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PRACTICA N 1 EXAMEN COPROPARASITOLOGICO INTRODUCCIN: Este examen es un estudio de materia fecal, indicado en sospechas de infestaciones por parsitos, utilizando

diferentes tcnicas y posterior observacin microscpica, se pueden observar formas parasitarias de quistes o huevos. Para ello se debe recolectar muestras de materia fecal de 3 a 5 das consecutivos en dos frascos: * 1 frasco de boca ancha con formol al 5%. * 1 frasco sin conservantes (muestras en fresco) para detectar la presencia de protozoarios. Por Ej. Giardias y Coccidios. Rutinariamente se recomienda, cada 4 a 6 meses, se debe realizar un anlisis de materia fecal y desparasitar basndose en los resultados. OBJETIVO: Que el alumno aprenda a realizar TODOS los mtodos ms utilizados en un laboratorio. Tambin que identifique los huevecillos, larvas, quistes y trofozoitos de los parsitos a observar. MATERIAL: Segn sea el mtodo a realizar... EXAMEN COPROPARASITOLOGICO DIRECTO: Es un mtodo que es muy fcil de realizar y que nos ayudar a encontrar huevecillos, trofozoitos, larvas y quistes de helmintos y protozoarios. MATERIAL: REACTIVOS: Guantes Solucin salina al 0.9 % Cubre bocas Solucin de Yodo Lugol Porta objetos Cubre objetos Tubos de ensayo Aplicadores Pipeta Pasteur Frasco recolector EQUIPO: BIOLGICO: Microscopio Muestra fecal TCNICA: 1

Se toma un fragmento de materia fecal de aproximadamente 1mm de dimetro con el aplicador. Se lleva a un porta, el cual contendr una gota de solucin salina o yodo lugol. Se emulsiona perfectamente, se protege con un cubre y se observa al microscopio. Si la muestra tiene moco con sangre se realiza una toma igual del sitio. MTODO DE KATO O VERDE DE MALAQUITA: Este es un mtodo de frotis grueso til para diagnosticar helmintiasis y adems cuantificar la presencia de huevecillos. En este mtodo el reactivo que se utiliza es el verde de malaquita. MATERIAL: REACTIVOS: Microscopio Verde de malaquita al 3% Porta objetos Glicerina pura Cubre objetos Agua destilada Papel celofn TCNICA: Se pone un da antes de la prctica cuadros de papel celofn en la sustancia de verde de malaquita. Se pone un frotis y se coloca en el cuadro de papel celofn sobre el mismo y se deja reposar durante 1 hora. Posteriormente se observa a 10X y 40X METODO DE FAUST: Mtodo de concentracin de materia fecal para la bsqueda de parsitos o estudio de quistes, huevecillos o larvas. Se toma en cuenta el peso especfico de estos para hacerlo notar o sedimentar. MATERIAL: REACTIVOS: Microscopio Agua Cubre objetos Sulfato de zinc Porta objetos Yodo lugol Asas bacteriolgicas Mechero de Bunsen Trpie Tela de alambre Vaso de precipitados Agitador 2

Tubos de ensayo Centrifugadora Embudo TCNICA: Se hace una suspensin homognea con 2g de materia fecal en un vaso de precipitados y se colocan 10ml de agua Se pasa a travs de una gasa colocada en un embudo recolectando la suspensin directamente en un tubo. Se centrfugan los tubos a 2500 R.P.M. y se decanta el sobrenadante y se resuspende con agua agitando con el aplicador, se centrfuga nuevamente y se vuelve a decantar hasta que aparezca totalmente transparente. Se decanta nuevamente y se le agregan 5ml de Sulfato de Zinc, se homogeniza nuevamente. Se centrfuga a 2500 R.P.M. y con el asa flameada se recolecta el sobrenadante y se coloca en el porta, se le agrega yodo lugol y se le coloca el cubre. Se observa a 10X y 40X. METODO DE RITCHIE: Es un mtodo de concentracin fecal muy parecido al de Faust, solo que esta vez se sedimentar en el fondo nuestra materia fecal a examinar, y es til para encontrar huevecillos, quistes y trofozoitos muy pesados. MATERIAL: REACTIVOS: Microscopio Solucin Salina fisiolgica Cubre objetos Formaldehdo Porta objetos Yodo lugol Pipetas Pasteur ter Etlico Vaso de precipitados Agitador Tubos de ensayo Centrifugadora Embudo TCNICA: Se pesan 2g de materia fecal y se hace una mezcla homognea, en un vaso de precipitados con 10ml de agua. Se hace pasar a travs de un embudo (con un gasa) a un tubo de ensayo. Se centrfugan los tubos a 2500 R.P.M. y se decanta la muestra, se le agregan 7ml de solucin salina y se vuelve a centrifugar hasta que el lquido sea transparente. Se decanta nuevamente y esta vez se le agregan 5ml de formaldehdo y se homogeniza, se le agregan 2ml de ter etlico y se centrfuga nuevamente. Al final se observan 4 capas. 3

