KHARLA JANINNY MEDEIROS

AVALIAO DOS EFEITOS DE UMA DIETA BASE DE MEXILHES Perna perna (Linn, 1758) EM RELAO AOS TEORES DE COLESTEROL, TRIGLICERDEOS E LIPOPROTENAS EM COBAIAS ( Cavia porcellus )

FLORIANPOLIS, SC 2001

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS DEPARTAMENTO DE CINCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
PS-GRADUAO EM CINCIA DOS ALIMENTOS

AVALIAO DOS EFEITOS DE UMA DIETA BASE DE MEXILHES Perna perna (Linn, 1758) EM RELAO AOS TEORES DE COLESTEROL, TRIGLICERDEOS E LIPOPROTENAS EM COBAIAS (Cavia porcellus)

Dissertao apresentada ao Curso de PsGraduao em Cincia dos Alimentos no Centro de Cincias Agrrias da Universidade Federal de Santa Catarina, como requisito final obteno do ttulo de Mestre em Cincia dos Alimentos. Orientador: Prof. Dr. Luiz Henrique Beiro Co-orientadora: Profa. Dra. Vera Lcia C. G. Tramonte

FLORIANPOLIS 2001

KHARLA JANINNY MEDEIROS AVALIAO DOS EFEITOS DE UMA DIETA BASE DE MEXILHES Perna perna (Linn, 1758) EM RELAO AOS TEORES DE COLESTEROL, TRIGLICERDEOS E LIPOPROTENAS EM COBAIAS (Cavia porcellus)

Dissertao aprovada como requisito final obteno do ttulo de Mestre em Cincia dos Alimentos no Centro de Cincias Agrrias da Universidade Federal de Santa Catarina pela banca examinadora:

______________________________________________________ Orientador: Prof. Dr. Luiz Henrique Beiro ______________________________________________________ Co-orientadora: Profa. Dra. Vera Lcia Cardoso Garcia Tramonte ______________________________________________________ Membro: Profa. Dra. Marilde T. B. Luiz:
_______________________________________________________________

Membro: Profa. Dra. Maria Alice Altemburg de Assis ______________________________________________________ Coordenadora: Dra. Roseane Fett Florianpolis, Junho de 2001

AGRADECIMENTOS

Gostaria de agradecer todas as pessoas que contriburam direta ou indiretamente, para a realizao deste trabalho. Especialmente dedico meus agradecimentos:

CAPES, pelo auxlio financeiro em todo o perodo de execuo do trabalho; Universidade Federal de Santa Catarina e ao Curso de Ps-Graduao em Cincia dos Alimentos, pela oportunidade de realizao desta pesquisa; Ao Departamento de Nutrio da Universidade Federal de Santa Catarina, pelo apoio possibilitando a utilizao do Laboratrio de Nutrio Experimental; Ao Prof. Dr. Luiz Henrique Beiro, meu orientador, pela sua disposio e auxlio em todos os momentos em que solicitei sua ajuda; Profa. Dra. Vera Lcia Cardoso Garcia Tramonte, do Departamento de Nutrio/UFSC, minha co-orientadora, por todos os momentos de auxlio, ensinamentos e, por toda a dedicao pesquisa pois sem sua contribuio com certeza, muito no poderia ter acontecido; Profa. Dra. e nutricionista Maria Alice Altemburg de Assis, do Departamento de Nutrio/UFSC, por toda a sua experincia na rea de nutrio bsica, em especial com doenas cardiovasculares, que muito contriburam para a realizao desta pesquisa; Ao Prof. Dr. Daniel Barrera Arrellano e Dr. Renato Grimaldi do Laboratrio de leos e Gorduras da UNICAMP/SP, pela cortesia das anlises dos mexilhes e auxlios prestados; Aos servidores do Departamento de Cincia e Tecnologia de Alimentos, em especial Srgio de Souza pelo atendimento e amizade em todos os momentos; e Alexandre da

Usina de Pescados, pela dedicao e amizade em ajudar em um dos momentos mais difceis da realizao deste trabalho; Profa. Ana Maria Campa, da Universidade de So Paulo, pela ateno e fornecimento de informaes imprescindveis para a finalizao da pesquisa; Ao Sr. Jos de Queiroz, do Cantinho da Ostra, em Santo Antnio de Lisboa/Florianpolis, pela confiana no meu trabalho, fornecimento dos mexilhes e disposio em ajudar sempre que necessrio; Ao Bioqumico Luciano Valdomiro Gonzaga, do Laboratrio de Fsico-qumica/UFSC, pelo auxlio nos inmeros momentos de dvidas e pela realizao de algumas anlises fsico-qumicas; Ao Bioqumico e Tcnico do Laboratrio de Nutrio Experimental/UFSC, Gerson Luiz Faccin, por todos os ensinamentos, particularmente no ensaio biolgico e anlises bioqumicas; Aos professores do Departamento de Cincia e Tecnologia de Alimentos especialmente, Profa. Dra. Marilde T. B. Luiz, Edna R. Amante e Roseane Fett pela orientao e utilizao dos laboratrios de Bioqumica; Frutas e Hortalias e Bromatologia sempre que necessrio; mdica veterinria Dra. Maria Aparecida C. A . Bello e Chefe do Biotrio Central da UFSC, Joansia M. J. Rothestein, pela contribuio em fornecer suporte para a utilizao de cobaias na pesquisa; Novamente Profa. Dra. Marilde T. B. Luiz e todos os alunos do Laboratrio de Bioqumica de Alimentos, pela minha adoo desde o primeiro instante, e onde sempre pude me sentir vontade; amiga e Profa. Elane Scwinden Prudncio, pelo incentivo, amizade e ajuda sempre e sempre;

 todos os meus amigos da Ps-Graduao, em especial Melissa Tensini Hering de Queiroz, pela troca de conhecimentos, crticas e companhia durante todo o perodo de Mestrado e Marco Antnio da Silva, pela sua luz e sensibilidade sempre presentes; Ao acadmico do curso de Nutrio Murilo Gonalves, pela dedicao pesquisa, principalmente no ensaio biolgico; acadmica do curso de Nutrio e amiga, Carolina Dias Moriconi, pelo esforo, dedicao e responsabilidade em relao ao trabalho e confiana que realmente pude depositar em todo e qualquer instante; minha tia ngela Albino, pelo incentivo, por acreditar em mim e por todo o amor dispensados; Ao meu amigo Dr. Glaycon Michels, pelos momentos de compreenso, amizade e apoio no meu progresso como profissional da rea da sade e confiana no meu trabalho; Ao meu amigo Hudson Mafra Jnior pela amizade, cumplicidade e auxlios em informtica com que pude contar sempre; minha famlia, pela compreenso, pacincia, ajuda e pelo grande carinho quando estive ausente; Deus e Espiritualidade, que sem dvida, me auxiliaram a chegar at aqui.

SUMARIO
Pgina LISTA DE TABELAS LISTA DE FIGURAS LISTA DE ABREVIATURAS RESUMO SUMMARY i ii iii

INTRODUAO...............................................................................................................1

REVISO DA LITERATURA ..................................................................... ...............5

2.1 Lipideos............................................. ...............................................................................5 2.2 cidos graxos saturados............................................. ......................................................6 2.3 cidos graxos monoinsaturados................................................ .....................................8 2.4 cidos graxos polinsaturados................................................. .........................................8 2.5 Colesterol........................................................................................................................12 2.6 Lipoproteinas..................................................................................................................13 2.7 Metabolismo das lipoproteinas e do colesterol..............................................................15 2.8 A relao entre colesterol, aterosclerose e doenas cardiovasculares...........................16 2.9 Lipdeos marinhos na nutrio humana.........................................................................23 2.10Caracterizao do mexilho Perna perna .....................................................................28 2.11O cultivo de mexilhes..................................................................................................29 2.12 A escolha do animal experimental ...............................................................................31

3. OBJETIVOS ............................................................. ........... ............... ..........................32 3.1 Objetivo geral ........................................................................................ ........................32 3.2 Objetivos especificos......................................................................................................32

4MATERIAL E MTODOS .............................................................................................33

4.1Material...........................................................................................................................33

4.1.1Mexilhes.....................................................................................................................33 4.1.2 Animais...................................................................................................................... 34 4.1.3 Delineamento experimental ...................................................................................... 35 4.1.4Raesexperimentais....................................................................................................36 4.1.4.1 Rao controle........................................................................................................ 36 4.1.4.2Rao dieta carnes.....................................................................................................37 4.1.4.3 Rao dieta mexilhes............................................................................................38

4.2 Mtodos..........................................................................................................................39

4.2.1 Preparo das amostras....................................................................................................39 4.2.2 Preparo das raes experimentais................................................................................40 4.2.3 Cuidado com os animais................................................................. ...........................40 4.2.4 Coleta das amostras de plasma dos animais experimentais.........................................42 4.2.5 Anlise da composio centesimal das raes experimentais......................................43 4.2.6 Anlise do teor de colesterol........................................................................................43 4.2.7 Anlise da composio em cidos graxos dos mexilhes....................................... ....44 4.2.8 Anlise do teor de colesterol, triglicerdeos e lipoprotenas das cobaias.....................44 4.2.9 Anlise estatstica.........................................................................................................45

5 RESULTADOS E DISCUSSO.....................................................................................46

5.1 Composio centesimal dos mexilhes Perna perna ....................................................46 5.2 Composio centesimal das raes experimentais..........................................................47 5.3 Composio em cidos graxos de mexilhes Perna perna ............................................ 49 5.4 Valor nutricional das raes experimentais....................................................................51 5.5 Ensaio biolgico..............................................................................................................55

5.5.1Consideraes..............................................................................................................55 5.5.2 Variao de peso corporal e consumo de rao..........................................................57 5.5.3 Perfil de lipoproteinas dos animais experimentais.....................................................59 5.5.3.1 Colesterol total e Lipoproteina de baixa densidade ( LDL-colesterol)...................59 5.5.3.2 Lipoproteina de alta densidade (HDL-colesterol) e Lipoproteina de muito baixa densade (VLDL colesterol)....................................................................................64 5.5.4.3 Triglicerdeos..........................................................................................................67 5.6 Sugestes para futuros trabalhos...................................................................................70

6CONCLUSES .................................................................................................................71

7ANEXOS ...........................................................................................................................74

8 REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS ............................ ............................................76

LISTA DE TABELAS
Tabela 1. cidos graxos insaturados quanto ao tamanho da cadeia e posio das insaturaes.................................................................................................................... 10 Tabela 2. Valores de referncia de colesterol total, LDL-colesterol, HDL-colesterol e triglicerdeos plasmticos em humanos ..................................................................... 18 Tabela 3. Composio qumica de alguns frutos do mar em relao ao teor calrico, macronutrientes, gordura saturada, cido graxo w-3 e colesterol/100g........................ 25 Tabela 4. Composio da rao controle (AIN-93G).................................................... 36 Tabela 5. Composio da rao dieta carnes................................................................. 37 Tabela 6. Composio da rao dieta mexilhes........................................................... 38 Tabela 7. Composio centesimal de mexilhes Perna perna macho e fmea de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC.................................................................. 46 Tabela 8. Composio centesimal das raes experimentais (g/100g produto seco).... 48 Tabela 9. Composio em cidos graxos (%m/m) de mexilhes Perna perna machos e fmeas, de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC............................................. 49 Tabela 10. Teor de colesterol e cidos graxos das dietas carnes e mexilhes.............. 52 Tabela 11. Teor de fibras totais, fibra solvel e fibra insolvel das dietas carnes e mexilhes....................................................................................................................... 53 Tabela 12. Composio nutricional das dietas carnes e mexilhes em relao aos micronutrientes Ca, Fe, Na, vit.C e vit. A ................................................................... 54 Tabela 13. Mdia e Desvio-padro ( DP) de peso corporal (g) e consumo de rao (g/animal/dia) de cobaias Cavia porcellus................................................................... 57 Tabela 14. Ganho mdio de peso corporal de cobaias Cavia porcellus durante 21 dias de experimento....................................................................................................... 58 Tabela 15. Perfil de lipoprotenas de cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de consumo de dieta controle, carnes e mexilhes............................................................. 59

Tabela 16. Intervalos de confiana, mdias e desvio-padro de triglicerdeos plasmticos em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento................................................67

LISTA DE FIGURAS

ii

Figura 1. Estrutura qumica dos triglicerdeos.............................................................. 6 Figura 2. cido graxo saturado..................................................................................... 7 Figura 3. cido graxo monoinsaturado........................................................................ 8 Figura 4. Posio das duplas ligaes dos cidso graxos w-3 e w-6............................ 11 Figura 5. Estrutura qumica do colesterol ..................................................................... 12 Figura 6. Composio das lipoprotenas....................................................................... 14 Figura 7. Mexilhes Perna perna fmeas e machos ................................................... 33 Figura 8. Cultivo de mexilhes em Santo Antnio de Lisboa, Fpolis/SC.................... 34 Figura 9. Cobaias Cavia porcellus................................................................................ 34 Figura 10. Higienizao dos mexilhes no local de cultivo ........................................ 39 Figura 11. Acondicionamento dos animais durante o ensaio biolgico........................ 41 Figura 12. Caixas de polipropileno individualizadas para as cobaias no perodo experimental.................................................................................................................. 41 Figura 13. Puno cardaca das cobaias........................................................................ 42 Figura 14. Grfico dos valores mdios de colesterol total em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento.......................................................................... 60 Figura 15. Grfico de box-plot em relao ao colesterol total (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus ............................................................................................................. 60 Figura 16. Grfico dos valores mdios de LDL-colesterol em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento.......................................................................... 62 Figura 17. Grfico de box-plot em relao ao LDL-colesterol (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus ............................................................................................................. 62 Figura 18. Grfico dos valores mdios de HDL-colesterol em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento.......................................................................... 64

Figura 19. Grfico de box-plot em relao ao HDL-colesterol (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus .......................................................................................................... 65 Figura 20. Grfico dos valores mdios de VLDL-colesterol em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento.......................................................................... 66 Figura 21. Grfico de box-plot em relao ao VLDL-colesterol (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus ............................................................................................................ 66 Figura 22. Grfico dos valores mdios de triglicerdeos em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento.......................................................................................... 68 Figura 23. Grfico de box-plot em relao ao triglicerdeos (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus.............................................................................................................. 68

LISTA DE ABREVIATURAS

iii

AHA American Heart Association Associao Americana do Corao AVC Acidente Vascular Cerebral AOAC Association Official Analytical Chemists (Assoc. Oficial de Qumica Analtica ) ACOS American Oil Chemists Society (Sociedade americana de qumica de leos) ANOVA Anlise de Varincia dos Dados CT Colesterol total COBEA Colgio Brasileiro de Experimentao Animal CPNEMB - Capacitao de Pessoal de Nveis Elementar e Mdios em Biotrios DCV Doenas cardivasculares DHA cido docosahexaenico DAC Doena Arterial Coronariana EPA cido eicosapentaenico HPLC High Performance Liquid Cromatrography (Cromatrografia lquida de alta efeicincia) HDL colesterol high density lipoprotein (lipoprotena de alta densidade) LDL colesterol low density lipoprotein (liporotena de baixa densidade) LPL Lipoprotena-lipase LCAT - lecitina-colesterol acil transferase Lp(a) Liporotena a MUFA - cidos graxos altamente monoinsaturados

