VALIDACIN DE LA METODOLOGA PARA EL ANLISIS DE LOS METALES CADMIO Y PLOMO EN AGUA TRATADA POR ABSORCIN ATMICA CON HORNO

DE GRAFITO EN EL LABORATORIO DE ANLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS DE LA UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA.

LAURA MELISSA ROBLEDO VLEZ 1088287105 ALFREDO CASTAO PUERTA 14572453

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGA ESCUELA DE QUMICA PEREIRA 2012

VALIDACIN DE LA METODOLOGA PARA EL ANLISIS DE LOS METALES CADMIO Y PLOMO EN AGUA TRATADA POR ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO EN EL LABORATORIO DE ANLISIS DE AGUAS Y ALIMENTOS DE LA UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA.

LAURA MELISSA ROBLEDO VLEZ ALFREDO CASTAO PUERTA

TRABAJO DE GRADO Requisito parcial para optar al ttulo de Tecnlogo Qumico

Director EDWIN JHOVANY ALZATE RODRIGUEZ Magister en instrumentacin fsica

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGA ESCUELA DE QUMICA PEREIRA 2012

NOTA DE ACEPTACIN ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________

___________________________________ Director: Edwin Jhovany Alzate Rodrguez Magister en Instrumentacin fsica

__________________________________ Jurado:

__________________________________ Jurado:

DEDICATORIA

A mi madre por todo su apoyo durante la realizacin de mis estudios.

Alfredo Castao Puerta

A mi madre, a quien le entrego todos mis logros y le doy infinitas gracias por su apoyo y esfuerzo en la realizacin de mis estudios; a mi hermano Paulo y mi tia Marta por su apoyo incondicional e inters en mi bienestar.

Laura Melissa Robledo Vlez

AGRADECIMIENTOS

Agradecemos de manera muy especial a nuestro director de tesis Edwin Jhovany Alzate Rodriguez, por su esfuerzo y dedicacin, quien con sus conocimientos, su paciencia, motivacin y experiencia nos ha apoyado y guiado durante este largo proceso hasta su culminacin.

Al profesor Felipe Arcila por los valiosos aportes que realiz durante la realizacin de nuestro trabajo.

Al Laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira por permitir la realizacin de ste trabajo en sus instalaciones.

CONTENIDO

Pg. LISTA DE GRFICAS LISTA DE TABLAS LISTA DE ANEXOS RESUMEN GLOSARIO 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 2. JUSTIFICACION 3. OBJETIVOS 3.1 OBJETIVO GENERAL 3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS 4. MARCO DE REFERENCIA 5. MARCO TEORICO 5.1 EL AGUA 5.2 VALIDACIN 5.2.1 Selectividad 5.2.2 Linealidad 5.2.3 Rango 5.2.4 Precisin xiv xv xvi xvii xviii 22 23 25 25 25 26 31 31 31 32 32 32 32

Pg. 5.2.5 Repetibilidad 5.2.6 Reproducibilidad 5.2.7 Exactitud 5.2.8 Limite de cuantificacin 5.2.9 Limite de deteccin 5.2.10 Robustez 5.2.11 Especificidad 5.2.12 Desviacin estndar 5.2.13 Porcentaje de recuperacin 5.3 METALES PESADOS 5.3.1 Cadmio 5.3.2 Plomo 5.4 ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA 5.4.1 Equipo 6. METODOLOGIA 6.1 EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES NECESARIOS PARA LA VALIDACIN DE CADMIO Y PLOMO POR ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO 6.1.1 Equipos 33 33 33 34 34 34 35 35 36 36 37 39 41 41 45

45 45

Pg.

6.1.2 Reactivos 6.1.3 Materiales 6.2 MTODO DE ANLISIS 6.2.1 Especificaciones bsicas del equipo 6.2.2 Procedimiento de validacin 6.3 PARMETROS ESTADSTICOS A ANALIZAR 6.3.1 Desviacin estndar 6.3.2 Limite de deteccin 6.3.3 Limite de cuantificacin 6.3.4 Exactitud 6.3.5 Repetibilidad 6.3.6 Porcentaje de recuperacin 6.4 CRITERIOS DE ACEPTACIN 7. RESULTADOS DEL MTODO DE ENSAYO PARA CADMIO 7.1 PREPARACIN DE SOLUCIONES 7.1.1 Solucin de Cadmio 50 mg/L 7.1.2 Solucin de Cadmio 1000 g/L 7.1.3 Solucin de Cadmio 10 g/L

45 46 46 47 48 48 49 50 50 50 51 51 52 53 53 53 53 53

Pg. 7.1.4 Modificador de matriz 7.2 PREPARACIN DE PATRONES PARA LA CURVA DE CALIBRACIN 7.2.1 Patrones de concentraciones conocidas 7.2.1.1 7.2.1.2 7.2.1.3 7.2.1.4 7.2.1.5 7.2.1.6 Blanco Patrn 2 g/L Patrn 3 g/L Patrn 4 g/L Patrn 5 g/L Patrn 6 g/L 53 54 54 54 54 54 54 54 54 55 55 55 55 55 55 56 56 56 56

7.3 MUESTRAS DE ANLISIS 7.3.1 Preparacin de soluciones estndar 7.3.1.1 7.3.1.2 7.3.1.3 Solucin estndar (bajo) 1 g/L Solucin estndar (medio) 3,5 g/L Solucin estndar (alto) 5,5 g/L

7.3.2 Preparacin de muestras naturales 7.3.2.1 7.3.2.2 7.3.2.3 7.3.2.4 M1 M2 M1 Ab M1 Aa

Pg. 7.4 DETERMINACIN DE PARMETROS INSTRUMENTALES 7.4.1 Parmetros pticos 7.4.2 Programa del horno 7.4.3 Automuestreador 7.4.4 Condiciones de repeticin de mediciones 7.4.5 Parmetro de medicin 7.5 RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE CADMIO 7.5.1 Resultados ensayo 1 para Cadmio 7.5.2 Resultados ensayo 2 para Cadmio 7.5.3 Resultados ensayo 3 para Cadmio 7.5.4 Resultados ensayo 4 para Cadmio 7.5.5 Resultados ensayo 5 para Cadmio 7.5.6 Resultados ensayo 6 para Cadmio 7.5.7 Resultados ensayo 7 para Cadmio 7.6 PARMETROS ESTADSTICOS 7.6.1 Prueba para rechazo de datos 7.6.2 Limite de deteccin y Limite de cuantificacin 7.6.3 Exactitud 56 56 57 59 59 59 60 60 62 63 64 65 66 67 68 68 70 71

