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Processo Upstream
Biorreatores e biorreao
Processo Downstream
26/03/2013
Parte I
Escala laboratorial
Escala industrial
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Biorreatores, reatores bioqumicos, reatores biolgicos so os reatores qumicos nos quais ocorrem uma srie de reaes qumicas catalisadas por biocatalisadores Clulas vivas
Enzimas
Biorreatores
Sistema no assptico onde no absolutamente necessrio se operar com culturas inteiramente puras (sistemas de descarte de efluentes);
Sistema assptico onde as condies de assepsia so prrequisitos para a formao do produto com sucesso;
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http://www.viagemesabor.com.br/noticias/roteiros/br/norte/para/marajo
Tanque de macerao das uvas Produo de vinhos (Hoje: prensa hidrulica) Quanto mais controle se tem sobre o processo de fermentao, maior a facilidade em se manter a qualidade e garantir a reproduo do processo.
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Chaim Weizmann e colaboradores, Inglaterra (1914-1918) Incio de FERMENTAO CONTROLADA Processo submerso anaerbio de produo de acetona-butanol - grande escala com condies total de assepsia; - condies estritas de anaerobiose (Clostridium acetobutylicum);
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Biorreator ou fermentador
Biorreator ou fermentador
Variao em forma e tamanho dependendo da aplicao O design do biorreator depende de um nmero de fatores que incluem: -Tipo de clulas -Tipo de reao metablica -Informao sobre a transferncia de massa e calor -Viscosidade e homogeneizao
Tamanhos: -Frascos agitados (erlenmeyers): 100 1.000 mL -Fermentadores de bancada: 1 L 30L -Fermentadores piloto: 100 1.000 L -Fermentadores industriais: 1.000 1.000.000 L Tambm podem ser bandejas, garrafas (fermentao slida), colunas (imobilizao clulas ou enzimas)
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Biorreator ou fermentador
1943 EUA, Primeira planta industrial de fermentao para produo de penicilina em fermentadores de ao-carbono de 54 m3 Reatores em ao-carbono Sistemas de agitao e aerao Fundo e tampa esterilizveis torriesfricos
Entrada para a adio de inculo Antiespumante Coleta de amostras Descarga e sada dos gases formados durante a fermentao, etc.
Biorreator ou fermentador
Padres de materiais usados nos fermentadores sofisticados: Todos os materiais que esto em contato com as solues ou com a cultura do organismo devem ser resistentes corroso para prevenir a contaminao do processo com traos de metais; No podem ser txicos pois se houver alguma dissoluo do material ou componente no haver inibio do crescimento da cultura; Inspeo visual do meio e cultura uma vantagem, por isso deve haver materiais transparentes quando possvel O sistema de agitao, portas de entrada e de sada devem ser rgidas o suficiente para no deformar ou quebrar sob estresse mecnico; Materiais precisam suportar repetidas esterilizaes por vapor em alta presso;
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Biorreator ou fermentador
Sistema de agitao
Agitadores: turbinas
Tanque cilndrico vertical; Agitado mecanicamente ou no; Provido de sistema de aquecimento e resfriamento; Demais controles necessrios ao processo;
Camisa de resfriamento
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Serpentinas
http://www.cetem.gov.br/publicacao/CTs/CT2005-084-00.pdf
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1- Pequena escala: 1 a 2 m3 de capacidade cultivo de microrganismos patognicos, ou para crescimento de clulas animais ou vegetais. Em geral, seu uso tem como objetivo produtos ligados rea de sade 2 Escala intermediria: dezenas de metros cbicos at 100 a 200 m 3 especificamente empregado na produo de enzimas, antibiticos e vitaminas.
3- Grande escala: reatores com milhares de metros cbicos de capacidade para processos que exigem poucos ou at mesmo nenhum cuidado de assepsia: fermentao alcolica ou do tratamento biolgico de resduos
1- O reator deve ser capaz de manter-se estril por muitos dias, trabalhar sem problemas por longos perodos e satisfazer todas as exigncias legislativas de conteno ambiental; 2- As exigncias metablicas dos microrganismos, quanto a aerao e agitao, devem ser plenamente satisfeitas, mantendo porm a integridade fsica dos mesmos;
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5- Um sistema de controle de pH deve estar disponvel; 6- Um sistema de tomada de amostras prova de contaminao do contedo do fermentador deve ser parte integrante do equipamento.