NCEP National Cholesterol Education Program (Programa de Educao Nacional de Colesterol) NCS - noncholesterol sterols (Esteris que no so colesterol) OMS Organizao Mundial de Sade PUFAs cidos graxos polinsaturados RDA - Recommended Dietary Allowances (Recomedao diettica diria) VLDL-colesterol very-low-density-lipoprotein (liporotena de muito baixa densidade) USDA United States Departament of Agriculture (Departamento de Agricultura dos Estados Unidos) WHO World Health Organization (Organizao Mundial de Sade)

MEDEIROS, K. J. Avaliao dos efeitos de uma dieta base de mexilhes Perna perna (Linn, 1758) em relao aos teores de colesterol, triglicerdeos e lipoprotenas em cobaias Cavia porcellus. Florianpolis, 2001. Dissertao (Mestrado em Cincia dos Alimentos) Universidade Federal de Santa Catarina. RESUMO Nos ltimos anos, as doenas cardiovasculares tm-se constitudo a principal causa de morte no Brasil e no mundo, sendo as enfermidades mais frequentes a aterosclerose, infarto do miocrdio e hipertenso. A eficcia da preveno ou tratamento da aterosclerose depende da eliminao dos fatores de risco modificveis, estando a alimentao inserida como um dos principais componentes da categoria estilo de vida que necessitam de interveno. A ingesto de lipdeos totais e colesterol tm relao direta sobre o desenvolvimento da aterognese. Segundo recentes estudos, os frutos do mar, em especial os mexilhes, contm baixos teores de colesterol e uma grande proporo de cidos graxos polinsaturados, dentre eles o -3 relatado como protetor na reduo do risco de doenas cardiovasculares. Os objetivos deste trabalho foram, determinar os teores de colesterol, triglicerdeos e cidos graxos de mexilhes Perna perna da regio de Florianpolis/SC e avaliar os efeitos de uma dieta base de mexilhes em relao ao perfil lipdico (LDLcolesterol, VLDL-colesterol, HDL colesterol , triglicerdeos e colesterol total) em cobaias Cavia porcellus , quando comparado uma dieta tendo como fonte protica a carne bovina. As cobaias foram divididas em 4 grupos(6 animais/grupo): 1.grupo zero (tempo zero do experimento); 2.grupo controle (dieta base de casena AIN/93); 3.grupo carnes recebendo dieta base de carne bovina (AHA, II NCEP/1996) e 4.grupo mexilhes (dieta grupo carnes com substituio da carne bovina por mexilhes). Os animais foram anestesiados com ter etlico para a coleta das amostras de sangue atravs de puno cardaca, no tempo zero e final do experimento aps 12 horas de jejum. As anlises de lipoprotenas, colesterol e triglicerdeos plasmticos foram realizadas por mtodo enzimtico (Kit Labtest Diagnstica e Wiener Lab). Os mexilhes foram analisados por HPLC (AOAC, 1989) para identificao do perfil de cidos graxos. No houve diferena em relao ao ganho de peso corporal e ingesto de alimentos entre os grupos aps o experimento.Em relao ao perfil lipdico, os animais que receberam dieta contendo mexilhes, apresentaram valores de colesterol-total, triglicerdeos e LDL-colesterol menores do que os demais grupos, respectivamente 72,46 mg/dL, 81,19 mg/dL e 34,96 mg/dL.Para os valores de VLDL-colesterol e HDL-colesterol houve diferena estatisticamente significativa entre os grupos (p< 0,05). Sugere-se portanto, que a ingesto de mexilhes no alterou o perfil lipdico em cobaias, possivelmente pelo seu teor de cidos graxos polinsaturados (-3) EPA (11,27%) e DHA (12,53%), apesar do elevado teor de colesterol (47,28 mg/100g). Assim, possvel a recomendao do consumo de mexilhes e incorporao em guias nutricionais para preveno de doenas cardiovasculares desde que orientados em relao quantidade, frequncia de ingesto e modo de preparo deste alimento. Palavras-chave: cobaias, lipdeos, mexilhes.

MEDEIROS, K.J. Effects os a diet mussels Perna perna (Linn, 1758) in relation to the levels of cholesterol, triacylglicerol and liporoteins in Guinea pigs Cavia porcellus. Florianpolis, 2001. (Dissertao de Mestrado- Cncia dos Alimentos) Universidade Federal de Santa Catarina. SUMMARY In the last years, the cardiovascular diseases have been constituting the main death cause in Brazil and in the world, being the most frequent illnesses the atherosclerosis, infarct of the miocardio and hypertension. The effectiveness of the prevention of treatment of the atherosclerosis depends on the elimination of the risk factors modified, being the nutrition inserted as one of the main components of the category lifestyle that must be changed. The ingestion of lipids and cholesterol have direct relationship on the development of the atherogenesis. As recent studies, the sea foods, especially the mussels, contain low cholesterol and a great proportion of polyunsaturated fatty acids, among them the -3 related as protector in the reduction of the risk of cardiovascular diseases. The objectives of this work were, to determine the cholesterol levels, triacylglycerols and fatty acids of mussels ( Perna perna ) of the Santo Antnio de Lisboa , Florianpolis/SC and to evaluate the effects of a diet to the base of mussels in relation to the lipoprotein profile (LDLcholesterol, VLDL-cholesterol, HDL-cholesterol, triacylglycerol and total cholesterol) in guinea pigs Cavia porcellus . The guinea pigs were distributed in 4 groups (6 animals/group): 1. group zero (time zero of the experiment); 2. group control (diet based in casein AIN/93); 3. group meats receiving diet based on bovine meat (hipolipidic diet) and 4. group mussels (diet group meals with substitution of the bovine meat for mussels), for 30days. The animals were anesthetized with ethyl ether for the collection of the samples of blood through heart puncture, in the time zero and in the end of the experiment after 12 hours of fast. The lipoproteins analyses, plasma cholesterol and triacylglycerol were examined by enzymatic method (Kit Labtest Diagnostica and Wiener Lab). The mussels were analyzed by HPLC (AOAC, 1989) for identification of the profile of fatty acids. No have difference in relation to increase of corporal weight and ingestion of foods in the groups after the experiment. In relation to the lipoprotein profile, the animals that received diet containing mussels, they presented values of total cholesterol, triacylglycerol and LDLcholesterol smaller than the other groups, respectively 72,46mg/dL, 81,19mg/dL and 34,9mg/dL. For the values of VLDL-cholesterol and HDL-cholesterol there significant difference (p<0,05). The suggests therefore, that the ingestion of mussels didnt alter the lipoprotein profile in guinea pigs, possibly because of the quantity of polyunsaturated fatty acids ( -3) EPA (11,27%) and DHA (12,53%), cholesterol content (47,28mg/100g). Like this, it is possible the recommendation of this consumption and incorporation in guides of nutrition for prevention of cardiovascular diseases since oriented in relation to the amount and frequency of ingestion of this food.

Key words: guinea pigs, lipids, mussels.

INTRODUO

As doenas cardiovasculares (DCV) nos ltimos anos tm-se constitudo na principal causa de morte em todo o mundo. No Brasil, segundo dados do Ministrio da Sade, em 1991, as DCV foram a primeira causa de morte da populao brasileira, representando cerca de 34% dos bitos totais do pas. As enfermidades mais freqentes so a aterosclerose e suas complicaes, infarto do miocrdio e a hipertenso. A Organizao Mundial de Sade (OMS) (1990) e a American Heart Association (AHA) (1994) defendem a idia de que a eficcia da preveno ou tratamento da aterosclerose depende da eliminao dos fatores de risco modificveis, o que se obtm com mudanas no estilo de vida. So considerados os principais fatores de risco modificveis, por exercerem uma relao causal importante com a doena coronria e uma alta prevalncia, a dislipidemia, a hipertenso arterial, o tabagismo, a obesidade, o sedentarismo e a alimentao. Portanto, dentro deste contexto, a dietoterapia enfatizada como a principal linha de abordagem teraputica pois, a alterao dos hbitos alimentares leva redues significativas do colesterol srico e as demais lipoprotenas plasmticas (Ministrio da sade, 1993;

National Cholesterol Education Program (NCEP), 1994; Assis, 1997)..

A elevao do consumo de sal, gordura saturada e de colesterol, acompanhada da reduo do consumo de gorduras polinsaturadas e de fibras alimentares uma caracterstica dos hbitos alimentares de populaes com dislipidemias (De Angelis & Ctenas, 1993; Assis, 1997; Caggiula & Mustad, 1997). A importncia da alimentao inadequada no desenvolvimento da doena coronariana caracterizada por seus efeitos sobre os lipdios

sricos, hipertenso arterial, promoo da aterognese e desenvolvimento do Diabetes mellitus (Piggot & Tucker, 1990; Ornish et al., 1990; Assis, 1997). Recentemente, a AHA/2000 atravs de uma reviso real izada para as recomendaes na preveno de DCV reforam os principais pontos a serem priorizados: Hbitos alimentares (educao nutricional); Manuteno do peso corporal adequado; Perfil de lipoprotenas; Presso arterial Especificamente, em relao dieta, mantm-se as recomendaes de ingesto de coelsterol de 300mg/dia para indivduos saudveis e 200mg/dia para indivduos com risco para DCV; bem como a reduo de gordura saturada e cidos graxos trans (encontrados em hidrogenados como margarinas e seus produtos). A maior nfase est na recomendao dos grupos alimentares com suas respectivas pores de ingesto dirias objetivando modificaes nos hbitos alimentares, do que a preocupao excessiva com percentuais de distribuio de nutrientes, quando trata-se de guias de orientaes nutricionais para doenas cardiovasculares (AHA, 2000).

A cultura popular e vrios profissionais de sade vinculam os frutos do mar com alto teor de colesterol, sendo frerquentemente eliminados da dieta de indivduos com dislipidemias. No entanto, a maioria dos frutos do mar contm menos do que 10% do total de Calorias sob a forma de gordura saturada, uma maior proporo de cidos graxos polinsaturados como o linolnico, o eicosapentaenico (EPA) e

docosahexaenico (DHA). Os mexilhes so considerados frutos do mar com baixo teor

de lipdeos quando comparados aos demais (King et al., 1983; Seafood Savvy NY, 1992; Molyneaux & Lee, 1988; Connor, 2000).

Em em um estudo que analisou o teor de zinco em mexilhes e ostras da regio de Florianpolis/SC confirmou-se a alta concentrao deste mineral nestes moluscos (Medeiros & Tramonte, 1996).

Posteriormente, em um ensaio biolgico com ratos, em que houve a substituio das carnes pelos mexilhes, em dieta tpica catarinense, para avaliar a biodisponibilidade de zinco, observou-se maiores valores na concentrao deste mineral no fmur e maior ganho de peso nos animais alimentados com mexilhes, sugerindo, portanto, boa

biodisponibilidade de zinco dos mexilhes desta regio (Medeiros & Tramonte, 1997). Entretanto, neste estudo com mexilhes (Medeiros & Tramonte, 1997), no final do experimento observou-se uma grande quantidade de gordura visceral nos animais do grupo que recebeu dieta contendo mexilhes. Por isso, suspeitou-se que esta gordura pudesse conter uma quantidade considervel de colesterol, bem como de outros cidos graxos, atribudas portanto, s quantidades presentes nos mariscos ingeridos pelos animais. Tal fato levou necessidade de uma maior definio e investigao dos cidos graxos e colesterol nestes alimentos.

Portanto, a proposta deste trabalho foi de determinar os teores de colesterol e triglicerdios dos mexilhes Perna perna da regio de Florianpolis/SC e avaliar o efeito de uma dieta base de mexilhes em relao ao perfil lipdico (colesterol total, triglicerdeos,LDL-colesterol, VLDL-colesterol e HDL-colesterol) em cobaias (Cavia

porcellus), comparada uma dieta hipolipdica tendo como fonte protica a carne bovina.. Alm de ser um alimento abundantemente cultivado nas regies litorneas do Brasil, principalmente entre o Norte do Esprito Santo a Santa Catarina, a constatao de baixos teores de cidos graxos saturados, colesterol e possivelmente altos teores de -3, sero de grande importncia para a recomendao de ingesto destes alimentos em funo de seus benefcios sade, alm de serem de fcil acesso e aquisio pela populao.

2 REVISO DA LITERATURA

2.1 Lipdios

Os lipdios da dieta (gorduras e leos) tm importante papel na nutrio, pois apresentam elevados valores energticos, so fonte de cidos graxos essenciais, atuam como transportadores de vitaminas lipossolveis, alm de aumentarem a palatabilidade dos alimentos. Pelo fato dos lipdios serem insolveis em gua e sendo o plasma um ambiente aquoso, o transporte dos lipdios realizado atravs da associao de protenas, lipdios anfipticos (fosfolipdios e colesterol) e lipdeos no-polares (triglicerdeos e steres de colesterol) resultando nas lipoprotenas miscveis em gua (Nawar, 1993; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995).

Os principais lipdios encontrados nos alimentos so os triglicerdeos, compostos por 3 cidos graxos e uma molcula de glicerol (Fig. 1). Os cidos graxos que fazem parte dos triglicerdios podem variar no comprimento da cadeia de carbonos e no grau de saturao. Os cidos graxos nos triglicerdios das gorduras e leos podem variar de saturado altamente insaturado. Em geral, gorduras de fonte animal (carnes, ovos, leite e derivados) contm um maior percentual de cidos graxos saturados do que os leos vegetais, com algumas notveis excees. Os leos de palma e cco tm um alto grau de saturao enquanto que os de peixes e moluscos so altamente insaturados. cidos graxos monoinsaturados, encontrados especialmente em leos de oliva, canola e amendoim contm uma dupla ligao, enquanto os cidos graxos polinsaturados (PUFAs) tm vrias

insaturaes. A posio da primeira dupla ligao ao longo da cadeia do cido graxo, a contar do final da cadeia ou do mega (ltimo carbono) de cada cido graxo, determina a srie da qual a molcula faz parte (-3, -6, -9) (Piggot & Tucker, 1990; Nawar, 1993; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995).

H- C-O-C-cido graxo O H - C-O-C-cido graxo O H - C-O-C-cido graxo

H Glicerol Figura 1. Estrutura qumica dos triglicerdeos

2.2 cidos graxos saturados

Entre os cidos graxos saturados da dieta, o cido lurico (12C) , cido mirstico (14C) e o cido palmtico (16C) (Fig. 2) so os que tm maior relao com o aumento do colesterol srico. Estes aumentam as fraes de LDL-colesterol, tendo pouco ou nenhum efeito sobre a frao lipoprotica HDL-colesterol e triglicerdeos plasmticos.( Mahan & Arlin, 1994; Assis, 1997; Caggiula et al., 1997; Griffin, 1999; Hu et al., 1999; Forns et al., 2000).

As gorduras animais representadas pelo leite integral, manteiga, queijo, sorvetes e cremes, bem como carne bovina, frango, ovelha e porco so as principais fontes de cidos graxos saturados (Mahan & Arlin, 1994; Kafatos et al., 1997; Kamath e t al., 1999). Os leos vegetais provenientes do cco e da semente de palmeira tambm contm cidos graxos saturados, no entanto so consumidos em menor escala do que as gorduras animais (Mahan & Arlin, 1994; Assis, 1997; Caggiula & Mussad, 1997; Forns et al., 2000).

