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Efecto in vitro de diferentes concentraciones de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze, sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae.
Effect of alcoholic extract of Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze on the Corynebacterium diphtheriae viability.

ESCOBAR BOBADILLA, Luis Enrique1; CHVEZ CASTILLO, Milciades2

RESUMEN
Se determin el efecto del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae. Se utiliz frutos de C. spinosa y cultivos de C. diphtheriae proporcionados por la Coleccin Peruana de Cultivos Tipo (CPCT) de la Universidad Nacional de Trujillo. Se emple el mtodo de Kirby-Bauer en el medio de Mueller-Hinton; ensayando concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% sobre cultivos de C. diphtheriae, usando inculos estandarizados con el Nefelmetro de McFarland. Se encontr que el promedio de los dimetros de inhibicin de C. diphtheriae obtenidos con las diferentes concentraciones ensayadas varia de 34,11 a 43,55 mm. A medida que se aumenta la concentracin del extracto alcohlico de C. spinosa taya de 25% a 100%, se obtiene un mayor dimetro del halo de inhibicin de C. diphtheriae. Se determin que el extracto alcohlico de C. spinosa taya tiene actividad antibacteriana in vitro contra C. diphtheriae. Se determin que las concentraciones promedio del extracto alcohlico de taya influyen en los dimetros de los halos de inhibicin de los cultivos de C. diphtheriae. Se justifica el uso de taya en medicina tradicional en la prevencin y/o tratamiento de infecciones del tracto respiratorio superior. Palabras clave: Caesalpina spinosa, Corynebacterium diphtheriae.

ABSTRACT
The effect of alcoholic extract of Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze taya on the viability of Corynebacterium diphtheriae was determined. Fruits of C. spinosa and cultures of C. diphtheriae provided by Peruvian collection of Cultures Type (CPCT) of the National University of Trujillo. Kirby-Bauer methodology and Mueller-Hinton medium were used; trying with concentrations of 25%, 50%, 75% and 100% on cultures of C. diphtheriae, using standardized inoculum with McFarland nephelometer. It was found that the average of the diameters of the inhibition of the cultures of C. diphtheriae obtained with the different concentrations tested varies of 34,11 to 43,55 mm. As the concentration is increased of the alcoholic extract of C. spinosa taya from 25% to 100%, a greater diameter is obtained of inhibition halo of C. diphtheriae. By that in the present investigation, alcoholic extract of C. Spinosa taya has antibacterial activity in Vitro against C. diphtheriae. was determined. It was determined statistically that the average concentrations of the alcoholic extract of taya, influence in the diameters of the inhibition in cultures of C. diphtheriae. When finding that the alcoholic extract of C. spinosa taya has antibacterial effect on the growth of C. diphtheriae, the use is justified of taya in traditional medicine in the prevention and/or treatment of infections of upper respiratory tract. Key words: Caesalpina spinosa, Corynebacterium diphtheriae.

1. Bilogo Microbilogo. Universidad Nacional de Trujillo. revistamedica@ucv.edu.pe 2. Doctor en Ciencias Biolgicas. Bilogo Microbilogo, Universidad Nacional de Trujillo. revistamedica@ucv.edu.pe