METODO DE AMIBA EN FRESCO: Es un mtodo, sencillo de realizar y que nos ayudar en la bsqueda de protozoarios, as como sus quistes y trofozoitos. MATERIAL: REACTIVOS: Mechero de Bunsen Yodo Lugol Trpie Tela de alambre Vaso de precipitados Tubos de ensayo Pinzas para tubo de ensayo Termmetro TCNICA: Se colocan aproximadamente 1g de materia fecal dentro de un tubo de ensayo. Se le agrega agua al vaso de precipitados y se calienta con el mechero, se deja de calentar hasta que tenga una temperatura de 37 C. Se coloca el tubo dentro del vaso de precipitados con ayuda de las pinzas, evitando que se introduzca agua dentro del mismo y se deja reposar 5 minutos. Se procede a observarlo al microscopio a 10X y 40X. INVESTIGACIONES: PARASITO: Parsito, cualquier organismo que vive sobre o dentro de otro organismo vivo, del que obtiene parte o todos sus nutrientes, sin dar ninguna compensacin a cambio al hospedador. En muchos casos, los parsitos daan o causan enfermedades al organismo hospedante. Ciertos parsitos como los piojos, que habitan sobre la superficie del que los hospeda, se denominan ectoparsitos. Los que viven en el interior, como por ejemplo los nematodos parsitos, se conocen como endoparsitos. Los parsitos permanentes pasan la mayor parte de su ciclo vital dentro o sobre el organismo al que parasitan. Los parsitos temporales viven durante un breve periodo en el husped, y son organismos de vida libre durante el resto de su ciclo vital. Los parsitos que no pueden sobrevivir sin el husped, se llaman parsitos obligados. Los parsitos facultativos son aquellos que pueden alimentarse tanto de seres vivos como de materia muerta. Los parsitos heteroicos, como las duelas del hgado, necesitan alojarse en animales diferentes en cada fase de su ciclo vital. Los parsitos autoicos, como las lombrices intestinales, pasan los estadios parsitos de su ciclo vital en un nico husped. La ciencia que estudia a los parsitos se denomina parasitologa. NEMATODOS: Gusano cilndrico, tambin nematodo, es el nombre comn de cualquier miembro de un filo de gusanos no segmentados, que pueden ser terrestres, de agua dulce o marinos. Los gusanos cilndricos estn distribuidos por casi todo el mundo y son muy numerosos en las capas superficiales del suelo. Muchos son dainos para la economa y para la salud, ya que viven como parsitos de plantas y animales, incluidos los seres humanos. Las infecciones por gusanos cilndricos son frecuentes y normalmente pasan inadvertidas; sin embargo, algunas especies causan enfermedades graves.

Estos gusanos son animales cilndricos, alargados, con una organizacin simple que consiste en un intestino interior y una pared muscular exterior, separadas por una cavidad llamada pseudocele, llena de lquido. La pared exterior segrega una cutcula elstica que el animal muda cuatro veces durante su vida. Tienen una longitud que vara desde lo microscpico hasta 10 cm. La mayora tienen sexos separados y la fecundacin es interna. Las cras se parecen a los individuos adultos y se desarrollan sin metamorfosis. PLATELMINTO: Gusano plano, tambin platelminto, nombre comn de un grupo de animales de cuerpo blando, por lo general parsitos. Son los animales ms sencillos entre los que poseen cabeza. Presentan simetra bilateral y son un tanto aplanados dorsoventralmente. La mayora son alargados. El filo al que pertenecen los gusanos planos o platelmintos comprende: las tenias, que en su fase adulta son parsitos del tracto digestivo de los animales; las duelas, que parasitan diversos rganos de distintos animales; y los gusanos planos de vida libre. Los gusanos planos de vida libre se encuentran en prcticamente todos los medios y as, se localizan tanto formas terrestres como marinas o de agua dulce. Las especies acuticas se alimentan principalmente de plancton. Los gusanos planos parsitos suelen presentar ciclos de vida muy complejos, y a veces requieren de 4 o 5 huspedes para completarlos. TREMATODOS: Son gusanos parsitos en forma de hoja lanceolada y son aplastados, no presentan segmentos, estan desprovistos de cilios vibrtiles, tienen un saco digestivo sin ano y pertenecen al PHILUM de los PLATHELMINTOS. Estos parsitos poseen ventosas musculares fijadoras y su ciclo evolutivo es muy complejo. Son muy frecuentes al este de Asia, cercano y lejano oriente, regiones de frica, de Sudamrica y en el sur de China. Son de distribucin cosmopolita en pases que explotan el ganado ovino y bovino, los cuales son la principal fuente de infestacin, pero tambin pueden ser perros y gatos. UNCINARIA: Es un gusano cilndrico, de color blanquecino o rosado, con una curvatura cervical que hace que la porcin anterior se dirija hacia el dorso. La cpsula bucal es fuerte, quitinosa y de contorno oval, tiene un borde ventral o superior. En situacin simtrica presenta dos pares de dientes en forma de ganchos, en el borde inferior un par de dientes rudimentarios, en el fondo de la cpsula bucal hay un par de placas pequeas, triangulares y quitinosas. Es una de las enfermedades ms antiguas conocidas por el hombre, sobre todo en los pases con clima clido y hmedo, ya que las repercusiones en la salud, traen como consecuencia retraso en el desarrollo fsico y mental, con cansancio generalizado y dao anatomopatolgico importante que puede llegar a causar la muerte. ASCARIS: Ascaris, gnero de gusanos parsitos del filo de los Nematodos. La especie ms conocida es la lombriz intestinal, que infecta a los humanos, en especial a los nios. Normalmente se aloja en el intestino delgado y a veces se abre camino hasta otras partes del cuerpo. Por lo general, mide de 15 a 25 cm de longitud, es de color blanquecino o rosado, y ahusado en ambos extremos. Sus huevos se desarrollan en el agua o en tierra hmeda, y a las pocas semanas de su maduracin en el suelo se vuelven infectantes. La infeccin tiene lugar cuando los huevos son ingeridos con alimentos contaminados o cuando los nios se meten en la boca las manos sucias que han estado en contacto con suelo contaminado. Los huevos ingeridos pasan al intestino donde se liberan las larvas, que atraviesan la pared intestinal y se desplazan al hgado, al corazn y a los pulmones. En este recorrido, las larvas sufren varias mudas y posteriormente ascienden hacia los bronquios y luego a la faringe, donde son deglutidas, descendiendo por el aparato digestivo hasta llegar nuevamente al intestino delgado, donde se transforman en adultos. Finalmente, se produce la fecundacin y la hembra libera los huevos que son expulsados con las heces, completndose el ciclo biolgico.

