C A P T U L O

32

Metabolismo de nucletidos

32.1  Panormica general de la

biosntesis de nucletidos y la nomenclatura

32.2  Una vez ensamblado el anillo de

pirimidina, se une al azcar ribosa

32.3  El anillo de purina se ensambla

sobre la ribosa fosfato

32.4  Los ribonucletidos se reducen a

desoxirribonucletidos

32.5  La biosntesis de nucletidos se

regula mediante retroinhibicin

32.6  Alteraciones en el metabolismo de

los nucletidos pueden dar lugar aestados patolgicos

Carlos V, emperador del sacro imperio romano (1519-1558), que tambin rein bajo el nombre de Carlos I, rey de Espaa (1516-1556), fue uno de los gobernantes ms poderosos de Europa. Bajo su reinado, el imperio espaol conquist los imperios azteca e inca del Nuevo Mundo. Carlos V tambin padeca graves ataques de gota, un estado patolgico causado por la alteracin del metabolismo de los nucletidos. Este retrato de Tiziano muestra la mano izquierda del emperador hinchada, que deja descansar con sumo cuidado sobre su regazo. Un anlisis reciente de una parte de su dedo, que se ha conservado como una reliquia religiosa, confirma el diagnstico de gota. [Erich Lessing/Art Resource, NY.]

dems de ser los materiales de construccin para pptidos y protenas, los aminocidos sirven de precursores para muchas clases de molculas pequeas que tienen importantes y variadas funciones biolgicas. Repasemos brevemente algunas de las molculas derivadas de los aminocidos (Figura 32.1). La histamina, un componente del sistema inmunitario cuya sobreproduccin provoca una respuesta alrgica, se obtiene a partir de la his-

555

NH2 N N
Adenina

NH2 N N H N O N H
Citosina

HO
+H N 3

N N H
Esfingosina Histamina

NH3+

HO

I HO O
+H 3N

O NH2 N N H R
Unidad nicotinamida del NAD+
+

H I COO

HO HO

H N

CH3

NH3+

HO HO I
Tiroxina (Tetrayodotironina) Adrenalina

Serotonina

HO

HO

N H
5,6-Dihidroxiindol

Figura 32.1 Seleccin de biomolculas derivadas de los aminocidos. Los tomos procedentes
de los aminocidos se muestran de color azul.

tidina por descarboxilacin. La tirosina es un precursor de las hormonas tiroxina (tetrayodotironina), que controla la velocidad de los procesos metablicos por todo el organismo, y adrenalina, la hormona del lucha o huye. La adrenalina tambin es un precursor del 5,6-dihidroxiindol, un precursor de la melanina, un pigmento polimrico complejo que se forma durante la exposicin al sol y que constituye la base qumica del bronceado. El neurotransmisor serotonina (5-hidroxitriptamina) y el anillo de nicotinamida del NAD1 se sintetizan a partir del triptfano. El extremo reactivo de las esngosina, un intermediario de la sntesis de esngolpidos, procede de la serina. Ahora vamos a considerar con ms detalle unos compuestos bioqumicos especialmente importantes que proceden de los aminocidos: las bases de los nucletidos. Las purinas y las pirimidinas se obtienen, principalmente, a partir de aminocidos y son los precursores del DNA, del RNA y de varias coenzimas. Comenzamos con un estudio de la sntesis de nucletidos. Los productos iniciales de la sntesis de nucletidos son los ribonucletidos y veremos cmo se convierten estos compuestos en desoxirribonucletidos, los sustratos para la sntesis del DNA. Despus, nos ocuparemos de la regulacin de la sntesis de nucletidos. Por ltimo, consideraremos algunos estados patolgicos ocasionados por alteraciones en el metabolismo de los nucletidos.

5 Describir cmo se sintetizan los

nucletidos.

32.1 Panormica general de la biosntesis de nucletidos yla nomenclatura

Las rutas para la biosntesis de nucletidos se dividen en dos clases: rutas de novo y rutas de recuperacin (Figura 32.2). En las rutas de novo, las bases de los nucletidos se ensamblan a partir de compuestos ms sencillos. Primero se ensambla el armazn para una base pirimidnica y, despus, se incorpora a la ribosa. Por el contrario, el armazn de una base prica se sintetiza paso a paso directamente sobre una estructura que contiene ribosa. En las rutas de recuperacin se aprovechan bases ya formadas volvindolas a unir a una unidad de ribosa. La sntesis de novo y la mayora de las rutas de recuperacin dan lugar a la sntesis de ribonucletidos. Sin embargo, el DNA se construye a partir de desoxirribonucle-

556

32.2 Sntesis del anillo de pirimidina557

Tabla 32.1 Nomenclatura de las bases, nuclesidos y nucletidos

RNA DNA

Base
Adenina (A) Guanina (G) Uracilo (U) Citosina (C)

Ribonuclesido
Adenosina Guanosina Uridina Citidina

Ribonucletido (5-monofosfato)
Adenilato (AMP) Guanilato (GMP) Uridilato (UMP) Citidilato (CMP)

Base
Adenina (A) Guanina (G) Timina (T) Citosina (C)

Desoxirribonuclesido
Desoxiadenosina Desoxiguanosina Desoxitimidina Desoxicitidina

Desoxirribonucletido (5-monofosfato)
Desoxiadenilato (dAMP) Desoxiguanilato (dGMP) Desoxitimidilato (TMP)* Desoxicitidilato (dCMP)

*Es raro encontrar el timidilato en la forma ribosa y, por tanto, por convencin, se omite la d minscula en la abreviatura.

tidos. Todos los desoxirribonucletidos se sintetizan a partir de los correspondientes ribonucletidos. El azcar desoxirribosa se genera mediante la reduccin de la ribosa integrada en un nucletido completamente formado. Adems, el grupo metilo que diferencia la timina del DNA del uracilo del RNA se aade en el ltimo paso de esta ruta. Un nuclesido est formado por una base prica o pirimidnica unida a un azcar, y un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido. Por ejemplo, la adenosina es un nuclesido formado por la base adenina y el azcar ribosa. El ATP es un nucletido, el ster fosfato (en esta caso, un trifosfato) de la adenosina. Los nombres de las principales bases del RNA y del DNA, as como los de los nuclesidos y nucletidos que se obtienen a partir de ellas se incluyen en la Tabla 32.1.

RUTA DE RECUPERACIN Ribosa activada (PRPP) + base

Nucletido

RUTA DE NOVO Ribosa activada (PRPP) + aminocidos + ATP + CO2 + . . .

32.2  Una vez ensamblado el anillo de pirimidina, se une al azcar ribosa

Los precursores de los anillos de pirimidina son el bicarbonato, el cido asprtico y el amoniaco, que se suele generar a partir de la hidrlisis de la cadena lateral de la glutamina. En la sntesis de novo de las pirimidinas, primero se sintetiza el anillo y, despus, se enlaza a la ribosa formando un nucletido de pirimidina (Figura 32.2, en la p. 558). La primera reaccin de la biosntesis de novo de las pirimidinas consiste en la sntesis de carbamilfosfato a partir de bicarbonato y amoniaco mediante un proceso que consta de tres pasos y que necesita la escisin de dos molculas de ATP. Esta reaccin est catalizada por la carbamilfosfato sintetasa (CPS, o tambin CPS II). En el primer paso de la ruta de la sntesis de carbamilfosfato, el bicarbonato es fosforilado por el ATP dando lugar al carboxifosfato, una forma activada del CO2, y ADP. En el segundo paso, la glutamina es hidrolizada por la CPS formando glutamato y amoniaco que, a continuacin, reacciona con el carboxifosfato generando cido carbmico y fosfato inorgnico.
O HO C
ATP ADP

Nucletido

Figura 32.2 Rutas de novo y rutas de recuperacin. En una ruta de recuperacin,

una base se une a una ribosa activada en forma de 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP). En la sntesis de novo, la propia base se sintetiza a partir de materiales de partida ms sencillos, entres los que se incluyen los aminocidos. La sntesis de novo requiere la hidrlisis del ATP.