O mecanismo pelo qual os cidos graxos saturados aumentam os nveis de colesterol no muito claro, mas considera-se que seja atravs da diminuio dos receptores hepticos, reduzindo a depurao das LDL-colesterol e dos remanescentes da VLDLcolesterol, com a consequente elevao do nvel srico de colesterol (Wardlaw & Insel, 1995; Assis, 1997; Caggiula & Mustad, 1997; Dreon et al., 1999; Griffin, 1999; Hu et al., 1999).

HHHHHHHHHHHH HH HHO H-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-H H HHHHHHHHHHHH HHH

Figura 2. cido graxo saturado (cido palmtico; C16:0)

2.3 cidos graxos monoinsaturados

Pesquisas recentes sugerem que o cido olico pode reduzir os nveis de LDLcolesterol, semelhante ao efeito do cido linolico (Fig. 3). O efeito dos cidos graxos monoinsaturados pode estar associado menor quantidade de oxidao do LDL-colesterol (Assis, 1997; Hu et al., 1999; Jones et al., 1999; Kris-Etherton et al., 1999).

O azeite de oliva rico em cido olico, mas outros leos como o de soja, canola e girassol tambm o contm (Fernandez & Macnamara, 1991; Mahan & Arlin, 1994; Nawar, 1993; Mayes, 1994; Ramirez-Tortoza et al., 1999).

HHHHHHHHHHHHH HH HHHO H-C-C-C-C-C-C-C-C-C=C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-H H HHHHHHHHHHHHH HH H H

Figura 3. cido graxo monoinsaturado (cido olico; -9; C18:1)

2.4 cidos graxos polinsaturados

H duas principais categorias de cidos graxos polinsaturados, referidos como -6 e -3 (Fig. 4). O principal cido graxo mega-6 o cido linolico, sendo relatado que sua adio dieta em substituio s gorduras saturadas resulta em queda dos nveis de LDLcolesterol (Mayes, 1994; Fernandez et al., 1993; Caggiula et al., 1997; Dreon et al., 1999).

O mecanismo pelo qual o cido linolico reduz os nveis de colesterol parece estar relacionado com um aumento da excreo de colesterol, formando cidos biliares. Acredita-se tambm haver uma redistribuio do colesterol entre o soro e os tecidos e por outro lado uma reduo na capacidade de transporte de colesterol atravs da LDLcolesterol. A maior probabilidade de que os cidos graxos polinsaturados aumentem a quantidade de receptores para a LDL-colesterol, causando reduo na concentrao desta lipoprotena (Nawar, 1993; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995; Assis, 1997; Griffin, 1999; Hu et al., 1999; Jones et al., 1999; Kris-Etherton et al., 1999).

Muitos leos vegetais so ricos em cido linolico, citando-se o leo de soja, milho, canola, semente de girassol, acafro e nozes (Assis, 1997; Ramirez-Tortoza et al., 1999). Os mega- 3 so derivados do cido linolnico, encontrado em leos vegetais, peixes e carnes como a de peru ( King e tal., 1983; Piggot & Tucker, 1990; Assis, 1997; Molineaux & Lee, 1998; Murphy et al., 1997; Murphy et al., 1999). Os cidos graxos -3 predominantes so o cido eicosapentanico (EPA) e o cido docosa-hexanico (DHA), cuja principal ao a inibio da sntese de triglicerdeos nvel heptico. Altas ingestes de cidos graxos -3 podem reduzir os nveis de triglicerdeos sricos substancialmente, muito mais do que as outras gorduras insaturadas (Vahouny et al., 1981; Mayes, 1994; Assis, 1997; Caggiula et al., 1997; Schaefer, 1997; Siscovick et al., 2000; Torres et al., 2000). Os benefcios dos cidos graxos -3 na reduo de risco de doenas cardiovasculares podem estar relacionados aes diferentes das exercidas sobre as lipoprotenas, pois so antiagregantes plaquetrios e parece que retardam a proliferao

dos fibroblastos e de clulas musculares lisas como resposta a uma leso da parede arterial. Pesquisas tm demonstrado que o consumo de mega-3 pode diminuir os nveis de lipdios sricos e possivelmente de colesterol (Seafood Savvy NY, 1992; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995; Assis, 1997; Caggiula et al., 1997; Schaefer, 1997; Siscovick et al., 2000; Torres et al., 2000; Visentainer et al., 2000). Alguns peixes como a cavalinha, salmo, sardinha e outros de gua salgada e fria so ricos em -3 (Piggot & tucker, 1990; Assis, 1997; Visantainer et al., 2000).

Tabela 1. cidos graxos insaturados quanto ao tamanho da cadeia e posio das insaturaes cido graxo Linolico Araquidnico Linolnico EPA DHA Nmero de carbonos 18 29 18 20 22 Duplas ligaes 2 4 3 5 6 Posio da dupla (n) 6 6 3 3 3

Fonte: Wardlaw, 1995.

Os cidos graxos saturados tm sido associados com as doenas cardiovasculares em contraste com os cidos graxos polinsaturados que causam reduo de risco para estas doenas. Apesar da maioria dos leos vegetais conterem altos teores de cidos graxos polinsaturados, muitos deles possuem apenas 2 duplas ligaes ou posies de insaturao (Piggot & Tucker, 1990; Wardlaw & Insel, 1995; Griffin, 1999; Connor, 2000).

Os leos de fontes animais podem conter alguns cidos graxos com mais de 4 duplas ligaes, mas tm altos teores de cidos graxos saturados (Piggot & Tucker, 1990; Wardlaw & Insel, 1995; Griffin, 1999; Connor, 2000). Somente os leos marinhos tm longas cadeias de cidos graxos com 5 ou 6 duplas ligaes (Tabela 1). Estes leos de moluscos e alguns peixes, podem conter at 50% de cidos graxos polinsaturados.

Portanto, os frutos do mar so considerados como a melhor fonte diettica de cidos graxos mega-3 ( Piggot & Tucker, 1990; Wardlaw & Insel, 1995; connor, 2000; Meydani, 2000). A quantidade de mega-3 pode variar de acordo com a espcie, quantidade de gordura e tipo de alimentao dos peixes ou moluscos, sendo os mexilhes classificados como alimentos com mdio teor de mega-3 (Seafood Savvy NY, 1992).

HHHHHHHHHHHHHHHOHHH H-C-C-C-C-C-C=C-C-C=C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-H HHHHH HHH HH H HHHHHHH

cido linolico -6; C18:2

HHHHHHHHHHHHHHH OHHH H-C-C-C=C-C-C=C-C-C=C-C-C-C-C-C-C-C-C-O-H HHHH H HH H HH H HHHHHHH

cido -linolnico -3; C18:3 Figura 4. Posio das duplas ligaes dos cidos graxos -3 e -6

2.5 Colesterol

O colesterol um componente essencial das membranas estruturais de todas as clulas e o principal componente do crebro e clulas nervosas (Fig. 6). encontrado em altas concentraes nos tecidos glandulares e no fgado onde sintetizado e armazenado. Alm disso, o colesterol um intermedirio na biosntese de vrios esterides importantes, incluindo os cidos biliares, hormnios adrenocorticais, estrgenos e progesterona (Nawar, 1993; Mayes, 1994; Mahan & Arlin, 1994). A contribuio de colesterol diettico em frutos do mar pequena. Os peixes e moluscos contm menos do que 100mg de colesterol/100g e alguns peixes mais magros possuem menos de 60mg/100g (Thomson et al., 1980; Vahouny et al., 1981; Piggot & Tucker, 1990; Molyneaux & Lee, 1998).

Figura 5 . Estrutura qumica do colesterol (Wardlaw & Insel , 1995)

2.6 Lipoprotenas

A gordura absorvida da dieta e os lipdeos sintetizados pelo fgado e tecido adiposo devem ser transportados para os vrios tecidos e rgos, para utilizao e armazenamento. O transporte destes no plasma sanguneo realizado pelas lipoprotenas. A densidade das lipoprotenas varia conforme a proporo de protena e lipdio, portanto, uma forma de separ-los do plasma por centrifugao (Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995). Desta forma , estas so classificadas em funo de sua densidade , em 4 principais categorias (Fig. 6):

Quilomicrons - derivados da absoro intestinal de triglicerdeos; Lipoprotenas de muito baixa densidade (VLDL) - so tambm chamadas de pr-lipoprotena, sendo derivadas do fgado de triglicerdeos que foram liberados; Lipoprotenas de baixa densidade (LDL) ou -lipoprotena, representando um estgio final do catabolismo da VLDL; Lipoprotenas de alta densidade (HDL) ou - lipoprotena, envolvidas no

metabolismo das VLDL, quilomcrons e no metabolismo do colesterol.

80% Percentuais 60% 40% 20% 0% HDL-col LDL-col VLDL-col QUILOM Lipoprotenas T G C O L FOSFOLIP PTN

Figura 6. Composio das lipoproteinas (adaptado de Wardlaw & Insel, 1995)

Assim, cada lipoprotena formada por um ncleo hidrofbico contendo triglicerdeos e steres de colesterol em propores variadas. Uma capa de fosfolipdeos polares envolve este ncleo, tornando a partcula hidrossolvel. A parte protica das lipoprotenas representada pelas apoprotenas ou apolipoprotenas que envolvem a partcula protica, fazendo com que esta possa ligar-se a enzimas especficas ou protenas de transporte em membranas celulares (Nawar, 1993; Mayes, 1994). As apoprotenas constituem cerca de 60% da HDL-colesterol e 1% dos quilomcrons. Estas so identificadas pelas letras A, B, C e D baseado nas diferenas existentes em suas caractersticas qumicas e metablicas. Alm do seu papel na

manuteno da estrutura das lipoprotenas, algumas apoprotenas desempenham importantes funes regulatrias, servindo como co-fatores para enzimas do metabolismo das lipoprotenas como a apo C-II que ativa a Lipoprotena lipase e a apo A-I que ativa a Lecitina colesterol aciltransferase (Nawar, 1993; Mayes, 1994; Mahan & Arlin, 1994).

2.7 Metabolismo das lipoprotenas e do colesterol

Quase todos os lipdeos da dieta so absorvidos da mucosa intestinal para o sistema linftico. Apenas os cidos graxos de cadeia mdia so absorvidos diretamente para a circulao portal (fgado). Os lipdeos advindos da alimentao sob a forma de triglicerdeos, so hidrolisados pela Lipoprotena-lipase (LPL) ou lipase lipoprotica no duodeno, formando monoglicerdeos e cidos graxos (Mahan & Arlin, 1994; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995).

Na mucosa intestinal, os cidos graxos e os monoglicerdeos so reesterificados a triglicerdeos, que juntamente com o colesterol so englobados pelos quilomcrons e transportados aos vasos linfticos. Os quilomcrons so ento conduzidos pelo sangue venoso at o fgado ou removidos do sangue para o tecido adiposo (Mahan & Arlin, 1994; Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995). Os triglicerdeos so removidos dos quilomcrons pela LPL, e os fragmentos destes so recapturados pelo fgado e reprocessados. O colesterol reconjugado para transporte no sangue como VLDL (Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995). A VLDL que formada principalmente por triglicerdeo, circula para os tecidos perifricos onde se transforma em LDL pela ao da LPL, que remove uma parte dos triglicerdeos para utilizao pelas clulas (Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995). ento estabelecido um ciclo onde a LDL-colesterol leva o colesterol para as clulas extra-hepticas (e paredes das artrias) enquanto que outra poro de colesterol retornada ao fgado pela HDL-colesterol onde ser excretado via bile. Dentro da HDLcolesterol o colesterol ligado com cidos graxos em um processo catalisado pela enzima Lecitina-colesterol aciltransferase (LCAT). Uma grande frao dos produtos do colesterol resultantes da reao com a LCAT transmitida para a LDL-colesterol ( Mayes, 1994; Wardlaw & Insel, 1995; Assis, 1997).

2.8 A relao entre colesterol, aterosclerose e doenas cardiovasculares

A aterosclerose, em termos gerais, definida como uma afeco das artrias de grande e mdio calibres, caracterizada pela presena na camada ntima, de placas gordurosas denominadas ateroma. Est inserida como um dos tipos de arteriosclerose, que

caracterizada como um conjunto de doenas comumente resultando em endurecimento da parede arterial com reduo de sua elasticidade. As principais manifestaes da aterosclerose so ligadas ao corao como a doena arterial coronariana (DAC) - infarto agudo do miocrdio, angina do peito e morte sbita; ao crebro - acidente vascular cerebral (AVC) e isquemia cerebral transitria, e aos membros inferiores - insuficincia vascular perifrica e gangrena ( DeAngelis & Ctenas, 1993; Assis, 1997; Griffin, 1999). A relao das dislipidemias principalmente, hipercolesterolemia com o

desenvolvimento da aterosclerose e doena coronariana baseia-se em inmeros estudos epidemiolgicos, clnicos e experimentais destacando-se o estudo de Famingham que demonstrou a correlao positiva entre o nvel de LDL-colesterol e a maior probabilidade de surgimento de doena coronariana , muito mais significativo do que os nveis de colesterol total (Ministrio da sade, 1993; Caggiula & Mustad, 1997; Kafatos et al., 1997; Assis, 1997). As dislipidemias, como relatado por vrios estudos, so classificadas entre os principais fatores de risco para doenas cardiovasculares com a hipercolesterolemia, mais especificamente os nveis elevados de LDL-colesterol (Ministrios da Sade, 1993; Michelon & Moriguchi, 1999). O termo dislipidemia mais adequadamente utilizado, uma vez que as anormalidades podem ser tanto de natureza quantitativa como qualitativa. Particularmente no caso do HDL-colesterol a anormalidade est relacionada s baixas concentraes (Michelon & Moriguchi, 1999).

Os valores de referncia vigentes para o diagnstico de dislipidemia em humanos adultos foram apresentados pelo 2 Congresso Brasileiro sobre Dislipidemias (1996), sendo estes baseados no consenso americano NCEP-II (1993) sendo demonstrados na tabela 2.

