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PRACTICA N 7: RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS I.

OBJETIVOS Demostrar la accin enzimtica de la catalasa de tejidos animales y vegetales sobre el perxido de hidrogeno Determinar la actividad amilasa salival y pancreatina Observar el efecto de la temperatura sobre la accin enzimtica de la catalasa.

II.

MATERIALES Tubo de ensayos Papa Perxido de hidrogeno Geranio Solucin de almidn Agua destilada salival Lugol Hcl Amilasa

III.

PARTE EXPERIMENTAL

A. ACCIN ENZIMTICA DE LA CATALASA En un tubo de ensayo colocar trocito de papa. Agregar 2ml de perxido de hidrgeno y dejar en reposo por 1 minuto. REACCION:

B. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA CATALASA Hacer hervir pequeos trozos de papa a alta temperatura. Hacer lo mismo con el geranio. Lugo de hacerlo hervir enfriar un poco y agregarle 2ml. de perxido de hidrogeno.

C. ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA 1. Sistema de incubacion : En dos tubos de ensayo (I y II)agregar 2ml de solucion de almidon 1% y luego 2ml de agua destilada. Colocar los tubos a bao maria a 37 C por 2 minutos. Luego agregar al tubo II, 3ml. de amilasa salival. Incubar los tubos por 10 minutos a 37 C

2. Control de la actividad enzimtica por el producto residual (sustrato) De los tubos I y II incubado transferir 2ml. a otros 2 tubos. Luego aadir dos gotas ml. de lugol diluido Mezclar ,

Tubo 1

Tubo 2

3. Control de la actividad ensimatica de los productos formados. De los tubos I y II incubados transferir 1ml. a otros dos dos tubos previamente rotulados. Agregar a cada tubo 2ml. del reactivo de benedict. Colocar a bao maria en ebullicion por 5 minutos.

D. SENSIBILIDAD DE LA AMILASA SALIVAL AL EFECTO DE PH.

Primer orden En un tubo de ensayo colocar un poco de solucin de almidn Agregar 4 gotas de acido clorhidrico. Agregar 1ml. de saliva

agregar 2 ml. de lugo Segundo orden En un tubo de ensayo colocar un poco de solucin de almidn Agregar 1ml. de saliva Agregar 4 gotas de acido clorhidrico. agregar 2 ml. de lugo

IV.

RESULTADOS:

ACCIN ENZIMTICA DE LA CATALASA En la papa se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxgeno. En el geranio se observa un burbujeo dbil a comparacin de la papa.

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA CATALASA

La alta temperatura inactiva la enzima catalasa de tal manera que no acta sobre el sustrato,ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin cataltica, por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y no se observa ningn tipo de reaccin en el geranio y la papa. ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA Sistema de incubacion : No se observa ninguna reaccin a simple vista molecularmente la amilasa desdobla al almidn en maltosa y dextrinas.

Control de la actividad enzimtica por el producto residual (sustrato) En el tubo 1 la solucin toma un color negro ya que sefija el yodo en el almidn . En el tubo 2 la fijacin es de color amarillo porque hay presencia de maltosa y dextrina y el almidon desapareci.

Control de la actividad ensimatica de los productos formados.

La reaccin o prueba de Benedict identifica azcares reductores. La reaccion con la maltosa tubo II da un color azul. La reaccion de ltubo dos es de color verde por la presencia de azucares reductores SENSIBILIDAD DE LA AMILASA SALIVAL AL EFECTO DE PH.