O HO

O C O

O P

NH3 procedente Pi + Glu de Gln 2

O C NH2

O O

HO

Bicarbonato

Carboxifosfato

cido carbmico

Posteriormente, el cido carbmico es fosforilado por otra molcula de ATP dando lugar al carbamilfosfato.
O HO C NH2
ATP ADP 2

O O O P O

O C NH2

cido carbmico

Carbamilfosfato

El carbamilfosfato reacciona con el aminocido aspartato formando carbamilaspartato, en una reaccin catalizada por la aspartato transcarbamilasa (ATCasa). Esta

Bicarbonato + NH3 2 ATP Carbamilfosfato

enzima alostrica regula la sntesis de nucletidos de pirimidina, como veremos ms adelante (p. 565). La reaccin catalizada por la carbamilfosfato sintetasa (CPS II) es idntica a la de la carbamilfosfato sintetasa (CPS I) que interviene en la sntesis de urea (p. 527). Sin embargo, la CPS II utiliza la glutamina, en vez del amoniaco, como fuente de nitrgeno y no necesita N-acetilglutamato.
Aspartato

C N 3 4 5C C 2 1 6C N
Anillo de pirimidina

O O
2

O O C NH2

Aspartato

Pi
OOC

HN H

O O

NH2 COO

Aspartato transcarbamilasa

PRPP (una ribosa fosfato)

H H
Carbamilaspartato

Carbamilfosfato

UTP

CTP al RNA

Despus, el carbamilaspartato se cierra sobre s mismo formando dihidroorotato, que se oxida por el NAD1 dando lugar al orotato.
O O
H
+

TTP

dCTP al DNA
OOC

HN H

H2O

NH2 COO OOC

HN H

NAD

NADH + H+

O HN C NH O H
Orotato

NH O
OOC

Figura 32.3 Ruta de novo para la sntesis de nucletidos de pirimidina.

Los tomos C-2 y N-3 del anillo de pirimidina proceden del carbamilfosfato, mientras que el resto de los tomos del anillo proceden del aspartato.

H H
Carbamilaspartato

H H
Dihidroorotato

Llegados a este punto, el orotato se acopla al 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP), una forma activada de la ribosa que puede aceptar bases de nucletidos. El PRPP se sintetiza a partir de la ribosa 5-fosfato, formada durante la ruta de las pentosas fosfato, mediante la adicin de pirofosfato procedente del ATP, en una reaccin catalizada por la PRPP sintetasa.
2O POH C 3 2

O HN O N H
Orotato

O OH

ATP

AMP PRPP sintetasa

2O

3POH2C

O O

O O P O

O O P
2

C O +

HO

OH

HO

OH
PRPP

Ribosa 5-fosfato

2O

3POH2C

O O

O O P O

O O P
2

HO

OH

El orotato reacciona con PRPP formando orotidilato, un nucletido de pirimidina, en una reaccin impulsada por la hidrlisis del pirofosfato, tal y como se indica al margen. A continuacin, el orotidilato se descarboxila formando uridina monofosfato (UMP, o uridilato), uno de los dos principales nucletidos de pirimidina precursores del RNA. Esta reaccin est catalizada por la orotidilato descarboxilasa.
O HN O
H+ CO2
2O 3POH2C

5-Fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP)

O HN O O N H

PPi

2O

3POH2C

N C O O

O HN O
2O 3POH2C

Orotidilato descarboxilasa

HO
N C O O

OH

HO

OH

Orotidilato

Uridilato

El CTP se forma mediante la aminacin del UTP

Cmo se forma la citidina monofosfato (CMP, o citidilato), el otro ribonucletido de pirimidina mayoritario? Se sintetiza a partir de la base uracilo del UMP pero, primero, el UMP se tiene que convertir en UTP para que la sntesis se pueda llevar a cabo.

HO

OH

Orotidilato

558

32.2 Sntesis del anillo de pirimidina559

Las quinasas convierten los nuclesidos monofosfato en nuclesidos trifosfato

Recordemos que, tanto en la biosntesis como en las conversiones energticas, las formas activas de los nucletidos son los difosfatos y los trifosfatos. Los nuclesidos monofosfato se convierten en nuclesidos trifosfato paso a paso. En primer lugar, los nuclesidos monofosfato se convierten en difosfato por medio de nuclesido monofosfato quinasas especcas que utilizan ATP como donador de grupos fosforilo. Por ejemplo, la UMP quinasa fosforila el UMP para formar UDP. UMP 1 ATP N UDP 1 ADP Los nuclesidos difosfato y trifosfato son interconvertibles gracias a la nuclesido difosfato quinasa, una enzima de escasa especicidad, a diferencia de las monofosfato quinasas. Las letras X e Y pueden representar a varios ribonuclesidos o, incluso, a varios desoxirribonuclesidos:

XDP 1 YTP N XTP 1 YDP

Una vez formada la uridina trifosfato, se puede transformar en citidina trifosfato (CTP) reemplazando un grupo carbonilo por un grupo amino. Como en la sntesis de carbamilfosfato, esta reaccin necesita ATP y utiliza la glutamina como fuente de grupos amino. A continuacin, la CTP puede utilizarse en multitud de procesos bioqumicos, entre los que se incluye la sntesis de RNA y la activacin de molculas para la sntesis de fosfolpidos (p. 499).
O HN O
4O 3PO3PO3POH2C

los precursores de la sntesis de novo de las pirimidinas?

PREGUNTA RPIDA 1 Cules son

Gln + H2O Glu NH3

NH2 N O
4O 3PO3PO3POH2C

N
ATP ADP + Pi

HO
UTP

OH

HO
CTP

OH

Las bases pirimidnicas se reciclan mediante rutas de recuperacin

Las bases pirimidnicas se pueden recuperar a partir de los productos de la descomposicin del DNA y del RNA utilizando las rutas de recuperacin. En estas rutas, se incorporan bases ya formadas a los nucletidos. Consideraremos la ruta de recuperacin de la timina, una base pirimidnica. La timina se encuentra en el DNA y, en la doble hlice, forma pares de bases con la adenina. La timina procedente de la degradacin del DNA se recupera en dos pasos. Primero, se convierte la timina en el nuclesido timidina mediante la timidina fosforilasa. Timina 1 desoxirribosa-1-fosfato N timidina 1 Pi Posteriormente, la timidina se convierte en un nucletido mediante la timidina quinasa.
O H N O N H
Timina

CH3 H

Timidina 1 ATP N TMP 1 ADP

La actividad de la timidina quinasa ucta con el ciclo celular, mostrando una actividad mxima durante la fase S, en la que se produce la sntesis de DNA. La timidina quinasa vrica es distinta de la enzima de los mamferos y, por tanto, constituye una diana teraputica. Por ejemplo, las infecciones por el herpes simple se tratan con aciclovir, un compuesto que la timidina quinasa vrica convierte en un inhibidor suicida que pone n a la sntesis del DNA. Como veremos en breve, la timidina quinasa tambin desempea un papel en la sntesis de novo del timidilato.