OXIURO: gusano nematodo parsito del intestino humano que se encuentra en casi todo el mundo. Los oxiuros son los gusanos cilndricos ms comunes, e infectan a los nios con ms frecuencia que a los adultos. Se dan en todas las clases sociales e indistintamente en el medio rural y el urbano. Miden alrededor de 1 cm de largo. La infeccin en los humanos, llamada enterobiasis u oxiuriasis, se produce por la ingestin de agua y alimentos contaminados con huevos de lombrices. Los gusanos adultos se desarrollan en el intestino y ponen sus huevos en la regin anal. Si los huevos se vuelven a tragar se produce una reinfeccin. Los sntomas de la infeccin por oxiuros no son graves: picor, trastornos intestinales, vmitos y nerviosismo. OBSERVACIONES: En la prctica, aprendimos todos los mtodos (ms utilizados en un laboratorio) de exmenes coproparasitolgicos y nos dimos cuenta que no vamos a encontrar los mismos parsitos en todos los mtodos, de ah la importancia de aprender a realizarlos y conocer lo que vamos a encontrar en cada uno de estos mtodos, as como identificar huevos, larvas, quistes y trofozoitos de parsitos. BIBLIOGRAFA: Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005 y Enciclopedia LAROUSSE Integral, Editorial LAROUSSE, pp. 341355, El hombre y la salud. CONCLUSIONES: Para realizar esta practica debemos tener una buena tcnica, esto fue muy entretenido y para nada aburrido, por lo que la practica me gust. PRACTICA N 2 EXAMENES INMUNOLOGICOS INTRODUCCIN: Estos exmenes nos ayudan a conocer si no tenemos algn tipo de bacteria en nuestro organismo. Tambin en esta prctica haremos una espermatobioscopia, prueba de embarazo y prueba de factor reumatoide. OBJETIVO: Que el alumno aprenda a realizar todos los exmenes inmunolgicos correspondientes a la mesa de trabajo. ESPERMATOBIOSCOPIA Fundamento: Suele formar parte de la investigacin cientfica completa de una prueba de infertilidad, as como las deformaciones que pueden presentar los espermatozoides como son: cabeza de alfiler, cabeza gigante, forma alargada, cabeza doble, media cabeza, etc... El anlisis se forma en varios aspectos como son medir el volumen, la viscosidad, el color, tiempo de licuefaccin el pH y observar las anormalidades que presentan. MATERIAL: Microscopio Vaso para la toma de muestra Regla Portaobjetos Caja de Neubauer Probeta 6

Pipeta de glbulos blancos o rojos Cintas reactivas TCNICA: Se procede a que el paciente done la muestra Se mide el volumen con ayuda de un matraz La viscosidad se mide con ayuda de dos portas y una regla El tiempo de licuefaccin es el tiempo que tarda la muestra en volverse lquida completamente. Con ayuda de una cinta reactiva se medir el pH, este mtodo esta indicado en el frasco de las cintas reactivas (cmo medir el pH). Posteriormente con ayuda de una pipeta de glbulos blancos o rojos, tomaremos un poco de la muestra y se depositar en la cmara de Neubauer y se proceder a contarlos. VALORES NORMALES: Examen Fsico: Volumen: 24 ml Color: BlancoBlanco lechoso Elasticidad: 510 ml Tiempo de licuefaccin: 1520 min. Examen Qumico: pH: Ligeramente alcalino 79 Examen microscpico: Vivos: 70 80 % Muertos: 2030 % Ascendentes: 60 % Descendentes 40% PRUEBA DE EMBARAZO: Fundamento: Es una prueba de diagnostico que se utiliza para detectar el estado de una mujer que se piensa, estar en un estado de gravidez o fertilidad. Una prueba de embarazo mide una hormona llamada gonadotropina corinica humana (GCH) para determinar si una mujer est en embarazo, y es una prueba que se puede llevar a cabo en sangre (suero) o en orina. Existen dos tipos de pruebas de embarazo: cualitativa, que mide si la GCH est presente; y cuantitativa, que mide la cantidad de hormona que est presente. MATERIAL: 7

Tubos de ensayo Sangre Reactivo de hormona gonadotropina corinica humana (GCH) TCNICA: La prueba de la gonadotropina corinica humana (GCH) en orina por lo general se lleva a cabo mediante la aplicacin de una gota de orina en una banda o tirilla qumica preparada, que generalmente presenta el resultado en uno o dos minutos. Las pruebas en suero se llevan a cabo mediante la extraccin de un slo tubo de sangre el cual se enva al laboratorio y es posible que se deba esperar entre algunas horas y ms de un da para obtener los resultados. Para que la prueba sea positiva debe formarse un crculo al fondo del tubo de ensayo, si no se forma nada es negativa. REACCIONES FEBRILES: Fundamento: Es una prueba que consiste en analizar una muestra de sangre (suero) para determinar si contiene alguna bacteria que pueda ocasionar enfermedades tales como tifoidea, brucelosis, etc. Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo especfico. El ttulo del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar. MATERIAL: Placas con divisiones (de Highlan) Gradillas Tubos de ensayo Aplicadores (palillos) Reactivos Tficos Pipetas automticas REACTIVOS. Antgeno O Salmonella Typhi Antgeno Paratyphi A Antgeno H Salmonella Typhi Antgeno Paratyphi B Antgeno Brucella Aborturs Antgeno Proteus OX19 TCNICA:

1. Anotar el antgeno correspondiente en la placa de vidrio. 2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para cada uno de los antgenos que se vayan a utiliza. 3. A cada gota de suero aadir una gota de cada antgeno. 4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para cada antgeno. 5. Agitar suavemente la placa por rotacin (120 r.p.m) durante 2 3 minutos. 6. Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara. Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma. Mililitros de suero 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005 FACTOR REUMATOIDE: Fundamento: Es una prueba que mide la presencia y nivel de las IgM especifica contra las inmunoglobulinas IgG anormales producidos por los linfocitos de la membrana sinovial de las articulaciones afectadas por artritis reumatoide. MATERIAL: TCNICA: INVESTIGACIONES PROTEINA C REACTIVA: La protena C reactiva se produce en el hgado cuando hay una infeccin o inflamacin aguda en el cuerpo. Su importancia es que reacciona con el sistema del complemento que es un sistema de defensa contra agresiones externas del cuerpo humano. Se utiliza para evaluar la presencia de enfermedades infecciosas bacterianas, enfermedades inflamatorias (fiebre reumtica, artritis reumatoide, etc.) pero no se eleva de forma habitual en enfermedades producidas por virus. La Protena C reactiva se eleva ante un problema infeccioso o inflamatorio antes que la VSG y comienza a disminuir antes que ella ante la recuperacin de la enfermedad. Si se trata la enfermedad con Aspirina o antiinflamatorios desaparece su elevacin. La protena C reactiva aparece elevada en el infarto de miocardio. Tambin puede ser de ayuda tras una intervencin de ciruga, ya que aparece elevada durante 3 4 das, para luego disminuir, si persiste elevada es que hay alguna infeccin o complicacin postquirrgica. 9 Dilucin 1:20 1:40 1:80 1:160 1:329

En la meningitis bacteriana aparece elevada y no as en la producida por virus, lo que puede servir para indicar el origen y tratamiento de un proceso de meningitis. FACTOR REUMATOIDE: El factor reumatoide (FR) es un anticuerpo reactivo contra el fragmento Fc de la inmunoglobulina G (IgG). Este anticuerpo, FR, es producido por los linfocitos B y est compuesto por inmunoglobulinas. Se piensa como ocurre en otras situaciones con las clulas B, que las clulas BFR presentara los antgenos contenidos en los inmunocomplejos a las clulas Thelper especficas. El anticuerpo FR est compuesto de dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, cada una de ellas con una regin constante y una regin variable. TIFOIDEA: Enfermedad infecciosa aguda producida por el bacilo Salmonella typhi. Se contagia por la leche, el agua o los alimentos contaminados por heces de enfermos o portadores. Los portadores son personas sanas que sufren una infeccin asintomtica y excretan peridicamente el bacilo. El esquema de transmisin epidemiolgica se puede simplificar con las siglas DAME (dedos, alimentos, moscas y excretas). El periodo de incubacin vara de una a tres semanas. Las bacterias se acumulan en el intestino delgado y de ah pasan al torrente sanguneo. La entrada en sangre de la bacteria ocasiona los primeros sntomas: escalofros, fiebre alta y postracin. Los enfermos presentan adems cefaleas, tos, vmitos y diarrea. La enfermedad remite de forma espontnea tras varias semanas en el 80% de los casos, pero en el 20% restante se complica con septicemia, focos de infeccin salmonelsica a distancia (neumonas, osteomielitis, abscesos hepticos o cerebrales) o perforaciones de la mucosa digestiva con la subsiguiente hemorragia. Estas complicaciones pueden producir la muerte. La tasa de mortalidad se redujo a partir del descubrimiento del primer antibitico efectivo frente a la salmonella, el cloranfenicol, aislado de un moho sudamericano a finales de la dcada de 1940. Este frmaco, que hoy da se obtiene de forma artificial, sigue siendo el tratamiento de eleccin en la mayora de los casos. Otros antibiticos tiles son la ampicilina y la amoxicilina, empleados para el tratamiento de los portadores. BRUCELLA: Tambin denominada fiebre ondulante, es una enfermedad infecciosa causada por varias especies de bacterias del gnero Brucella, transmitida a los seres humanos por animales como las vacas, cerdos y cabras. La enfermedad se adquiere por contacto con animales infectados o al ingerir su leche. Esta afeccin se ha conocido con el nombre de fiebre de Malta, enfermedad de Bang, fiebre mediterrnea y fiebre de las cabras. En los animales, la enfermedad puede producir esterilidad parcial, disminucin de la produccin de leche y abortos. En el ser humano, la brucelosis puede presentarse en forma aguda o crnica. La forma aguda se caracteriza por debilidad, escalofros, fiebre nocturna elevada, y con frecuencia produce alteraciones del sistema nervioso central, dolores articulares y aborto espontneo. La brucelosis crnica es difcil de diagnosticar, porque los sntomas son imprecisos y muy variables. Sin embargo, en casi todos los casos aparece fiebre remitente y alteraciones del sistema nervioso central. Hay una prueba de aglutinacin sangunea que permite detectar la enfermedad. Como norma, la persona que padece brucelosis responde a la administracin de antibiticos de amplio espectro. La pasteurizacin de la leche es fundamental para el control de la brucelosis. Adems, el desarrollo en la dcada de 1950 de una vacuna denominada cepa 19, que se puede inocular al ganado vacuno, ha reducido de forma significativa la incidencia de brucelosis bovina. El organismo que produce la enfermedad fue descubierto en 1887 por el mdico y anatomopatlogo britnico David Bruce. PROTEUS: Enterobacterias, nombre comn de una familia de bacterias Gram negativas que reciben este nombre porque suelen encontrarse en el intestino de los mamferos. Las especies que poseen flagelos son mviles; el resto, inmviles. La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven para diferenciar los gneros. Los que no realizan la fermentacin son patgenos, los fermentadores, saprofitos. Hay enterobacterias que provocan intoxicaciones alimentarias, como la salmonelosis. Los sntomas son fiebre, diarrea y dolores abdominales. Es una intoxicacin muy rpida. Las epidemias de peste, que fueron muy importantes en la antigedad, tambin son producidas por una enterobacteria. 10