Pg. 7.6.4 Repetibilidad 7.6.5 Porcentaje de recuperacin 8. RESULTADOS DEL MTODO DE ENSAYO PARA PLOMO 8.1 PREPARACIN DE SOLUCIONES 8.1.1 Solucin de Plomo 50 mg/L 8.1.2 Solucin de Plomo 5 mg/L 8.1.3 Solucin de Plomo 200 g/L 8.1.4 Modificador de matriz 8.2 Preparacin de patrones para la curva de calibracin 8.2.1 Patrones de concentraciones conocidas 8.2.1.1 8.2.1.2 8.2.1.3 8.2.1.4 8.2.1.5 Blanco Patrn 20 g/L Patrn 40 g/L Patrn 60 g/L Patrn 80 g/L 72 73 77 77 77 77 77 77 78 78 78 78 78 78 78 79 79 78 79

8.3 MUESTRAS DE ANLISIS 8.3.1 Preparacin de soluciones estndar 8.3.1.1 8.3.1.2 Solucin estndar (bajo) 15 g/L Solucin estndar (medio) 40 g/L

Pg. 8.3.1.3 Solucin estndar (alto) 72 g/L 79 79 80 80 80 80 80 80 81 83 83 83 84 84 86 87 88 89

8.3.2 Preparacin de muestras naturales 8.3.2.1 8.3.2.2 8.3.2.3 8.3.2.4 M1 M2 M1 Ab M1 Aa

8.4 DETERMINACIN DE PARMETROS INSTRUMENTALES 8.4.1 Parmetros pticos 8.4.2 Programa del horno 8.4.3 Automuestreador 8.4.4 Condiciones de repeticin de mediciones 8.4.5 Parmetro de medicin 8.5 RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE PLOMO 8.5.1 Resultados ensayo 1 para Plomo 8.5.2 Resultados ensayo 2 para Plomo 8.5.3 Resultados ensayo 3 para Plomo 8.5.4 Resultados ensayo 4 para Plomo 8.5.5 Resultados ensayo 5 para Plomo

Pg. 8.5.6 Resultados ensayo 6 para Plomo 8.5.7 Resultados ensayo 7 para Plomo 8.6 PARMETROS ESTADSTICOS 8.6.1 Prueba para rechazo de datos 8.6.2 Limite de deteccin y Limite de cuantificacin 8.6.3 Exactitud 8.6.4 Repetibilidad 8.6.5 Porcentaje de recuperacin 9. RESUMEN DE RESULTADOS 10. CONCLUSIONES 11. RECOMENDACIONES 12. BIBLIOGRAFIA ANEXOS 90 91 93 93 94 96 98 99 102 103 104 105 108

LISTA DE GRFICAS

Pg. GRAFICA 1. GRAFICA 2. GRAFICA 3. GRAFICA 4. GRAFICA 5. GRAFICA 6. GRAFICA 7. GRAFICA 8. GRAFICA 9. Determinacin de temperatura ptima para Cd Curva de calibracin para el ensayo 1 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 2 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 3 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 4 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 5 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 6 para Cd Curva de calibracin para el ensayo 7 para Cd Determinacin de temperatura optima para Pb 58 60 62 63 64 65 66 67 82 84 86 87 88 89 90 91

GRAFICA 10. Curva de calibracin para el ensayo 1 para Pb GRAFICA 11. Curva de calibracin para el ensayo 2 para Pb GRAFICA 12. Curva de calibracin para el ensayo 3 para Pb GRAFICA 13. Curva de calibracin para el ensayo 4 para Pb GRAFICA 14. Curva de calibracin para el ensayo 5 para Pb GRAFICA 15. Curva de calibracin para el ensayo 6 para Pb GRAFICA 16. Curva de calibracin para el ensayo 7 para Pb

xiv

LISTA DE TABLAS

Pg. TABLA 1. TABLA 2. TABLA 3. TABLA 4. TABLA 5. TABLA 6. TABLA 7. TABLA 8. TABLA 9. Especificaciones bsicas del equipo Fragmento tabla de valores crticos Criterios de aceptacin Parmetros pticos Determinacin de temperatura ptima para Cd Programa de temperaturas para Cd Parmetros de automuestreador Condiciones de repetibilidad Datos de la curva de calibracin para el ensayo 1 para Cd 47 49 52 56 57 58 59 59 60 61 62 62 63 63 64 64 65 65 66 66 67

TABLA 10. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 1 para Cd TABLA 11. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 2 para Cd TABLA 12. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 2 para Cd TABLA 13. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 3 para Cd TABLA 14. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 3 para Cd TABLA 15. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 4 para Cd TABLA 16. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 4 para Cd TABLA 17. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 5 para Cd TABLA 18. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 5 para Cd TABLA 19. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 6 para Cd TABLA 20. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 6 para Cd TABLA 21. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 7 para Cd
xv

Pg. TABLA 22. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 7 para Cd TABLA 23. Datos consolidados de los ensayos TABLA 24. Prueba de rechazo de datos Dcima de Grubbs TABLA 25. Concentraciones de blanco para cada ensayo TABLA 26. Exactitud para Cd TABLA 27. Porcentaje de variacin para Cd TABLA 28. Porcentajes de recuperacin para Cd TABLA 29. Parmetros pticos para Pb TABLA 30. Determinacin de temperatura ptima para Pb TABLA 31. Programa de temperaturas para Pb TABLA 32. Parmetros de automuestreador TABLA 33. Condiciones de repetibilidad para Pb TABLA 34. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 1 para Pb TABLA 35. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 1 para Pb TABLA 36. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 2 para Pb TABLA 37. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 2 para Pb TABLA 38. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 3 para Pb TABLA 39. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 3 para Pb TABLA 40. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 4 para Pb TABLA 41. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 4 para Pb TABLA 42. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 5 para Pb TABLA 43. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 5 para Pb TABLA 44. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 6 para Pb
xvi