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INTRODUCCIN
En el tracto respiratorio superior (nasofaringe, cavidad oral y garganta) los microorganismos viven primariamente en reas baadas con las secreciones de las membranas mucosas. Las bacterias penetran en el tracto respiratorio superior con el aire durante la respiracin, si bien la mayor parte de ellas son atrapadas en los corredores nasales y expelidas con las secreciones nasales. Los organismos que con ms frecuencia se encuentran son los estafilococos,estreptococos, bacilos diftricos y cocos gramnegativos. Las especies potencialmente patgenas como Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes y Corynebacterium diphtheriae constituyen a menudo parte de la microbiota de la nasofaringe de los individuos sanos. Estos son portadores de patgenos, pero habitualmente no adquieren la enfermedad debido a que otros microorganismos residentes compiten con xito por los recursos y limitan el crecimiento del patgeno (1). Las infecciones respiratorias agudas (IRA), ocupan el primer lugar como causa de enfermedad y muerte; siendo ms frecuente sobre todo en nios y durante la estacin fra en otoo y al comienzo de primavera (2). Las bacterias responsables de faringitis son: Streptococcus pyogenes, Corynebacterium diphtheriae, Haemophilus influenzae tipo b, Borrelia vincentii y Neisseria gonorrhoeae (3). El genero Corynebacterium, contiene una especie patgeno importante en humanos el Corynebacterium diphtheriae (4). Son bacilos grampostivos que se ordenan en palizadas o en formaciones como V o L, que semejan letras chinas (5) no forman esporas, son inmviles, aerobios o anaerobios facultativos, catalasa positivo y no son cido alcohol resistente (6). Crece bien en agar sangre, pudiendo originar pequeas zonas de hemlisis. En medios slidos con telurito forma colonias grisceas por la reduccin del telurito. En el medio de Loeffler, se desarrolla rpidamente, pudiendo detectarse en pocas horas (6). La temperatura ptima de crecimiento est entre 36 y 44C, y crece bien a 37C, con un rango de pH que oscile entre 7.5 y 8 (7). La infeccin por C. diphtheriae por lo general afecta el tracto respiratorio superior (8) siendo responsable de la difteria, que es una enfermedad que afecta fundamentalmente a nios (6). La difteria se caracteriza por el desarrollo de una membrana exudativa que recubre las amgdalas, la vula, el paladar y la pared de la faringe; si no se trata es potencialmente fatal, por el desarrollo de una obstruccin respiratoria y la liberacin de toxina en sangre que puede daar diversos rganos, incluso el corazn. (9). La difteria es una enfermedad grave cuyo diagnstico se basa en la observacin clnica. En esta eventualidad, el mdico suele solicitar un cultivo del bacilo diftrico. El microbilogo debe estar siempre preparado para buscar las colonias de aspecto tpico en los cultivos de exudado farngeo, especialmente en los pases donde es frecuente esta enfermedad (10). El factor ms importante para el xito del tratamiento de la difteria es el empleo precoz de antitoxina diftrica, que proporciona neutralizacin especfica de la exotoxina. La terapia antibitica con penicilina o eritromicina se ha mostrado eficaz para eliminar C. diphtheriae en los pacientes con enfermedad y en los portadores asintomticos (11). La Organizacin Mundial de la Salud (OMS), en su estrategia: Salud para todos en el ao 2000, reconoce la necesidad de incorporar a la salud pblica los recursos y tcnicas de la medicina tradicional. As, el medicamento natural puede contribuir a la solucin del problema de salud rural, as como aliviar del alto costo y difcil adquisicin de medicamentos hechos a base de insumos qumicos, los que han reemplazado a muchas de las antiguas y bien establecidas drogas vegetales (2, 12). Los vegetales han sido desde la antigedad un recurso al alcance del ser humano para su alimentacin y curacin de sus enfermedades, estas ltimas llamadas plantas medicinales, eran veneradas por las virtudes que se les haba reconocido, transmitindose sus propiedades curativas de generacin en generacin. Actualmente los botnicos que creen que la existencia de plantas beneficiosas para la salud no constituye una ciega casualidad, sino que fueron puestas en la creacin para bien del hombre y se recuerda que estos medios tan sencillos y naturales fueron usados por nuestros antepasados, desde hace millones de aos. Tambin hoy sabemos que el ser humano, antes de perder su fino y natural instinto, estaba dotado para aceptar con gran intuicin, entre las muchas plantas beneficiosas, aquellas que precisamente necesitaba para librarse de ciertos males. Hay que tener presente que las plantas, generalmente, no suelen tener accin especfica para una enfermedad determinada, sino que ms bien actan en el sentido general de aumentar las defensas autocurativas del organismo. Otra accin que presentan muchas plantas es favorecer la eliminacin de microorganismos perjudiciales para el cuerpo humano (13). En la actualidad las plantas son utilizadas en la medicina, pero la ciencia moderna, analizando y estudiando los efectos teraputicos de las plantas, quiere precisar, comparar y clasificar las diversas propiedades, para conocer los principios activos responsables de cortar, aliviar o curar las enfermedades. Un anlisis de esta naturaleza debe ser realizado como una accin multidisciplinaria con la intervencin de bilogos, qumicos, farmaclogos y farmacognosistas (14). Las propiedades curativas de las plantas se atribuye a la presencia de un principio activo, el cual produce un efecto fisiolgico. Un gran porcentaje de estos principios activos estn comprendidos dentro de

