumica Introduccin. El metabolismo es toda una serie de reacciones que ocurren en los seres vivos. Estas reacciones incluyen procesos de obtencin de energa como son la composicin de mol!culas org"nicas en los quimitro#os $catabolismo% o la captacin de lu& para el caso de los #ottro#os' as como de sntesis de material celular a partir de nutrientes esenciales $anabolismo%. En el laboratorio es posible conocer las caractersticas metablicas de los microorganismos' inoculando en di#erentes medios de cultivo' con sustratos que pueden utili&ar como #uente de energa' #uente de carbono y de otros nutrientes esenciales para su crecimiento. Como se (a observado en pr"cticas anteriores' algunas bacterias y levaduras tienen caractersticas coloniales y microscpicas muy similares' lo que no permiten decidir si dos cultivos bacterianos o de levaduras mor#olgicamente similares pertenecen a una misma especie. Con algunas pruebas bioqumicas es posible su di#erenciacin e incluso su identi#icacin. Cuando el n)mero de pruebas es su#icientemente amplio.

Objetivos. Reali&ar pruebas bioqumicas en medios de cultivo para sustratos espec#icos que permitir"n demostrar actividades metablicas de bacterias y levaduras. Comprender la importancia de las pruebas bioqumicas para caracteri&acin e identi#icacin de estos organismos.

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Materiales de laboratorio por equipo Material del Equipo *Tubos con T+I $pico de #lauta% Cinta ad(esiva transparente *Tubos con ,ICerillos *Tubos con citratos de +immons $pico .ranela de .lauta% *Tubos con agar urea $pico de #lauta% *Ca/as de Petri con AA 0 Asas bacteriolgicas de punta y aro 1 mec(eros Actividad prctica. T!cnica de inoculacin en ca/as de Petri 0. +embrar por estra cru&ada 2. Incubar las ca/as en #orma invertida a *2 C durante 13435 (rs. T!cnica de inoculacin 0. 6os tubos de T+I se inocularan por estra simple en la super#icie y por picadura (asta el #ondo del tubo. 1. 6os tubos con medio ,I- se inocularan por picadura $asa recta% *. 6os tubos con citrato de +immons se inocular"n por estra simple en la super#icie. 3. los tubos de caldo de urea se inocularan 1 a * veces. 5. Incubar los tubos a *2 C durante 13435 (rs. marcador indeleble o l"pi& graso Cloro Colores

Evaluacin de actividades metablicas

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0. 7eterminar la actividad de amilasas en las ca/as de AA por el crecimiento y aparicin de &onas claras alrededor de las colonias. +i no es posible observarlas a simple vista' agregar unas gotas de lugol a las ca/as y observar la aparicin de &onas claras sobre el medio que se colorea de a&ul como indicativo de prueba positiva $8%. Comparar los resultados con la &ona de la ca/a que se de/o sin inocular. 1. En un portaob/eto (acer una suspensin en una gota de agua destilada de las colonias obtenidas en el medio AA y agregar unas gotas de pero9ido de (idrgeno al *:;. -bservar la #ormacin de burbu/as que da como positiva $8% la prueba de catalasa. *. En los tubo con ,I- es usado para la identi#icacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad' actividad de ornitina decarbo9ilasa y produccin de indol. 6a movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que di#unde mas all" de la lnea de inoculacin. 6a reaccin positiva $8% a la ornitina est" dada por un color p)rpura turbio a un p)rpura amarillento apagado. 6a reaccin negativa $4% esta dada por un color amarillo claro y brillante. El indol' es producido a partir del tripto#ano por los microorganismos que contienen la en&ima tripto#anasa. El desarrollo de <n anillo ro/o en la super#icie del medio en la capa alco(lica. luego de agregar 2 gotas de reactivo de =ovac>s' indica un resultado positivo $8%.Prueba negativa $4% no se produce color. Prueba variable o dudosa $ % un color anaran/ado en la super#icie. 3. En los tubos con T+I es usado para determinar la capacidad de un organismo de atacar un (idrato de carbono espec#ico' con produccin o no de gas' /unto con la determinacin de posible produccin de "cido sul#(drico $?1+%

?idratos de carbono

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.ermentacin de la glucosa solamente $alcalina@"cida%. <n pico de #lauta color ro/o y en la capa pro#unda amarillo .ermentacin de glucosa y lactosa $"cida@"cida% .ermentacin de peptonas $alcalina@alcalina%

Produccin de gas Aerog!nico <na sola burbu/a de gas' Aurbu/as en el medio' desdoblamiento del medio' despla&amiento completo del medio del #ondo del tubo de/ando un "rea clara' ligera muesca del medio en el costado del tubo. Anaerog!nico no (ay produccin de gas.

