UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE PATOLOGA

GUA No.1: CAMPO Y MTODOS EN PATOLOGA

Orlando Ricaurte G. Profesor Asociado 1. PALABRAS CLAVES Patologa Mrbida Autopsia - Patologa quirrgica Citopatologa Inmunopatologa -Patologa molecular Inmunohistoqumica. Etiologa Patognesis Fisiopatologa Nosologa - Correlacin clnico patolgica 2. OBJETIVO GENERAL Introducir al curso al campo de la patologa e ilustrar los conceptos generales de la patologa como disciplina cientfica y diagnstica 3. OBJETIVOS ESPECIFICOS - Dar a conocer el proceso de desarrollo de la patologa usando una breve resea histrica como hilo conductor - Dar a conocer los campos de aplicacin de la patologa - Conocer los mtodos y tcnicas que ha apropiado la patologa para su desarrollo - Dar a conocer las secuencias de estudio de las enfermedades 4. CONCEPTOS FUNDAMENTALES - DEFINICIN Etimolgicamente el trmino patologa, deriva del prefijo pathos: sufrimiento o enfermedad y del sufijo logos: tratado. En su concepcin ms moderna es la disciplina que estudia las bases cientficas de las enfermedades en sus aspectos estructurales y sus implicaciones en la funcin de clulas, tejidos u rganos afectados por ellas. - ANTECEDENTES Para que se iniciara el desarrollo de la patologa, previamente debieron darse una serie de condiciones como el advenimiento del pensamiento racional en el renacimiento, que en su forma ms estructurada dara lugar al mtodo cientfico as como el desarrollo de la anatoma, disciplina a partir de la cual fue posible empezar a identificar en autopsias alteraciones estructurales de los rganos en pacientes fallecidos de diferentes enfermedades. La agrupacin sistemtica de estos hallazgos determin el desarrollo de anatoma la mrbida, que posteriormente se denominara patologa macroscpica. En sus albores, el conocimiento de la patologa anatmica fue el resultado del inters y las observaciones de mdicos clnicos que se desempeaban como profesores en las escuelas de medicina europeas, quienes inquietos por conocer el sustrato morfolgico de los sntomas y signos de las enfermedades de los pacientes fallecidos, establecieron metodologa de la correlacin clnico patolgica la cual enriqueci notoriamente la prctica mdica y la clasificacin ms objetiva de las enfermedades nosologa El descubrimiento de los microorganismos y la nocin de contagio de las enfermedades infecciosas, permiti definir relaciones de causalidad de las enfermedades dando lugar a los conceptos de etiologa de los procesos patolgicos y de los mecanismos que determinan su desarrollo o patogenia. La invencin del microscopio y el desarrollo posterior de la histologa dieron lugar al nacimiento de la patologa celular, base fundamental de la histopatologa. Con ello se alcanz el mximo desarrollo de la Patologa mrbida, que obtuvo su conocimiento a partir del estudio de autopsias clnicas. El desarrollo de la ciruga y la anestesiologa permiti obtener acceso tanto a rganos enfermos o especimenes quirrgicos como de biopsias, aspecto que dio lugar al nacimiento de la patologa quirrgica.

Facultad de Medicina Cra. 30 calle 45 - Oficina 224 Tel: 3165000 Ext. 15177 - E-mail: departpat_fmbog@unal.edu.co www.unal.edu.co/patologia - Bogot, D.C. Colombia

La identificacin de los mecanismos de funcionamiento de los diferentes aparatos y sistemas determin el desarrollo de la fisiologa, a partir de la cual fue posible inferir como las alteraciones de funcin -fisiopatologa- generados por las lesiones determinaban las manifestaciones clnicas de las enfermedades. Ello tambin permiti el desarrollo de pruebas diagnsticas en el laboratorio clnico, campo de trabajo de la patologa clnica. En la medida en que ha evolucionado la patologa ha incorporado diversas metodologas para dilucidar interrogantes relacionados con diferentes enfermedades, convirtindose junto con la clnica y la salud pblica entre otras en uno de los grandes pilares del conocimiento mdico SECUENCIAS DE ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES Como parte del estudio de la historia natural de una enfermedad se establecen los siguientes aspectos: Incidencia: No. de casos nuevos de una enfermedad en una poblacin Etiologa: causa de enfermedad Patogenia: mecanismo de produccin de enfermedad Caractersticas macroscpicas: Alteraciones de la estructura anatmica Caractersticas microscpicas: Alteraciones de la estructura histolgica Fisiopatologa: Alteraciones de la funcin derivadas de procesos patolgicos Sntomas: Manifestaciones Clnicas y hallazgos paraclnicos Signos: Hallazgos efectuados por el mdico en el examen fsico de un paciente Sndrome: Conjunto de sntomas y signos comunes a un grupo de enfermedades Lesin: en sentido genrico dao estructural de una clula o tejido Secuelas: daos irreversibles de la estructura que determina dficit permanente de funcin Pronstico: Previsin sobre la evolucin de un proceso patolgico DIVISIONES DE LA PATOLOGA SEGN SU CAMPO DE APLICACIN Patologa humana Patologa veterinaria o zoopatologa Fitopatologa Patologa humana Contenidos de la Patologa Bsica o General Adaptacin y lesin celular Inflamacin Trastornos hemidinmicos y de lquidos Inmunopatologa Trastornos genticos Neoplasia Patologa ambiental Patologa Especial rganos y Sistemas: Cardiovascular, respiratorio, digestivo, genitourinario, sistema nervioso, tegumentario, locomotor etc. endocrino, hematopoytico,