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los productos naturales o metabolitos que son compuestos de estructura compleja y de distribucin restringida, entre ellos: alcaloides, esteroides, terpenoides, flavonoides, aceites esenciales, gomas, resinas y taninos, que pueden encontrarse distribuidas por toda la planta o en alguna de sus partes (15). Teniendo conocimiento que nuestros antepasados han utilizado los vegetales en el tratamiento de sus enfermedades, muchos investigadores estn haciendo estudios en el laboratorio a fin de comprobar los efectos de ciertas plantas sobre los microorganismos causantes de enfermedades infecciosas que afectan al ser humano. As Rengifo y Roncal en el ao1991 (16) en sus investigaciones con extracto acuoso de hojas de Piper angustifolium matico encontraron que tiene efecto antibacteriano sobre Staphylocoocus aureus, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorhoeae y Pseudomona aeruginosa. En investigaciones realizadas por Uriol en el ao1998 (17) se encontr que la Uncaria tomentosa ua de gato tuvo efecto inhibitorio del crecimiento in vitro de cepas de Shigella flexnerii, Staphylococcus aureus y Salmonella Typhi. Asi mismo Vigo en el 2005 (18) en estudios realizados con aceites vegetales de Satureja sericeae shalgarromero encontr que ste tiene efecto inhibitorio sobre el Streptococcus hemoltico del grupo A. Tambin encontr que Klebsiella sp. fue sensible frente al aceite de Mintosthachys tomentosa mua. Moreno y Nuez en el ao1997 (19) demostraron que el aceite extrado de hojas y flores de Thymus vulgaris tomillo tiene efecto antibacteriano sobre cepas de Staphylococcus aureus mas no sobre cepas de Eschericihia coli. Santos y Villanueva en el ao 2000 (20) encontraron que el ltex de Croton baillonianus var. pachyphyllus cabe cabe posee actividad antibacteriana frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli enteropatgeno, Salmonella tiphy y Pseudomonas aeruginosa. La flora peruana es muy rica en especies a las que la medicina tradicional atribuye eficaces propiedades teraputicas, las que sin embargo an no son investigadas convenientemente, como es el caso de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze taya perteneciente a la familia de las leguminosas

(15). La tara, es una planta originaria del Per utilizada desde la poca prehispnica en la medicina folclrica o popular y en aos recientes, como materia prima en el mercado mundial de hidrocoloides alimenticios (21). Estudios realizados en nuestro pas, demuestran que en los departamentos de Cajamarca, La Libertad, Ancash, Lambayeque, Amazonas, Ayacucho, Apurimac y Hunuco; existen plantaciones silvestres del rbol comnmente llamado tara, cuyos frutos cuando estn maduros pueden contener entre 30 a 60 % de taninos, de los cuales, mediante sntesis, se puede obtener cido tnico, cido glico, cido elgico, protenas, carbohidratos, etc, los mismos que sirven como base para la elaboracin de otros productos usados en la industria farmacutica, alimentara, peletera, etc (22). La taya se encuentra en estado silvestre y posee un inmenso potencial mdico, alimenticio e industrial. Es utilizada, muy frecuentemente en la medicina tradicional para aliviar malestares de la garganta, sinusitis, infecciones vaginales, lavado de ojos inflamados; heridas crnicas, dientes cariados; dolor de estmago; diarreas; reumatismo, resfriado y como depurativo del colesterol (21). En investigaciones realizadas in vitro con extracto de Caesalpinia spinosa taya se ha demostrado que tiene actividad antimicrobiana contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella sp. y Shiguella flexnerii (23, 24). Teniendo conocimiento que Caesalpinia spinosa taya ha sido utilizada por nuestros antepasados, sobre todo en las comunidades rurales como terapia en la curacin de infecciones del tracto respiratorio superior , esto motiv al autor del presente trabajo a investigar el efecto del extracto de Caesalpinia spinosa taya sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae, agente etiolgico de la difteria, a fin de proporcionar una alternativa en la prevencin y/o tratamiento de la difteria mediante el uso de medicamentos antibacterianos extrados de plantas, sabiendo que estos son ms econmicos y estn al alcance de las clases populares. Por las consideraciones anteriormente expuestas, el presente estudio tuvo como objetivo determinar el efecto in vitro de diferentes concentraciones del extracto de Caesalpinia spinosa taya sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae.