Produccin de ?1+ <n color negro distribuido por toda la capa pro#unda' puede o no enmascarar la acide&' un anillo negro cerca de la parte superior de la capa pro#unda. 2. Todas las pruebas en tubos deber"n interpretarse en comparacin con tubos control$sin inocular%.

Resultados

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Reportar los resultados en el cuadro' de acuerdo al siguiente convenio Bo (ay crecimiento $4%' poco crecimiento $8%' mayor crecimiento $88%' crecimiento abundante $888%. Actividad sobre sustratos $8% o $4% en caso de que no (aya actividad. Investigar los resultados bibliogra#icos de cada una de las cepas y compararlos con los obtenidos en la pr"ctica. Investigar las reacciones en&im"ticas y de color reali&adas para la evaluacin de actividades metablicas. 7e acuerdo a sus observaciones proponga el nombre de la especie que corresponde a su microorganismo.

,edio de cultivo Agar almidn $AA%

Bacteria 1

Bacteria 2

+in inocular

Crecimiento Color del medio con lugol ?idrlisis de almidn Reaccin de catalasa

Bacteria 1

Bacteria 2

+in inocular

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Caldo <rea

Crecimiento Color ?idrlisis de urea Bacteria 1 Citrato de simmons Bacteria 2 +in inocular

Crecimiento Color .ermentacin del citrato Bacteria 1 Agar (ierro triple a&)car $T+I% Bacteria 2 +in inocular

Crecimiento Cambio de color Produccin de ?1+ Produccin de gas .ermentacin del a&)car

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Bacteria 1 ,edio ,I$,ovilidad ' Indol E -rnitina% Color ,ovilidad Conversin a indol. Presencia de la ornitina descarbo9ilasa uestionario

Bacteria 2

+in inocular

del

tripto#ano

0. CCuales son las rutas bioqumicas de obtencin de energa de las bacterias aerobias' las anaerobias' las #ermentadorasDCcu"l de esta es la m"s e#icienteDCporqu!D

1. 7escriba brevemente las actividades en&im"ticas que se identi#ican en cada uno de los medios de cultivo utili&ados en esta practica. CCu"l es la reaccin bioqumica que catali&a cada una de ellasD

*. CE9plique por que se busca la presencia de precipitados de sul#uros en el #ondo del tubo T+I y no en la super#icieD

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!ic"as catolo#rficas del material biblio#rfico su#erido que se encuentran en la biblioteca de la $MAR .ic(a Bo. 17F5 C6A+I.ICACI-B 270. F*51G* ,2:7 I+AB Ttulo ,anual de ,edios de Cultivos @ Publicacin patrocinada por ,ERC= Autor Editorial Alemania E. ,ERC=' 0GG: 7escripcin *22 p. TE,A+ 0. ,ICR-AI-6-HIA 4 C<6TII-+ 4 ,AB<A6E+ J 1. ,ICR-AI-6-HIA IB7<+TRIA6 4 IB7<+TRIA K<I,IC- .AR,ACE<TICA 4 IBIE+TIHACI-B E 7E+ARR-66- J *. ,E7I-+ 7E C<6TII- HRAB<6A7-+ 4 PREPARACI-B 4 C-B+ERIACI-B Botas Incluye re#erencias bibliogr"#icas e ndice .ic(a Bo. 030F C6A+I.ICACI-B F0F.:03 ,2:7p I+AB GF54702740:4: Ttulo Pruebas bioqumicas para la identi#icacin de bacterias de importancia clnica @ Lean .. ,ac .addin' Irma 6oren&o trad. Autor ,ac .addin' Lean .. Editorial ,!9ico ,!dica Panam!ricana' 0GG: 7escripcin *:0 p. TE,A+ 0. AACTERI-6-HIA 4 6AA-RAT-RI-' REACTII-+ 7E 4 IIR<+ J 1. ,ICR--RHABI+,-+ 4 -A+ERIACI-B 4 ,AB<A6 J *. AACTERIA+ 4 I7EBTI.ICACI-B 4 6AA-RAT-RIBotas .otocopia de original

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