Para tanto, 12 pontos devem ser observados: 7- Perdas por evaporao devem ser mantidas ao mnimo;
8- Eficiente sistema de controle dos gases e sada do fermentador devem estar disponveis; 9 - O reator deve exigir o mnimo em mo-de-obra para sua operao, limpeza e manuteno; 10 O reator deve preencher, sempre que possvel, a caracterstica de multi-propsito, contudo, a regulamentao de conteno ambiental e a possibilidade de contaminaes cruzadas podem ser fatores limitantes
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Para tanto, 12 pontos devem ser observados: 11- O reator deve ter as superfcies internas polidas e todas as suas conexes, na medida do possvel, devem ser soldadas e no rosqueadas; 12- Na medida do possvel, o reator deve manter uma geometria similar dos reatores menores ou maiores, a fim de facilitar a ampliao de escala do processo.
Biorreator ou fermentador
Escala laboratorial ~1L
Biorreator de bancada
http://www.faperj.br/boletim_interna.phtml?obj_id=3930
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Biorreator ou fermentador
Composio: Reatores de bancada 1. Reatores de vidro com fundo arredondado ou chato e tampa superior de inox ligada ao corpo por uma flange. Dimetro mximo = 60 cm. vidro borossilicato esterilizado em autoclave; 2. Reatores com corpo cilndrico de vidro, com tampas superior e inferior em ao inoxidvel. Esterilizado in situ (10-20L).
http://www.ars-fla.com/Mainpages/Bio-Reactor/bioreactor.html
Biorreator ou fermentador
Composio: Reatores Pilotos e industriais Volumes: 50 L a 500 m3 Analisar materiais quanto: - Capacidade de resistir s presses de esterilizao - Resistncia corroso - Toxicidade dos produtos resultante de uma eventual corroso; - Custo do material Ao inoxidvel 316 considerado adequado no resolve todos os problemas: produo de cido ctrico pH 1 ou pH 2 corroso Inox 317 com 3-4% de molibdnio
Classes de ao inox no Brasil segue American Iron and Steel Institute (AISI)
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Tabela 1. Composio de alguns tipos de aos inoxidveis AISI. Composio nominal (%). Tipo de ao 304 304L 321 316 316L Carbono 0,08 0,03 0,08 0,08 0,03 Cromo 18-20 18-20 17-19 16-18 16-18 Nquel 8-11 8-11 9-12 10-14 10-14 5 xC Titnio Molibdnio 2-3 2-3
Fermentao com clulas animais corroso dos metais pesados insuspeitveis problemas
Biorreator ou fermentador
Composio: Reatores Pilotos e industriais Outros materiais: Cobre (cervejarias resistncia pelas leveduras chega a 30 ppm) Alumnio raramente utilizado pois reagentes podem atac-lo; Nquel elevada resistncia corroso; Titnio alto custo; Vidro borossilicato instalao de visores; Plsticos resistentes corroso, mas alguns no resistem muito a solventes (polietileno, polipropileno, PVC rgido...) Ao carbono Ferro + carbono: utilizado nos primeiros reatores empregados na produo de penicilina. No mais utilizado devido dificuldade de limpeza e contaminao do produto
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1. Fase lquida: contm sais, substratos e metablitos dissolvidos. Pode tambm possuir substrato imiscvel em gua; 2. Fase slida: consiste nas clulas, substratos ou produtos insolveis;
Sistema de agitao
Fatores importantes:
Sondas para determinao de pH pO2
1 - Oxignio 2 - Temperatura 3 - pH
Sistema de aerao
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Processos fermentativos envolvendo cultivo de clulas aerbias ou anerbias facultativas visando formao de produtos ou tratamento biolgico de guas residurias tm em comum o aspecto de exigirem um adequado dimensionamento do sistema de transferncia de oxignio (fase gasosa fase lquida)
Permite: - Armazenamento de energia ATP; - Reoxidao das coenzimas que participam das reaes de desidrogenao.
NADH
NADH
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300 rpm
450 rpm
750 rpm
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Concentrao de O2
Co
Co
Co 1
t0
t1
Tempo
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Devagar
rpida
pequena grande
as bolhas pequenas iro circular por todo o reator e tero o seu tempo de residncia aumentado.
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Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma Fatores que favorecem a formao de espuma:
Meio de fermentao: meios ricos em protenas tendem a formar mais espuma. Muitas clulas produzem molculas tipo detergente (cidos nuclicos e protenas excretadas aps lise das clulas ou compostos lipdicos produzidos durante o crescimento); Taxa de aerao e velocidade do agitador (, formao de espuma);
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Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma Formao excessiva de espuma pode: 1. Bloquear os filtros de sada de ar; 2. Aumentar a presso do biorreator O controle feito com a adio de agentes antiespumantes baseados em silicone ou leos vegetais que desestabilizam a espuma pela reduo da tenso superficial.