MATERIAL Y MTODOS
1.- Material biolgico Frutos de C. spinosa taya, recolectados de cultivos procedentes de la provincia de Snchez Carrin del departamento de la Libertad e identificados en el Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo. Cultivos de C. diphtheriae, proporcionados por la Coleccin Peruana de Cultivos Tipo (CPCT) de la Universidad Nacional de Trujillo. 2.- Mtodos y Tcnicas 2.1. Preparacin de la muestra Despus de la recoleccin, se seleccionaron los frutos maduros y no lesionados de C. spinosa taya, luego fueron limpiados, desinfectados con alcohol y secados a temperatura no mayor de 40C. Seguidamente los frutos son molidos

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hasta obtener un polvo semifino por tamizaje. 2.2. Obtencin del extracto Del material pulverizado, se pes 50 g., se coloc en un matraz con 100 mL de solucin alcohlica al 70%, se dej reposar por 10 das a temperatura ambiente agitando con frecuencia (3 veces por da aproximadamente). Luego se filtr y el filtrado se desec en estufa para eliminar el exceso de alcohol. Este producto desecado obtenido es el extracto alcohlico seco de taya. 2.3 Identificacin de los fitoconstituyentes Se realiz el anlisis de los fitoconstituyentes del extracto de C. spinosa taya segn la marcha fitoqumica propuesta por Olga Lock de Ugaz (Anexo 2). 2.4 Preparacin de las concentraciones A partir del extracto alcohlico seco de taya se prepararon concentraciones del, 25%, 50%, 75% y 100% las que fueron guardadas en frascos color mbar estriles y conservadas en refrigeracin hasta el momento que dichas concentraciones sean colocados en discos de papel de filtro para probar su efecto sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae. 2.5 Ensayo microbiolgico 2.5.1. Preparacin y estandarizacin del inculo A partir de cultivos puros en suero coagulado de Loeffler de C. diphtheriae (24horas) se hicieron suspensiones en solucin salina fisiolgica estril hasta alcanzar la densidad bacteriana equivalente a la turbidez del tubo N 0.5 del Nefelmetro de Mac Farland. 2.5.2. Preparacin de los discos Se emplearon discos de papel de filtro Whatman de 6,35 mm de dimetro los que fueron colocados en una placa de Petri, y esterilizados en autoclave a 121C por 15 minutos a 1 atm de presin, luego fueron secados en estufa a 37C por 10 horas. A estos discos se les agreg con una micropipeta 50 uL de las diferentes concentraciones del extracto alcohlico de taya en el momento de probar

su efecto del extracto sobre la viabilidad de C. diphtheriae 2.5.3. Sensibilidad de Corynebacterium diphtheriae a diferentes concentraciones del extracto de Caesalpinia spinosa taya La sensibilidad fue determinada en 18 cultivos de Corynebacterium diphtheriae mediante el mtodo de Kirby-Bauer, segn la OMS (10). La suspensin bacteriana que viene a ser el inculo fue estandarizado y comparado con el tubo N 0,5 del Nefelmetro de McFarland, luego se introdujo un hisopo estril en dicho inculo para sembrarlo en toda la superficie de la placa con medio Muller-Hinton; se tap la placa y se dej secar el inculo unos minutos a temperatura ambiente, despus se colocaron los discos con las distintas concentraciones ensayadas del extracto alcohlico de taya. Posteriormente estas placas fueron incubadas a 35C por 18 horas. Al cabo de este tiempo se procedi a hacer la lectura midiendo los dimetros de los halos obtenidos con las diferentes concentraciones del extracto (Anexo 4, Anexo 5). Paralelamente usando el mismo mtodo de Kirby Bauer y en las mismas condiciones se procedi a probar la sensibilidad de Corynebacterium diphtheriae a penicilina y eritromicina (antibiticos de eleccin para el tratamiento de la difteria) a fin de determinar los dimetros de los halos de inhibicin de dichos antibiticos (Anexo 3, Anexo 6) y tener una referencia de comparacin con los dimetros de las diferentes concentraciones de extracto de taya; no obstante que los antibiticos son qumicamente puros y el extracto no esta purificado . 2.6. Anlisis Estadstico Se aplic anlisis de varianza para determinar si las concentraciones promedio del extracto alcohlico de taya influyen en los dimetros de los halos de inhibicin en los cultivos de C. diphtheriae.