CO2 Aspartato

Glicina

32.3 El anillo de purina se ensambla sobre la ribosa fosfato

N10-Formiltetrahidrofolato Glutamina

N 1 6 5C C2 N
3 4C

N10-Formiltetrahidrofolato Glutamina

7 8C 9

Estructura del anillo de purina

ribosa-P

IMP

Las purinas, al igual que las pirimidinas, se sintetizan de novo a partir de materiales de partida sencillos (Figura 32.4). A diferencia de la sntesis de pirimidina, el primer paso para el ensamblaje de la purina consiste en su unin a la ribosa. La sntesis de novo de la purina requiere PRPP, al igual que la biosntesis de pirimidina pero, en el caso de la purina, el PRPP proporciona la plataforma sobre la que se van construyendo las bases paso a paso. El paso comprometido inicial es el desplazamiento del pirofosfato del PRPP por parte del amoniaco en vez de por una base previamente ensamblada, para producir 5-fosforribosil-1-amina, con la amina en conguracin b. En esta reaccin, catalizada por la glutamina fosforribosil amidotransferasa, es la glutamina, de nuevo, la que aporta el amoniaco.
2O POH C 3 2

ATP

GTP al RNA

O O

O O P O

O O P
2

PPi

2O

3POH2C

NH2

O
H3N + Glu H2O + Gln

dATP

dGTP al DNA

HO

OH
PRPP

HO

OH

5-Fosforribosil-1-amina

Figura 32.4 Ruta de novo para la sntesis de nucletidos de purina. Se indica la

procedencia de los tomos del anillo de purina.

Para ensamblar el anillo de purina se necesitan otros nueve pasos. La biosntesis de novo de la purina se lleva a cabo mediante reacciones sucesivas de activacin por fosforilacin, seguida de un desplazamiento, tal y como se muestra en la Figura32.5. El producto nal es el nucletido inosina monofosfato (IMP, o inosinato). Los aminocidos glicina, glutamina y aspartato son importantes precursores La sntesis de las purinas depende del tetrahidrofolato, un destacado transportador de unidades monocarbonadas activadas (p. 546).

El AMP y el GMP se forman a partir del IMP

En la forma cclica del azcar ribosa, la conguracin b indica que el grupo unido al C-1 se encuentra del mismo lado del anillo que el grupo CH2OH. En la conguracin a el grupo unido al C-1 y el grupo CH2OH se encuentran en lados opuestos del anillo.

la procedencia de todos los tomos de un anillo de purina.

PREGUNTA RPIDA 2 Identifique

El inosinato, aunque forma parte de algunas molculas de RNA, acta fundamentalmente como precursor de otras purinas. El inosinato se encuentra en la base de una ruta ramicada que da lugar tanto al AMP como al GMP (Figura 32.6, en la p. 562). El adenilato se sintetiza a partir del inosinato mediante la sustitucin del tomo de oxgeno del grupo carbonilo en la posicin C-6 por un grupo amino. La adicin de aspartato seguida de la eliminacin de fumarato proporciona el grupo amino. Durante la sntesis del intermediario adenilsuccinato a partir de inosinato y aspartato, se necesita GTP en vez de ATP. La guanosina monofosfato (GMP, o guanilato) se sintetiza mediante la oxidacin del inosinato a xantina monofosato (XMP, o xantilato), seguida de la incorporacin de un grupo amino al C-2. Durante la oxidacin del inosinato, el aceptor de hidrgeno es el NAD1. El grupo carbonilo del xantilato se activa mediante la transferencia de un grupo AMP procedente del ATP. Posteriormente, el amoniaco generado por la hidrlisis de la glutamina desplaza el grupo AMP para formar guanilato, en una reaccin catalizada por la GMP sintasa. Hay que sealar que la sntesis de adenilato requiere GTP, mientras que la sntesis de guanilato necesita ATP, una diferencia que, como ya veremos (p. 566), permite que el ujo a travs de cada rama sea equilibrado.

In vivo, las enzimas de la ruta para la sntesis de purina se asocian entre s

Los bioqumicos creen que las enzimas de muchas rutas metablicas, como la gluclisis y el ciclo del cido ctrico, se encuentran fsicamente asociadas entre s. Estas asociaciones aumentaran la ecacia de las rutas facilitando el movimiento del producto de una enzima al centro activo de la siguiente enzima de la ruta. Las evidencias que sugieren este tipo de asociaciones proceden, fundamentalmente, de experimentos en los que uno de los componentes de una ruta, puricado con mucho cuidado a partir de la clula, se encuentra unido a otros componentes de la ruta. Sin embargo, estas asociaciones plantean la siguiente cuestin: se asocian realmente las enzimas entre s in vivo o se trata de un artefacto provocado por el protocolo de puricacin? Evidencias obtenidas recientemente in vivo demuestran que, cuando hay que sintetizar purina, las enzimas de la ruta de la sntesis de purina se asocian entre s. Se fusionaron los

560

1 ATP + Gly ADP + Pi O

O H
THF

O
ADP + Pi

NH3+ P-ribosa H N C O CH2

THF

H
ATP

H H N P-ribosa

P-ribosa-NH2
Fosforribosilamina

P-ribosa

H N

C O

CH2
H 3N + Glu H2O + Gln

C N H

CH2

Glicinamida ribonucletido

Formilglicinamida ribonucletido

Formilglicinamidina ribonucletido ATP 4 ADP + Pi

C C

N C C O O P-ribosa

C C HN

N C H O

N P-ribosa

ADP + Pi HO

ATP + O C

C C

N C H NH2

N P-ribosa

NH2
Carboxiaminoimidazol ribonucletido ATP + Asp ADP + Pi

C O

5-Aminoimidazol ribonucletido

OOC

C C

N C C H

N P-ribosa

O O N

C CH2 C H C O O

COO

C C

N C O C NH2
THF

O C H THF

Fumarato

N
7

P-ribosa

NH2

NH2

5-Aminoimidazol4-(N-succinilcarboxamida) ribonucletido

5-Aminoimidazol4-carboxamida ribonucletido

C C H N

N C H O C NH2
9 H2 O

H ribosa

C C

N C O C NH C H

N P-ribosa

N P-ribosa

Figura 32.5 Biosntesis de novo de la purina (1) La

glicina se acopla al grupo amino de la fosforribosilamina. (2) El N10-formiltetrahidrofolato (THF) transfiere un grupo formilo al residuo de glicina. (3) El grupo amida interno se fosforila y, despus, se convierte en un amidina mediante la adicin de amoniaco procedente de la glutamina. (4)Una reaccin de acoplamiento intramolecular forma un anillo imidazol de cinco tomos. (5) El bicarbonato se une primero al grupo amino exocclico y, despus, a un tomo de carbono del anillo imidazol. (6) El carboxilato del imidazol se fosforila y el grupo fosforilo es desplazado por el grupo amino del aspartato. (7) Se libera fumarato y, despus, (8) se aade un segundo grupo formilo procedente del N10-formiltetrahidrofolato. (9) La formacin de un anillo pone fin a la sntesis de inosinato, un nucletido de purina. Abreviatura: La P representa el grupo fosforilo.

O
5-Formaminoimidazol4-carboxamida ribonucletido Inosinato (IMP)

561

562 32 Metabolismo de los nucletidos

OOC

H N
GDP + Pi

OOC

HN COO N N
H COO

N
Fumarato

NH2 N N

N N P-ribosa N
Inosinato

O NH

GTP + Asp

N P-ribosa

N P-ribosa
Adenilato (AMP)

Adenilsuccinato

N
NAD + H2O
+

O NH N H O
H 3N + Glu H2O + Gln AMP + PPi

N N P-ribosa N

O NH NH2

N
NADH + H+

ATP

P-ribosa

Xantilato

Guanilato (GMP)

Figura 32.6 Generacin de AMP y de GMP. El inosinato es el precursor del AMP y del GMP.
ElAMP se forma mediante la adicin de aspartato seguida de la liberacin de fumarato. El GMP se genera mediante la adicin de agua, la deshidrogenacin por NAD1 y la sustitucin del tomo de oxgeno del grupo carbonilo por un NH2 procedente de la hidrlisis de la glutamina.

genes de varias enzimas de la ruta con el gen de la protena uorescente verde (GFP), que permite visualizar las enzimas, y se transfectaron en clulas. Cuando las clulas crecan en presencia de purina, la GFP se encontraba esparcida de forma difusa por todo el citoplasma (Figura 32.7A). Cuando las clulas fueron transferidas a un medio de crecimiento carente de purinas, comenz la sntesis de purinas y las enzimas se asociaron entre s formando unos complejos denominados purinosomas (Figura32.7B). Se repitieron los experimentos con otras enzimas de la ruta de la sntesis de purina y los resultados fueron idnticos: la sntesis de purina se produce cuando las enzimas forman los purinosomas. Qu es lo que induce la formacin de los complejos? Aunque las causas todava no estn muy claras, parece ser que una fosfatasa, que presumiblemente responde de alguna manera a la ausencia de purinas, induce la formacin del complejo, mientras que una quinasa, en respuesta a la presencia de purinas, parece provocar el desmantelamiento del purinosoma.