ON-OFF. Uma parte fica no meio e a outra acima do nvel do lquido. Quando a espuma atinge a superfcie do sensor que est em cima, existe a produo de uma corrente eltrica que detectada pelo controlador, resultando na ativao da bomba.
Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma Fatores que auxiliam na diminuio da formao da espuma: O volume livre no reator: em sistemas nos quais a espuma formada facilmente, o volume de trabalho deve ser reduzido para facilitar o controle de espuma. Quanto maior o volume livre, maior a probabilidade da espuma colapsar por causa do seu prprio peso; Temperatura do condensador: em reatores de laboratrio, uma temperatura mais baixa pode ajudar no controle da espuma. A densidade da espuma aumenta quando ela se move de uma regio mais quente para a regio fria do condensador, causando o colapso da espuma; Quebradores mecnicos de espuma: agitador de alta velocidade. A bolha puxada para o agitador e colapsa por ao de foras mecnicas. Em pequenos reatores de laboratrio so utilizados quebradores ultrassnicos, que geram vibraes de alta frequncia responsveis por quebrar as bolhas da espuma
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Geometria do biorreator
DT WB
Li Wi Di
HL
Geralmente cilndricos. So construdos em dimenses padro publicadas pela International Standards Organisation e British Standards Institution.
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Geometria do biorreator
DT WB
Esquema de tanque agitado por turbinas de ps planas, com indicao de dimenses importantes na transmisso de potncia ao lquido
Li Wi Di
HL
Di = Dimetro do impelidor (m) DT = Dimetro do tanque (m) HL = altura da coluna do lquido (m) C = distncia do impelidor ao fundo do reator (m) Wi = altura da p da turbina (m) WB = altura da chicana (m) Nmero
de impelidores para uma mxima transferncia de potncia > NImpelidores > HL 2Di Di
HL Di Di
Geometria do biorreator
OBS Depende do nvel de espuma produzido durante a fermentao Reatores europeus tendem a ser mais altos que os projetados nos EUA Reatores com turb. Rushton so geralmente 1/3 do dimetro do tanque. Os de fluxo axial so maiores Geralmente 10% do dimetro do reator
Ht/Dt
~1-2
Da/Dt
1/3 1/2
Largura das chicanas e dimetro do tanque Altura da p do impelidor e dimetro do impelidor Largura da p do impelidor e dimetro do impelidor Distncia mdia entre o impelidor e a sada de gs e altura da p
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Geometria do biorreator
Geometria do biorreator
Fluxo axial: o lquido dirigido para a base do reator, isto , paralelo ao eixo do agitador. So deficientes em gerar turbulncia e quebra das bolhas de ar, o que os tornam indesejveis para cultivos aerados.
Algumas marcas comerciais: Impelidor Lightnin 320, Impelidor KPC KROMA, Impelidor Pitched Impelidor Lightnin
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Geometria do biorreator
No fluxo radial, o lquido inicialmente dirigido a parede do reator, isto , ao longo do raio do tanque. No to eficiente quanto o fluxo axial. Maior quantidade de energia necessria para gerar o mesmo fluxo que o axial; Algumas marcas comerciais: tipo Arrowhead, de ps curvas, de ps retas verticais, Impelidor Rushton, Impelidor Smith.
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Exotrmica
Reao no Biorreator
Endotrmica
Sistema de circulao de vapor e gua quente podem aquecer o sistema e tambm podem ser teis para esterilizao do biorreator antes do incio do processo da fermentao;
Camisa (Jacket) ou serpentina de resfriamento Para o resfriamento de culturas, por onde pode passar gua, por exemplo, com temperaturas menores
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Serpentinas
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Agitao adequada essencial pois proporciona os seguintes efeitos nas trs fases: 1- Disperso do ar no meio de cultivo 2- Homogeneizao para igualar a temperatura, pH e concentrao de nutrientes 3- Suspenso dos microrganismos e dos nutrientes slidos 4- Disperso de lquidos imiscveis
Deve-se buscar o equilbrio entre a necessidade de mistura do meio evitando-se o dano celular.
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1. Sistema de agitao; 2. Sistema de distribuio de O2; 3. Sistema de controle de espuma; 4. Sistema de controle de temperatura; 5. Sistema de controle de pH; 6. Portas de amostragem; 7. Sistema de limpeza e esterilizao; 8. Linhas para esvaziar o biorreator.
Bibliografia
Schmidell W, Lima UA, Aquarone E, Borzani W. Biotecnologia Industrial: Engenharia Bioqumica. Volume 2. Ed Edgard Blcher LTDA, So Paulo, 2001. Cap. 8 e 20 Smith JE. Biotechnology. 4th ed. Cambridge University Press, 2004. Cap. 4
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