PRIMEROS REPORTES DE AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y HONGOS ENDOFITOS EN EL CULTIVO DE LA QUINUA (Chenopodium quinoa wild) EN BOLIVIA

Mayra Claros, Violeta Angulo, Claudia Gutirrez, Noel Ortuo

RESUMEN La mayora de las plantas naturalmente propagadas crecen en campos o en macetas, estos suelos son colonizados por las comunidades endofticas de bacterias, que abarcan una gran variedad de especies y gneros. Estas bacterias no patgenas forman relaciones con sus anfitriones: algunas beneficiosas, algunas neutras, y algunas perjudiciales. Estas asociaciones pueden aumentar el crecimiento de las plantas, acelerar el desarrollo o mejorar la resistencia al estrs ambiental. (Sturz A. V. et al, 2000). La manipulacin de las poblaciones de bacterias en el suelo y dentro de los cultivos es fundamental para que los microorganismos endfitos puedan ser utilizados en la produccin de cultivos. Se evaluaron 11 plantas de la zona altiplnica. De las cuales se obtuvieron 104 aislados. De los cuales 55 son de raz, 8 de tallo y 41 de hoja. Por lo que se concluye que es viable aislar bacterias endfitas de plantas de quinua de la zona altiplnica. Para la seleccin de las mejores bacterias endofitas promotoras de crecimiento se realizan diferentes pruebas de laboratorio. Las mejores cepas de PGPR son enviadas a invernadero y posteriormente a campo para su validacin. Las mejores cepas de PGPR son identificadas molecularmente. Palabras clave: Bacterias y hongos endofitos, organismos PGPR, quinua INTRODUCCION La mayora de las plantas naturalmente propagadas crecen en campos o en macetas, estos suelos son colonizados por las comunidades endofticas de bacterias, que abarcan una gran variedad de especies y gneros. Estas bacterias no patgenas forman relaciones con sus anfitriones: algunas beneficiosas, algunas neutras, y algunas El comensalismo y el mutualismo representan el equilibrio de las etapas de interaccin planta-microorganismo. El comensalismo proporciona beneficios para los microorganismos endfitos permitiendo el suministro de nutrientes existentes sin afectar al anfitrin. El mutualismo, por el contrario, se define como una interaccin que es beneficiosa para ambos socios. Adems de los beneficios que prev el mutualismo para los microorganismos endfitos, estos frecuentemente ayudan al crecimiento de la planta. El efecto beneficioso para la planta puede ser la mejora del suministro de nutrientes por los microorganismos endfitos. (Harrison MJ., 2005) La manipulacin de las poblaciones de bacterias y hongos en el suelo dentro de los cultivos es fundamental para que los microorganismos endfitos puedan ser utilizados en la produccin de cultivos.

Fundacin PROINPA. Casilla 4285, Cochabamba - Bolivia. E-mail: m.claros@proinpa.org; n.ortuno@proinpa.org perjudiciales. Estas asociaciones pueden aumentar el crecimiento de las plantas, acelerar el desarrollo o mejorar la resisten cia al estrs ambiental. (Sturz A. V. et al, 2000)

OBJETIVO Aislar bacterias y hongos endfitos del cultivo de la quinua (Chenopodium quinoa Wild ), para su posterior uso como promotores de crecimiento o recicladores de nutrientes para la planta. MATERIALES Y METODOS Las plantas de quinua fueron colectadas del Altiplano Sud de parcelas de produccin orgnica (figura 1).

Figura 1. Material vegetal de quinua.

Las muestras fueron transportadas en bolsas plsticas, mantenidas fras en conservadoras hasta el laboratorio, ah se almacen a 10C hasta procesarlas. Es importante disponer en laboratorio el material biolgico en muy buen estado para disminuir la probabilidad de trabajar con contaminantes generados durante el transporte y almacenamiento. El material utilizado en laboratorio fue el convencional: cmara de flujo laminar, autoclave, agua destilada, alcohol, hipoclorito de sodio, medios TSA y PDA y utensilios de vidrio y metal necesarios. Se utiliz el protocolo del manual de microbiologa de Dion et.al., 2009. RESULTADOS Y DISCUSIN Parte de los resultados son la metodologa que se tuvo que adecuar para obtener resultados satisfactorio del anlisis de endfitas en plantas de quinua, ya que no se encuentras disponibles en la literatura. Se lavaron cuidadosamente las races, tallos y hojas frescas bajo el agua del grifo, para quitarles todas las impurezas. Si los fragmentos de las races eran muy grandes, fueron cortados en segmentos de 58 cm. Para la esterilizacin superficial, el material fue sumergido durante 1 min en una solucin de etanol al 70%, en agitacin. El etanol al 70% fue eliminado y al material procesado se le agreg una solucin de hipoclorito de Na al 1,2%, dejando en agitacin por 15 min. Una vez que finaliz este tiempo, el material procesado fue lavado cuatro veces con solucin salina NaCl 0.85%.

Posteriormente, el material procesado se coloc en un mortero estril o en bolsas de alta densidad estriles (figuras 2 y 3) una vez macerado se agregan 30 mL de solucin salina NaCl 0.85% y se trat de recuperar todas las races en un matraz de 250 mL estril. Finalmente, se agreg otros 60 mL de solucin salina estril NaCl 0.85% y se realiz diluciones seriadas de 10-110-8. Se utiliz estas diluciones para cultivar las bacterias y hongos endfitas en medio TSA y PDA, respectivamente Las cajas de Petri fueron incubadas a 28C por aproximadamente 72 h.

Figura 2. Proceso de maceracin y siembra de bacterias endfitas.

Figura 3. Proceso de aislamiento de bacterias endfitas.

Una vez crecidas las colonias bacterianas se aislaron en tubos con TSA para posteriores pruebas y caracterizacin (figura 4).

Figura 4. Colonias bacterianas endfitas aisladas de: A) races B) hojas.

Se evaluaron 11 plantas de la zona altiplnica. De las cuales se obtuvieron 104 aislados de los cuales 55 de raz, 8 de tallo y 41 de hoja. Se puede concluir que es viable aislar bacterias endfitas de plantas de quinua de la zona altiplnica. Para la seleccin de las mejores bacterias endofitas promotoras de crecimiento se realizan diferentes pruebas de laboratorio. Las mejores cepas de PGPR sern enviadas a invernadero y posteriormente a campo para su validacin. Las mejores cepas de PGPR sern caracterizadas molecularmente. BIBLIOGRAFIA Harrison, MJ. 2005. Signaling in the arbuscular mycorrhizal symbiosis. Annu Rev Microbiol 2005, 59:19-42. Sturz A. V., Christie B. R. and Nowak, J. 2000. Bacterial Endophytes: Potential Role in Developing Sustainable Systems of Crop Production Critical Reviews in Plant Sciences Prince Edward Island- Canada. 19(1):130 . Dion P., Magalln P. 2009. Manual de microbiologia agricola Importancia de los microorganismos promotores de crecimiento vegetal para los pequeos productores de Bolivia, Universit Laval, Qubec, Canada. 90: 31-32.