Tabela 2 . Valores de referncia de Colesterol total, LDL-Colesterol, HDL-Colesterol e Triglicerdeos plasmticos

Lipdeos

Valores (mg/dL) Desejveis Limtrofes 200-239 130-159 Aumentados >240 >160 >200

Colesterol total LDL-colesterol HDL-colesterol Triglicerdeos

< 200 < 130 >35 <200

Obs.: valores de referncia para humanos adultos Fonte: Michelon & Moriguchi, 1999

Estas recomendaes identificam o LDL-colesterol como a lipoprotena mais aterognica e estudos clnicos comprovam que a reduo do LDL-colesterol diminui a incidncia e a mortalidade para DAC, bem como reduz a mortalidade total (Ministrio da sade, 1993; Fernandez, 1995; Assis, 1997; Berglund et al., 1999; Dreaon et al., 1999; Griffin, 1999; Hu et al., 1999; Jones et al., 1999; Michelon & Moruguchi, 1999; Siscovick et al., 2000). Apesar das controvrsias que se criaram sobre os triglicerdeos em relao sua associao como risco de DAC, atualmente, a hipertrigliceridemia est bem estabelecida como um fator de risco para DAC (Roche, 1999). Alm de ser considerada um fator de

risco, a hipertrigliceridemia tambm um marcador de outros fatores que aumentam o risco DAC que so: resistncia insulnica, hipertenso arterial e estado protrombtico. Os valores de referncia mais especficos para triglicerdeos sricos em adultos so: normal menor que 200mg/dL; limtrofe - 200 a 400mg/dL; aumentados - 400 a 1000mg/dL e muito aumentados - maiores que 1000mg/dL (Michelon & Moriguchi, 1999). Segundo estudos recentes, o conceito de "estilo de vida", relaciona os hbitos alimentares, grau e frequncia de atividade fsica, estresse emocional e o tabagismo com a doena coronariana (Lotufo & Lolio, 1985; Ornish et al., 1990; Ministrio da sade, 1993; Michelon & Moriguchi , 1999; Forns et al., 2000). Ornish e col. (1990) avaliaram em uma pesquisa a influncia de modificaes significativas no estilo de vida como; dieta vegetariana, abstinncia ao tabagismo e atividade fsica regular, com coronariopatas. Aps um ano de seguimento, a maior regresso e menor progresso das leses aterosclerticas ocorreu no grupo experimental. Portanto, como observado por Forns et al. (2000) , alteraes no estilo de vida, especialmente a mudana nos hbitos alimentares representam significativas melhoras no perfil conseqentemente, na qualidade de vida. Segundo Kris-Etherton et al., (1999) dietas com restrio de lipdios aumentam os valores de triglicerdeos plsamticos e reduzem as concentraes de HDL-colesterol afetando os riscos para doenas cardiovasculares. Os cidos graxos altamente monoinsaturados (MUFA) e dietas que contm baixos teores de colesterol no aumentam as concentraes de triglicrides ou reduzem o HDL-colsterol, entretanto pouco conhecido sobre de que maneira alguns produtos base de MUFA, afetam os riscos para doenas cardiovasculares (DCV). lipdico e

A dieta a base da preveno e tratamento de DCV. Correntemente, O NCEP/AHA Estgio I ou Estgio II so tipicamente recomendados para reduo de colesterol plasmtico. O principal objetivo destas dietas reduzir a gordura saturada ( 8-10% e <7% do VCT). A dieta Estgio I reduz o colesterol total e o LDL-colesterol em 5-7%. A dieta Estgio II pode reduzir o colesterol total e o LDL-colesterol em 3-7% adicionais. Nestas dietas as Calorias provenientes da gordura saturada so substitudas por carboidratos, resultando em uma dieta hipolipdica e hiperglicdica (Kris-Etherton et al., 1999). O mecanismo pelo qual os MUFA desempenham efeito hipotrigliceridmico no bem esclarecida. Existem dois mecanismos supostos: - mudanas na composio de VLDLcolesterol; - mudanas nas atividades das enzimas e protenas envolvidas no catabolismo e processamento intravascular de VLDL-colesterol (Kris-Etherton et al., 1999). A composio dos cidos graxos das VLDL-colesterol a qual afetada pela composio dos cidos graxos da dieta, um determinante da converso de VLDLcolesterol dentro de outras lipoprotenas e o metabolismo dos triglicrides. Assim, a produo de VLDL-colesterol e o clearance de triglicrides pode ser alterado como um resultado da quantidade e tipo da gordura na dieta (Kris-Etherton et al., 1999).

Numerosos estudos tm investigado os efeitos dos cidos graxos da dieta no transporte de LDL-colesterol para determinar os mecanismos e qual cido graxo especfico altera os nveis plasmticos de LDL-colesterol. Estudos da cintica do LDL-colesterol tm sugerido vrios mecanismos metablicos pelos quais os cidos graxos polinsaturados reduzem os nveis de LDL-colesterol, incluindo uma velocidade maior de catabolismo de LDL-colesterol em humanos e animais ou reduo da velocidade de fluxo das apolipoprotenas. A composio da gordura saturada tm sido demonstrada por influenciar

a velocidade de modificao do LDL-colesterol em cobaias, na qual a ingesto de cidos graxos de cadeia longa (cido esterico e palmtico) resultam em maiores valores no catabolismo de LDL-colesterol do que em animais alimentados com cidos graxos de cadeia curta (cido lurico e mirstico) (Fernandez et al., 1993; Fernandez et al., 1994; McNamara et al., 1999; Metz et al., 1997). Investigando os efeitos da reduo de ingesto de gordura total e saturada em populaes jovens e idosas em relao subpopulaes de HDL-colesterol observou-se que com a reduo de gordura total e gordura saturada na dieta houve um decrscimo de ambas as subpopulaes de HDL-colesterol, maiores e menores com uma reduo mais pronunciada nas subpopulaes mais densas e maiores (Berglund et al., 1999). O HDLcolesterol um importante fator de risco negativo para doenas coronarianas. Isto bem reconhecido que concentraes de HDL-colesterol so afetadas por modificaes dietticas, geralmente aumentando com dietas ricas em gordura saturada e colesterol ; reduzindo quando a gordura diettica substituda por carboidratos(Berglund et al., 1999). Um estudo de seguimento de mais de dez anos com humanos, observou-se associaes entre a ingesto de alguns cidos graxos saturados e suas fontes alimentares em relao ao risco para DCV. A ingesto de cidos graxos de cadeia longa (12:0 - 18:0) foi associado com um menor aumento no risco de DCV. A proporo de gordura polinsaturada/saturada foi muito maior e inversamente associada com o risco para DCV. Em contrapartida, propores maiores de consumo de carne vermelha/aves e peixes e consumo de laticnios integrais e desnatados foram associados com risco significativamente maior para DCV (Hu et al., 1999). Uma distino entre o cido esterico (18:0) e outros cidos graxos no pareceu ser importante em recomendaes dietticas para reduzir o risco de DCV, em parte devido a

alta correlao entre o cido esterico e outros cidos graxos saturados em dietas tpicas das populaes estudadas (Hu et al., 1999). Estudos de migrao e de comparaes internacionais sugerem a grande associao positiva entre a ingesto de gordura saturada e risco para DCV. Em estudos metablicos dietas ricas em gordura saturada e restritas em gordura insaturada aumentam as concentraes de colesterol sanguneo. Entretanto, diferentes classes de cidos graxos saturados podem ter diferentes efeitos nas concentraes de lpidios plasmticos e lipoprotenas ( Hu et al., 1999). Especificamente, cidos graxos saturados com 12 a 16 tomos de carbono tendem a aumentar as concentraes de colesterol total e LDL-colesterol, enquanto o cido esterico (18:0) no tem efeito de aumento do colesterol comparado com o cido oleico (18:1). Entretanto, o cido esterico pode reduzir as concentraes de HDL-colesterol e aumentar as concentraes de lipoprotena a [Lp(a)]. Entre os cidos graxos saturados que aumentam o colesterol, o cido miristco (14:0) parece ser mais potente do que o cido lurico (12:0) ou cido palmtico (16:0), mas os dados no so inteiramente consistentes (Hu et al., 1999). A maior ingesto diettica de cidos graxos saturados de cadeia longa, inclundo 12:0; 14:0; 16:0 e 18:0, foi associado com o risco aumentado de DCV, enquanto que a ingesto de cidos graxos saturados de cadeia curta e mdia (4:0 - 10:0) no foram. Um maior consumo de carnes vermelhas e latcinios integrais, as principais fontes de cidos graxos saturados na dieta, foram tambm associadas com maior risco. Em contraste, um maior consumo de aves, peixes e laticnios desnatados foram associadas com um menor risco (Hu et al., 1999).

Em um outro estudo realizado, obteve-se que as concentraes de triglicerdeos psprandiais foram maiores para uma dieta rica em gordura saturada, menor para uma dieta rica em gordura polinsaturada com -3 e intermediria para -6. Isso explica em parte os efeitos adversos dos cidos graxos de cadeia longa no risco de DCV relacionado s respostas ps-prandiais estes cidos graxos. As variveis estilo de vida, como atividade fsica, obesidade e outros aspectos da dieta como a ingesto de fibras tambm devem ser considerados. Em concluso sugere-se a substituio da gordura saturada por gordura polinsaturada para reduzir substancialmente o risco de DCV (Hu et al., 1999).

2.9 Lipdios marinhos na nutrio humana

As mais de 200 espcies de peixes e frutos do mar disponveis para o consumo humano oferecem quantidades significativas de protena de alto valor biolgico, uma variedade de vitaminas e minerais, cidos graxos essenciais, acompanhados pelo baixo teor de lipdios e consequentemente reduzido valor calrico. O interesse nos benefcios sade advindos dos frutos do mar especialmente devido ao contedo de leos (cidos graxos insaturados), principalmente dos cidos graxos derivados do cido linolico, o qual apresenta-se, segundo pesquisas recentes, com efeitos nutracuticos pelo seu teor de cidos graxos polinsaturados ( -3), sendo antiagregantes plaquetrios e outros efeitos benficos ao sistema cardiovascular. A contribuio de colesterol diettico em frutos do mar pequena, sendo que novas pesquisas analticas indicam que os mexilhes contm aproximadamente 50mg colesterol/100g, valores menores do que os nveis relatados em outros moluscos (Seafood Savvy NY, 1992;Holland et al., 1994; Molyneaux & Lee, 1998).

Os diferentes e vrios tipos de lipdios encontrados em frutos do mar refletem as formas absorvidas do plncton e outros alimentos ingeridos e/ou filtrados por peixes e moluscos bem como do metabolismo de lipdios destes seres. Os componentes metablicos produzidos por eles e encontrados nas suas partes comestveis so influenciados no somente pela alimentao, mas tambm pela temperatura da gua e poca do ano tendendo a ser menores durante a desova ou reproduo e quando seus alimentos esto menos abundantes. Portanto, peixes e moluscos alimentando-se de algas tero uma composio de lipdeos diferente daqueles frutos do mar que consomem alimentos de origem animal (Piggot & Tucker, 1990; Seafood Savvy NY, 1992).

Em relao aos mexilhes, poucos dados esto disponveis quanto sua composio em lipdios e cidos graxos saturados e insaturados sendo considerados como alimentos com baixo teor de lipdios (2,5-5,0%) e mdio teor de -3 (0,5-1,0g%). Por muitos anos, atribuiu-se aos moluscos um alto teor de colesterol. Mtodos mais antigos de anlise de colesterol medem outros esteris encontrados nos moluscos alm do colesterol e isso resultou por muitos anos em altos valores de colesterol total nestes alimentos. Pesquisas recentes tm demonstrado que os esteris em moluscos podem ser colesterol ou esteris marinhos que no so colesterol noncholesterol sterols (NCS). Os NCS no so usualmente encontrados em fontes animais e alguns estudos com ratos e humanos indicam que os NCS inibem ou competem com a absoro intestinal do colesterol semelhante aos esteris de plantas (-sitosterol) em dietas humanas (Piggot & Tucker, 1990; Seafood Savvy NY, 1992; Molyneaux & Lee, 1998).

Na tabela 3 pode-se observar e confirmar que os moluscos apresentam em sua poro comestvel um alto teor protico semelhante ao de peixes e crustceos. O carboidrato encontrado nos moluscos est representado principalmente na forma de glicognio. Em relao ao cido graxo -3 , colesterol e gordura saturada apresenta-se bem prximo aos de salmo e atum (Antoniolli, 1999).

Tabela 3. Composio qumica de alguns frutos do mar em relao ao valor calrico, macronutrientes, gordura saturada , cido graxo mega-3 e colesterol/100g Alimento Salmo Atum Arenque Camaro Siri Berbigo Ostra Calorias Protena (g) 150,0 22,0 120,0 170,0 110,0 90,0 130,0 120,0 25,0 19,0 22,0 19,0 22,0 12,0 20,0 Carboidrato (g) 0 0 0 0 0 4,0 7,0 6,0 Lipdios totais(g) 7,0 1,0 10,0 2,0 1,0 2,0 4,0 4,0 Gordura mega 3 Colesterol saturada(g) (g) (mg) 1,0 0,9 50,0 0 2,0 0 0 0 1,0 1,0 0,2 1,7 0,3 0,4 0,2 0,7 0,7 50,0 60,0 130,0 80,0 60,0 90,0 50,0

Mexilhes 150,0
Fonte: USDA, 1987.

Oliveira e Silva et al. (1996) estudaram os efeitos do consumo de camaro comparado ao consumo de ovos em relao s lipoprotenas plasmticas e concluram que o consumo moderado de camaro (300g/dia) em homens sem dislipidemia no afetou o perfil de lipoprotenas em relao ao LDL-colesterol. Vahouny et al. (1981) sugerem que os esteris dos moluscos so pouco absorvidos e exercem um efeito semelhante aos esteris de vegetais na reduo da absoro diettica ou endgena de colesterol.

Em um estudo realizado com alguns moluscos ingeridos por homens com perfis lipdicos normais, observou-se que o consumo de mexilhes e ostras aumentaram os nveis de HDL-colesterol, reduziram a relao LDL/HDL-colesterol e resultaram em uma menor absoro de colesterol quando comparado ingesto dos demais moluscos (Childs, et al., 1990). Portanto, Childs et al. (1990) concluram que quando consumidos com uma dieta restrita em gorduras, as ostras, mexilhes, berbiges e siris apresentaram efeitos benficos em relao ao perfil lipdico em humanos. O mercado americano para os nutracuticos marinhos tm-se expandido na rea de sade-alimento/suplementos dietticos com produtos tais como, leos de peixe, cartilagem de tubaro, leo de fgado de tubaro e mais recentemente, produtos de cidos graxos e enzimas (Mloyneaux & Lee, 1998). Esses produtos tm sido comercializados como medicamentos para sintomas de artrite, auxlio cardiovascular, desenvolvimento cerebral em crianas, e a cartilagem de tubaro especificamente pelas propriedades anti-angiognese na terapia do cncer. O aumento do consumo destes produtos tm estimulado os fornecedores para este mercado. Os alimentos nutracuticos so comercializados para o pblico geral indicados para "recuperao" ou como alimentos "medicinais" bem como alimentos para a "promoo da sade". Os nutracuticos marinhos representam uma

pequena parte do mercado de nutracuticos. As fontes incluem leo de peixe rico em -3, EPA e DHA; leo de algas enriquecidos com DHA; leo de fgado de bacalhau e tubaro; cartilagem de tubaro; quitina e quitosana; pepinos marinhos; moluscos e algas (Molyneaux & Lee, 1998).