Primer orden: El acido inactiva la actividad de la enzima. por la presencia del almidon al echar gotas de lugol esta se pinta de color negro Segundo orden: La amilasa reacciona tan rpido que desdobla el almidn en maltosa y dextrina antes de tener contacto con el acido esto se confima con la aplicacin del lugol ya que no se fija el yodo en las cadenas del almidn ya que desaparecio. V. DISCUSION DE RESULTADOS:

La velocidad de una reaccin enzimtica depende de varios factores. Entre stos est el pH. Cada enzima tiene un rango de pH en el que su actividad enzimtica es ptima. Fuera de este rango la enzima por ser una protena empieza a desnaturalizarse por la protonacin o desprotonacin de sus aminocidos constituyentes. La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimtica. Se puede decir que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la reaccin hasta que llega un punto en el que la velocidad disminuye con el aumento en el calor. VI. 1. CUESTIONARIO: Indique las principales propiedades de las enzimas. Estn presentes en pequeas cantidades. No sufren alteraciones irreversibles en el curso de la reaccin y por lo tanto, cada molcula de enzima puede participar en muchas reacciones individuales. No tienen efecto sobre la termodinmica de la reaccin. Tiene gran poder cataltico Son catalizadores en las reacciones qumicas de los sistemas biolgicos. Poseen un elevado grado de especificad de sustrato. Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves de pH y temperatura. La mayora de las enzimas son protenas 2. Cmo demostramos la actividad enzimtica experimentalmente?

Tanto los valores de pH como de la temperatura a los que trabaja la enzima son extraordinariamente importantes. La mayora de los organismos tienen un intervalo de temperatura preferente en el cual sobreviven y sus enzimas funcionan mejor dentro de dicho intervalo de temperatura. Si el ambiente donde se encuentra la enzima es

demasiado cido o demasiado bsico, la enzima puede desnaturalizarse de forma irreversible o transformarse de modo que su forma no le permita ms realizar su funcionamiento apropiado.

3.

Qu es un zimgeno? Cite al menos 4 ejemplos.

Son protenas precursoras sin actividad enzimtica, su activacin es un proceso catalizado por encimas promoviendo la hidrlisis de uno o ms enlaces peptdicos especficos en el zimgeno. Muchos procesos biolgicos estn regulados por esta ruptura proteoltica como la digestin o la coagulacin sangunea. La sntesis de los zimgenos en forma inactiva permite almacenarlos de forma segura hasta que son requeridos y evitar as que las protenas ejerzan una actividad peligrosa en un lugar y momento equivocado. Ejemplo: el tripsingeno, el quimotripsingeno, el fibringeno, el tromboplastingeno, la proacelerina.

4.

Cul es la diferencia entre hormona y enzima?

Cumplen funciones diferentes: la enzima funciona como catalizador (acelera o retarda una reaccin qumica) y la hormona regula el funcionamiento de un tejido en especial. 5. Cuntas clases de inhibidores se conocen que afecta la actividad enzimtica? Irreversible; cuando el inhibidor o veneno modifica o destruye el enzima, que no puede recuperar su actividad, (imagen 37). Reversible; cuando el complejo enzima-inhibidor puede disociarse y volver a actuar. Existen dos tipos: o Inhibicin competitiva; el inhibidor compite con el sustrato por el centro activo, ya que es una molcula parecida y el enzima no es capaz de distinguir entre uno y otro, (imagen 36). o Inhibicin no competitiva; el inhibidor no compite con el sustrato ya que no interacciona con el centro activo, sino con otros grupos del enzima. Suele producir una modificacin en la conformacin del enzima que impide la unin del sustrato, pudiendo, adems, unirse al enzima o al complejo enzima-sustrato. CONCLUSIONES: Se demostr la accin enzimtica de la catalasa de tejidos animales y vegetales sobre el perxido de hidrogeno Se determin la actividad amilasa salival y pancreatina

VII.

Se observ el efecto de la temperatura sobre la accin enzimtica de la catalasa.

VIII.

BIBLIOGRAFICA:

http://www.oocities.org/pelabzen/inhenz.html http://educativa.catedu.es/44700165/aula/archivos/repositorio/3250/3374/html/24_i nhibicin_enzimtica.html http://www2.vernier.com/sample_labs/CMV-03-enigma.pdf http://academic.uprm.edu/~jvelezg/lab7-2.pdf http://es.scribd.com/doc/17469299/Informe-N9-laboratorio-de-BioquimicaI http://bibliotecavirtual.unl.edu.ar:8180/tesis/bitstream/1/193/3/tesis3.pdf