Las bases se pueden reciclar mediante rutas de recuperacin

Los nucletidos de purina, como los de pirimidina (p. 559), tambin se pueden sintetizar mediante la recuperacin y reciclaje de purinas intactas liberadas durante la degradacin hidroltica de los cidos nucleicos y nucletidos. Estas rutas de recuperacin se saltan la mayora de los pasos que, en la sntesis de novo de los nucletidos, necesitan energa, con lo que se ahorran cantidades considerables de ATP.
(A) (B)

Figura 32.7 Formacin de purinosomas.

Se dise una construccin gnica que codifica una protena de fusin formada por la formilglicinamida sintasa y la protena fluorescente verde (GFP) y se transfect y expres en clulas HeLa (una lnea celular humana). (A) En presencia de purinas (no hay sntesis de purinas), la GFP aparece como una mancha difusa esparcida por todo el citoplasma. (B) Cuando se transfieren las clulas a un medio sin purinas se forman purinosomas, que se pueden ver como grnulos citoplasmticos, y se produce la sntesis de purinas. [Tomado de S. An, R.
Kumar, E. D. Sheets y S. J. Benkovic, Science 320: 103-106, 2008, Fig. 2, partes C y D.]

Las bases de purina se recuperan mediante dos enzimas que presentan distintas especicidades. La adenina fosforribosiltransferasa cataliza la formacin de adenilato, Adenina 1 PRPP h adenilato 1 PPi, mientras que la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT) cataliza la formacin de guanilato y de inosinato que, como ya hemos visto, es un precursor del guanilato y del adenilato. Guanina 1 PRPP h guanilato 1 PPi

Hipoxantina 1 PRPP h inosinato 1 PPi

Las rutas de recuperacin de la purina son especialmente dignas de atencin si se tienen en cuenta las asombrosas consecuencias derivadas de su ausencia (p. 569).

32.4 Los ribonucletidos se reducen a desoxirribonucletidos

Ahora centraremos nuestra atencin en la sntesis de los desoxirribonucletidos. Estos precursores del DNA se forman mediante la reduccin de los ribonucletidos. El grupo hidroxilo en posicin 2 de la unidad de ribosa es sustituido por un tomo de hidrgeno. Los sustratos son ribonuclesidos difosfato y el reductor nal es el NADPH (Figura 32.8). La misma enzima, la ribonucletido reductasa, acta sobre los cuatro ribonucletidos. La estequiometra global es Ribonuclesido difosfato 1 NADPH 1 H iiiih Desoxirribonuclesido difosfato 1 NADP1 1 H2O El mecanismo de reaccin es ms complejo de lo que podra inferirse a partir de esta ecuacin. La ribonucletido reductasa solo cataliza el ltimo paso de esta reaccin. La propia reductasa tiene que reducirse para poder llevar a cabo otro ciclo cataltico y los electrones para esta reduccin proceden del NADPH, pero no directamente. Uno de los transportadores del poder reductor que conecta el NADPH con la reductasa es la tiorredoxina, una protena de 12 kDa que tiene dos residuos de cistena expuestos muy cerca el uno del otro. Durante la reaccin catalizada por la ribonucletido reductasa, estos grupos sulfhidrilo se oxidan a disulfuro.
SH Ribonuclesido difosfato + R SH
Ribonuclesido reductasa

ADP

GDP

CDP

UDP
Productos de la ribonucletido reductasa

Ribonucletido reductasa

dADP dGDP dCDP dUDP

El proceso acaba generando dNTP

Ribonuclesido reductasa

dATP dGTP dCTP

TTP

Figura 32.8 Formacin de desoxirribonucletidos. La ribonucletido

reductasa cataliza la formacin de desoxxiribonucletidos a partir de ribonucletidos.

S Desoxirribonuclesido difosfato + R S

A su vez, la tiorredoxina reducida se regenera gracias al ujo de electrones procedentes del NADPH. Esta reaccin est catalizada por la tiorredoxina reductasa, una avoprotena. Los electrones uyen desde el NADPH al FAD unido a la reductasa y, de all, al disulfuro de la tiorredoxina reducida, a la ribonucletido reductasa y, por ltimo, a la unidad ribosa.
SH
NADPH + H+ FAD

S T RR S SH T RR SH
Tiorredoxina (T)

SH Unidad de ribosa SH S Unidad de desoxirribosa S

Ribonucletido Reductasa (RR)

TR SH S

NADP

FADH2

TR S

Tiorredoxina reductasa (TR)

El timidilato se forma mediante la metilacin del desoxiuridilato

Las reacciones precedentes han generado desoxirribonucletidos, incluyendo el dUDP. Sin embargo, los nucletidos que contienen uracilo no forman parte del DNA. En vez de uracilo, el DNA contiene timina, una anlogo metilado del uracilo. Se nece-

563

564 32 Metabolismo de los nucletidos

sita otro paso para generar timidilato a partir de uracilo. La timidilato sintasa cataliza el toque nal: el desoxiuridilato (dUMP) se metila a timina monofsofato (TMP, o timidilato). En este reaccin, el donador de metilos es el N5,N10-metilentetrahidrofolato (p. 547).
O HN O N H + N5, N10-metilentetrahidrofolato H
Timidilato sintasa

O HN O N CH3 + dihidrofolato H

desoxirribosa-P
Desoxiuridina monofosfato (dUMP)

desoxirribosa -P
Timidilato (TMP)

El tetrahidrofolato se regenera a partir del dihidrofolato producido durante la sntesis de timidilato. Esta regeneracin se consigue gracias a la dihidrofolato reductasa, utilizando NADPH como reductor.
H2N HN O N H N + NADPH + H+ HN H N O
Dihidrofolato

H2N HN

H N H N H + NADP+

O COO H COO

HN H N O
Tetrahidrofolato

COO H COO

Aspecto clnico
Algunos frmacos anticancergenos muy eficaces bloquean la sntesis de timidilato
En las clulas que se dividen rpidamente, la sntesis de DNA necesita un abundante suministro de timidilato, el nico nucletido especco para el DNA. La vulnerabilidad de estas clulas a la inhibicin de la sntesis de TMP ha sido aprovechada en la quimioterapia contra el cncer. La timidilato sintasa y la tetrahidrofolato reductasa son las dianas elegidas para la quimioterapia (Figura 32.9). El uorouracilo, un frmaco anticancergeno, se convierte, in vivo, en uorodesoxiuridilato (F-dUMP). Este anlogo del dUMP acta como un sustrato normal para la sntesis de TMP antes de inhibir de forma irreversible la timidilato sintasa. El F-dUMP constituye un ejemplo de inhibicin suicida, en el que una enzima convierte un sustrato en un agente inhibidor que interrumpe la actividad cataltica de la enzima (p. 132). La sntesis de TMP tambin se puede bloquear inhibiendo la regeneracin del tetrahidrofolato. Anlogos del dihidrofolato, como la aminopterina y el metotrexato (ametopterina), son potentes inhibidores competitivos de la dihidrofolato reductasa.
COO N N H2N N NH2
Aminopterina (R = H) o metotrexato (R = CH3)