Os benefcios esto na terapia do cncer pela ao de sulfato de condroitna (componente bioativo da cartilagem de tubaro), alm de alguns efeitos teraputicos antiinflamatrios no tratamento da artrite. A quitina e a quitosana so tidas no mercado como absorventes de gordura. relatado que a glicosamina reconhecida, presente no "esqueleto" dos crustceos indicada para reduzir os sintomas de artrite. Os leos de fgado de bacalhau e tubaro so ricos em vitamina A e -3. Os pepinos marinhos so conhecidos por serem ricos em mucopolissacardeos, uma condoitrina tambm encontrada na cartilagem de tubaro. Os moluscos tm um alto nvel de condrotina e as algas tambm oferecem alguns efeitos teraputicos tais como, fonte de -carotenos, antioxidantes e outras substncias bioativas (Molyneaux & Lee, 1998). O camaro um alimento com baixo teor de lipdeos totais, muito baixo em gordura saturada, mas seu consumo reduzido devido ao seu alto contedo de colesterol diettico, sendo um dos maiores dentre os alimentos mais comumente consumidos. Entretanto, o camaro contm altos teores de -3, o qual tm efeitos potencialmente benficos na aterosclerose e trombose (Oliveira e Silva et al., 1996). Em um outro estudo realizado por Childs et al.,(1990) , a protena do camaro foi usada para substituir o protena animal e os efeitos no padro das lipoprotenas plasmticas. De fato, a dieta com camaro diferiu pouco da dieta basal na quantidade de colesterol , mas foi 38% menor no total de gordura e teve uma diferente composio de cidos graxos. Segundo este autor, houve uma surpreendente resposta com a dieta de alto teor de colesterol contendo camaro, a qual no alterou a proporo de LDL-colesterol/HDL-colesterol, comparado com a dieta controle, contudo reduziu a proporo de LDL-colesterol/HDL-colesterol em relao dieta que continha ovos. Alm disso, tm-se que a dieta contendo camaro apresentou maior quantidade de

cidos graxos biologicamente ativos como -3 (EPA e DHA) mais do que as duas outras dietas estudadas (Molyneaux & Lee, 1998). Estudos prvios tm mostrado que dietas suplementadas com -3 em quantidades maiores ou iguais a 1,5g/dia podem reduzir as concentraes de triglicerdeos plasmticos, especialmente em indivduos com hipertrigliceridemia. Algumas explicaes para estas observaes: - O colesterol diettico no camaro pode no ser eficientemente absorvido visto que, este essencialmente insolvel em gua e a absoro para dentro das clulas epiteliais do intestino requerem que o colesterol esteja presente na forma micelar. A reduzida quantidade de gordura do camaro, com sais biliares e gorduras, pode resultar em um microambiente de colesterol do camaro que desfavorvel para a formao de micelas e portanto absoro de colesterol; - os esteris sem colesterol pouco absorvidos no camaro podem competir com o colesterol pela absoro. Isso tem sido postulado por ser o caso dos moluscos como os berbiges, scallops e mexilhes, nos quais o colesterol incluem apenas 1/3 do total de esteris (Oliveira e Silva et al., 1996).

2.10 Caracterizao do mexilho Perna perna

Mexilho o termo oficial utilizado na lngua portuguesa para denominar as diversas espcies de moluscos bivalves da famlia Mytilidae, sendo os gneros mais comuns o Mytilus, Perna e Mytella. De acordo com a regio do Brasil e da espcie, os mexilhes recebem diversos nomes populares como marisco, marisco-preto, marisco das pedras, sururu e ostra de pobre. Em Santa Catarina conhecido popularmente como marisco (Rosa, 1998).

O mexilho Perna perna um molusco bivalve classificado da seguinte maneira: Filo Classe Ordem Famlia Gnero Espcie - Mollusca - Bivalvia - Mytiloida - Mytilidae - Perna - perna (Linn, 1758) (Linn, 1758) (Frussac, 1822) (Rafinesque, 1815) (Retzius, 1788) (Linn, 1758)

O mexilho, como os demais moluscos bivalves, um animal que no possui esqueleto interno e tem o corpo contido em uma concha, formada por duas partes iguais (valvas) unidas medianamente por uma estrutura conhecida como ligamento e contendo delicadas linhas de crescimento. Exceto alguns casos de hermafroditismo, o mexilho Perna perna uma espcie diica, com indivduos apresentando sexos separados. No h dimorfismo sexual externo, de forma que somente aps a abertura das valvas com observao das gnadas dos animais sexualmente maduros que so diferenciados. Nos machos as gnadas apresentam colorao branco-leitosa e as fmeas vermelho-alaranjado. Estes moluscos podem produzir uma grande quantidade de gametas, sendo liberados na gua do mar ocorrendo a fecundao (Magalhes, 1985; Routledge, 1996; Suplicy, 1998). Todas as espcies de mexilhes so ssseis e filtradores, alimentando-se de fitoplncton, micro-zooplncton e matria orgnica em suspenso (Suplicy, 1998).

2.11 O cultivo de mexilhes

O cultivo de mexilhes conhecido pelo termo mitilicultura ou maricultura , tendo iniciado partir da dcada de 40 na Espanha. Desde ento, este tipo de atividade passou a ser desenvolvida em pases da Europa, sia e Amrica (Andreu, 1990, apud Suplicy, 1998; Rosa, 1998). No Brasil, os projetos de cultivos de mexilhes tiveram incio na dcada de 70, principalmente nos estados de So Paulo e Rio de Janeiro. Em Santa Catarina, as pesquisas com mexilhes iniciaram em 1986. O litoral catarinense possui excelentes condies para o cultivo de mexilhes nativos como a espcie Perna perna (Linn, 1758) (Ferreira & Magalhes, 1997, apud Suplicy, 1998; Hernandes, 1990 e Magalhes et al. 1987, apud Rosa, 1997). Os mexilhes podem formar densas populaes em esturios e em costes rochosos marinhos, tanto em locais de forte arrebentao, como em reas mais abrigadas. So comumente encontrados em guas pouco profundas do litoral (30-40m de profundidade) sobrevivendo em salinidades entre 19-49% (eurihalinos) (Fernandes, 1985; Magalhes, 1985; Routledge, 1996). Segundo Szidat (1963) e Sawaya (1965), apud Suplicy (1998), a mitilicultura citada como uma opo para explorao dos recursos marinhos e de desenvolvimento da Amrica Latina sem destruio ambiental, desde a dcada de 60. Existem atualmente mais de 600 produtores de mexilhes no estado de Santa Catarina com uma produo anual variando de 5000 a 6000 toneladas, sendo

comercializado o molusco "in natura ou cozido, sem a concha e congelado (Ferreira, 1997, apud Suplicy, 1998; Rosa, 1998). Devido ao fato deste cultivo marinho ser bastante econmico, no necessitando de grandes investimentos iniciais, permite que esse seja adotado por pescadores artesanais e pequenos produtores , como acontece no litoral de Santa Catarina. Esta atividade tem garantido a subsistncia da populao ligada pesca artesanal, tanto em termos de consumo como de comrcio (Suplicy, 1998).

2.12 A escolha do animal experimental

Existe uma grande dificuldade em se definir um animal de laboratrio que seja metabolicamente semelhante ao homem e sensvel o suficiente para estudar efeitos de dietas ou drogas nos nveis de lipdios plasmticos (Fernandez & Mcnamara, 1991; Fernandez et al., 1999). Coelhos alimentados com colesterol tm sido utilizados como modelo de aterosclerose humana pelo rpido desenvolvimento de leses articas; porm estes animais tm a maior proporo do seu colesterol na frao VLDL-colesterol, situao diferente dos humanos. O uso de ratos est em declnio devido s grandes diferenas em relao aos humanos incluindo respostas dieta, resistncia aterosclerose e seu principal transportador de colesterol no plasma ser o HDL-colesterol (Shefer et al., 1992). As cobaias vm sendo utilizadas em experimentos com lipdios pois so animais que apresentam seu metabolismo semelhante ao do homem, possuem a maior parte de seu colesterol sob a forma de LDL-colesterol e respondem positivamente em relao aos efeitos de dietas hiperlipdicas. So portanto, utilizadas em experimentos relacionados nutrio,

farmacologia, imunologia, radiologia, entre outras reas (Thomson et al., 1980; Committee on Lab. An. Diet, 1979; COBEA, 1996; Smith, 1998; Fernandez et al., 1999; Murphy et al., 1997 e 1999). Quando utiliza-se modelos animais para o estudo de fatores de risco para DCV, importante o uso de um animal que mais de assemelhe s propriedades fisiolgicas e metabolismo de humanos. Os porcos so extrememente aceitos como modelos nos estudos de hipercolesterolemia e ateroslcerose devido sua similaridade aos humanos sendo tambm conhecido por desenvolverem aterosclerose espontaneamente quando alimentados com dieta aterognica. Esta aterosclerose positivamente correlacionada com as concentraes sricas de colesterol como em humanos. Entretanto, h uma necessidade de um animal de menor tamanho, com menor custo e de mais fcil manipulao para utilizao em estudos preliminares mais rpidos com hiperlipidemia (Sullivan et al., 1993). Os ratos so utilizados em grande escala para estudos em vrios tipos de metabolismo e em estudos de efeitos dietticos nas concentraes de lipdeos sricos. Contudo, existem muitas limitaes nas informaes obtidas destes estudos devido s diferenas no metabolismo lipdico entre humanos e ratos (Sullivan et al., 1993; Fernandez et al., 1999; Murphy et al., 1999). Um estudo utilizando hamsters, "camundongos" e cobaias fmeas foram

alimentados com dietas hipercolesterolmicas com adio de 10% de leo de cco e 1% colesterol, e dieta controle, sendo subdivididos em grupos com privao de alimentos por 12 horas e no final de 7 dias; e grupo que recebeu dieta durante todo o experimento. Nas cobaias, a privao de alimentos no resultou em efeito significativo na concentrao de colesterol plasmtico em relao animais recebendo dieta rica em colesterol. Estes dados sugerem que as cobaias so o modelo mais apropriado de roedores para estudos com

hipercolesterolemia devido ao aumento moderado da concentrao de colesterol sem afetar a concentrao pr-prandial de triglicerdeos quando receberam dieta com alto teor de colesterol. Isto importante pois a forma mais comum de hiperlipidemia em humanos a variedade tipo IIa, a qual caracterizada pelo aumento da concentrao de colesterol , porm concentraes normais de triglicerdeos (Sullivan et al., 1993). Outro fator relacionado ao estudo de lipdeos sricos o desenvolvimento da aterosclerose arterial. As cobaias portanto, so conhecidas por desenvolverem rapidamente leses aterosclerticas em resposta diferentes tratamentos sendo consideradas excelentes modelos para pesquisas com aterosclerose. Alm disso, estes animais so levemente maiores do que os demais roedores, possibilitando uma anlise mais detalhada das leses relacionadas aterosclerose, especialmente no interior dos vasos sanguneos (Sullivan et al., 1993, Fernandez et al., 1997e 1999; Murphy et al., 1999). Interaes da saturao da gordura diettica com o colesterol diettico em relao homeostase do colesterol em cobaias, foram estudados com a administrao de dietas com gordura saturada, mono e polinsaturadas com adio de colesterol farmacolgico. O colesterol total e o LDL-colesterol aumentaram significativamente com o aumento do colesterol diettico sendo pronunciado esta alterao com a dose farmacolgica excedendose o nvel de sntese endgena de colesterol. Alm disso, a gordura saturada e o colesterol diettico farmacolgico aumentaram as concentraes de HDL-colesterol, o oposto

ocorrido com a ingesto de gordura polinsaturada. O colesterol diettico impediu a atividade da HMG-CoA redutase em todos os nveis de ingesto de colesterol. Os resultados sugerem que quantidades fisiolgicas de colesterol diettico desempenham um "papel-chave" na regulao aguda das concentraes de colesterol plasmtico (feedback na sntese de colesterol endgeno), enquanto a saturao da gordura pode ter um efeito mais

crnico (pools de colesterol regulatrio, expresso do receptor de LDL-colesterol) (Lin et al., 1992; Nicolosi, 1997). Portanto, optou-se por utilizar as cobaias como animais experimentais nesta pesquisa para a obteno de uma maior fidedignidade dos resultados em relao ao perfil lipdico e s doenas cardiovasculares.

3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo geral

Avaliar os efeitos de uma dieta base de mexilhes Perna perna (Linn, 1758) de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC, em relao aos teores de colesterol, triglicerdeos e lipoprotenas no plasma de cobaias Cavia porcellus.

3.2 Objetivos especficos

Determinar o teor de colesterol e perfil de cidos graxos de mexilhes Perna perna de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC; Analisar a composio centesimal dos mexilhes e das raes experimentais; Analisar a variao de peso e ingesto de rao dos animais durante o perodo de experimento; Determinar o teor de coelsterol, lipoprotenas (HDL-colesterol, LDL-colesterol, VLDLcolesterol) e triglicerdeos no plasma dos animais experimentais; Correlacionar os valores do perfil lipdico, variao de peso e ingesto de rao nas cobaias alimentadas com dieta contendo mexilhes em substituio carne bovina em relao aos demais grupos experimentais.

4 MATERIAL E MTODOS

4.1 Material

4.1.1 Mexilhes

Figura 7. Mexilhes Perna perna fmea (E) e macho (D)

Os mexilhes Perna perna (Linn, 1758) foram obtidos do cultivo de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis, (parte centro-oeste, de frente para a baa norte da Ilha de Santa Catarina), nos ms de janeiro/2000, com temperatura da gua a 25 C.

Figura 8. Cultivo de mexilhes em Santo Antnio de Lisboa, Fpolis/SC

4.1. 2 Animais

Foram utilizados cobaias da linhagem Cavia porcellus, cepa inglesa, machos, com aproximadamente 30 dias e peso mdio de 300g , procedentes do Biotrio Central da UFSC.

Figura 9. Cobaia Cavia porcellus

4.1.3 Delineamento experimental

A verificao dos efeitos de uma dieta base de mexilhes em relao aos teores de colesterol, triglicerdeos e lipoprotenas plasmticas das cobaias foi realizado atravs de um ensaio biolgico com durao de 21 dias.

Ensaio biolgico com cobaias

Os animais(18 cobaias) foram distribudos em trs grupos: controle (6 cobaias) - que receberam dieta base de casena (AIN-93G); carne (6 cobaias) recebendo dieta base de carne bovina, hipolipdica para preveno de aterosclerose; mexilhes (6 cobaias) - receberam uma dieta com base na dieta carne sendo substituda por mexilhes. No incio do experimento 6 animais foram agrupados (grupo zero) para o registro do perfil lipdico no incio do experimento, os quais no participaram do experimento sendo sacrificados aps a coleta de sangue. O ensaio biolgico foi conduzido de acordo com as normas de utilizao com animais de laboratrio (COBEA, 1996) e os protocolos experimentais foram aprovados pela Comisso de tica da Universidade Federal de Santa Catarina.

4.1.4 Raes experimentais

4.1.4.1 Rao controle

Esta foi composta com ingredientes de acordo com as recomendaes do AIN-93G para utilizao em experimentos de laboratrio com roedores. A composio da rao controle pode ser observada na tabela 4. Tabela 4. Composio da rao controle (AIN-93G) Ingredientes Casena Quantidade (g) 200 3,0 50 35 10 70 100 532 0,014 1000

DL-cistina
Celulose Mistura salina Mistura vitamnica leo de soja Sacarose Amido Benzoato de sdio/Bitartarato de colina Total Fonte: Reeves et al., 1993.