67 68 69 70 72 73 75 80 81 82 83 83 84 85 86 86 87 87 88 88 89 89 90

Pg. TABLA 45. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 6 para Pb TABLA 46. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 7 para Pb TABLA 47. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 7 para Pb TABLA 48. Datos consolidados de los ensayos TABLA 49. Prueba de rechazo de datos Dcima de Grubbs TABLA 50. Concentraciones de blanco para cada ensayo TABLA 51. Exactitud para Pb TABLA 52. Porcentaje de variacin para Pb TABLA 53. Porcentajes de recuperacin para Pb TABLA 54. Resultados de los parmetros de calidad para cadmio TABLA 55. Resultados de los parmetros de calidad para plomo 90 91 91 92 94 95 97 98 100 102 102

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LISTA DE ANEXOS

Pg. Imagen 1. Parmetros pticos para Cadmio Imagen 2. Programa del horno para Cadmio Imagen 3. Automuestreador para Cadmio Imagen 4. Condiciones de repeticin de mediciones para Cadmio Imagen 5. Parmetro de medicin para Cadmio Imagen 6. Parmetros pticos para Plomo Imagen 7. Programa del horno para Plomo Imagen 8. Automuestreador para Plomo Imagen 9. Condiciones de repeticin de mediciones para Plomo Imagen 10. Parmetro de medicin para Plomo 108 109 109 110 110 111 111 112 112 113

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RESUMEN

En el presente trabajo se validaron las metodologas analticas para los anlisis de Cadmio y Plomo en agua tratada por absorcin atmica con horno de grafito en el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira el cual cumple con los requerimientos de la resolucin 2115 del decreto 1575 de 2007 donde se establecen parmetros fisicoqumicos para el agua. Con el fin de mantener los estndares de calidad, se realiz la validacin de la metodologa la cual consisti en establecer los parmetros ptimos de operacin del espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000 tales como determinacin de temperatura optima para cada metal, parmetros de automuestreador, condiciones de repetibilidad y parmetros pticos; se prepararon una serie de patrones, estndares y muestras de concentraciones conocidas, bajo los lineamientos del Standard methods for the examination of water and wastewater, a dichas soluciones se les realizaron siete ensayos durante siete das diferentes; el grupo de muestras se analiz por duplicado. Los datos obtenidos se sometieron a la prueba de la dcima de grubbs para rechazo de datos; una vez elaborada esta prueba se determinaron los parmetros analticos de cada mtodo, tales como exactitud, repetibilidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin y porcentaje de recuperacin. Finalmente estos parmetros se compararon con los criterios de aceptacin establecidos por el Laboratorio de anlisis de aguas y alimentos, determinando as la metodologa la cual posee cualidades analticas acordes con lo que la norma exige.

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GLOSARIO Analito: sustancia contenida en la muestra sometida a anlisis. [1] Blanco: es un sistema fsico que no contiene muestra real y por consiguiente no debera contener el analito de inters, pero que debe contener todos los reactivos que se utilizan en el mtodo de anlisis, y ser sometida a las mismas condiciones y al mismo procedimiento que las muestras reales y los estndares. En lugar de muestra, el volumen faltante se completara con agua grado reactivo que deber tener la calidad recomendada por el mtodo respectivo. Calibracin: Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especficas, la relacin entre valores indicados por un instrumento o valores representados por una medida material y el correspondiente valor conocido como una medida. [2] Curva de calibracin: Representacin grafica de la seal de medicin como una funcin de la cantidad de analito [3] Estandarizacin: Es un mtodo analtico riguroso que dependiendo de la tcnica analtica a la que pertenezca el mtodo, la matriz el analito, la cantidad de parmetros de estandarizacin, y de la logstica empleada para su desarrollo, puede requerir de un tiempo mas o menos considerable. [4] Exactitud: Es la proximidad de concordancia entre un resultado medido y el valor de referencia aceptado. [3] Matriz de la muestra: Conjunto de todas aquellas especies qumicas que acompaan al analito en la muestra. [5] Medicin: Conjunto de operaciones que tienen por objeto determinar un valor de una magnitud. [3] Mtodo de medicin: Secuencia lgica de operaciones, genricamente, utilizada en el desarrollo de las mediciones. [3] descritas

Muestra: Se refiere a cada sistema fsico que sea sometido al procedimiento de anlisis siguiendo el mtodo que se esta estandarizando, ya sea un blanco, un estndar, una muestra adicionada, o una muestra real propiamente dicha. [4] Linealidad: define la habilidad del mtodo para obtener resultados de la prueba proporcionales a la concentracin del analito. [3]
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 Parmetros de estandarizacin: Son los resultados finales del proceso, expresados en forma clara y de acuerdo con las convenciones que se utilicen por la literatura especializada en el tema. [4] Patrones: Los patrones, mejor las sustancias qumicas patrn son especies qumicas fciles de obtener y purificar, y en particular estables en condiciones adecuadas de almacenamiento. Los patrones primarios son un grupo de sustancias utilizadas como referencia para diferentes anlisis, de los cuales existe informacin general. [6] Procedimiento de medicin: Conjunto de operaciones, descritas especficamente, para realizar mediciones de acuerdo a un mtodo determinado. [3] Protocolo: Es la descripcin especifica de un mtodo, las instrucciones detalladas deben seguirse, sin excepcin, si se quiere que los resultados analticos sean aceptados para un propsito dado, como un anlisis. [7] Recuperacin: Es la fraccin del analito adicionada a una muestra de prueba previa al anlisis que es determinada efectivamente por el mtodo. [3] Selectividad: Capacidad de un mtodo para determinar exactamente y especficamente el analito de inters en presencia de otros componentes en una matriz de muestra bajo las condiciones de prueba establecidas. [3] Sensibilidad: El cambio en la repuesta de un instrumento de medicin dividido por el correspondiente cambio del estimulo. [3]