HN N R N O H

COO

El metotrexato es un frmaco de muy ecaz para el tratamiento Fluorouracilo de muchos tumores de crecimiento rpido, como es el caso de la leucemia aguda o del coriocarcinoma, un cncer que se origina en clulas de la placenta. Sin embargo, el metotrexato mata a las Fluorodesoxiuridilato clulas que se estn replicando rpidamente, sean malignas o no. (inhibidor suicida) Las clulas madre de la mdula sea, las clulas epiteliales del tracto intestinal y los folculos pilosos son sensibles a la accin de este antagonista del folato y dan cuenta de sus efectos secunTMP dUMP darios txicos, entre los que se incluyen el debilitamiento del sisTimidilato sintasa tema inmunitario, nuseas y prdida del cabello. Los anlogos del folato como la trimetoprima poseen una intensa actividad antibacteriana y antiprotozoaria. La trimetoprima se une a la dihidrofolato reductasa de mamferos con una intensidad 105 veces menor que a las reductasas N 5, N10-MetilentraDihidrofolato de los microorganismos sensibles a ella. Pequehidrofolato as diferencias en las hendiduras donde se locaGlicina NADPH + H+ lizan los centros activos de esas enzimas explican la actividad antimicrobiana tan selectiva de la Dihidrofolato reductasa trimetoprima. Para tratar infecciones se utiliza Serina mucho una mezcla de trimetoprima y sulfameNADP+ Tetrahidrofolato toxazol (un inhibidor de la sntesis de folato).
NH2 N H2N N OCH3 OCH3

Aminopterina y metotrexato (ametopterina)

Figura 32.9 Dianas para los frmacos anticancerosos. La timidilato sintasa y la

dihidrofolato reductasa son las dianas escogidas para la quimioterapia contra el cncer, ya que las clulas cancerosas se dividen rpidamente y necesitan generar gran cantidad de precursores para la sntesis de DNA.

OCH3

Trimetoprima

32.5 La biosntesis de nucletidos se regula mediante retroinhibicin

La biosntesis de nucletidos se regula mediante retroinhibicin, de manera parecida a la regulacin de la biosntesis de aminocidos (p. 549). Estas rutas de regulacin garantizan que los diversos nucletidos se produzcan en las cantidades necesarias.

6 Explicar cmo se regula la sntesis

de nucletidos.

La biosntesis de pirimidina se regula mediante la aspartato transcarbamilasa

En bacterias, la aspartato transcarbamilasa (ATCasa) es una enzima clave en la regulacin de la biosntesis de pirimidinas. La ATCasa se inhibe por CTP, el producto nal de la biosntesis de pirimidinas y se activa por el ATP. Este acoplamiento entre la inhibicin por un nucletido de pirimidina y la estimulacin por un nucletido de purina permite equilibrar los dos reservorios de nucletidos.

Aspartato + carbamilfosfato

ATCasa

carbamilaspartato

UMP

UDP

UTP

CTP

ATP

La carbamilfosfato sintetasa es otro punto donde tambin se produce retroinhibicin, tanto en procariotas como en eucariotas.

565

566 32 Metabolismo de los nucletidos

Histidina Nucletidos de pirimidina
Inhibido por AMP

Adenilsuccinato

AMP

Ribosa 5-fosfato

PRPP
Inhibido por IMP, AMP y GMP

Fosforribosilamina

IMP Xantilato
Inhibido por GMP

GMP

Figura 32.10 Control de la biosntesis de purinas. La retroinhibicin controla tanto la velocidad

global de la biosntesis de purinas como el equilibrio entre la produccin de AMP y GMP.

La sntesis de nucletidos de purina se controla en varios puntos mediante retroinhibicin

El esquema de la regulacin de los nucletidos de purina es ms complejo que el de los nucletidos de pirimidina (Figura 32.10). 1. En la biosntesis de nucletidos de purina, el paso comprometido es la conversin de PRPP en fosforribosilamina mediante la glutamina fosforribosil-amidotransferasa. Esta importante enzima se retroinhibe por muchos ribonucletidos de purina. Hay que destacar el hecho de que el AMP y el GMP, los productos finales de la ruta, actan de manera sinrgica a la hora de inhibir la amidotransferasa. 2. El inosinato es el punto donde la sntesis se bifurca hacia el AMP o hacia el GMP. Las reacciones que tienen lugar a partir del inosinato son puntos de retroinhibicin. El AMP inhibe la conversin del inosinato en adenilsuccinato, su precursor inmediato. Anlogamente, el GMP inhibe la conversin de inosinato en xantilato, su precursor inmediato. 3. Como ya se ha indicado, el GTP es un sustrato para la sntesis de AMP mientras que el ATP es un sustrato para la sntesis de GMP (p. 560). Esta relacin recproca entre lo sustratos tiende a mantener el equilibrio entre la sntesis de los ribonucletidos de adenina y de guanina.

La sntesis de desoxirribonucletidos se controla mediante la regulacin de la ribonucletido reductasa

La reduccin de ribonucletidos a desoxirribonucletidos se controla de manera precisa mediante interacciones alostricas. La ribonucletido reductasa de E. coli es una enzima homodimrica. Cada subunidad contiene dos centros alostricos: uno de ellos controla la actividad global de la enzima, mientras que el otro regula la especicidad hacia el sustrato (Figura 32.11). La actividad cataltica global de la ribonucletido reductasa disminuye cuando se une el dATP, una seal que indica abundancia de desoxirribonucletidos. La unin de dATP o ATP al centro de control de la especicidad hacia el sustrato intensica la reduccin de UDP y CDP, nucletidos de pirimidina, a los correspondientes desoxinucletidos. La unin de timidina trifosfato (TTP) promueve la reduccin del GDP e inhibe la reduccin ulterior de los ribonucletidos de pirimidina. El consiguiente incremento en los niveles de dGTP estimula la reduccin de ATP a dATP. Este complejo patrn de regulacin permite que los cuatro desoxirribonucletidos necesarios para la sntesis del DNA se encuentren en las proporciones adecuadas.

32.6 Alteraciones del metabolismo de los nucletidos567

(A) Centro activo Centro alostrico (actividad) (B) Regulacin de la actividad global ADP GDP Ribonucletido reductasa UDP + CDP ATP

dADP dGDP dUDP dCDP

dATP dGTP TTP dCTP

Regulacin de la especificidad hacia el sustrato ADP GDP UDP CDP + + + dADP dGDP dUDP dCDP dATP dGTP TTP dCTP

Centro alostrico (especificidad)

+ ATP

Figura 32.11 Regulacin de la ribonucletido reductasa. (A) Cada subunidad del dmero de la
reductasa contiene dos centros alostricos, adems del centro activo. Uno de los centros alostricos regula la actividad global y el otro regula la especificidad hacia el sustrato. (B) Patrones de regulacin de la ribonucletido reductasa por parte de los distintos nuclesidos difosfato.

32.6 Alteraciones en el metabolismo de los nucletidos pueden dar lugar a estados patolgicos
Los nucletidos de una clula se estn renovando continuamente. Los nucletidos se degradan a nuclesidos mediante hidrlisis, gracias a las nucleotidasas. La ruptura fosforoltica de los nuclesidos para generar bases libres y ribosa-1-fosfato (o desoxirribosa-1-fosfato) est catalizada por las nuclesido fosforilasas. Como ya se ha comentado, algunas de las bases son reutilizadas para formar nucletidos mediante las rutas de recuperacin. Otras se degradan a productos que sern excretados (Figura 32.12). Una insuciencia en una enzima puede alterar estas rutas, dando lugar a un estado patolgico.