Los miembros del grupo Proteus desaminan la fenilalanina, son mtiles, crecen en medio de cianuro de potasio (KCN), y fermentan la xilosa. Estas especies se mueven con mucho actividad por medio de flagelos pertricos, lo que da por resultado hormigueo sobre los medios slidos a menos que este fenmeno se inhiba con productos qumicos. OBSERVACIONES: Tenemos que estar atentos al realizar una prueba de reacciones febriles y factor reumatoide, ya que a veces creemos que es negativa, por que no hay aglutinacin, pero al cabo de un tiempo comienza a aglutinar y sera positiva. Tambin es un poco difcil contar espermatozoides en una cmara de Neubauer, por lo pequeos que son. BIBLIOGRAFA: : Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005 Enciclopedia LAROUSSE Integral, Editorial LAROUSSE, pp. 250263, El mundo vivo Apuntes de Bacterias, Nueva estrategia curricular. Autor: M.C. Gastn M. Graillet Jurez CONCLUSIONES: La prctica fue muy tediosa, pero al final me divert haciendo todos los mtodos ya antes citados, por lo que me gust. PRACTICA N 3 QUMICA SANGUNEA INTRODUCCIN: La qumica sangunea es un examen que utiliza reacciones qumicas para analizar la sangre de un paciente. Es uno de los exmenes ms importante y ms tedioso que se realiza dentro de un laboratorio. A continuacin se darn las tcnicas para obtener TODOS los parmetros solicitados en una Qumica Sangunea. OBJETIVO: Que el alumno aprenda a realizar una qumica sangunea y reconozca los valores normales y elevados, para as dar un buen diagnostico y tratamiento. MATERIAL: REACTIVOS: Espectrofotmetro semiautomtico manual Solucin acuosa de A. Prico Cubetas para espectro Solucin acuosa de NaOH Tubos de ensayo Solucin de creatinina con Zn2Cl Gradillas Mechero de Bunsen Trpie Tela de alambre Cristalizadores

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Termmetro Pipetas Pasteur Pipetas de 10ml, 5ml, 0.1ml Pipetas automticas Sangre TCNICA: Segn la sustancia... CREATININA: Fundamento: En 1886 Jaffe describe un mtodo para la determinacin de creatinina haciendo reaccionar un filtrado libre de protenas con cido pcrico en una solucin alcalina. Aunque desde entonces se han descrito muchos mtodos, la reaccin clsica de Jaffe es la ms utilizada. Esta reaccin esta sujeta a interferencias a causa de varias sustancias como protenas y glucosa. Para combatir esta desventaja, se han desarrollado modificaciones. Los mtodos cinticos son los ms utilizados por ser ms rpidos, simples y sin interferencias. La creatinina reacciona con el cido pcrico en un medio alcalino para formar un complejo de color el cual absorbe a 510nm. La velocidad de formacin del color es proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra. TCNICA: Coloque las cubetas del espectrofotmetro a 37 C. Lleve a cero el espectrofotmetro con un blanco de agua destilada a 510nm. Pipetee 1 ml del reactivo en cada cubeta y preincube por 3 minutos a 37 C. Transfiera 0.05ml del estndar en el tubo de ensayo, mezcle inmediatamente y pase a una celdilla de lectura. Transcurridos exactamente 20 segundos, lea y registre absorbancia (A1) Exactamente 60 segundos despus de la lectura inicial lea y registre la absorbancia final (A2) Calcule el cambio de absorbancias A restando (A1 A2) NOTA: Todos los volmenes se pueden duplicar, si el instrumento requiere volmenes mayores a 1.0 ml. CONTROL DE CALIDAD: Incluya en cada corrida de muestras un suero control y/u orina con valores conocidos analizados por este mtodo. RESULTADOS: Los valores resultan de comparar el cambio de absorbancia (A) de la muestra (M) con el estndar (S) tratado de la forma idntica.

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VALORES NORMALES: Hombres (Suero) 0.9 1.5 mg/dl (Orina) 1000 2000 mg/24 horas Mujeres (Suero) 0.7 1.4 mg/dl (Orina) 600 1500 mg/24 horas GLUCOSA: Fundamento: La determinacin de los niveles de glucosa fue el primer procedimiento empleado en el laboratorio clnico medico. La metodologa de la glucosaoxidasa fue introducida por Keilin y Hartree en 1948. Ms tarde Keston report el uso de un reactivo combinado glucosaoxidasaperoxidasa, seguido por el de Teller adicionando un reactivo cromognico al procedimiento de Keston La glucosa es oxidad en presencia de glucosa oxidasa (GOD). El perxido de hidrgeno formado reacciona bajo la influencia de peroxidasa (POD) con fenol y 4aminoantipirina para formar un complejo rojovioleta de quinona. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de glucosa. MATERIAL: REACTIVOS: Espectrofotmetro capaz de ab. de 500nm Glucosa Liquicolor Pipetas automticas Estndar de glucosa (100mg/dl) Mechero de Bunsen Trpie Tela de alambre Cristalizadores Cubetas para espectro Agitador Cronometro TCNICA: Coloque en cubetas los siguientes volmenes (ml) y mezcle bien. REACTIVO BLANCO (RB) ESTANDAR (E) 1.0 1.0 0.01 MUESTRA (M) 1.0