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1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA El agua potable es indispensable para la vida del hombre, pero escasea en la medida que la poblacin aumenta y lamentablemente es desperdiciada. Despus del aire, el agua es el elemento ms indispensable para la existencia del hombre. Por eso es preocupante que su obtencin y conservacin se este convirtiendo en un problema crucial. [8] El agua de consumo puede ser una fuente de intoxicacin por algunos metales. Cuando se combinan aguas de carcter acido con un sistema de conduccin por tuberas revestidas de algn metal contaminante las cuales pueden llegar a afectar la salud pblica. [9] Existen contaminantes antropogenicos entre los que se destacan los metales pesados por ejemplo el plomo (Pb), constituye un elemento txico que se acumula en el cuerpo conforme se inhala del aire o se ingiere con los alimentos y el agua. El plomo se ha empleado durante muchos siglos para fabricar tuberas de agua y utensilios de cocina, es de all que puede contaminar el agua potable. [10] La dosis mortal de plomo absorbido se calcula en 0.5 mg. La acumulacin y toxicidad aparecen si se absorben mas de 0.5 mg por da. La vida media del plomo en los huesos es de 32 aos y en el rin de 7 aos. El lmite de exposicin para el plomo en la atmosfera es de 0.15 mg/m 3. Las principales manifestaciones de la intoxicacin con plomo son trastornos gastrointestinales y anemia. [10] El cadmio se encuentra en forma regular junto con los minerales de zinc, cobre y plomo. Por lo tanto la actividad volcnica es una razn natural para un aumento temporal del medio ambiente en concentraciones de cadmio. El cadmio se utiliza ampliamente en los procesos industriales, por ejemplo: como un agente anticorrosivo, como un estabilizador en productos de PVC, como un pigmento de color, un absorbedor de neutrones en las centrales nucleares, y en la fabricacin de bateras de nquel-cadmio. Fertilizantes fosfatados tambin muestran una gran carga de cadmio. A pesar de que algunos productos que contienen cadmio pueden ser reciclados, una gran parte de la contaminacin por cadmio es causada por el dumping y la incineracin de cadmio de los residuos contaminados. En Escandinavia, por ejemplo, concentracin de cadmio en los suelos agrcolas se incrementa en un 0,2% por ao. El total mundial de emisiones de cadmio asciende a 7000 t / ao. [11] El laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira se rige por los lineamientos establecidos en la resolucin 2115 del decreto 1575 de 2007 donde se establecen parmetros fisicoqumicos para el agua de consumo humano.

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Las cantidades excesivas de cadmio pueden provocar daos en el hgado, los riones y el bazo. Adems existen ciertas evidencias de que el cadmio tiene cierta relacin con la hipertensin, que puede originar enfermedades cardiacas. [10] Entre los parmetros fisicoqumicos que se realizan en el laboratorio se encuentran el Cadmio y el Plomo, los cuales poseen valores mximos aceptables de 0.003 mg/L y 0.01 mg/L respectivamente establecidos en la resolucin. A pesar de que el laboratorio cuenta con la tcnica de espectrofotometra de absorcin atmica de llama para realizar los anlisis de cadmio y plomo no se alcanzan valores ms bajos que los exigidos por la resolucin 2115/2007.

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2. JUSTIFICACIN

El laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira para dar cumplimiento con la resolucin 2115 de 2007 y dar cumplimiento con los lineamientos de la norma Internacional NTC ISO:IEC 17025, debe estandarizar y validar la tcnica de espectrofotometra de absorcin atmica por horno de grafito ya que con la tcnica que se tienen establecida por espectroscopia de absorcin atmica de llama no alcanza los valores mximos exigidos para dichos metales.

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3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL Validar los mtodos de Espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito, en las determinaciones de los metales Cadmio y Plomo en el agua potable.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS Establecer las condiciones instrumentales experimentales para los anlisis mediante ensayos previos con muestras patrn. Obtener las soluciones patrn con los rangos de concentracin definidos y las muestras naturales y de referencia de acuerdo a la metodologa planteada por medio de la tcnica de espectrofotometra de absorcin atmica con horno de grafito. Realizar los ensayos de validacin de acuerdo a la metodologa planteada por el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira. Determinar las variables del mtodo tales como lmite de deteccin, lmite de cuantificacin y reproducibilidad para confirmar que el mtodo de ensayo tiene cualidades de desempeo acordes con lo que la aplicacin requiere. Documentar el procedimiento para la cuantificacin de Cadmio y Plomo por espectrofotometra de absorcin atmica por horno de grafito. Presentar los informes de validacin de acuerdo a los datos recopilados, detallando las condiciones de cada ensayo as como los parmetros estadsticos obtenidos.

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4. MARCO DE REFERENCIA

Los mtodos utilizados en un laboratorio de anlisis qumicos han de ser evaluados y sometidos a prueba para asegurarse de que producen unos resultados vlidos y coherentes con el objetivo previsto, es decir, han de ser validados. Todos los mtodos nuevos que se introduzcan en un laboratorio deben estar adems documentados, y todos los analistas que los vayan a utilizar han de recibir una formacin adecuada y demostrar su competencia en su utilizacin antes de empezar a actuar en casos concretos. Tambin necesitan una revalidacin, o al menos una verificacin, los mtodos comercializados. Los procedimientos recomendados por los fabricantes han de respetarse lo mximo posible. En caso contrario, si se introducen cambios importantes, se necesitar una validacin completa. Si un mtodo se modifica o se aplica en una situacin nueva (por ejemplo, una muestra de matriz nueva) se necesitar una revalidacin o una verificacin, segn el alcance de la modificacin y el carcter de la nueva situacin. Por ejemplo, se necesitar una revalidacin si un mtodo diseado para actuar con orina se utiliza con sangre; se necesitar una verificacin si se utiliza una columna cromatogrfica de un carcter o una dimensin diferentes. No se necesitar adoptar ninguna medida si la modificacin es slo pequea, por ejemplo, si se sustituye una columna cromatogrfica por otra del mismo tipo. La validacin o la verificacin de un mtodo se realizan mediante una serie de pruebas normalizadas y experimentales de las que se obtienen datos sobre su exactitud, precisin, etc. El proceso que ha de seguirse para ello debe constar por escrito como procedimiento normalizado de trabajo. Una vez validados o verificados los mtodos, su utilizacin habitual en el laboratorio debe ser autorizada formalmente por la persona responsable, por ejemplo, el director del mismo. En el certificado de mtodo autorizado o documento similar que se establezca en el manual de garanta de calidad se anotarn los detalles del mtodo y los datos en que se bas su evaluacin, entre ellos los siguientes: Denominacin del mtodo Analito(s) Matriz de la muestra Fundamento cientfico del mtodo Datos del estudio de validacin (exactitud, precisin, selectividad, intervalo, lmite de deteccin, etc.) Nombre y cargo de la persona responsable de la autorizacin
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 Fecha. [21]