O N N H NH N NH2
H2O NH4+

Guanina

H2N N N N N
H2O Pi

H2N N N N N
H2O NH4+

O N N NH N
Pi Ribosa 1-P Nuclesido fosforilasa

O N N H NH N

O2 + H2O

O
H2O2

N N H

NH N H O

Nucleotidasa

Adenosina desaminasa

Xantina oxidasa

ribosa 5-P AMP

ribosa Adenosina

ribosa Inosina

Hipoxantina

Xantina
Xantina oxidasa H2O + O2

H2O2

O N NH N H O
H+

O H N O N H NH O

Figura 32.12 Catabolismo de las purinas. Las bases pricas se convierten

primero en xantina y, despus, en urato, que es excretado. En este proceso, la xantina oxidasa cataliza dos reacciones.

N H

Urato

N H cido rico

568 32 Metabolismo de los nucletidos

Aspecto clnico
La prdida de la actividad adenosina desaminasa provoca lainmunodeficiencia combinada grave
Si la comparamos con la de otros nucletidos, la ruta de la degradacin del AMP incluye una etapa adicional. En primer lugar, se elimina el fosforilo por medio de una nucleotidasa para formar el nuclesido adenosina (ver la Figura 32.12). En la etapa adicional, la adenosina se desamina mediante la adenosina desaminasa formando inosina. Por ltimo, se elimina la ribosa por medio de la nuclesido fosforilasa generando hipoxantina y ribosa-1-fosfato. Algunas formas de la inmunodeciencia combinada grave (SCID), una enfermedad inmunolgica, estn relacionadas con una insuciencia en la actividad adenosina desaminasa. Las personas con este trastorno padecen graves infecciones recurrentes que, a menudo, provocan la muerte a una edad temprana. La SCID se caracteriza por una prdida de clulas T, que son fundamentales para la respuesta inmunitaria. Aunque el fundamento bioqumico de la enfermedad no se ha determinado con claridad, la ausencia de adenosina desaminasa hace que los niveles de dATP aumenten hasta alcanzar valores entre 50 y 100 veces superiores a lo normal, lo que provoca la inhibicin de la ribonucletido reductasa y, en consecuencia, la sntesis de DNA. A menudo, la SCID se denomina enfermedad del nio burbuja porque los primeros tratamientos exigan aislar al paciente completamente del entorno. El tratamiento actual consiste en un transplante de mdula sea. La insuciencia de adenosina desaminasa ha sido la primera enfermedad gentica que se ha tratado mediante terapia gnica. n

Aspecto clnico
Niveles elevados de urato en el suero inducen la gota
Durante la degradacin del AMP se produce hipoxantina que es oxidada por la xantina oxidasa primero a xantina y, posteriormente, a cido rico. En ambas reacciones, el oxidante es el oxgeno molecular, que se reduce a H2O2 que, posteriormente, se descompone en H2O y O2 por medio de la catalasa. A pH siolgico, el cido rico pierde un protn dando lugar a urato (ver la Figura 32.12). En los seres humanos, el urato es el producto nal de la degradacin de las purinas y se excreta por la orina. Niveles elevados de urato en el suero (hiperuricemia) provocan la gota, una dolorosa enfermedad de las articulaciones. En esta enfermedad, la sal sdica del urato cristaliza en el uido y en el revestimiento de las articulaciones (Figura 32.13). Con frecuencia, el urato sdico se acumula en la pequea articulacin de la base del dedo gordo del pie, aunque tambin se acumula en otras articulaciones. Cuando las clulas del sistema inmunitario engullen los cristales de urato sdico se produce una dolorosa inamacin. Los riones tambin pueden resultar daados por la precipitacin de cristales de urato. La gota es un problema mdico frecuente que afecta al 1% de la poblacin de los pases occidentales. Es nueve veces ms frecuente en hombres que en mujeres. Uno de los tratamientos contra la gota consiste en la administracin de alopurinol, un anlogo de la hipoxantina. El mecanismo de accin del alopurinol es interesante: primero acta como un sustrato y, posteriormente, como un inhibidor de la xantina oxidasa. La oxidasa hidroxila el alopurinol para formar aloxantina (oxipurinol) que, a continuacin, permanece fuertemente unida al centro activo. Vemos aqu otro ejemplo de inhibicin suicida. La sntesis de urato a partir de hipoxantina y xantina disminuye poco despus de la administracin de alopurinol. Las concentraciones de hipoxantina y de xantina en el suero aumentan, mientras que la de urato diminuye. En los seres humanos, los niveles medios de urato en el suero estn muy prximos a su lmite de solubilidad y son ms elevados que los observados en otros primates. Cul es la ventaja selectiva de un nivel de urato tan elevado que sita a mucha gente al borde de un ataque de gota? Resulta que el urato provoca un efecto notablemente benecioso: es muy ecaz a la hora de neutralizar especies reactivas del oxgeno. De hecho, el urato es un antioxidante casi tan ecaz como el ascorbato (vitamina C). El elevado nivel de urato en los seres humanos puede hacer que disminuya la incidencia

OH N N N H

Alopurinol

Figura 32.13Gota. (A) La gota, la reina

de las enfermedades y la enfermedad de los reyes, es una enfermedad ya conocida en laAntigedad. Se crea que la gota se deba al exceso de comida y bebida, algo que solo se podan permitir los ricos. El dolor de su pierna inflamada hace que el corpulento msico se sienta como si le estuviese torturando el mismo diablo. (B) Micrografa de cristales de urato sdico. La acumulacin de estos cristales provoca daos en las articulaciones y en los riones. [(A) El
(A) (B)

del cncer y, si lo comparamos con el de otros primates, puede contribuir de forma signicativa a la mayor esperanza de vida de los humanos. n

grabado a color procede de la Granger Collection, New York / The Granger Collection. La cita se ha extrado de R. L. Wortmann, Gout and hyperuricemia. En Kellys Textbook of Rheumatology, 8. ed., G. S. Firestein, Ed. (Saunders Elsevier, 2008), pp. 1481-1524. (B)Cortesa del Dr. James McGuire.]

Aspecto clnico
El sndrome de Lesch-Nyhan es una dramtica consecuencia de las mutaciones en una enzima de las rutas de recuperacin
Las mutaciones en los genes que codican enzimas de la biosntesis de nucletidos pueden reducir los niveles de los nucletidos necesarios y pueden provocar la acumulacin de intermediarios. Una ausencia prcticamente total de la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa, una enzima de la ruta de recuperacin de guanilato e inosinato (p. 562), provoca inesperadas y devastadoras consecuencias. La manifestacin ms sorprendente de este defecto congnito del metabolismo, denominado sndrome de Lesch-Nyhan, es un comportamiento autodestructivo compulsivo. A la edad de 2 3aos, los nios que presentan esta enfermedad empiezan a morderse los dedos y los labios y, si nadie se lo impide, pueden llegar a arrancrselos. Estos nios tambin se comportan de forma agresiva con otros nios. Otras caractersticas del sndrome de Lesch-Nyhan son el retraso mental y la espasticidad. Los elevados niveles de urato en el suero provocan la formacin de piedras en el rin durante la infancia y, algunos aos despus, aparecen los sntomas de la gota. La enfermedad se hereda como un trastorno recesivo ligado al cromosoma X y afecta principalmente a los varones. Las consecuencias bioqumicas de la prctica ausencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa son una elevada concentracin de PRPP, un notable aumento en la velocidad de biosntesis de purinas mediante las rutas de novo y una produccin excesiva de urato. La relacin entre la ausencia de la transferasa y los extraos sntomas neurolgicos es un misterio, aunque evidencias recientes sugieren que la carencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa provoca, mediante mecanismos an no determinados, un desequilibrio en las concentraciones de neurotransmisores clave. El sndrome de Lesch-Nyhan demuestra que las rutas de recuperacin para la sntesis de IMP y de GMP no son un capricho. Adems, el sndrome de Lesch-Nyhan pone de maniesto que la ausencia de una sola enzima puede originar comportamientos anormales como la automutilacin y la agresividad extrema. Sin duda, el esclarecimiento de las bases moleculares de estos trastornos mentales beneciar a la psiquiatra. n