REACTIVO ESTANDAR

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MUESTRA 0.01 NOTA: El volumen se puede incrementar si el instrumento requiere volmenes mayores que 1.0 ml. Incube las cubetas a 37 C por 5 minutos o a temperatura ambiente 1530 C por 10 minutos. Lea E y M contra RB a 500 nm antes de 60 minutos. CONTROL DE CALIDAD: Se deben incluir dos sueros control con niveles de glucosa conocidos determinados por este mtodo o por el procedimiento de hexocinasa en cada serie de pruebas. Se recomienda el uso de Suero Control Normal Ser T Fy I y Suero Control Anormal Ser T Fy II para cada ensayo. RESULTADOS: Los valores se derivan de la siguiente ecuacin: Glucosa (mg/dl)= AM x 100 AE Donde Am y As son los valores de las absorbancias de la muestra y el estndar respectivamente y 100 es la concentracin del estndar (mg/dl). VALORES NORMALES: Suero / Plasma 70105 mg/dl (3.95.3 mmol/l) Lquido cerebro espinal: 4075 mg/dl (2.24.2 mmol/l) COLESTEROL: Fundamento: La determinacin de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnstica limitada. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formacin de ateromas dado que las complicaciones arteriosclerticas prevalecen en individuos hipercolesterolemicos. Estudios epidemiolgicos demuestran que el riesgo de contraer enfermedad cardiaca coronaria para individuos de ms de 40 aos con colesterolemia menor a 2,10 g/l es 3 veces menor que entre individuos con ms de 2,30 g/l y 6 veces menor que entre individuos con ms de 2,60 g/l. MATERIAL: Espectrofotmetro capaz de dar absorbancias de 505nm Pipetas automticas Mechero de Bunsen Trpie Tela de alambre Cristalizadores Cubetas para espectro 14

Agitador Cronometro REACTIVOS: Standard: Solucin de colesterol 2 g/l Enzimas: Suspensin conteniendo lipasa fungal 300 U/ml, colesterol oxidasa (CHOD) 3 U/ml y peroxidasa (POD) 20 U/ml. Reactivo 4AF: Solucin de 4aminofenazona 25 mmol/l. Reactivo Fenol: Solucin de fenol 55 mmol/l. TCNICA: En tres cubetas para espectro marcadas B (blanco), S (Standard) y D (desconocido), colocar: Standard (S) Desconocido (D) Standard 20 ul Muestra 20 ul Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml Incubar 15 minutos en bao de agua a 37 C o 30 minutos a temperatura ambiente (25 C). Leer en espectrofotmetro a 505 nm, llevando a cero con el Blanco. CALCULO DE LOS RESULTADOS: Colesterol (g/l)= D x f donde f = 2,00 g/l S VALORES DE REFERENCIA: El panel de expertos del National Colesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de colesterol: Deseable: < de 2.00 g/l Moderadamente alto: 2.00 a 2.39 g/l Elevado: > de 2.40 g/l ACIDO URICO: Fundamento: La uricaza sobre el cido rico para toma perxido de hidrgeno y alantoina. El H2O2 es ledo cuantitativamente por su reaccin con el cido 3,5dicloro2hidroxibenzosulfnico (DCHB) en presencia de peroxidasa y 4 aminofemazona, para formar un complejo quinoneimina de color rojo violeta. MATERIAL: Espectrofotmetro capaz de dar absorbancias de 520nm 15

Cubetas Mechero de Bunsen Tela de alambre Trpie Pipetas automticas Cristalizador REACTIVOS: cido rico Enzimtico (liquido), Cat. No. 1044 Solucin acuosa de cido rico, con estabilizadores y solubilizadores TCNICA: 1. Pipetear en cubetas los siguientes volmenes (ml) y mezcle bien Reactivo Blanco (RB) 1.0 Estndar (E) 1.0 0.02 Muestra (M) 1.0 0.02

Reactivo Estndar Muestra

NOTA: El volumen puede ser incrementado si el instrumento requiere volmenes mayores a 1ml. Use 2ml del reactivo y aada 0.05 ml del estndar o la muestra. Incube todas las cubetas a 37 C por 5 minutos y deje enfriar o incube a temperatura ambiente por 15 minutos. Lea E y M contra RB a 520nm antes de 15 minutos. CONTROL DE CALIDAD: 2 niveles de sueros controles con concentraciones de cido rico conocidas, determinadas por este mtodo se recomiendan utilizar en cada ensayo. CALCULO DE LOS RESULTADOS: Se calculan mediante la ecuacin: cido rico en suero o plasma (mg/dl)= AM X 8 AE VALORES NORMALES: Hombres: 3.47.0 mg/dl 16

Mujeres 2.45.7 mg/dl FOSFATASA ALCALINA: Fundamento: Los niveles de fosfatasa alcalina srica son de inters en el diagnostico de desordenes hepatobiliares y seos asociados con el incremento en la actividad osteoblstica. Las elevaciones tambin se pueden observar en varias condiciones que no involucran al hgado o al hueso. Entre estos estan la enfermedad de Hodgkin, falla congestiva cardiaca, colitis ulcerativa, enteritis regional e infecciones bacterianas intraabdominales. Las elevaciones tambin se observan durante el 3er trimestre del embarazo. El procedimiento esta basado en el trabajo de Bowers y McComb, en el cual se utiliza pnitrofenilfosfato y en el de Schifren y Burnett el cual trata los efectos de los errores de la longitud de onda y el ancho de la banda del espectro. La fosfatasa alcalina hidroliza el 4nitrofenilfosfato para formar 4nitrofenol y fosfatos. MATERIAL: Espectrofotmetro capaz de dar absorbancias de 405nm Cubetas Mechero de Bunsen Tela de alambre Trpie Pipetas automticas Cristalizador REACTIVOS: Buffer de fosfatasa alcalina (R1) Substrato Fosfatasa Alcalina (R2) PREPARACIN DEL REACTIVO: El buffer y el substrato son reactivos lquidos listos para usarse. Prepare el reactivo de trabajo a razn de 5 partes de buffer (R1) y 1 parte substrato (R2) (ejemplo 50ml buffer y 10ml de substrato). TCNICA: Prepare el reactivo de trabajo de acuerdo a las instrucciones. Ajuste a cero el espectrofotmetro con agua destilada. Para cada muestra y control aada 1.0ml del reactivo de trabajo en una cubeta o tubo de prueba e incube a 37 C por 3 minutos. Aada 20 (0.020ml) de suero al tubo respectivo y mezcle suavemente. Lea y registre la absorbancia en 1 minuto. Contine incubando a 37 C antes de cada lectura. Determine el incremento de absorbancia por minuto (A/min. Y multiplique por el factor 2764 para obtener los resultados en U/l.

