MTODOS DE SEPARACIN CROMATROGRAFIA DE CAPA DELGADA Y COLUMNA

Mayra A. Mora 1034311 mormayra17@hotmail.com Joan Stiven Astudillo Valencia 1036719 joan_sav93@hotmail.com Universidad del Valle, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Departamento de Qumica, Cali-Colombia. Fecha de realizacin: 30 septiembre/ 2013. Fecha de entrega: 07 septiembre/ 2013. 1. METODOLOGA EXPERIMENTAL Para la cromatografa de columna se pesaron 4.18g de gel de slice de 60 angstroms de tamao de poro de 70 a 230 mesh y se pas a humedecer con 40.0mL de etanol dentro de la columna previamente acordonada con algodn (ver fig.1). Se rotularon 3 tubos de ensayo los que se ubicaron de modo que fuese sencillo recoger los volmenes que pasen a travs de la columna. El volumen inicial de etanol que pasa por la columna se recogi (tubo #1) y se registr, se pas a disolver 3 gotas de mezclas de tintes en 5mL de etanol de los que se recogieron volmenes de fluorescena (tubo #2), luego se llen de nuevo la columna de cromatografa con agua, de la que se recogi un volumen (tubo #3) y se registr.

Fig. 1. Montaje de cromatografa de columna.

Para la cromatografa de capa delgada se tomaron dos beakers de 20.0mL junto con dos vidrios reloj medianos, estos se llenaron con aproximadamente 3.05.0mL de dos soluciones de elusin de metanol-agua en proporciones 1:10 y 10:1, se tomaron 2 placas de 2x4cm (ver fig.2) para cromatografa de capa delgada, y se compar una solucin de mezcla de tintes junto con una solucin de azul de metileno. Se registraron los valores de la distancia recorrida por los puntos en la placa.

Figura 4. Azul de metileno

Fig. 2. Montaje de cromatografa de placas delgadas.

2. CALCULOS Y RESULTADOS
Tabla1. Distancia recorrida por la el azul de metileno (cromatografa de capa delgada).

Figura 5. Fluorescena

Azul de metileno 10:1 (Etanol-Agua) 1:10 (Etanol-Agua)

Distancia recorrida (0.1cm) 0 0

Tabla 2. Distancia recorrida por la mezcla de tintes (cromatografa de capa delgada).

Mezcla de Tintes 10:1 (Etanol-Agua) 1:10 (Etanol-Agua)

Distancia recorrida (0.1cm) 4,9 4.8

Clculos de Rf para el azul de metileno en la relacin 10:1 y 1:10 metanol-agua. 3. DISCUSIN DE RESULTADOS En la prctica se realizaron cromatografa en columna (ver fig.1) y cromatografa de capa delgada (ver fig. 2). Se debe resaltar que los equilibrios en los que se basan los dos tipos de cromatografa son idnticos, y que la teora desarrollada para la cromatografa en columna se adapta tambin fcilmente a la cromatografa de capa delgada. [1] La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos la retencin y el desplazamiento.

Tabla 3. Volmenes recogidos en la cromatografa de columna.

Tubo de ensayo #1 Metanol #2 Fluorescena #3 Agua

Volumen recogido (0.1) 18,5 8,1 15,0

Figura 3. Gel de slice

a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte slido. b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas. [2] En la cromatografa en columna, un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a travs de la cual hace pasar la fase mvil. Se realiz el montaje indicado en la metodologa, se hizo pasar disolvente a travs de la fase estacionaria de forma constante por aproximadamente 40-45 minutos para lograr que la fase estacionaria se compactara y no quedasen burbujas de aire ni partes secas. El adsorbente o fase estacionaria ms utilizada es gel de slice aunque tambin se emplea almina activada. En el caso del gel de slice la interaccin se establece entre los grupos Si-OH y Si-OSi (ver fig.3), y los grupos funcionales polares de los compuestos orgnicos. La fase mvil est constituida por un disolvente en el que los componentes de la mezcla deben ser al menos parcialmente solubles, y dependiendo a la polaridad del solvente, as mismo la facilidad de separacin de la mezcla. Se tuvo cuidado de dejar el nivel del disolvente por encima del nivel de la fase estacionaria. Posteriormente se adiciono una mezcla de tintes que se disolvi en 5mL de etanol. Se abri la llave de la columna y se coloc un tubo de ensayo con rotulo 1, en el cual se recogi la fase mvil (etanol, 18,5mL). En un segundo tubo de ensayo se recogi la fluorescena (8,1mL). En un tercer tubo de ensayo se recogi la fase intermedia entre la fluorescena y el azul de metileno (agua 15,0mL). Un cuarto tubo de ensayo estaba destinado para recoger el azul de metileno, pero este no cedi a pesar de que se cambi de disolvente

(agua) y se aplic una presin por medio de una jeringa. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases (La velocidad de elucin de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase mvil y se puede utilizar un gradiente de polaridad aumentando con el tiempo la proporcin del disolvente ms polar, en este caso agua). Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. [3] La retencin que ocurre del soluto en la fase estacionaria, se debe generalmente a la diferencia de polaridades entre las fases estacionaria y la mvil, promoviendo que el soluto se reparta entre ellas segn su coeficiente de distribucin. De esta manera, al separarse una mezcla que contenga solutos con polaridad distinta, y por lo mismo coeficientes de distribucin distintos, la retencin ser diferente para cada uno. Como las fuerzas de atraccin de cada compuesto con la fase estacionaria son distintas, estos fluyen a diferentes velocidades, los menos atrados eluyen primero.