Aspecto clnico
La insuficiencia de cido flico provoca defectos al nacer, como la espina bfida
La espina bda es un tipo de defecto congnito que se caracteriza por una formacin incompleta o defectuosa del tubo neural durante las primeras etapas del desarrollo. En los Estados Unidos, la incidencia de los defectos del tubo neural es, aproximadamente, de uno por cada 1.000 nacimientos. Diversos estudios han demostrado que, si las mu-

569

570 32 Metabolismo de los nucletidos

jeres ingieren cido flico como suplemento diettico antes del embarazo y durante el primer trimestre de gestacin, la incidencia de los defectos del tubo neural se reduce hasta en un 70%. Una de las hiptesis que explica este hecho es que, cuando aumenta la frecuencia de las divisiones celulares y se tienen que sintetizar cantidades considerables de DNA, se necesitan ms derivados del folato para la sntesis de los precursores del DNA. n

Resumen
32.1 Panormica general de la biosntesis de nucletidos y la nomenclatura En las rutas de novo, los nucletidos se pueden sintetizar exclusivamente a partir de pequeas molculas precursoras mediante una serie de reacciones. Alternativamente, en las rutas de recuperacin se pueden reciclar bases intactas para unirlas a la ribosa activada. Un nuclesido consta de una base unida a un azcar ribosa o desoxirribosa, mientras que un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido. 32.2  Una vez ensamblado el anillo de pirimidina, se une al azcar ribosa Para formar un nucletido de pirimidina, primero se forma el anillo de pirimidina y, despus, se une a la ribosa fosfato. El 5-fosforribosil-1-pirofosfato es el donador de la unidad ribosa fosfato. La sntesis del anillo de pirimidina comienza con la formacin de carbamilaspartato a partir de carbamilfosfato y aspartato, una reaccin catalizada por la aspartato transcarbamilasa. Una deshidratacin, la formacin de un anillo y una oxidacin dan lugar al orotato, que reacciona con PRPP formando orotidilato. La descarboxilacin de este nucletido de pirimidina genera UMP. A continuacin, la aminacin del UTP da lugar al CTP. 32.3 El anillo de purina se ensambla sobre la ribosa fosfato El anillo de purina se ensambla a partir de diversos precursores: glutamina, glicina, aspartato, N10-formiltetrahidrofolato y CO2. El paso comprometido de la sntesis de novo de los nucletidos de purina es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de PRPP y glutamina. El anillo de purina se ensambla sobre la ribosa fosfato, a diferencia de la adicin de ribosa a un anillo de pirimidina ya formado. La adicin de glicina, seguida de una formilacin, una aminacin y la formacin de un anillo, generan el ribonucletido 5-aminoimidazol. Este intermediario contiene el anillo completo de cinco tomos que forma parte del esqueleto de purina. La adicin de CO2, del tomo de nitrgeno del aspartato y de un grupo formilo, seguida del cierre del anillo, generan inosinato, un ribonucletido de purina. El AMP y el GMP se forman a partir del IMP. Los ribonucletidos de purina tambin se pueden sintetizar mediante una ruta de recuperacin en la que una base ya formada reacciona directamente con el PRPP. 32.4 Los ribonucletidos se reducen a desoxirribonucletidos Los desoxirribonucletidos, los precursores del DNA, se forman mediante la reduccin de ribonuclosidos difosfato. Estas conversiones estn catalizadas por la ribonucletido reductasa. La tiorredoxina transfiere electrones desde el NADPH a los grupos sulfhidrilo de los centros activos de esta enzima. El TMP se forma por la metilacin del dUMP. En esta reaccin, el donador de un grupo metileno y de un hidruro es el N5,N10-metilentetrahidrofolato, que se convierte en dihidrofolato. El tetrahidrofolato se regenera mediante la reduccin del dihidrofolato por el NADPH. La dihidrofolato reductasa, que cataliza esta reaccin, se inhibe por anlogos del folato como la aminopterina y el metotrexato. Estos compuestos, junto con el fluorouracilo, un inhibidor de la timidilato sintasa, se utilizan como frmacos anticancergenos. 32.5 La biosntesis de nucletidos se regula mediante retroinhibicin En E. coli, la biosntesis de pirimidina se regula mediante la retroinhibicin de la aspartato transcarbamilasa, la enzima que cataliza el paso comprometido. El CTP inhibe esta enzima, mientras que el ATP la estimula. La retroinhibicin de la glutamina-PRPP amidotransferasa por nucletidos de purina es importante a la hora de regular su biosntesis.

Problemas571

32.6  Alteraciones en el metabolismo de los nucletidos pueden dar lugar aestados patolgicos En los seres humanos, las purinas se degradan a urato. La incapacidad para desaminar la adenosina provoca la inmunodeficiencia combinada grave. La gota, una enfermedad que afecta a las articulaciones y que provoca artritis, est relacionada con una acumulacin excesiva de urato. El sndrome de Lesch-Nyhan, una enfermedad gentica que se caracteriza por automutilaciones, retraso mental y gota, se debe a una insuficiencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa. Esta enzima es esencial para la sntesis de nucletidos de purina a travs de las rutas de recuperacin. Los defectos en el tubo neural son ms frecuentes cuando una mujer embarazada presenta insuficiencia de derivados del folato durante los primeros meses de gestacin, lo que, probablemente, se debe al importante papel que desempean estos derivados en la sntesis de precursores del DNA.

Trminos clave
nuclesido (p. 557) nucletido (p. 557) nucletido de pirimidina (p. 557) carbamilfosfato sintetasa (CPS) (p. 557) 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP) (p.558) orotidilato (p. 558) purina (p. 560) inosinato (p. 560) hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT) (p.563) ribonucletido reductasa (p. 563) timidilato sintasa (p. 564) dihidrofolato reductasa (p. 564) inmunodeficiencia combinada grave (SCID) (p. 568) gota (p. 568) sndrome de Lesch-Nyhan (p. 569) espina bfida (p. 569)

Respuestas a las PREGUNTAS RPIDAS

2. Dixido de carbono, aspartato, glutamina, N10-formiltetrahidrofolato, glicina. Ver la Figura 32.4.

1. Bicarbonato, amoniaco y aspartato. Ver la Figura 32.3.

Problemas
1. Desde el principio o extraer, ahorrar y reutilizar. Qu diferencias hay entre la sntesis de novo de los nucletidos y la sntesis mediante rutas de recuperacin? 5 2. Ribosa fosfato activada. Escriba una reaccin ajustada para la sntesis de PRPP a partir de glucosa a travs de la rama oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato. 3. Fabricando una pirimidina. Escriba una reaccin ajustada para la sntesis de orotato a partir de glutamina, CO2 y aspartato. 5 4. Identificando el donador. Cul es el reactante activado durante la biosntesis de cada uno de los siguientes compuestos? 5 (a) Fosforribosilamina. (b) Carbamilaspartato. (c) Orotidilato (a partir de orotato) 5. Una s en lugar de una t. Qu diferencias hay entre un nuclesido y un nucletido? 6. Ascielos. Asigne a cada trmino la descripcin correspondiente. 5 (a)  Exceso de urato _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (b)  Ausencia de adenosina desaminasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (c)  Ausencia de HGPRT _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (d) Carbamilfosfato sintetasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (e)  Inosinato _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (f) Ribonucletido reductasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (g)  Ausencia de cido flico _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (h) Glutamina fosforribosiltransferasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (i)  Un solo anillo _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (j)  Anillo bibclico _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (k)  Precursor del _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ CTP_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 1. Espina bfida 2.  Precursor del ATP y del GTP 3. Purina 4.  Sntesis de desoxinucletidos 5. UTP 6.  Sndrome de LeschNyhan 7. Inmunodeficiencia 8. Pirimidina 9. Gota 10.  Primera etapa de la sntesis de pirimidina 11.  Paso comprometido de la sntesis de purina