Devido ao fato das cobaias no sintetizarem a vitamina C, foioferecido um capim verde fresco (3x/sem), rotina do Biotrio Central /UFSC para esses animais, durante o perodo do experimento (COBEA, 1996). O clculo da rao para 40 dias de experimento com cobaias, cada animal consumindo em mdia 50g de rao/dia pode ser visto a seguir; 1 dia 50g de rao 40 dias x x = 2000g de rao 2000g de rao 6cobaias (grupo controle) Total - 12000g = 12kg de rao controle

Obs.: A quantidade calculada de 12kg de rao corresponde tambm a mesma quantidade para as demais raes ( dieta carne e rao base de mexilhes) totalizando em 36kg de rao.

4.1.4.2 Rao dieta carnes

A rao dieta carnes (tabela 5) foi confeccionada com os ingredientes de uma dieta para 2300Kcal/dia (Anexo) hipoteticamente calculada para um adulto de 1,70m e 70Kg em relao ingesto diria de protenas, lipdios, carboidratos e colesterol. A adequao nutricional da dieta foi calculada atravs do Software NUT (2000).

Tabela 5. Composio da rao dieta carnes Ingredientes* Quantidade (g) Arroz 100,0 Feijo 150,0 Macarro espagueti 120,0 Leite em p desnatado 40,0 Biscoito salgado 26,6 Carne bovina 120,0 Alface 30,0 Agrio 30,0 Acar 6,0 leo de soja 10,0 Margarina 6,0 Azeite de oliva 15,0 Po integral 84,0 Tomate 15,0 *Peso cozido e/ou Peso lquido ** Adio para confeco dos "pellets" Ingredientes Batata inglesa Banana Laranja Ma Cebola Sal Iogurte desnatado Beterraba Cenoura Ricota Amido de milho** Quantidade (g) 80,0 60,0 140,0 116,0 15,0 6,0 250,0 108,0 18,0 19,0 17,0

Total

1786,6

4.1.4.3 Rao dieta mexilhes

Composta pelos mesmos ingredientes da dieta carnes, com mexilhes (mistura aleatria de machos e fmeas) em substituio carne bovina, na quantidade equivalente em gramas quela recomendada para ingesto de carnes, sendo demonstrado na tabela 6.

Tabela 6. Composio da rao dieta mexilhes Ingredientes * Arroz Feijo Macarro espagueti Leite em p desnatado Biscoito salgado Mexilhes Alface Agrio Acar leo vegetal Margarina Azeite de oliva Po integral Tomate Quantidade (g) 100,0 150,0 120,0 26,6 14,0 120,0 30,0 30,0 6,0 10,0 6,0 15,0 84,0 15,0 Ingredientes Batata inglesa Banana Laranja Ma Cebola Sal Iogurte desnatado Beterraba Cenoura Ricota Amido de milho Quantidade (g) 80,0 60,0 140,0 116,0 15,0 6,0 250,0 108,0 18,0 19,0 17,0

Total

1786,6

* Peso cozido e/ou Peso lquido ** Adio para confeco dos " pellets"

4.2 Mtodos

4.2.1 Preparo das amostras

Os mexilhes foram previamente higienizados no local de obteno das amostras (Fig.10) e ento transportados em caixas de isopor com o auxlio de gelo e encaminhados at o Laboratrio de Nutrio Experimental/UFSC onde foram novamente higienizados e desconchados. Uma parte foi submetida s anlises da composio centesimal; teor de colesterol, triglicerdeos e mega-3. O restante foi utilizado no preparo da rao base de mexilhes.

Figura 10. Higienizao dos mexilhes no local de cultivo

4.2.2 Preparo das raes experimentais

A rao controle foi confeccionada segundo as recomendaes do AIN93G.

Em

relao rao dieta carnes, esta foi preparada da forma habitual de preparo de alimentos para o consumo humano de acordo com as preparaes elaboradas no cardpio (Anexo). Aps a coco e secagem, os ingredientes das raes sofreram triturao para melhor homogeneizao das raes. Para a rao dieta mexilhes, o preparo da rao deu-se da mesma forma que a rao dieta carne porm, com a substituio por mexilhes preparados para serem ingeridos como " Mexilhes no vapor". Todas as raes foram dessecadas em estufa ventilada 35 C, confeccionadas sob a forma de pellets, acondicionadas em embalagens plsticas hermeticamente fechadas e mantidas sob refrigerao at o momento de sua utilizao. Alquotas das raes confeccionadas foram submetidas s anlises da composio centesimal.

4.2.3 Cuidado com os animais

Durante o experimento, as cobaias foram mantidos individualmente em caixas de polipropileno, recebendo gua e alimentao ad libitum, sendo registrados o consumo de rao e variao de peso trs vezes por semana. Os demais cuidados como temperatura do ambiente, ciclo claro-escuro entre outros, foram realizados conforme as normas de cuidados para animais de laboratrio respeitando as peculiaridades das cobaias (Committee on Laboratory Animal Diets , 1979; CPNEMB, 1994; COBEA, 1996).

Figura 11. Acondicionamento dos animais durante o ensaio biolgico

Figura 12.Caixas de polipropileno individualizadas para as cobaias no perodo experimental

4.2.4 Coleta das amostras de plasma dos animais experimentais

As amostras do plasma das cobaias foram coletadas no tempo zero (incio do experimento- grupo zero ) e aps 4 semanas de experimento. Para esse procedimento os animais foram previamente anestesiados com ter etlico, e aps privao da alimentao por 12 horas, atravs de puno cardaca, colocados em tubos de ensaio heparinizados, separado o plasma das hemcias por centrifugao durante 10 minutos e ento, submetidos s anlises de colesterol total, triglicerdeos, LDL- colesterol, HDL-colesterol e VLDLcolesterol.

Figura 13. Puno cardaca das cobaias

4.2.5 Anlise da composio centesimal das raes e dos mexilhes

As raes experimentais (controle, carnes e mexilhes) foram analisadas em triplicata em cada um dos itens abaixo segundo normas da AOAC , 1989. Estas anlises foram realizadas no Laboratrio de Nutrio Experimental e Laboratrio de Bioqumica de Alimentos , UFSC.

Determinao da umidade; Determinao de lipdeos ou extrato etreo; Determinao das cinzas; Determinao do nitrognio total; Determinao de Fibra bruta

O clculo dos carboidratos nos mexilhes e nas raes experimentais foi realizado por diferena segundo a Portaria n. 41 da Vigilncia Sanitria, 1998.

4.2.6 Anlise do teor de colesterol

Foram realizadas determinaes do teor de colesterol nos mexilhes por segundo normas do Instituto Adolfo Lutz, 1985 no Laboratrio de Fsico-qumica, UFSC. Posteriormente, foram relacionados aos teores de lipdios nos mexilhes, a ingesto pelas cobaias e, a influncia no perfil lipdico dos animais experimentais.

4.2.6 Anlise da composio em cidos graxos dos mexilhes

As anlises dos teores de cidos graxos foram realizadas nos mexilhes atravs do mtodo Oficial da American Oil Chemistss Society (ACOS Ce 1f-96), 1997 por HPLC (High Performance Liquid Cromatrography) no Laboratrio de leos e Gorduras, FEA (UNICAMP).

4.2.7 Anlise do teor de colesterol, triglicerdeos e lipoprotenas das cobaias

A determinao do teor de colesterol plasmtico, lipoprotenas (HDL-colesterol, VLDL-colesterol) e triglicerdeos das cobaias foram realizadas atravs de mtodo enzimtico com a utilizao de kits LABTEST Diagnstica S.A. Para as anlises do LDLcolesterol foi utilizado o kit da Wiener Lab. Posteriormente, foram realizadas anlises estatsitcas da significncia dos dados em relao aos valores das lipoprotenas aps a ingesto de dieta base de mexilhes.

4.2.8 Anlise estatstica

Inicialmente, foi realizada uma anlise estatstica descritiva, com os parmetros estatsticos bsicos (mdias e desvio-padro) e representaes grficas dos resultados. Em seguida foi ento realizada a anlise de varincia dos dados (ANOVA), baseando-se nas hipteses Ho e H1 onde, Ho: 1 = 2 (no existe diferena entre as mdias) e H1 : 1 2 (existe diferena entre pelo menos duas mdias). O nvel de significncia 95% ( p<0,05) foi considerado para todas as anlises. Testes de comparaes mltiplas atravs de Contraste de mdias foram utilizados para as anlises de lipoprotenas e composio centesimal da raes. A correlao (r) foi realizada para o relao entre o peso corporal e consumo de rao pelos animais experimentais aps o ensaio biolgico. Todas as anlises estatsticas foram realizadas com auxlio do Software Statstica 5.0 (1996) for Windows, Stat Soft Co.

5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Composio centesimal dos mexilhes Perna perna

A tabela 7 apresenta a composio centesimal de mexilhes machos e fmeas, onde observa-se a diferena entre os sexos quanto ao teor de lipdeos sendo maior nas fmeas e, em relao protena so maiores nos machos. Contudo, no observou-se diferena

estatisticamente significativa (p<0,05) para umidade, carboidrato e cinzas.

Tabela 7. Composio centesimal de mexilhes Perna perna macho e fmea de amostras coletadas em Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC Amostra Caloria s (Kcal) 406,28 a 406,63 a 406,45 Protena (g%) 59,20 a 55,56 b 57,38 Lipdeo (g%) 7,96 a 10,59 b 9,27 Umidade (g%) 80,77 a 80,22 a 80,49 Carboidrato (g) 24,46 a 22,27 a 23,36 Cinzas (g) 11,68 a 11,70 a 11,69

Machos Fmeas Mdia

Os valores so apresentados como mdias As mdias dos valores tendo a mesma identificao alfabtica no so estatisticamente diferentes (p<0,05) determinado pela ANOVA e Teste de comparao mltipla.

Os resultados da composio centesimal dos mexilhes apresentam-se maiores em relao literatura ou seja, encontra-se respectivamente 150Kcal/100g de mexilhes, 20,0g de protenas e 4,0g de lipdeos totais de acordo com os dados segundo a USDA, 1987. Em relao aos carboidratos, no possvel realizar uma anlise comparativa dos valores em funo do mtodo de anlise dos carboidratos para os frutos do mar diferir em relao analise de carboidratos totais pois, deve-se considerar o contedo de glicognio presente em grandes quantidades nestes alimentos (Piggot & Tucker, 1990; Antoniolli, 1999). Alm disso, o teor de glicognio no contribui para o valor calrico total dos alimentos, no expressando portanto a realidade quando compara-se com os dados apresentados na literatura (Piggot & Tucker, 1990; Antoniolli, 1999). importante ressaltar que, a poca do ano, a temperatura da gua, o perodo reprodutivo e o local de cultivo influenciam diretamente na composio centesimal dos

frutos do mar(Magalhes, 1985; Piggot & Tucker, 1990). Portanto, explica-se a diferena encontrada para os mexilhes analisados.

5.2 Composio centesimal das raes experimentais A anlise da composio centesimal das raes experimentais (tabela 8) revela que o teor de lipdeos apresentou-se maior (p<0,05) para a rao mexilhes quando comparado s raes carnes e controle. Quanto ao teor de protenas, entre todas as raes oferecidas aos animais no houve diferena estatisticamente significativa. Contudo, os teores de carboidratos, fibra bruta, umidade e cinzas, na rao controle mostraram-se diferentes, sendo maiores em relao aos carboidratos e fibra bruta, e menor para umidade e cinzas em relao s dietas carnes e mexilhes. O maior teor de cinzas na rao contendo mexilhes, provavelmente reflete o alto contedo de minerais nos frutos do mar e especialmente, destes moluscos (Piggot & Tucker, 1990; Ninikoski et al., 1997).

Tabela 8. Composio centesimal das raes experimentais (g/100g produto seco) Rao Controle Carnes Mexilhes VCT (Kcal) 380,69 a 383,01 b 383,03 b PTN* 16,73 a 17,38 a 18,81 a LIP 5,85 a 6,37 a 6,95 b CHO 65,28 a 64,04 b 61,31 b Umidade 5,75 a 7,06 b 6,70 b Cinzas 2,58 a 3,72 b 4,47 b Fibra bruta 3,99 a 1,43 b 1,76 b

Os valores so apresentados como mdias As mdias dos valores tendo a mesma identificao alfabtica no so estatisticamente diferentes (p<0.05) determinado pela ANOVA e Teste de comparao mltipla *N total x 6,25

Para uma melhor interpretao dos resultados, o teor de fibras totais, fibra solvel e insolvel das dietas carnes e mexilhes foram calculados por valores retirados de tabelas de

composio de alimentos (Mendes et al., 1995), em funo de que a anlise de carboidratos da composio centesimal deu-se por diferena e, isso inclui as fraes fibra solvel e insolvel, o que no representa na realidade o teor de fibras das dietas. Assim, o valor calrico total das raes e/ou dietas foram calculados atravs dos valores obtidos de lipdeos, protenas e carboidratos reduzindo-se os teores de fibras da dieta.

5.3 Composio em cidos graxos de mexilhes Perna perna

Tabela 9 - Composio em cidos graxos (g/100g)) de mexilhes Perna perna machos e fmeas, de amostras coletadas em Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC cido Graxo Mirstico Pentadecanico Palmtico Palmitoeladico Palmitolico Margrico Margarolico Esterico Olico ( -9) Linolico ( -6) Araqudico Linolnico ( -3) Estearidnico( -3) No identificado Eicosatrienico( -6) Araquidnico ( -6) No identificado No identificado EPA ( -3) No identificado No identificado No identificado Docosapentaenico ( -3) DHA ( -3) Macho** 6,29 1,12 23,56 1,04 6,74 4,27 0,25 7,16 5,70 4,40 0,48 5,93 2,22 2,74 1,72 10,35 0,60 1,05 1,16 13,22 Fmea** 6,71 1,29 22,90 1,50 8,70 3,87 0,62 4,97 4,57 2,56 0,32 6,78 2,86 0,50 0,27 1,87 0,51 1,66 12,20 0,61 0,69 0,82 1,39 11,84

C14:0 C15:0 C16:0 C16:1t C16:1 C17:0 C17:1 C18:0 C18:1 C18:2 C20:0 C18:3 C18:4* NI C20:3* C20:4 NI NI C20:5 NI NI NI C22:5 C22:6

* Identificao no confirmada **Mdia de triplicata.