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NOTA: Si la cubeta no esta a temperatura controlada incube las muestras a 37 C antes de cada lectura. Los volmenes se pueden incrementar al doble si el instrumento requiere un volumen mayor a 1ml. CONTROL DE CALIDAD: El suero control normal SerTFy I Cat no. G42786 y el suero control anormal SerTFy II Cat no. G42786 son recomendables para verificar precisin y exactitud. CALCULO DE RESULTADOS: Los valores se derivan del coeficiente de absorvatividad micromolar a 405 nm. Una unidad por litro (U/l) de fosfatasa alcalina es la cantidad de enzima que produce 1 mmol/l de 4nitrofenol por minuto. VALORES NORMALES: Rango Normal (Adultos) 34114 U/l a 37 C. NITRGENO DE UREA: Fundamento: La urea es el principal producto de desecho del catabolismo de protenas. Es sintetizada en el hgado a partir del amonio, el cual es producido como resultado de la desaminacin de aminocidos. Normalmente, el nitrgeno de urea en la sangre comprende slo el 45% del nitrgeno no proteico. La importancia de la determinacin del nitrgeno de urea es su valor como buen indicador del funcionamiento heptico y renal. La disminucin de Nitrgeno de Urea (BUN) se ha visto en nefritis, destruccin heptica aguda, amiloidosis y embarazos. Valores elevados de BUN se han visto en casos de nefritis aguda y crnica, obstruccin urinaria e intestinal, uremia, envenenamiento por metales, neumona, enfermedad de Addison, peritonitis, shock en ciruga y fallas cardiacas. MATERIAL: Espectrofotmetro capaz de dar absorbancias de 340nm Cubetas Mechero de Bunsen Tela de alambre Trpie Pipetas automticas Cristalizador REACTIVOS: Regulador de BUN (R1) Enzima BUN (R2) Estndar de BUN 30 mg/dl PREPARACIN DEL REACTIVO: El buffer y los reactivos enzimticos lquidos estan listos para su uso. 18

Prepare el reactivo de trabajo en una porcin de 5 partes Buffer (R1) y 1 parte de enzima (R2), (por ejemplo 25 ml de buffer y 5 ml de enzima). Antes de utilizarse, mantener el reactivo de trabajo a temperatura ambiente, 1525 C por lo menos 30 minutos. TCNICA: Prepare el reactivo de trabajo de BUN de acuerdo al instructivo. Calibre a cero el espectrofotmetro a 340nm con agua destilada. Por cada Muestra y Control, agregar 1.0ml de reactivo de trabajo a la cubeta y llevar a 37 C por 3 minutos. Adicionar 10 (0.010ml) de suero a cada tubo respectivamente y agitar levemente. Leer y anotar la absorbancia (A1) despus de 30 segundos. Exactamente a los 60 segundos despus de leer (A1) lea y registre la absorbancia (A2). Calcule el cambio de absorbancia por minuto (A) mediante la resta (A1A2). NOTA: Si la cubeta no est a temperatura controlada incube las muestras a 37 C entre lectura y lectura. CONTROL DE CALIDAD: Los sueros control Normal SerTFy I y suero control anormal SerTFy II son recomendados en cada ensayo. CALCULO DE RESULTADOS: Los valores se derivan de la comparacin de l cambio de absorbancia (A) de muestra (m) con la del estndar (s). BUN suero (mg/dl)= Au X 30 As Donde Au y As son los cambios de absorbancias (decrementos) de la muestra y del estndar, respectivamente y 30 es la concentracin del estndar (mg/dl). VALORES NORMALES: BUN: 823 mg/dl UREA: 1749 mg/dl INVESTIGACIONES SUERO: Es una sustancia formada exclusivamente por agua y tambin por minerales o electrolitos, su lugar de almacenamiento de estas sustancias vienen siendo las clulas grasas razn por la cual, cuando una persona realiza ejercicio expulsa gran cantidad de agua. El suero se observa en herida como esa parte amarillenta en la misma, tendr un pH alcalino. De las sustancias que se hayan formando el suero tenemos: Calcio, Sodio, Potasio, Magnesio, cloro. La deficiencia de alguna de estas sustancias se puede producir por una perdida elevada de lquidos, por ejemplo una sudoracin excesiva, en la diarrea profusa, en el vomito, es decir, en todos aquellos casos fisiolgicos y patolgicos que se reflejen por una perdida total de lquidos.