572 32 Metabolismo de los nucletidos

7. El precio de la metilacin. Escriba una reaccin ajustada para la sntesis de TMP a partir de dUMP que est acoplada a la conversin de serina en glicina. 8. Accin de las sulfamidas. La sulfanilamida y otras sulfamidas parecidas inhiben el crecimiento bacteriano, a la vez que se produce una acumulacin de 5-aminoimidazol-4-carboxamida ribonucletido. La adicin de p-aminobenzoato revierte esta inhibicin.
H2N
Sulfanilamida

19. Nitrgeno marcado. Se lleva a cabo la biosntesis de purinas en presencia de [15N]-aspartato y se purifica el GTP y el ATP recin formados. Qu posiciones aparecern marcadas en los dos nucletidos? 5 20. Suministros necesarios. Por qu las clulas cancerosas son especialmente sensibles a los inhibidores de la sntesis de TMP? 6
Problemas de integracin de captulos

SO2NH2

Proponga u mecanismo para el efecto inhibidor de la sulfanilamida. 9. Un donador generoso. Qu importantes reacciones biosintticas utilizan PRPP? 10. Alcanzando el equilibrio. Cul es la relacin recproca entre sustratos que tiene lugar durante la sntesis de ATP y de GTP? 6 11. Siga el rastro del ATP. Cuntas molculas de ATP se necesitan para sintetizar una molcula de CTP partiendo de cero? 12. Encuentre el marcaje. Supongamos que se cultivan clulas en presencia de aminocidos cuyos tomos de carbono a han sido marcados con 13C. Identifique los tomos de la citosina y de la guanina que estarn marcados con 13C. 5 13. Siga el rastro de los carbonos. Se incubaron las clulas de un cultivo tisular con glutamina marcada con 15N en el grupo amida. Posteriormente, se purific el IMP y se observ que contena algunos tomos de 15N. Qu tomos del IMP estaban marcados? 5 14. Bloqueos. Si una cepa bacteriana carece de los siguientes compuestos bioqumicos, cul es el intermediario de la sntesis de purina que se acumular en cada caso? 5 (a) Aspartato. (b) Tetrahidrofolato. (c) Glicina. (d) Glutamina. 15. Mecanismo de accin. Cul es el fundamento bioqumico del tratamiento de la gota con alopurinol? 6 16. Terapia complementaria. En algunos casos, a los pacientes con leucemia agua que estn siendo tratados con frmacos anticancerosos se les administra alopurinol. Por qu se utiliza el alopurinol? 6 17. Insuficiencia de folato. Suponga que alguien padece una insuficiencia de folato. En su opinin, cules seran las clulas ms afectadas? Los sntomas pueden incluir diarrea y anemia. 18. Corrigiendo insuficiencias. Suponga que se encuentra una persona con insuficiencia de una de las enzimas necesarias para la sntesis de IMP. Cmo habra que tratar a esa persona?

21. Estn en todas partes! Los nucletidos desempean diversas funciones en la clula. D un ejemplo de un nucletido que participe en cada una de las funciones o procesos siguientes: (a) Segundo mensajero (b) Transferencia de grupos fosforilo (c) Activacin de carbohidratos (d) Activacin de grupos acetilo (e) Transferencia de electrones (f) Quimioterapia (g) Efector alostrico 22. Ejercitando el msculo. En el tejido muscular tienen lugar algunas reacciones interesantes que facilitan la generacin de ATP para la contraccin. 6
Fumarato Adenilsuccinato liasa

Adenilsuccinato

GDP + Pi Adenilato quinasa

2 ADP

ATP + AMP

CICLO DE LOS NUCLETIDOS DE PURINA

Adenilsuccinato sintetasa

H2O

Aspartato + GTP AMP desaminasa

NH3

IMP

Durante la contraccin muscular, el ATP se convierte en ADP. La adenilato quinasa convierte dos molculas de ADP en una molcula de ATP y otra de AMP. (a) Por qu esta reaccin resulta beneficiosa para el msculo que se contrae? (b) Por qu la constante de equilibrio para la adenilato quinasa es aproximadamente igual a 1? El msculo puede metabolizar AMP utilizando el ciclo de los nucletidos de purina. la reaccin inicial de este ciclo, catalizada por la AMP desaminasa, consiste en la conversin de AMP en IMP. (c) Cmo podra la desaminacin del AMP facilitar la formacin del ATP en el msculo? (d) Cmo puede el ciclo de los nucletidos de purina contribuir a la generacin aerbica de ATP? 23. Estilos distintos. Los seres humanos contienen dos enzimas carbamilfosfato sintetasa distintas. Una utiliza como sustrato el glutamato, mientras que la otra utiliza amoniaco. Cules son las funciones de estas dos enzimas? 24. Su pato mascota. Usted sospecha que su pato mascota tiene gota. Por qu se lo tendra que pensar dos veces antes de administrarle una dosis de alopurinol camuflada en el pan?

Problemas573

Problemas para atrevidos

25. Inhibiendo la biosntesis de purinas. Las amidotransferasas se inhiben por el antibitico y agente antitumoral azaserina (O-diazoacetil-l-serina), que es un anlogo de la glutamina. 5
O N N O
+H N 3

H COO

27. Hiperuricemia. Muchos pacientes con insuficiencia de glucosa-6-fosfatasa presentan niveles elevados de urato en el suero. La hiperuricemia se puede inducir en personas normales mediante la ingestin de alcohol o mediante un ejercicio extenuante. Proponga un mecanismo comn que explique estas observaciones. 28. Carbono marcado. Se aade succinato marcado uniformemente con 14C a clulas que estn participando activamente en la biosntesis de pirimidinas. Proponga un mecanismo mediante el cual, los tomos de carbono del succinato se puedan incorporar a la pirimidina. En qu posiciones estar marcada la pirimidina? 5 29. Aqu pasa algo raro. Se incubaron clulas con glucosa marcada con 14C en el carbono 2, mostrado en rojo en la figura inferior. Despus, se purific el uracilo y se observ que contena 14C en los carbonos 4 y 6. Explique este patrn de marcaje. 5
CHO C C C C H HO H H OH H OH OH

Azaserina

En clulas tratadas con azaserina, qu intermediarios de la biosntesis de purinas se acumularan? 26. El medio HAT. Las clulas mutantes incapaces de sintetizar nucletidos mediante las rutas de recuperacin son herramientas muy tiles en biologa molecular y celular. Suponga que la clula A carece de la timidina quinasa, la enzima que cataliza la fosforilacin de timidina a timidilato, y que la clula B carece de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa. (a) Las clulas A y B no proliferan en un medio HAT, que contiene hipoxantina, aminopterina o ametopterina (metotrexato) y timina. Sin embargo, la clula C, formada mediante la fusin de las clulas A y B s crece en este medio. Por qu? (b) Suponga que se quieren introducir genes forneos en la clula A. Disee un sencillo mtodo que le permita distinguir las clulas que han captado el DNA forneo de las que no. 5

CH2OH

En la direccin www.whfreeman.com/tymoczko2e se pueden encontrar lecturas recomendadas para este captulo.