Nos ltimos anos, vrios estudos revelaram a importncia dos lipdeos presentes em peixes e frutos do mar, por serem fontes de cidos graxos polinsaturados , principalmente os -3 EPA e DHA (ODea & Sinclair, 1982; Murphy et al., 1999; Ramirez-Tortosa et al., 1999; Siscovick et al., 2000 e Visentainer et al., 2000). Na tabela 9 pode-se confirmar estas observaes, com uma grande proporo de EPA (11,27%) e DHA(12,53%) no leo de mexilhes para ambos os sexos quando comparado aos demais cidos graxos

polinsaturados. Contudo, tambm visvel a presena do cido palmtico (C16:0) em grande quantidade, aproximadamente 22 g/100g do total de cidos graxos; sendo

considerado aterognico em funo de ser um cido graxo altamente saturado (Mahan & Arlin , 1994; Assis, 1997: Caggiula, 1997). Portanto, a presena de altas concentraes de cidos graxos polinsaturados -3, principalmente EPA e DHA nos mexilhes de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/SC, confirmam os dados de recentes pesquisas que identificam os frutos do mar como fontes de -3, apesar de seu contedo em cidos graxos saturados. Alm disso, importante salientar a relao positiva com o perfil lipdico e a preveno de doenas cardiovasculares com a ingesto destes alimentos fonte destes cidos graxos (Van Tol et al, 1991; Murphy et al., 1997; Meydani, 2000; Siscovick et al., 2000; Torres et al., 2000; Visantainer et al., 2000). Na tabela 9 observa-se tambm a diferena entre os sexos quanto aos cidos graxos -3 (DHA) e -6 (cido linolico), sendo maior em machos para ambos os cidos graxos. Em relao ao EPA, as fmeas apresentaram maiores teores (p<0,05) em relao aos machos. Esses resultados indicam o que ocorre na realidade, ou seja, a ingesto mista de mexilhes (machos e fmeas) acarretar os benefcios dos cidos graxos presentes nestes moluscos. Isso ocorrer independente da escolha por sexo em funo de sua composio em cidos graxos pois, ambos contm -3 (EPA e DHA). Vale ressaltar a importncia da recomendao de ingesto associada ao modo de preparo dos alimentos, como os mexilhes preparados na dieta, sendo utilizado mexilhes no vapor ou mais popularmente conhecido como mexilhes ao bafo, no qual no acrescentado gordura, o que no altera seu valor calrico alm de acentuar seu sabor no momento da degustao. 5.4 Valor nutricional das raes experimentais

Inicialmente, calculou-se uma dieta com aproximadamente 2300Kcal/dia (Anexo), hipolipdica atravs do software NUT/2000. estes ingredientes sofreram o processo de coco e/ou preparo de acordo com o cardpio elaborado e em seguida foram desidratados para ento serem transformados em p atravs da triturao dos ingredientes e/ou preparaes, peletizados e constituindo desta forma, as raes carnes e mexilhes. Com a anlise da composio centesimal 9tabela 8) das raes experimentais e com o clculo dos macronutrientes destas demonstrados na tabela 8, observa-se que todas as raes so hiperproticas (30% protenas em relao ao valor calrico total). Em relao aos lipdeos, as dietas oferecidas s cobaias do grupo carnes e mexilhes contm de 25-27,4% de lipdeos, no sendo estatisticamente diferentes, contudo so dietas hipolipdicas de acordo com as recomendaes nutricionais para indivduos com dislipidemias (OMS, 1990; NCEP, 1994). O teor de carboidratos , como citado anteriormente, fica comprometido em funo da presena das fraes solveis e insolveis das fibras dietticas. Com isso, todas as dietas ficaram aqum das recomendaes para carboidratos. Sabe-se, em contrapartida que, as dietas carnes e e mexilhes contm um maior proporo de carboidratos complexos (amido e cereais integrais) sobre os carboidratos simples (glicose, frutose e sacarose). Entretanto, o contedo de carboidratos em mexilhes representado na sua grande maioria por

glicognio, forma de depsito de carboidrato presente nos frutos do mar, como citado anteriormente, alm do teor de glicognio no interferir no valor calrico total da dieta (Piggot & tucker, 1990; Holland et al., 1994; Antoniolli, 1999).

Tabela 10. Teor de colesterol e cidos graxos das dietas carnes e mexilhes Alimentos Dieta carnes*1 Dieta mexilhes
Fonte: 1 Holland et al., 1994

Colesterol (mg) 116,01 a 62,65 b

AG Sat (g) 18,45 a 11,66 b

AG Mono (g) AG Polinsat (g) -3 27,73 a 15,19 b 12,88 a 17,28 b

*Anexo As amostras de mexilhes machos analisados quando comparada s amostras de mexilhes fmeas apresentaram respectivamente, 24,90mg/100g e 69,66mg/100g de

colesterol. Portanto, as fmeas contm maiores teores de colesterol (p<0,05). Com a adio de mexilhes na dieta, pode-se observar na tabela 10, estando presente em 116,01mg na dieta oferecida aos animais do grupo carnes e 62,65mg na dieta mexilhes. Com isso, apesar do maior teor de colesterol ter sido encontrado nos mexilhes fmeas, a introduo destes na dieta no excedeu as recomendaes nutricionais para dislipidemia, alm do fato de ter sido menor em relao dieta carnes (p<0,05). Quanto aos cidos graxos, tm-se uma maior proporo de cidos graxos monoinsaturados sobre os demais cidos graxos. Contudo, observa-se tambm que o teor de cidos graxos saturados superior aos cidos graxos polinsaturados na rao carnes, em funo da presena da carne bovina. Na dieta mexilhes a composio em cidos graxos fica em vantagem quando comparada dieta carnes pois apresenta uma maior proporo de cidos graxos polinsaturados representados pelo EPA e DHA (tabela 9). Apesar, do elevado teor de gordura saturada na dieta mexilhes , os animais que receberam esta dieta no apresentaram alteraes de suas lipoprotenas aps 21 dias de experimento devido ao efeito protetor dos cidos graxos -3 , tambm observado por Murphy et al. (1997 e 1999) e

Ramirez-Tortoza et al. (1999) quando suplementaram leos de peixe em cobaias ou observando a relao com doenas cardiovasculares, perfil lipdico e ingesto de gordura polinsaturada de peixes.

Tabela 11. Teor de fibras totais, fibra solvel e fibra insolvel das dietas carnes e mexilhes Alimentos Dietas carnes/mexilhes % Adequao 171,8% Fibra total (g) 38,58 Fibra solvel (g) 16,05 Fibra insolvel (g) 22,53

41,60 166,4%

58,39 77,85%

Fonte: Mendes et al., 1995 Recomendao NCEP/1994 (20-30g/dia sendo 25% fibra solvel)

A composio das dietas carnes e mexilhes quanto ao teor de fibras pode ser observada na tabela 11, sendo realizado o mesmo clculo para as duas dietas pois a diferena entre elas est na substituio da carne bovina por mexilhes, alimentos que no contm fibras. Assim, tm-se que do total de fibras da dieta, 41,6% encontra-se sob a forma de fibra solvel estando alm dos valores recomendados (20-30g de fibras/dia). Estudos epidemiolgicos tm demonstrado que a fibra diettica atua como protetora contra os riscos de doenas coronarianas. Numerosos estudos clnicos e com a utilizao de animais experimentais (cobaias), mostram que a ingesto de fibras solveis reduzem as concentraes de LDL-colesterol e a relao CT/HDL (Jenkins et al., 1997; Andreson & Hanna, 1999; Fernandez et al., 1999, Lampe , 1999).

Fernandez et al. (1994 e 1997) observaram que a presena de fibras solveis resultou na reduo do colesterol plasmtico em cobaias. Tal fato pode tambm ter contribudo para os resultados de colesterol plasmticos nas cobaias dos grupos carnes e mexilhes aps o perodo experimental em funo do alto teor de fibras solveis nas respectivas dietas.

Tabela 12. Composio nutricional das dietas carnes e mexilhes em relao aos micronutrientes Clcio, Ferro, Sdio, Vit.C e Vit. A Alimento Dieta carnes* Adequao Dieta mexilhes Adequao
Fonte: Software NUT * Anexo

Ca (mg) 1542,02 128,5% 1765,35 147,11%

Fe (mg) 27,39 273,9% 32,13 321,3%

Na (mg) 3455,74 115,2% 3622,41 120,75%

Vit. A ( gRE) 1427,90 142,8% 1427,9 142,79%

Vit. C (mg) 269,43 449,05% 269,43 449,05%

A composio nutricional das dietas carnes e mexilhes em relao aos micronutrientes demonstra que segundo as recomendaes nutricionais de 1200mg/dia para o Clcio; 10mg/dia para o Ferro; entre 500-3000mg/dia de Sdio; 1000 RE para a vit. A e 60mg/dia de vit.C , ambas as dietas conseguiram adequar-se s recomendaes (Tabela 12) e at mesmo ultrapassaram os valores de ingesto diria determinados para um adulto saudvel, os quais so os mesmos para indivduos com dislipidemias (RDA, 1989).

5.5 Ensaio Biolgico

5.5.1 Consideraes

Inicialmente, foi realizado um ensaio biolgico preliminar com as cobaias para a verificao da adaptao do animal s condies do experimento obtendo-se bons resultados com os animais queseriam utilizados. Iniciado o ensaio biolgico definitivo, com os animais divididos em grupo recebendo dietas base de carne bovina, mexilhes e casena (controle), houve partir do 21 dia de experimento comearam a ocorrer perdas de animais, tendo algumas hipteses para estas observaes: - As cobaias so extremamente suscetveis condies estressantes devido alteraes das condies ambientais, como simples modificaes na rao, comedouro, gua e bebedouro, quando podem passar a recusar alimento e gua. Isso implica em dizer que a manipulao desta espcie deve ser realizada com pacincia e muito cuidado. Apesar de ter sido realizado um ensaio biolgico preliminar (teste piloto), sempre possvel a difculdade na adaptao do animal (CPNEMB, 1994; COBEA, 1996). A escolha aleatria dos animais para a diviso dos grupos experimentais pode ter selecionado animais mais resistentes, o que resultou em sua permanncia at o final de 30 dias para alguns grupos; Para a maior homogeneidade do experimento, foram solicitados animais (cobaias) co a mesma idade, machos, pesando entre 300-400g. Em funo da dificuldade do Biotrio central da UFSC em atender estas condies, algumas cobaias precisaram ser adquiridas de outros Biotrios, as quase passaram por um tratamento emergencial para a

eliminao de patgenos (piolhos) por um perodo de 15dias que antecederam o experimento. Estes fatores so extremamente importantes em relao ao estado inicial dos animais no ensaio biolgico pois, aqueles animais que passaram pelo tratamento estavam de uma certa maneira debilitadas imunologicamente, o que j os diferencia dos demais tambm em relao absoro e utilizao de nutrientes a que foram submetidos. Deficincia de vitamina C nas dietas experimentais, visto que estes animais no a sintetizam e. os suplementos utilizados (folhas verdes) podem no ter sido suficientes para as necessidades nutricionais deste micronutriente. E ainda, possveis perdas de vitaminas ocorridas no momento do preparo ou acondicionamento das raes experimentais. Estas condies podem ter ocasionado alteraes metablicas com a debilitao do estado geral e conseqente morte dos animais antes do final do experimento; Inexperincia com a manipulao destes animais com estudos de nutrio em relao aos lipdeos;

Na tentativa de confirmao de algumas das hipteses citadas acima, realizou-se ento um ensaio biolgico com as mesmas dietas oferecidas s cobaias e mesmo perodo de durao do experimento. A diferena ocorreu com a utilizao de ratos Wistar , animais clssicos em estudos de nutrio, para a verificao dos mesmos efeitos propostos com as cobaias tendo novamente a presena de cobaias separadas em grupos carnes e mexilhes.

Ao final do experimento, observou-se que: No houve perda de nenhum animal experimental (ratos e/ou cobaias); A curva de variao de peso dos ratos apresentou-se semelhante das cobaias. partir destes resultados, conclui-se que no houve evidncias de alteraes e/ou deficincias vitamnicas nas dietas oferecidas aos animais a ponto de causar a perda dos animais em virtude da dieta. Tal acontecimento seria evidenciado se ocorresse tambm com os ratos aps a ingesto das raes experimentais. Portanto, a sensibilidade do animal e a debilidade imunolgica foram provavelmente as responsveis pelo curto perodo de resistncia das cobaias no ensaio biolgico inicial.

5.5. 1 Variao de peso corporal e consumo de rao

Tabela 13. Mdia e Desvio-Padro ( DP) de peso corporal (g) e consumo de rao (g/animal/dia) de cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento Grupo Controle Carnes Mexilhes Peso (g) 314,89 a 38,67 304,70 a 51,64 314,93 a 50,92 Consumo (g) 37,14 a 19,17 29,54 a 19,69 34,99 a 20,27

As mdias dos valores apresentados tendo a mesma identificao alfabtica no so significativamente diferentes (p<0,05) determinado pela ANOVA e Teste de Comparao mltipla

As mdias dos pesos corporais e consumo de rao da cada grupo experimental so demonstrados na tabela 13, onde no observou-se diferena estatisticamente significativa

entre os grupos aps o perodo experimental (p=0,49), sendo portanto, que o peso corporal e o consumo de rao dos grupos carnes e mexilhes foram semelhantes ao grupo controle. Estes resultados conferem com Sullivan et al. (1993); Fernandez et al. (1999) e Murphy et al. (1999) , os quais trabalharam com cobaias e hiperlipidemias. Alm disso, a no significncia dos dados pode ser explicada pela grande varincia dos dados, o que dificultou a visualizao de diferena entre os grupos. Contudo, foi possvel observar correlao entre o peso corporal e o consumo de rao com um coeficiente de correlao (r = 0,782), o que indica que o consumo de rao est correlacionado ao aumento de peso corporal ao longo do experimento porm, no apresentando diferenas estatisticamente significativas entre os grupos (p = 0,39). Isso tambm devido ao fato de haver grande varincia dos dados experimentais.

Tabela 14. Ganho mdio de peso corporal de cobaias Cavia porcellus durante 20 dias de experimento

Grupo Controle Carnes Mexilhes

Ganho de peso (g/semana) 24,15 a - 1,88 a 34,72 a

DP 28,44 67,37 58,46

As mdias dos valores apresentados tendo a mesma identificao alfabtica no so significativamente diferentes (p<0,05) determinado pela ANOVA e Teste de Comparao mltipla

Em relao ao ganho mdio de peso corporal das cobaias durante o perodo do experimento, foi possvel observar um ganho mdio maior para o grupo controle quando

comparado aos grupos carnes e mexilhes, porm no sendo estatisticamente significativo entre esses dois grupos (Tabela 14). A semelhana em ganho de peso de peso corporal entre os grupos carnes e mexilhes aps o experimento deu-se devido grande variabilidade individual dos animais, com perda de peso observada durante as semanas iniciais do experimento em funo da adaptao destes a uma diferente alimentao. Assim, apesar da correlao existente entre consumo de rao e peso corporal, os animais no diferenciaram-se entre os grupos quanto ao ganho mdio de peso corporal aps 21 dias de experimento.

5.5.2 Perfil de lipoprotenas dos animais experimentais

Tabela 15. Perfil de lipoprotenas de cobaias Cavia porcellus consumindo dieta,controle, carnes e mexilhes Grupo Zero Controle Carnes Mexilhes CT (mg/dL) 57,97 a 12,96 103,86 a 38,25 101,45 a 63,18 72,46 a 31,31 LDL-col (mg/dL) 24,45 a 7,24 71,48 b 17,92 53,72 b 54,10 34,96 b 19,93 HDL-col (mg/dL) 10,30 a 1,15 13,22 b 1,97 15,64 c 0,57 13,04 d 0,71 VLDL-col (mg/dL) 7,59 a 1,23 14,12 b 0,47 14,68 c 1,04 10,14 a 3,41

Os valores so apresentados como mdias e DP As mdias dos valores tendo mesma identificao alfabtica no so estatisticamente diferentes (p<0,05) determinado pela ANOVA e Teste de comparao mltipla .