RESULTADOS
Los dimetros de los halos de inhibicin de 18 cultivos de Corynebacterium diphtheriae frente a cuatro concentraciones (25%, 50%, 75% y 100%) de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze taya se presentan en la tabla 1: * El promedio de los dimetro de los halos de inhibicin de los cultivos de Corynebacterium diphtheriae obtenidos fue desde 34,11 a 43,55 mm. * Los mayores dimetros de los halos de inhibicin de los cultivos estudiados fueron obtenidos con la concentracin al 100%, mientras que los menores dimetros fueron obtenidos con la concentracin al 25%. Las diferentes concentraciones del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya presentaron halos de inhibicin de C. diphtheriae de mayor dimetro que los obtenidos con penicilina y eritromicina, antibiticos que se ensayaron como referencia de comparacin (tabla 2 ).

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Tabla 1: Dimetro de los halos de inhibicin de 18 cultivos de Corynebacterium diphtheriae frente a cuatro concentraciones de extracto alcohlico de Caesalipnia spinosa taya
Dimetro de la zona de inhibicin (mm) a diferentes concentraciones de extracto alcohlico de taya 25% 50% 75% 100% 35 33 36 33 34 35 34 35 34 33 35 33 34 34 34 35 33 34 34,11 40 38 39 38 38 41 40 39 38 38 39 37 38 39 39 40 37 38 38,66 42 41 43 41 41 42, 43 42 40 40 42 40 41 42 41 42 40 41 41,33 44 42 44 43 43 44 45 44 43 43 44 43 44 44 44 45 42 43 43,55

Cultivos de C. diphtheraie 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

X
Leyenda: X : Promedio

46 44 Dimetro del halo (m.m) 42 40 38 36 34 32 25 50 75 Concentracin de caesalpinia spinosa (%) 100

Figura 1: Grafica de las longitudes de los dimetros de los halos de inhibicin en milmetros de Corynebacterium diphtheriae versus concentraciones de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze.
Nota: Los crculos azules representan a los promedios de los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae

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Tabla 2. Dimetro de los halos de inhibicin de 18 cultivos de Corynebacterium diphtheriae frente a penicilina y eritromicina
Cultivos de Corynebacterium diphtheriae 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Dimetro de la zona de inhibicin (mm) Penicilina (oxacilina) 10 IU 20,0 22,0 21,0 23,0 24,0 25,0 22,0 24,0 20,0 22,0 21,0 23,0 22,0 21,0 23,0 22,0 21,0 20,0 22,0 Eritromicina 15 g 21,0 23,0 22,0 21,0 24,0 25,0 26,0 25,0 23,0 24,0 23,0 25,0 24,0 22,0 25,0 24,0 24,0 23,0 23,5

X Leyenda: X : Promedio

45

40 Dimetro del halo (m.m)

35

30

25

20 10 15 25 Penicilina (IU) Eritromicina(ug) 50 75 100 Concentraciones de caesalpinia spinosa(%)

Figura 2: Grafica de las longitudes de los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae versus concentraciones de Penicilina, Eritromicina y concentraciones de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze.
Nota: Los crculos azules representan a los promedios de los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae

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DISCUSIN
En nuestro pas, desde pocas remotas y ancestrales, se han utilizado con fines teraputicos las diversas plantas medicinales que se cultivan en nuestro mbito territorial. En estudios realizados con drogas vegetales para comprobar una eventual actividad antimicrobiana, se emplean mtodos de difusin en placa con discos o mtodo de diluciones en caldo o en agar. El mtodo de difusin en placa consiste en impregnar discos de papel de filtro de 6,35 mm de dimetro con 50 uL del extracto vegetal, se aplican los discos en el cultivo y se incuba a 35C por 24 horas. Al hacer la lectura, en caso de actividad, se observa halos de inhibicin que se miden en mm. Si el halo dio un dimetro mayor a 9 mm. el resultado es positivo, pero si el halo dio un dimetro entre 6 a 9 mm. la actividad se considera intermedia o moderada, y si el halo fue inferior a 6 mm. se considera sin actividad o negativo (25). Asimismo en la presente investigacin, el extracto de Caesalpinia spinosa probado por el mtodo de difusin en discos impregnados con 50 uL del extracto se obtuvo halos muy superiores a 9 mm y por lo tanto se puede decir que posee actividad antimicrobiana. En la presente investigacin se ha determinado el efecto de Caesalpinia spinosa taya sobre la viablidad de 18 cultivos de Corynebacterium diphtheriae encontrndose que tiene actividad antibacteriana in Vitro sobre dichos cultivos. En esta investigacin se encontr (Tabla 1) que a una concentracin del 25% del extracto de Caesalpinia spinosa taya, se obtuvo halos de inhibicin del Corynebacterium diphtheriae que comprendan entre 33 a 36 mm. de dimetro, mientras que a una concentracin de 50% se obtuvo halos de inhibicin de 37 a 41 mm de dimetro, a la concentracin de 75% se obtuvieron halos de inhibicin de 40 a 43mm de dimetro, en tanto que a la concentracin del 100% se obtuvo halos de inhibicin de 42 a 45 mm de dimetro. Estadsticamente se determin que si hay influencia entre la concentracin del extracto y los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae. En investigaciones realizadas por Youngken en el ao1992 (26) se encontr que los taninos son metabolitos que se encuentran en diferentes partes de la planta. Estos son solubles en agua, etanol, acetona; otorga resistencia a la planta contra parsitos y para el hombre es til por su actividad farmacolgica como antihemorrgico local, antidiarreico y antibacteriano, ya que al combinarse con las protenas de la membrana celular de las bacterias, las desnaturalizan. Los flavonoides son otros principios activos encontrados en el estudio fitoqumico del extracto de taya. Estos son pigmentos que derivan de un ncleo bsico denominado flacona, es uno de los grupos ms numerosos y ampliamente distribuidos dentro de los constituyentes naturales de las plantas, conocidos tambin como antoxantinas. Se conocen alrededor de 90 clases de flavonoides, todos contienen quince tomos de carbono en su ncleo bsico, suelen encontrarse bajo la forma de glicsidos con una o tres unidades de azcar, que son solubles en agua, etanol y otros disolventes orgnicos. Los flavonoides tienen accin farmacolgica como dilatadores coronarios, espasmolitica, antihepatxica, estrgeno, diurtica, y actividad antibacteriana (27) Estos resultados concuerdan con los anteriores trabajos realizados con Caesalpinia spinosa taya, as Lpez y col. en el ao 1998 (28) encuentran que la planta de Caesalpinia spinosa taya tiene diferente accin antimicrobiana frente a B. subtilis, S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, C. albicans, Penicillum sp. y Aspergillus sp. Asimismo en otra investigacin realizada por De la Cruz en el ao 2006 (29 ) sobre el efecto del extracto de Caesalpinia spinosa taya sobre la viabilidad de Streptococcus hemoltico se demostr actividad antibacteriana sobre dicho germen. En la presente investigacin se encontr actividad antibacteriana del extracto de Caesalpinia spinosa sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae. En el trabajo de investigacin realizado por De la Cruz en el ao 2006 (29) se encontr que la actividad antibacteriana del extracto de Caesalpinia spinosa frente a estreptococo hemoltico aumenta a medida que se eleva (25% a 100%) la concentracin del extracto. En forma similar en el presente trabajo se hall que los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae fueron mayores a medida que se aument (del 25% a 100%) la concentracin del extracto. En la presente investigacin al encontrar amplios halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae con dimetro promedio entre 33 a 43 mm, se decidi comparar los antibiticos con penicilina y eritromicina que generalmente se usa para tratar enfermedades por Corynebacterium diphtheriae, encontrandose que los halos obtenidos por el extracto de Caesalpinia spinosa fueron mayores que los obtenidos por los antibiticos mencionados. Al encontrar que el extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya tiene efecto antibacteriano sobre el crecimiento de Corynebacterium diphtheriae, se justificara el uso de infusin de taya en medicina tradicional en la prevencin y/o tratamiento de infecciones del tracto respiratorio superior.