4.1 NORMATIVIDAD

Para desarrollar la validacin de la tcnica se consultaron normas en las cuales se establecen requisitos a cumplir en la validacin. Estas normas son: la resolucin 2115 del decreto 1575 de 2007 y la norma NTC/ISO/IEC 17025:2005 En la resolucin 2115 del decreto 1575 de 2007 del ministerio de la proteccin social, ministerio de ambiente y desarrollo territorial, se menciona el valor mximo aceptable para el plomo que es 0.01 mg/L, del cadmio que es de 0.003 mg/L. [12]. La acreditacin de laboratorios de ensayo se concede en base al cumplimiento de la norma NTC/ISO/IEC 17025:2005 Requisitos Generales Para la Competencia de Laboratorios de Ensayo y de Calibracin Esta menciona acerca de la validacin y la incertidumbre lo siguiente: Numeral 5.4.5.2 El laboratorio debe validar los mtodos no normalizados, los mtodos que disea o desarrolla, los mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto, as como las ampliaciones y modificaciones de los mtodos normalizados, para confirmar que los mtodos son aptos para el fin previsto. La validacin debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades del tipo de aplicacin o del campo de aplicacin dados. El laboratorio debe registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado para la validacin y una declaracin sobre la aptitud del mtodo para el uso previsto. Numeral 5.4.5.3 La gama y la exactitud de los valores que se obtienen empleando mtodos validados (por ejemplo, la incertidumbre de los resultados, el lmite de deteccin, la selectividad del mtodo, la linealidad, el lmite de repetibilidad o de reproducibilidad, la robustez ante influencias externas o la sensibilidad cruzada frente a las interferencias provenientes de la matriz de la muestra o del objeto de ensayo) tal como fueron fijadas para el uso previsto, deben responder a las necesidades de los clientes. Numeral 5.4.6.2 Los laboratorios de ensayo deben tener y deben aplicar procedimientos para estimar la incertidumbre de la medicin. En algunos casos la naturaleza del mtodo de ensayo puede excluir un clculo riguroso, metrolgica y estadsticamente vlido, de la incertidumbre de medicin. En estos casos el laboratorio debe, por lo menos, tratar de identificar todos los componentes de la
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incertidumbre y hacer una estimacin razonable, y debe asegurarse de que la forma de informar el resultado no d una impresin equivocada de la incertidumbre. Una estimacin razonable se debe basar en un conocimiento del desempeo del mtodo y en el alcance de la medicin y debe hacer uso, por ejemplo, de la experiencia adquirida y de los datos de validacin anteriores. Numeral 5.4.6.3 Cuando se estima la incertidumbre de la medicin, se deben tener en cuenta todos los componentes de la incertidumbre que sean de importancia en la situacin dada, utilizando mtodos apropiados de anlisis. [14]

4.2 VALIDACIN

La validacin es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto [15]. Estrategia para la validacin del mtodo de ensayo La validez de un mtodo especfico debe demostrarse con experimentos de laboratorio utilizando muestras o patrones que sean similares a las muestras desconocidas analizadas rutinariamente. La preparacin y ejecucin debe seguir un protocolo de validacin, preferiblemente escrito en un procedimiento paso a paso. Los posibles pasos para una validacin completa del mtodo de ensayo se enumeran a continuacin: Desarrollar un procedimiento de validacin. Definir la aplicacin, propsito y alcance del mtodo. Definir los parmetros de desempeo y criterios de aceptacin. Definirlos experimentos de validacin. Verificar las caractersticas pertinentes de los equipos. Cualificar materiales; por ejemplo patrones y reactivos. Realizar experimentos de prevalidacin. Ajustar los parmetros del mtodo y criterios de aceptacin, si es necesario. Realizar completamente los experimentos internos (y externos) de validacin. Desarrollar un procedimiento normalizado de operacin para ejecutar el mtodo rutinariamente. Definir los criterios para la revalidacin. Definir el tipo y la frecuencia de las pruebas apropiadas del sistema y las comprobaciones del control de la calidad para la rutina. Documentar los experimentos de validacin y los resultados en un informe de validacin.
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 Quin es el responsable de que el mtodo que utiliza el laboratorio se encuentre validado? El laboratorio que utiliza un mtodo de ensayo determinado es el responsable por asegurar que el mtodo haya sido validado. En ciertos casos el laboratorio debe llevar cabo trabajo adicional para complementar los datos existentes sobre la validacin. Por ejemplo, cuando un mtodo ha sido validado por organizaciones que publican normas, tales como la AOAC (Association of Official Analytical Chem ists) y la ASTM (American Society for Testing and Materials), el usuario slo ne ce sita establecerlos datos de desempeo para su propio uso del mtodo. En esta situacin el laboratorio debe confirmar que su desempeo se ajusta al previsto por el mtodo. Mucho se ha publicado en la literatura acerca de la validacin de mtodos de ensayo mediante comparaciones interlaboratorio. Hay numerosos documentos que relacionan este tipo de validacin. Si se desarrolla un mtodo de ensayo con amplias perspectivas de uso, quizs como un procedimiento normalizado publicado, entonces, una comparacin que involucre un grupo de laboratorios es probablemente la manera preferida de llevar a cabo la validacin. Sin embargo, no siempre es una opcin conveniente para los laboratorios de ensayo industriales. La aplicacin para la que el mtodo se requiere puede ser secreta, en tal magnitud que ningn otro laboratorio estara interesado en colaborar. Aqullos que podran estar interesados seran los competidores.[16] Dicho laboratorio deber demostrar finalmente que los criterios de rendimiento y de confirmacin del mtodo son adecuados en: Las tolerancias requeridas de todas las mediciones realizadas como parte del mtodo (volumen, temperatura, masa, etctera). Las formas de los analitos medidos, incluyendo su especiacin. Que el efecto de las interferencias haya sido ampliamente identificado y cuantificado. Que se hayan identificado las fuentes significativas de error y los mecanismos adecuados para controlarlas. [17] Por qu es necesaria la validacin de mtodos? Si no se puede confiar en el resultado de un ensayo, entonces este tiene poco valor y dara lo mismo no realizarlo, por otra parte el costo e estas mediciones es alto y se generan costos adicionales a partir de decisiones tomadas con base a resultados errados. La validacin de mtodos permite a los qumicos demostrar que un mtodo es "apropiado", y que el resultado analtico es idneo para el propsito deseado y es confiable para que cualquier decisin basada en l, pueda tomarse con total confianza. [17]

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Cundo deben validarse los mtodos? Un mtodo debe validarse cuando sea necesario verificar que sus parmetros de rendimiento son adecuados para usarlos en un problema analtico especfico. Por ejemplo en las siguientes circunstancias: El desarrollo de un nuevo mtodo para un problema especfico. La revisin de un mtodo ya establecido con el fin de incorporar mejoras en l o con el objetivo de ampliarlo para un nuevo problema. Cuando el control de calidad indique que un mtodo ya establecido est cambiando con el tiempo. Cuando un mtodo ya establecido sea usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o instrumentos. Para demostrar la equivalencia entre dos mtodos; por ejemplo, un mtodo nuevo y el normalizado. [17]