El azul de metileno es un compuesto heterocclico aromtico con formula molecular C16H18N3SCI, debido a que es una sal y posee una estructura polar (ver fig.4) esta tiene mucha afinidad con la estructura que conforma la fase estacionaria (gel de slice, ver fig.3), de hecho es por este motivo que no cedi a travs de esta. Por el contrario, la estructura de la fluorescena (ver fig.5) aunque tambin tiene afinidad con la fase estacionaria, al disolverse no contiene iones, lo que hace que fluya ms fcilmente. En la prctica se realiz una cromatografa de capa delgada, en donde se utiliz una capa uniforme de gel de slice sostenida en una placa de aluminio, y se colocaron 2 manchas en la base de la placa (de tal forma que no tocara el disolvente), una de azul de metileno y la otra de una mezcla de ambos. Se coloc la placa en un vaso de precipitado que contena una mezcla de etanol/agua en proporciones 10:1, se tap el vaso con un vidrio reloj con el objetivo de saturar el medio de la placa con el vapor del disolvente y obtener un mejor resultado, y se registraron las distancias recorridas por los compuestos (ver Tabla 1) debido al desplazamiento del disolvente; Se realiz nuevamente otra cromatografa de capa delgada cambiando las proporciones metanolagua 1:10 (ver Tabla 2). Los compuestos ascendieron a diferentes velocidades, dependiendo de la relacin del eluyente (etanol/agua), por medio de las distancias recorridas se calcul el valor de Rf, que representa la movilidad relativa de cada compuesto, este depende de la polaridad en la que se disuelve los diferentes tipos de compuestos, en la practica la solucin

de metileno recorri una distancia de 0,1cm en el eluyente de proporciones 1:10 metanol-agua para un Rf de 2,1 x 10-2 del cual se concluy que el medio en el que se mueve es ms polar lo que permite la dilucin del azul de metileno, en teora si se realizara la misma practica en un medio ms polar este tendra mayor facilidad a la hora de recorrer la placa delgada cromatogrfica. 4. PREGUNTAS 1. Qu es la preparativa?

cromatografa

Este tipo de cromatografa consiste en placas de gel de slice de 1-2mm de espesor sobre un soporte de vidrio. Se utiliza para la separacin y aislamiento de los compuestos de una mezcla en cantidades comprendidas entre 100200mg. En la superficie del adsorbente (gel de slice), mediante una pipeta Pasteur, se traza una lnea continua con la muestra disuelta y se introduce la placa en posicin vertical en una cubeta. Durante la elucin debe permanecer tapada para evitar la evaporacin del disolvente. Una vez se han separado los productos que componen la muestra, se marca con una cuchilla el contorno del compuesto a aislar y con ayuda de una esptula se desprende el soporte de vidrio el gel de slice con el compuesto adsorbido. Una vez transferido a un Erlenmeyer se aade un disolvente en el cual sea soluble el producto, se filtra el gel de slice y una vez eliminado el disolvente tenemos el producto puro. [4] 2. En Cromatografa de columna se emplea un instrumento conocido como rota-evaporador, que permite extraer el disolvente empleado tras la elucin del compuesto de

inters. Explique en qu consiste su funcionamiento e ilustre mediante grficos. Un evaporador rotatorio o ROTAVAPOR, es un dispositivo que se utiliza en laboratorios de qumica para la eliminacin eficiente y suave de disolventes en sustancias a travs de la evaporacin. Cuando se hace referencia en la literatura de investigacin qumica, la descripcin de la utilizacin de esta tcnica y los equipos pueden incluir la frase "rotavapor", aunque el uso es a menudo bastante marcado por el lenguaje (por ejemplo, "la muestra se evapor a presin reducida").Los rotavapores tambin se utilizan en la cocina molecular para la preparacin de destilados y extractos. [5]

La introduccin de vapores de yodo permite la reaccin de este con molculas orgnicas formando complejos de color marrn. Las lmparas de luz UV permiten que muestras que absorben luz sean capaces de ser visibles para el anlisis. Otro revelador ms selectivo es la Nihidrina, que reacciona con aminocidos. 5. CONCLUSIONES Por medio de la movilidad relativa (Rf) se puede deducir cual es el mejor disolvente para ser utilizado en la cromatografa de columna para obtener una ptima separacin. La cromatografa de columna es un mtodo eficiente al momento de separar sustancias orgnicas. Aunque sea un mtodo poco eficiente de tiempo, permite muy bien realizar las separaciones de compuestos orgnicos.[3]

6. REFERENCIAS [1] Skoog; Holler; Nieman; Principios de anlisis instrumental; 5ta ed.; Editorial Mc Graw Hill. Pp. 731-732 [2] Tecnicas cromatografcas; Facultad de qumica analtica instrumental II; Universidad autnoma de Mexico;Pp. 2-4 [3] Villegas C. Wilbert A; Anlisis Ultravioleta-visible. La Teora Y la Prctica en El Ejercicio; 1er ed.; Universidad Autnoma de Yucatn; 2006; Secciones 3-1, 3-2, 3-6, 3-7, 3-9. [4] Introduccin a la cromatografa; Universidad de Valencia; Open Course Ware; 2011; Disponible en http://ocw.uv.es/ocw-formaciopermanent/2011-1-35_Manual.pdf (Consultada 3 de octubre)

Figura 6. Rota-vapor.

3. En la cromatografa de capa delgada se emplean diversos mtodos para el revelado de placas por exposicin, indique brevemente en qu casos se emplea cada uno de estos agentes reveladores. Los agentes reveladores son compuestos cuya funcin es mostrar claramente al analista el recorrido que realiza la muestra a travs de la capa.

[5] Equipos y Laboratorios de Colombia; Rotavapor; 2011 Diponible en: http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/ contenidos_mo.php?it=3081 (Consultado el 4 de octubre)

Anexos

Lamina de cromatografa de capa delgada, metanol-agua 10:1.

Lamina de cromatografa de capa delgada, metanol-agua 1:10.