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CONCLUSIONES
1. El extracto alcohlico del fruto de Caesalpinia spinosa taya tiene actividad antibacteriana i n v i t r o c o n t ra C o r y n e b a c t e r i u m diphtheriae 2. A medida que se aumenta la concentracin del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya (de 25% a 100%) se obtiene un mayor dimetro del halo de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae 3. Los dimetros de los halos de inhibicin de Corynebacterium diphtheriae obtenidos con las diferentes concentraciones del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya son de mayor dimetro que los obtenidos con penicilina y eritromicina.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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RECIBIDO: 14.01.2008

ACEPTADO: 29.02.2008

Pgina

Rev. Med. Vallejiana. Vol. 5 N 1

Escobar L, Chvez M.

ANEXO 1
Anlisis de varianza de los dimetros de halo de inhibicin en funcin de las diferentes concentraciones de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya . Fuente de Variacin Tratamientos Error Total Suma de cuadrados 891,278 62,222 953,500 Grados de libertad 3 68 71 Cuadrados medios 297,093 0,915

Fc 324,68

P 0.000

Nivel de significancia: 1% Prueba de hiptesis para determinar las diferencias significativas entre las diferentes concentraciones de extracto alcohlico de C. spinosa taya a. Planteamiento de la hiptesis: Ho: Las concentraciones promedio de extracto alcohlico de taya no influyen en los dimetros de los halos de inhibicin en los cultivos de C .diphtheriae H1: Las concentraciones promedio del extracto alcohlico de taya si influyen en los dimetros de los halos de inhibicin en los cultivos de C. diphtheriae b. Discusin: Si P < (nivel de significancia) se Rechaza la hiptesis nula Ho c. Decisin: Como Fc = 324,68 es muy alto adems P lo confirma siendo menor que el nivel de significacin 1% o 0.01 entonces se rechaza la Ho implicando aceptar la H1. d. Conclusin : Las concentraciones promedio del extracto alcohlico de taya influyen en los dimetros de los halos de inhibicin en los cultivos de C. diphtheriae

ANEXO 2
Estudio fitoqumico del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya Extracto Metabolito (Fitoconstituyentes) Esteroles Quinonas Flavonoides Taninos Alcaloides Alcaloides Esteroles Alcaloides Taninos Taninos Flavonoides Flavonoides Taninos Taninos Leucoantocianidinas Reaccin de Identificacin Resultado

Diclorometano Metanlica

Acuoso cido

Acuoso

Liberman Bortranger Shinoda Gelatina Mayer Draggendorf Liberman Mayer Tricloruro ferrico Gelatina Shinoda Shinoda Gelatina Tricloruro ferrico Rosenheim

+ +++ +++ +++ + + +++ +++ -

Efecto in vitro de diferentes concentraciones de extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa ...

Pgina

ANEXO 3

ANEXO 4

Figura 4. Crecimiento de Corynebacterium diphtheriae en medio de Mueller- Hinton (Testigo)

Figura 5. Ensayo antimicrobiano del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya a concentracines del 25% y 50% sobre el crecimiento de Corynebacterium diphtheriae

ANEXO 5

ANEXO 6

Figura 6. Ensayo antimicrobiano del extracto alcohlico de Caesalpinia spinosa taya a concentraciones de 75% y 100% sobre el crecimiento de Corynebacterium diphtheriae

Figura 7. Ensayo antimicrobiano sobre el crecimiento de Corynebacterium diphtheriae frente a penicilina (10 IU) y eritromicina (15 g ).