Protocolo de validacin Para realizar la validacin se sigui el protocolo definido en el documento estandarizacin de mtodos analticos del instituto de hidrologa, meteorologa y estudios ambintales, en el cual se define un procedimiento de estandarizacin que se puede considerar como abreviado pero que incluye los parmetros fundamentales para que un mtodo analtico una vez montado pueda empezar a reportar datos con adecuado y comprobable grado de confianza. Con el procedimiento propuesto la precisin se da en trminos de repetitividad y una vez logrado ste objetivo, se puede desarrollar lo concerniente a la reproducibilidad entre analistas y luego entre laboratorios. Protocolo

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5. MARCO TEORICO

5.1 EL AGUA

El agua es un componente de nuestra naturaleza que ha estado presente en la Tierra desde hace ms de 3.000 millones de aos, ocupando tres cuartas partes de la superficie del planeta. Alrededor del 98%, corresponde a agua salada que se encuentra en mares y ocanos, el agua dulce que poseemos en un 69% corresponde a agua atrapada en glaciares y nieves, un 30% est constituido por aguas subterrneas y una cantidad no superior al 0,7% se encuentra en forma de ros y lagos. El agua es una molcula simple y extraa, puede ser considerada como el lquido de la vida. Es la sustancia ms abundante en la biosfera, dnde la encontramos en sus tres estados y es adems el componente mayoritario de los seres vivos, pues entre el 65 y el 95% del peso de la mayor parte de las formas vivas es agua. El agua fue adems el soporte donde surgi la vida. Posee un extrao comportamiento, que la convierte en una sustancia diferente a la mayora de los lquidos, manifiesta extraordinarias propiedades fsicas y qumicas que van a ser responsables de su importancia biolgica. Durante la evolucin de la vida, los organismos se han adaptado al ambiente acuoso y han desarrollado sistemas que les permiten aprovechar las propiedades del agua.

5.2 VALIDACIN El termino validacin ha sido en la literatura de diversas maneras y por numerosos autores. Aunque los trminos dados son diferentes el significado de las mismas es siempre el mismo: a) especificar e implementar, b) aprobar y c) documentar. La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas documentadas, mediante estudios sistemticos de laboratorio y demostrativos, de que un mtodo de anlisis es lo suficientemente fiable y reproducible para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos. El proceso de validacin permite el conocimiento de las caractersticas de funcionamiento del mtodo y proporciona un alto grado de confianza en el mismo y en los resultados obtenidos al aplicarlo. [1]
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5.2.1

Selectividad. La capacidad de un mtodo para determinar el analito sin interferencias de impurezas, productos de degradacin, excipientes u otras sustancias presentes en la muestra, se relaciona con el trmino de selectividad. La selectividad es la capacidad de un mtodo analtico para medir y/o identificar simultnea o separadamente los analitos de inters de forma inequvoca, en presencia de otras sustancias qumicas que pueden estar presentes en la muestra. [1]

5.2.2 Linealidad. La linealidad es la capacidad del mtodo para proporcionar resultados que son directamente (o por medio de transformaciones matemticas) proporcionales a la concentracin del analito en la muestra dentro de un rango establecido. Siempre que sea posible se busca una respuesta de tipo lineal que facilitara su trazado, interpolacin e interpretacin. [1] La linealidad en un procedimiento analtico es su capacidad para obtener resultados de prueba que sean proporcionales ya sea directamente, o por medio de una transformacin matemtica bien definida, a la concentracin del analito en muestras en un intervalo dado. La linealidad se refiere a la relacin entre la concentracin y la medida de valoracin. El objetivo es obtener un modelo que describa con precisin la relacin de la concentracin versus respuesta, ya sea lineal o no. [18] 5.2.3 Rango. El rango se define como el intervalo entre la concentracin superior e inferior de analito para el cual se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad del mtodo descrito. [1]

5.2.4

Precisin. La precisin expresa el grado de concordancia (grado de dispersin) entre una serie de medidas de tomas mltiples a partir de una misma muestra homognea en las condiciones prescritas. La procedencia de las muestras destinadas al estudio de precisin puede ser de muestras reales o preparadas en el laboratorio. El objeto del estudio de la prediccin es conocer la variabilidad o el mas-menos del mtodo de ensayo. Esta variabilidad es debida a errores aleatorios inherentes a todo mtodo de ensayo. Como consecuencia de la existencia de estos errores, los anlisis efectuados sobre muestras idnticas, en las mismas circunstancias, no conducen generalmente a resultados idnticos. Los factores susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados (analista, equipo instrumental, reactivos, tiempo, entre otros.) de aqu la importancia del estudio de la precisin. [1]
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5.2.5

Repetibilidad. Estudia la variabilidad del mtodo efectuando una serie de anlisis sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas (por un mismo analista, con los mismos aparatos y reactivos, entre otros), en un mismo laboratorio y en un periodo de tiempo corto. [1] La repetibilidad se expresa matemticamente por el coeficiente de variacin (desviacin estndar relativa) de una serie de medidas. Uno de los factores que pueden influir en la repetibilidad del mtodo de anlisis es la concentracin del analito, ya que la desviacin estndar de las respuestas obtenidas aumenta al disminuir la concentracin del analito. Por otro lado el valor aceptado del coeficiente de variacin depende del intervalo de aceptacin especificado en el mtodo de anlisis. El numero de replicas se deduce a partir del coeficiente de variacin de repetibilidad del mtodo. [1]

5.2.6

Reproducibilidad. Evala la concordancia entre resultados independientes obtenidos mediante la variacin del mtodo de anlisis, del instrumento, del laboratorio o incluso del experimentador. [6]