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GLUCOSA: Azcar monosacrido, de frmula C6H12O6. Se encuentra en la miel y en el jugo de numerosas frutas. El nombre alternativo azcar de uva proviene de la presencia de glucosa en las uvas. Se produce en la hidrlisis de numerosos glucsidos naturales. La glucosa est presente en la sangre de los animales Es un slido cristalino de color blanco, algo menos dulce que el azcar destinado al consumo. Las disoluciones de glucosa giran el plano de polarizacin de la luz a la derecha; de ah el otro nombre alternativo dextrosa (del latn dexter, 'derecha'). La glucosa cristaliza en tres formas diferentes y cada una de ellas gira el plano de polarizacin de la luz en distinto grado. La glucosa se forma en la hidrlisis de numerosos hidratos de carbono, como la sacarosa, maltosa, celulosa, almidn y glucgenos. La fermentacin de la glucosa por la accin de levaduras produce alcohol etlico y dixido de carbono. Industrialmente, la glucosa se obtiene en la hidrlisis del almidn bajo la accin de cido diluido, o ms frecuentemente, de enzimas. Su aplicacin ms importante es como agente edulcorante en la elaboracin de alimentos. Tambin se emplea en curtidos y tintes, y en medicina para el tratamiento de la deshidratacin y alimentacin intravenosa. UREA: compuesto cristalino incoloro, de frmula CO(NH2)2, con un punto de fusin de 132,7 C, conocido tambin como carbamida. Se encuentra abundantemente en la orina de los humanos y otros mamferos. En cantidades menores, est presente en la sangre, en el hgado, en la linfa y en los fluidos serosos, y tambin en los excrementos de los peces y muchos otros animales inferiores. La urea se forma principalmente en el hgado como un producto final del metabolismo. El nitrgeno de la urea, que constituye la mayor parte del nitrgeno de la orina, procede de la descomposicin de las clulas del cuerpo, pero, sobre todo, de las protenas de los alimentos. La urea est presente tambin en mohos de los hongos as como en las hojas y semillas de numerosas legumbres y cereales. Es soluble en agua y en alcohol, y ligeramente soluble en ter. La urea se obtiene mediante la sntesis de Whler, que fue diseada en 1828 por el qumico alemn Friedrich Whler. COLESTEROL: Colesterol, alcohol complejo que forma parte de todas las grasas y aceites animales. Acta como precursor en la sntesis de vitamina D. El colesterol pertenece a un grupo de compuestos conocidos como esteroides, y est relacionado con las hormonas sexuales producidas en las gnadas y las hormonas de la corteza suprarrenal. Cuando el colesterol se eleva en la sangre por encima de unos niveles, considerados como normales, se produce una enfermedad conocida como hipercolesterolemia. Se consideran normales, valores de colesterol en la sangre iguales o inferiores a 200 mg/dl. En las hipercolesterolemias leves los valores de colesterol se sitan entre 200 y 249 mg/dl; en las hipercolesterolemias moderadas se sitan entre 250 y 299 mg/dl y en las hipercolesterolemias graves los valores de colesterol superan los 299 mg/dl. Sin embargo, hay que considerar que, aunque el colesterol es el factor de riesgo ms importante de las cardiopatas isqumicas en pacientes menores de 50 aos, existen otros factores de riesgo cardiovascular, como la hipertensin, la diabetes, el tabaquismo o la obesidad, cuyos efectos se suman a la hora de facilitar un evento cardiovascular. CREATININA: Compuesto derivado de la degradacin de la creatina... Creatina: sustancia presente en el torrente sanguneo de los vertebrados que se utiliza como molcula portadora de energa suplementaria en algunos sistemas del organismo (la arginina desempea un papel equivalente en los invertebrados). El trifosfato de adenosina o ATP es la principal fuente de energa del organismo, pero las clulas del cerebro, corazn y msculos requieren enormes cantidades de energa, por lo que utilizan la creatina de forma complementaria. Esta sustancia se produce en los riones y en el hgado, las clulas la absorben y en su interior se transfieren grupos fosfato de alta energa procedentes del ATP de las mitocondrias, como la creatina fosforilada o fosfocreatina, que almacena de forma temporal grupos fosfato de alta energa disponible para aportarla cuando se necesite. TRIGLICRIDOS: Grupo de compuestos orgnicos existentes en la naturaleza que consisten en steres formados por tres molculas de cidos grasos y una molcula del alcohol glicerina. Son sustancias aceitosas, 20

grasientas o cerosas, que en estado puro son normalmente incoloras, inodoras e inspidas. Las grasas y aceites son ms ligeros que el agua e insolubles en ella; son poco solubles en alcohol y se disuelven fcilmente en ter y otros disolventes orgnicos. Las grasas son blandas y untuosas a temperaturas ordinarias, mientras que los aceites fijos (para distinguirlos de los aceites esenciales y el petrleo) son lquidos. Algunas ceras, que son slidos duros a temperaturas ordinarias, son qumicamente similares a las grasas. FOSFATASAS ALCALINAS: Enzimas que liberan fosfatos inorgnicos de steres fosfricos; se definen como cidas o alcalinas segn sean ms activas a valores de pH < o > 7 ACIDO URICO: compuesto nitrogenado, blanco, inodoro e inspido, de frmula C3H4N4O3, que se forma en el cuerpo como resultado del metabolismo de las protenas. Est presente en pequeas cantidades en la orina humana, y en cantidades mayores en la orina de los pjaros y reptiles. El cido rico es muy poco soluble en agua e insoluble en alcohol y ter. Al calentarse forma urea, amonaco y dixido de carbono. La gota es el resultado de una alteracin en el metabolismo del cido rico. Las piedras en los riones formadas por sales de cido rico aparecen en personas con altos niveles de este cido en la orina. ESPECTROFOTOMETRO: El espectrofotmetro se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en comparacin con la intensidad de luz procedente de una fuente patrn. Esta comparacin permite determinar la concentracin de la sustancia que ha producido ese espectro. Los espectrofotmetros tambin son tiles para estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus elementos de deteccin son bolmetros o clulas fotoelctricas. Los primeros se aplican especialmente al anlisis de espectros de infrarrojos, y los segundos al de espectros ultravioletas. Las redes de difraccin pueden emplearse, igual que los prismas, tanto en los espectrgrafos como en los espectrofotmetros. OBSERVACIONES: Tenemos que estar atentos al realizar una prueba de cualquier parmetro ya que es difcil de realizar por los tiempos que te dan, a veces es muy poco y tenemos que apurarnos y estar atentos para hacer un buen anlisis. BIBLIOGRAFA: : Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005 Enciclopedia LAROUSSE Integral, Editorial LAROUSSE, pp. 108154, Ciencia y tecnologa CONCLUSIONES: La prctica fue muy tediosa, pero al final me divert haciendo todos los mtodos ya antes citados, por lo que me gust.

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