Por metodologa y campo de aplicacin Patologa anatmica: nfasis en las alteraciones estructurales Patologa clnica: Medicina de Laboratorio (Laboratorio clnico) Patologa experimental: Reproduccin de procesos patolgicos en modelos de laboratorio, determinacin de la eficiencia de pruebas de diagnstico, medicamentos o procedimientos en modelos de laboratorio. Patologa ambiental: Impacto de factores ambientales en la produccin de enfermedades Divisiones de la Patologa Anatmica Patologa mrbida: Patologa de autopsias Patologa quirrgica: Patologa diagnstica Patologa forense: rea de la patologa que auxilia a la justicia en el estudio de muertes inesperadas y violentas Citopatologa: Citologa diagnstica Patologa ultraestructural: estudio de las alteraciones estructurares subcelulares mediante microscopa electrnica.
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Subespecialidades de la Patologa Anatmica Dermatopatologa, Hematopatologa, Neuropatologa, Neuropatologa, Neuropatologa, Patologa digestiva, Patologa ginecoobsttrica y perinatal, Patologa peditrica Divisiones de la Patologa Clnica Administracin y control de calidad, Banco de Sangre, Hematologa, Inmunologa, Microbiologa, Qumica clnica Tcnicas usadas en patologa anatmica Autopsia Descripcin macroscpica Histopatologa (Descripcin microscpica) Histotecnologa: Proceso de tejidos para estudios histolgicos e histopatolgicos. Histoqumica: Mediante la aplicacin de diferentes coloraciones de histoqumica pueden identificarse una garan variedad de componentes intracelulares y extracelulares as como microorganismos Citopatologa (citologa diagnstica) Citologa exfoliativa: Estudio de muestras de clulas obtenidas a partir de superficies mucosas o de lquidos corporales Citologa aspirativa: Estudio de muestras de clulas obtenidas mediante presin negativa con una jeinga provista de una aguja fina Imunofluorescencia: Conjunto de tcnicas utilizadas para la identificacin de determinantes antignicos especficos generalmente eptopes peptdicos mediante anticuerpos especficos de carcter mono o policlonal. La visualizacin de la reaccin en los tejidos se efecta utilizando un fluorocromo acoplado a los anticuerpos que al se excitado por luz de una longitud de onda habitualmente del rango ultravioleta emite un fotn de menor longitud de onda. Su observacin requiere de un microscopio de fluorescencia. En la tcnica de imunofluorescencia directa, el fluorocromo se acopla directamente al anticuerpo mientras que en la de inmunofluorescencia indirecta, se utilizan dos anticuerpos, el primario reconoce el antgeno problema mientras el segundo, al cual se acopla el fluorocromo, se prepara en otra especie animal y reconoce secuencias especies especficas del fragmento Fc del anticuerpo primario. Los fluorocromos ms usados son la fluorescena y la rodanina que emiten luz verde y roja respectivamente. Su campo de aplicacin es la imunopatologa (Enfermedades mediadas por mecanismos inmunolgicos). Microscopa Electrnica: Ultraestructura
Inmunohistoqumica: Conjunto de tcnicas utilizadas para la identificacin de determinantes antignicos especficos generalmente eptopes peptdicos mediante anticuerpos especficos de carcter mono o policlonal. La visualizacin de la reaccin en los tejidos se efecta utilizando una enzima como parte del complejo inmunoenzimtico que acta sobre un sustrato cromgeno, el cual cambia de color al reaccionar con la enzima, permitiendo identificar la localizacin especfica del antgeno investigado mediante una seal coloreada en una preparacin histolgica o citolgica. Inicialmente se utilizaron los mtodos directo e indirecto, similares a la inmunofluorescencia directa e indirecta, pero se acoplando una enzima al anticuerpo en vez del fluorocromo. Para mejorar la especificidad del mtodo, posteriormente se idearon complejos inmunoenzimticos que permitan mejorar su sensibilidad al amplificar la seal coloreada en el tejido revelando la presencia del antgeno problema, debido a que por cada molcula de anticuerpo primario el complejo contiene varias molculas de enzima. Los mtodos ms ampliamente utilizados son el complejo peroxidasa antiperoxidasa que utiliza un anticuerpo terciario preparado en la misma especie animal que el anticuerpo primario, es reconocido al igual que este por la por uno de los fragmentos Fab del anticuerpo secundario y reacciona con dos molculas de peroxidasa. El complejo avidina biotina peroxidasa por su parte, aprovecha la gran afinidad entre la avidina y la biotina: a cada molcula de biotina se acoplan 3 molculas de avidina y cada una de estas se une a una molcula de peroxidasa. Este complejo se acopla al fragmento FC del anticuerpo secundario. El cromgeno ms ampliamente usado para pruebas de inmunohistoqumica con peroxidasa es la 2,2 diaminobencidina, pero este reactivo es carcinognico por ello se han empezado a usar otras enzimas como la fosfatasa alcalina y la glucosa oxidasa que utilizan otros cromgenos.