5.2.7

Exactitud. La exactitud de un procedimiento analtico expresa la proximidad entre el valor que es aceptado convencionalmente como el valor verdadero o un valor referencia y el valor experimental encontrado. No debe confundirse la exactitud y prediccin, la precisin esta relacionada con la dispersin de una serie de mediciones, pero no da ninguna indicacin de lo cerca que esta del valor verdadero. Se puede tener mediciones muy precisas pero poco exactas; sin embargo, para que un mtodo sea exacto se requiere un cierto grado de precisin. [1] De la definicin de exactitud surge el principal problema: cul es el valor verdadero del analito en la muestra?, el valor verdadero en muchos casos se desconoce. No obstante, cuando se dispone de patrones de referencia certificados, el valor de dicho patrn es el que se acepta como valor verdadero y la exactitud puede evaluarse aplicando el mtodo sobre dicho patrn, o bien analizando muestras de placebo o de problema a las que se ha aadido una cantidad conocida de dicho patrn. Tambin se acepta la comparacin de resultados con un mtodo de referencia validado del que ya se ha demostrado su exactitud; entonces el valor verdadero es el que se obtiene con dicho mtodo de referencia y se compara con el valor hallado con el mtodo nuevo que se quiere validar. [1]

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5.2.8 Limite de cuantificacin. Dado un mtodo analtico determinado, se entiende por lmite de cuantificacin (LQ) de dicho mtodo, la mnima cantidad de analito presente en la muestra que se puede cuantificar, bajo las condiciones experimentales descritas, con una adecuada prediccin y exactitud. El lmite de cuantificacin es una caracterstica de las valoraciones cuantitativas de compuestos que se encuentran en baja concentracin en la matriz de una muestra. [1]

Siendo:

5.2.9 Limite de deteccin. El lmite de deteccin (LD) se define como la mnima cantidad de analito en la muestra que se puede detectar aunque no necesariamente cuantificar bajo dichas condiciones experimentales. El lmite de deteccin es una caracterstica de las pruebas de lmite. La cantidad mnima de la muestra que puede detectarse, aunque no necesariamente cuantificarse, en las condiciones experimentales indicadas. Las pruebas de lmite simplemente comprueban que la cantidad del analito se encuentra por encima o por debajo de un nivel determinado. El lmite de deteccin se expresa habitualmente en forma de concentracin de analito (por ejemplo, porcentaje, partes por milln, entre otras). [1] Siendo:

5.2.10 Robustez. La gua ICH, Q2A define la robustez de un mtodo analtico como la medida de su capacidad para permanecer inalterado ante pequeas pero deliberadas variaciones en ciertos parmetros, proporcionando idea de su fiabilidad o estabilidad durante su empleo. Es por lo tanto la capacidad que demuestra el procedimiento de anlisis para proporcionar resultados vlidos en presencia en presencia de pequeos

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cambios respecto de las condiciones descritas en el mtodo, susceptibles de producirse durante su utilizacin. [1] La robustez de un procedimiento analtico es una medida de su capacidad para no resultar afectando por variaciones pequeas pero deliberadas en los parmetros enumerados en la documentacin del procedimiento, y a la vez, da una idea de su aptitud durante su uso normal. La robustez puede determinarse durante la etapa de desarrollo del procedimiento analtico. [18] 5.2.11 Especificidad. Los documentos ICH definen especificidad como la capacidad de evaluar de manera inequvoca el analito en presencia de aquellos componentes cuya presencia resulta previsible, como impurezas, productos de degradacin y componentes de la matriz. La falta de especificidad de un procedimiento analtico individual puede compararse utilizando otros procedimientos analticos complementarios otras autoridades internacionales de reconocido prestigio (IUPAC, AOAC-I) han preferido el termino selectividad reservando especificidad para procedimientos que resulten completamente selectivos. [1]

5.2.12 Desviacin estndar. Estadstico bsico indicativo de la dispersin o variabilidad de los resultados. [1]

Siendo:

Esta frmula se aplica para n<30 5.2.13 Porcentaje de recuperacin. Por recuperacin de analitos en un ensayo se entiende la respuesta del detector ante una adicin o extraccin de analito de la matriz, en comparacin con su respuesta ante la concentracin real del estndar de referencia verdadero. Los experimentos de
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recuperacin deben hacerse comparando los resultados analticos de las muestras extradas con tres concentraciones (normalmente iguales a las de las muestras de control utilizadas para valorar la precisin y exactitud de un mtodo). No es necesario que la recuperacin del analito sea del 100%, pero el grado de recuperacin (del analito y del estndar interno) debe ser estable (con cualquier tipo de concentracin analizada), precisa y reproducible (ms del 20 %). [19]

Siendo:

5.3 METALES PESADOS

Alrededor de 40 elementos en la Tabla Peridica tienen una densidad mayor o igual a 5 g/cm3 y son conocidos como metales pesados. El rasgo definitivo de la fisiologa de los metales pesados, es que aun cuando muchos de ellos son esenciales para el crecimiento como el Na, K, Mg, Ca, V, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn y Mo, se ha reportado que tambin tienen efectos txicos sobre las clulas, principalmente como resultado de su capacidad para alterar o desnaturalizar las protenas. [3.15]. debido a su movilidad en los ecosistemas acuticos naturales y a su toxicidad para las formas de vida superiores de vida, los iones de metales pesados presentes en los abastecimientos de agua superficial y subterrneos, se les ha dado prioridad como los contaminantes inorgnicos mas importantes en el ambiente. Aun cuando se encuentren en cantidades bajas e indetectables, la recalcitrancia y consiguiente persistencia de los metales pesados en cuerpos de agua, implica que a travs de procesos naturales como la biomagnificacion, su concentracin puede llegar a ser tan elevada que empiece a ser toxica. Los metales pesados suelen ser detectados ya sean en su estado elemental, lo que implica que no sufren modificaciones, o enlazados en varios complejos de sales. De cualquier manera, los iones metlicos no pueden ser mineralizados. [20] 5.3.1 Cadmio. El cadmio es un metal de color blanco brillante, dctil, maleable y resistente a la corrosin. Su densidad es de 8.642 g/cm3, y sus vapores son 3.88 veces ms pesados que el aire. Su presin de vapor es relativamente alta, por lo que pasa fcilmente al estado de vapor y en este estado se oxida rpidamente produciendo xido de cadmio que permanece
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en el aire. Cuando en la atmsfera hay gases o vapores reactivos, como los bixidos de azufre o de carbono, reaccionan con ellos y produce respectivamente carbonato, sulfito, hidrxido, sulfato y cloruro cadmio. El cadmio est presente en la naturaleza como xidos complejos, los sulfuros y los carbonatos de zinc, plomo y cobre; no se recupera como producto principal de las minas, sino como un subproducto de la extraccin de otros metales no ferrosos, principalmente de minerales de zinc. Alrededor del 18 por ciento del consumo mundial proviene del reciclaje. Los usos principales del cadmio refinado son: en bateras (pilas Ni Cd), pigmentos para plsticos, cermica y esmaltes; estabilizadores para plsticos, placas de hierro y acero, tambin como elemento de aleacin de plomo, cobre y estao. [21] Uno de los mayores agentes txicos asociado a contaminacin ambiental e industrial es el cadmio, pues rene cuatro de las caractersticas ms temidas de un txico: 1. Efectos adversos para el hombre y el medio ambiente. 2. Bioacumulacin. 3. Persistencia en el medio ambiente. 4. Viaja grandes distancias con el viento y en los cursos de agua. El cadmio se obtiene como subproducto del tratamiento metalrgico del zinc y del plomo, a partir de sulfuro de cadmio; en el proceso hay formacin de xido de cadmio, compuesto muy txico. Adems de contaminar el ambiente desde su fundicin y refinacin, contamina tambin por sus mltiples aplicaciones industriales. [22] No hay evidencia clara de que la presencia del cadmio en los organismos vivos sea consecuencia del transporte a travs de las cadenas alimentarias, aunque se ha confirmado que la entrada de iones de cadmio es seguida de acumulacin en los organismos. La toxicidad del cadmio es el resultado del enlace del metal con especies reactivas o agentes acomplejantes que originan procesos de inhibicin enzimtica, posiblemente trastocando las funciones de crecimiento y metabolismo tisular. Toxicologa avanzada La toxicidad en agua est controlada por la concentracin de cadmio libre, la cual a su ves esta condicionada a la dureza del agua. Toxicologa avanzada