5.5.2.1 Colesterol total e Lipoprotena de baixa densidade

A tabela 15

apresenta a mdia das concentraes de Colesterol total (CT),

Lipoprotena de baixa densidade (LDL-colesterol), Lipoprotena de alta densidade (HDLcolesterol) e Lipoprotena de muito baixa densidade (VLDL-colesterol) plasmticos das cobaias para cada grupo estudado, os quais sero explicados sob a forma de grficos a seguir.
120

CT (mg/dL)

100 80 60 40 20 0 1 Grupos experimentais

controle

carnes

mexilhes

zero

Figura 14. Grfico dos valores mdios de Colesterol total em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento

Box & Whisker Plot: CT 260

200

140 CT

80

20 1.96*Std. Dev. 1.00*Std. Dev. Mean

-40 CONTROLE CARNE GRUPO MEXILHO ZERO

Figura 15. Grfico de Box-plot em relao ao colesterol total (mg/dL) de cobaias Cavia porcellus

Em relao ao CT e LDL-colesterol houve uma grande varincia dos resultados, sendo obtido valores menores para o grupo mexilhes durante o perodo experimental. Estes resultados foram tambm observados por Sullivan et al. (1993) e Fernandez et al. (1999), que obtiveram hipercolesterolemia significativa entre os grupos experimentais utilizando a adio de colesterol em doses farmacolgicas nas dietas; o que difere deste trabalho pois o objetivo principal desta pesquisa foi de observar o perfil lipdico das cobaias quando substitundo a carne bovina por mexilhes em uma dieta nutricionalmente balanceada para preveno de aterosclerose. Nas figuras 15 e 16 atravs dos grficos podese observar os valores mdios de CT entre os grupos e sua relao quando demonstra-se os desvio-padres, explicando portanto, a igualdade estatstica em relao a esta lipoprotena apesar de ter sido observado valores absolutos menores em relao ao grupo mexilhes quando comparado aos grupos carnes e controle.

Os animais experimentais iniciaram o ensaio biolgico com hipercolesterolemia (>43mg/dL) segundo Puppione et al. (1971). Contudo, o grupo mexilhes apresentou ao final do experimento apresentou valores 24,9% menores que os demais grupos, no sendo estatisticamente significativo quando comparado aos demais grupos experimentais.

LDL-Col (mg/dL)

8 0 7 0 6 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 1

G r u p o s

e x p e r i m e n t a i s

c o n t r o l e

c a r n e s

m e x i l h e s

z e r o

Figura 16. Grfico dos valores mdios de LDL-colesterol em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento

Box & Whisker Plot: LDL 200

160

120

80 LDL 40

0 -40 1.96*Std. Dev. 1.00*Std. Dev. Mean

-80 CONTROLE CARNE GRUPO MEXILHO ZERO

Figura 17. Grfico de Box-plot em relao aos valores de LDL-colesterol (mg/dL)de cobaias Cavia porcellus

Nas figuras 17 e 18 os resultados da lipoprotena LDL-colesterol so apresentados sob a forma de grficos dos valores mdios e Box-Plot para melhor visualizao da varincia dos dados com o desvio-padro de cada grupo. Assim, observa-se que entre os grupos experimentais no houve diferena estatisticamente significativa (p< 0,05), apesar do grupo mexilhes apresentar resultados absolutos menores do que os grupos controle e carnes. Isso pode evidenciar que a LDl-colesterol, lipoprotena aterognica, no foi alterada com a ingesto da rao contendo mexilhes, confirmando os achados de que os frutos do mar atuam como protetores do sistema cardiovascular devido presena de cidos graxos polinsaturados (-3), que tambm foi observado nos mexilhes que fizeram parte das raes experimentais (Oliveira e Silva et al., 1996; Murphy et al., 1997 e 1999; RamirezTortosa et al., 1999; Meydani , 2000; Siscovick et al., 2000; Torres et al., 2000; Visantainer et al., 2000). Os valores de LDL-colesterol, no estiveram acima dos valores de referncia para as cobaias segundo Puppioni et al. (1971) desde o incio do experimento (< 125mg/dL). Entretanto, houve diferena entre o grupo zero, que apresentou menores valores em comparao aos grupos controle, carnes e mexilhes (p < 0,05), como j era esperado pois, so valores obtidos da coleta inicial , quando ainda no haviam recebido as dietas experimentais.

5.5.2.2 Lipoprotena de alta densidade e Lipoprotena de muito baixa densidade

Em contrapartida aos resultados de CT e LDL-colesterol, as liporotenas HDLcolesterol (figuras 19 e 20) e VLDL-colesterol (figuras 21 e 22) apresentaram-se diferentes entre os grupos. Em relao HDL-colesterol quando comparado aos demais grupos experimentais (controle,carnes e mexilhes) o gruop zero foi menor (p<0,05) ou seja, aps o experimento houve um aumento de HDL-colesterol em todos os grupos experimentais.

HDL-col (mg/dL)

16 14 12 10 8 6 4 2 0 1 Grupos experimentais

controle

carnes

mexilhes

zero

Figura 18. Grfico dos valores mdios de HDL-colesterol total em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento

Esses resultados demonstram que com a ingesto das dietas houve um aumento dos valores plasmticos de HDL-colesterol sendo benfico pois, quanto maior os valores desta lipoprotena, menores so os riscos de doenas coronarianas devido sua funo em

excretar o LDl-colesterol e o colesterol total atravs da bile (DeAngelis & Ctenas, 1993: Mayes, 1994; Berglund et al., 1999; Griffin, 1999; Michelon & Moriguchi, 1999). A lipoprotena HDL-colesterol aps o experimento apresentou alteraes para os grupos carnes e mexilhes em relao aos valores de referncia de lipoprotenas em cobaias (Puppioni etal., 1971). Quando comparado ao grupo zero, observou-se diferena siginificativa entre os grupos, sendo que os valores apresentaram-se acima dos considerados como referncia (> 10 mg/dL).

Box & Whisker Plot: HDL 22 20 18 16 HDL 14 12 10 8 6 CONTROLE CARNE MEXILHO ZERO GRUPO

1.96*Std. Dev. 1.00*Std. Dev. Mean

Figura 19. Grfico de Box-plot em relao aos valores de HDL-colesterol (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus

Quanto ao VLDL-colesterol (figuras 21 e 22) evidenciou-se

a diferena

significativa entre os grupos aps o experimento devido menor varincia dos dados. Todavia, os grupos controle e carnes apresentaram maiores valores do que o grupo mexilhes aps 21 dias de experimento.Assim, foram obtidos melhores resultados em relao VLDL-colesterol, com o grupo que recebeu dieta base de mexilhes .

VLDL-Col (mg/dL)

15

10

0 1 Grupos experimentais

controle

carnes

mexilhes

zero

Figura 20. Grfico dos valores mdios de VLDL-colesterol total em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento

Box & Whisker Plot: VLDL 22 20 18 16 14 VLDL 12 10 8 6 4 CONTROLE CARNE MEXILHO ZERO GRUPO 1.96*Std. Dev. 1.00*Std. Dev. Mean

Figura 21. Grfico de Box-plot em relao aos valores de VLDL-colesterol (mg/dL) em cobaias Cavia porcellus

Em relao aos valores de referncia de lipoprotenas em cobaias comparados aos resultados obtidos ao final do perodo de experimento tm-se que, a lipoprotena VLDL-

colesterol no apresentouse acima dos valores-padres de referncia (35mg/dL) segundo Puppione et al., 1971; desde o incio do perodo experimental.

5.5.2.3 Triglicerdeos

Tabela 16. Intervalos de confiana, mdias e desvio-padro de triglicerdeos plasmticos em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento Grupos Zero Controle Carnes Mexilhes Mdias (mg/dL) 71,22 16,81 96,86 38,41 91,16 19,74 81,19 16,33 Intervalos de confiana 48,3 94,1 74,0 119,8 58,8 123,6 53,1 109,3

A tabela 16 mostra os valores mdios, desvio-padro e intervalos de confiana de triglicerdeos para os grupos zero, controle, carnes e mexilhes. No houve evidncia estatstica de diferena (p< 0,05) entre os grupos aps o experimento que tambmpodem ser visualizados nas figuras 23 e 24. Os intervalos de confiana apresentados na tabela 16 foram bastante amplos. Portanto, quanto maior a varincia dos dados, menor a chance de obteno de homogeneidade dos valores obtidos.

G
100 80 60 40

20 0 1 Grupos experimentais

controle

carnes

mexilhes

zero

Figura 22. Grfico dos valores mdios de triglicerdeos em cobaias Cavia porcellus aps 21 dias de experimento

Box & Whisker Plot: TG 200

160

120 TG 80 40 1.96*Std. Dev. 1.00*Std. Dev. Mean 0 CONTROLE CARNE MEXILHO ZERO GRUPO

Figura 23. Grfico de Box-plot em relao aos triglicerdeos plasmticos de cobaias Cavia porcellus

A figura 24 mostra o grfico de Box-plot em relao aos valores plasmticos de triglicerdeos podendo-se observar que houve uma maior variao dos dados nos grupos controle e carnes, seguido dos grupos mexilhes e zero. Portanto, o grupo mexilhes apresentou-se prximo aos valores obtidos no incio do experimento (zero) ou seja, com a ingesto da rao com mexilhes houve pequena alterao dos triglicerdeos plasmticos. Esses resultados so benficos, pois a hipertrigliceridemia est inserida nas dislipidemias e conseqentemente como fator de risco para doenas cardiovasculares, o que no foi ocasionado com a ingesto de mexilhes (Michelon & Moriguchi, 1999). partir dessas observaes, pode-se afirmar o que Vahouny et al. (1981); Piggot & Tucker (1990); Oliveira e Silva et al. (1996) e Murphy et al. (1999), observaram onde relatam a presena de esteris que no so colesterol em moluscos; mas que nas anlises de colesterol so considerados como um todo identificando hipercolesterolemia. Alm disso, estes esteris parecem competir com a absoro intestinal do colesterol semelhante aos fitosteris. Estas hipteses podem ser confirmadas pelos valores obtidos de LDL-colesterol, lipoprotena considerada aterognica , que desde o incio do experimento no apresentou alteraes que evidenciassem o efeito aterognico da dieta com mexilhes oferecida aos animais e sendo menor do que os demais grupos aps o ensaio biolgico. Ainda, importante considerar que , a LDL-colesterol uma lipoprotena que faz parte do colesterol total, portanto, para o grupo mexilhes apresenta um menor valor como citado anteriormente. Assim, do total de colesterol presente no plasma, o LDL-colesterol

representa uma pequena poro do total de lipdeos circulantes representada pelo LDLcolesterol. O HDL- colesterol, apresentando altos valores faz com que a relao CT/HDL diminua e com isso tambm reduza o risco de surgimento de leses aterosclerticas. Isso

pde ser observado no grupo mexilhes aps o perodo que os animais receberam a dieta por 21 dias. Os cidos graxos polinsaturados presentes nos mexilhes , principalmente como 3, provavelmente propiciaram os efeitos redutores no perfil de lipoprotenas das cobaias, sendo tambm observado por Murphy et al. (1999) aps a ingesto destes cidos graxos e/ou alimentos considerados fonte de -3. Os efeitos do alto teor de cidos graxos

saturados (cidos palmtico e mirstico) nos mexilhes possivelmente foi inativado pela ao do -3, sendo evidente nos resultados do perfil lipdico dos animais do grupo mexilhes.

5.5 Sugestes para futuros trabalhos

Devido grande variabilidade individual quanto aos valores das lipoprotenas, existe a possibilidade de que os dados encontrados para o grupo zero no reflitam a mdia dos valores plasmticos dos animais que participaram dos grupos experimentais alimentados com as diferentes raes. Por isso, talvez neste caso, seria interessante analisar os valores iniciais das lipoprotenas de todos os animais que participariam do ensaio biolgico. Tal procedimento no foi efetuado no presente estudo devido a possibilidade de perda dos animais aps a puno cardaca inicial, tambm em funo de serem extremamente sensveis a qualquer situao de estresse. Portanto, para tentar reduzir a grande variabilidade dos dados, pode-se controlar melhor as variveis interferentes no experimento tais como: Melhor controle da ingesto individual de rao;

Ambiente adequado para os animais no perodo de experimento; Anlises das lipoprotenas dos animais que participaro do experimento; Melhor conhecimento do comportamento e necessidades nutricionais dos animais experimentais.

6 CONCLUSES
Em relao composio centesimal dos mexilhes, as fmeas apresentaram maior teor de lipdeos e os machos maior teor de protenas. Esses resultados foram maiores do que os encontrados na literatura em relao Calorias, protenas e lipdeos;

A rao mexilhes apresentou um maior teor de lipdeos do que as raes controle e carnes, no sendo estatisticamente diferente para os demais itens analisados.

Os mexilhes de Santo Antnio de Lisboa, Florianpolis/Sc so boas fontes de cido graxo polinsaturado -3 principalmente EPA e DHA. A proporo de cido graxos polinsaturados maior que a de saturados (ac. Palmtico C 16:0). E ainda, os mexilhes fmeas apresentaram maior teor de colesterol do que os machos no influenciando negativamente nos resultado obtidos;

As raes experimentais foram hipolipdicas, hiperproticas e normoglicdicas no excluindo-se a importante relao com as fibras solveis e insolveis presentes nas dietas carnes e mexilhes; o que contribuiu para bons resultados no perfil lipdico das cobaias aps o ensaio biolgico;

A composio centesimal das dietas carnes e mexilhes quanto aos micronutrientes clcio, ferro, sdio, vitamina C e vitamina A, apresentou-se adequada de acordo com as recomendaes nutricionais para dislipidemias e na preveno de ateroslcerose

(OMS/1995;AHA/2000, NCEP/1994), indicando apenas um pequeno excesso de sdio (intrnseco);

A dieta mexilhes apresentou menores valores de colesterol e maior teor de -3 quando comparada dieta carnes, bem como a quantidade de cidos graxos saturados e monoinsaturados, devido quantidade destes nutrientes encontrados nos mexilhes que foram adicionados dieta. Portanto, os melhores resultados encontrados para esse grupo evidenciam o efeito benfico dos cidos graxos polinsaturados apesar da presena de gordura saturada;

Houve correlao entre o ganho de peso corporal e o consumo de rao pelas cobaias durante o perodo de experimento ou seja, o ganho de peso corporal foi proporcional ao consumo de rao pelos animais entre os grupos experimentais;

O grupo de animais que recebeu a dieta mexilhes no apresentou diferena no perfil lipdico quanto lipoprotena aterognica LDL-colesterol possivelmente, devido aos efeitos benficos do -3 e das fibras solveis na reduo da utilizao do colesterol e gordura saturada;

Apesar das intercorrncias com a sensibilidade dos animais experimentais, a pioneira utilizao e consequente ausncia de habilidade com as cobaias, foi possvel obter bons resultados com a substituio de mexilhes em dietas base de carne bovina para

correlao com o perfil lipdico e aterosclerose, tendo as cobaias se mostrado como um animal sensvel e adequado para utilizao em pesquisas com lipdeos e nutrio;

possvel, portanto, a recomendao do consumo de mexilhes como fonte de cido graxo polinsaturado -3 e a incorporao destes em guias de orientaes nutricionais para preveno de doenas cardiovasculares, desde que sejam orientados em relao quantidade e freqncia de ingesto, bem como o modo de preparo deste alimento.

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