Estas tcnicas se basan en la incubacin de las preparaciones histolgicas y citolgicas con los anticuerpos y complejos inmunoenzimticos en diluciones de trabajo especficas, seguidos de lavados con soluciones buffer, posteriormente se incuban con los sustratos cromgenos y se contrastan con hematoxilina como tincin nuclear

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Citometra de flujo La citometra de flujo es un mtodo complejo de laboratorio que permite identificar seales luminosas provenientes de fluorocromos acoplados a diversos componentes de poblaciones celulares, que se desplazan en un flujo de clulas individuales sobre las cuales incide un rayo lser que las excita y las seales resultantes son capturadas y transmitidas a un computador provisto de un programa de soporte lgico, que analiza la informacin y traduce la distribucin de los componentes estudiados de la poblacin celular en grficas (planos cartesianos) que registran cada evento, su agrupacin o dispersin en histogramas. La citometra de fluo se utiliza para estudiar el ciclo celular determinando la ploida (contenido de ADN) de una poblacin celular, habitualmente tumoral o precursora de tumor y para la identificacin automatizada de antgenos en un flujo de clulas individuales en fase lquida. Patologa Molecular En la medida que se ha desarrollado la biologa molecular, sus tcnicas han empezado a aplicarse a muestras de estudios de patologa. La Hibridacin in-situ es una prueba aplicada a cortes de tejido incluida cuyo fundamento se basa en la identificacin de una secuencia especfica de ADN mediante una sonda constituda por una secuencia complementaria de nucletidos. Las sondas se marcan mediante molculas

quimioluminicentes, enzimas como la fosfatasa alcalina que interactan con cromgenos para la deteccin de la reaccin.
La reaccin en cadena de la polimerasa es una tcnica de amplificacin de ADN que utiliza la enzima de polimerasa reversa para obtener un gran nmero de copias de la secuencia que se busca detectar en el tejido mediante una prueba de hibridacin in-situ, aumentando de esta manera enormemente su sensibilidad. Postest: En que poca comenz el desarrollo de la patologa A quin se considera el padre de la patologa? Qu metodologa utilizaba la patologa en sus albores? Defina anatoma mrbida Quin introdujo la utilizacin del microscopio en el estudio de la patologa? Que es la patologa quirrgica? Defina etiopatogenia Defina fisiopatologa En que ao se empez el primer curso regular de patologa en Colombia y que profesor lo inici? Cul es el campo de aplicacin de la patologa clnica? Qu es la histoqumica? Cules son los campos de aplicacin de la histoqumica? Cul es el fundamento de la inmunofluorescencia y cul es su campo de aplicacin en patologa? Cul es el fundamento de la inmunohistoqumica? Mencione las tcnicas inmunohistoqumicas de mayor aplicacin y haga un esquema de cada una de elllas Cul es el principio de la citometra de flujo y cuales son sus campos de aplicacin? Mencione dos tcnicas de patologa molecular y cuales son sus campos de aplicacin 5. LECTURAS RECOMENDADAS
Foucault M. El nacimiento de la clnica. Una arqueologa de la mirada mdica. 8 Edicin. Ed. Siglo XXI Bogot D.C. 1981 Nezelof C, Seemayer TA. The historiy of pathology: An overview. In: Damjanov I, Linder J. Andersons Pathology. 10 Ed. Mosby. St Louis, Missouri U.S.A 1996: 1 14 Methods in Pathology. In: Damjanov I, Linder J. Andersons Pathology. 10 Ed. Mosby. St Louis, Missouri U.S.A 1996: 15 282 Margotta R. The history of Medicine. 2 Ed. Smithmarrk publishers. New York 1996 Pollak K. La Medicina (Los discpulos de Hipcrates: Una historia de la medicina). Plaza & Janes. Barcelona 1969. Rosai j. Gross techniques in surgical pathology and special techniques yn surgical pathology , in: Rosai and Ackerman`s Pathology Vol. 1. 9th Edition. Mosby- Elsevier Inc. Philadelphia, 2004: 25- 92. Silverberg SG, Wick MR. General philosophy and principles of surgical pathology and cytopathology including quality and malpractice issues in: Silverberg`s surgical pathology and cytopathology Vol 1. 4th Edition. Churchill- Livingstone- Elsevier Inc. Philadelphia 2006: 3- 14 De Lellis RA, Resnick M, Frabble WJ. General and special techniques in surgical pathology and cytopathology, in: Silverberg`s surgical pathology and cytopathology Vol 1. 4th Edition. Churchill- Livingstone- Elsevier Inc. Philadelphia 2006: 15- 56.

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