Efectos sobre la salud del cadmio Los principales efectos adversos del cadmio incluyen dao renal y el enfisema pulmonar, la poblacin de mayor riesgo son las mujeres con deficiencias nutricionales o bajo contenido de hierro, tambin las
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personas con trastornos renales, los fetos y los nios con bajo contenido de hierro en sus reservas corporales; la (OMS) ha establecido una ingesta semanal tolerable provisional (ISTP) para el cadmio en 7g/kg de peso corporal, el rin es el rgano diana considerado crtico para controlar la toxicidad del cadmio en los humanos, los efectos crticos principales incluyen un aumento de la excrecin de protenas en la orina como resultado de los daos de clulas tubulares proximales, la severidad del efecto depende de la duracin y magnitud de la exposicin. [21] Las alteraciones seas es otro efecto crtico de la exposicin crnica a niveles elevados de cadmio. El cadmio es un carcingeno humano por la va de inhalacin, datos epidemiolgicos de los lugares de trabajo confirman a los pulmones como rganos afectados, el cadmio no se considera un agente carcingeno por ingestin. El cadmio se almacena principalmente en el hgado y los riones, la excrecin es lenta, con una media de vida muy larga (dcadas) en el cuerpo humano; el cadmio se almacena en la mayora de los tejidos al aumentar la edad. El tabaco es una importante fuente de absorcin de cadmio en los fumadores y tambin puede afectar a los no fumadores a travs de la exposicin pasiva al humo secundario. Las personas que viven en las proximidades de fuentes industriales y otras fuentes con punto de liberacin de cadmio pueden estar expuestas a un mayor nivel de cadmio. El cadmio se produce en todos los alimentos, pero los cultivos agrcolas (en particular el arroz de regado) generalmente representan la mayor parte de la ingesta, los vegetarianos y los grupos de alto consumo de cereales pueden tener mayor exposicin en comparacin con la poblacin general. Las personas con un alto consumo de mariscos y carnes de rganos de animales marinos pueden tener un consumo especialmente alto de cadmio. El cadmio en los cultivos se debe a la absorcin de cadmio del suelo y la velocidad de absorcin est influenciada por factores tales como el pH del suelo, salinidad, contenido de humus, las especies y variedades vegetales y la presencia de otros elementos (por ejemplo, zinc). [21]

5.3.2 Plomo. En su forma elemental es de color blanco plateado y se vuelve de color gris azulado cuando se expone al aire. Pertenece al Grupo IVA de la Tabla Peridica. Sus propiedades incluyen: un bajo punto de fusin, alta densidad, facilidad de fundicin, baja resistencia, maleabilidad, facilidad de
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fabricacin, resistencia a los cidos, y resistencia a la corrosin. En la naturaleza el plomo se encuentra con el mineral de zinc, plata y cobre y se extrae junto con estos metales. La minera produce ms del 90 por ciento del consumo mundial actual y el reciclaje representa alrededor del 10 por ciento del total del consumo mundial de plomo. Aproximadamente tres cuartas partes del consumo de plomo se utiliza principalmente en la fabricacin de bateras, mientras que un quinto en lminas de plomo para el techado de viviendas, para la fabricacin de municiones, balas de plomo para escopetas, en aleaciones metlicas, revestimientos de cables y para los aditivos de la gasolina. [21] Sobre los productos que contienen plomo indicar que el plomo se utiliza para un nmero de aplicaciones debido a su suavidad, plomo puro se utiliza slo para unas pocas aplicaciones. En las aplicaciones metlicas, el plomo es ms a menudo aleado con pequeas cantidades de antimonio (por ejemplo, en bateras, revestimientos y envolturas de cables), de cobre (por ejemplo, en hojas de plomo y tuberas de plomo), de calcio (por ejemplo, en bateras) o de plata (por ejemplo en soldaduras). Adems, el plomo se utiliza como elemento de aleacin en las aleaciones de cobre, bronce y estao. El uso del plomo a gran escala se debe a su bajo punto de fusin, la facilidad de fundicin, alta densidad, baja resistencia, facilidad de fabricacin, resistencia a los cidos, resistencia a la corrosin, reaccin electroqumica con cido sulfrico y la capacidad para atenuar las ondas sonoras, las radiaciones ionizantes y las vibraciones mecnicas. Los cambios ms significativos en el patrn de uso general son el aumento del consumo de bateras, y una disminucin en las reas de revestimiento de cables y aditivos de gasolina. [21] Efectos a la salud del plomo: El plomo es txico an a muy bajos niveles de exposicin y tiene efectos agudos y crnicos en la salud humana. Se trata de una sustancia txica que puede causar daos en el sistema de mltiples rganos, sean neurolgicos, cardiovasculares, renales, gastrointestinales, hematolgicos y efectos en la reproduccin. La exposicin a corto plazo a altos niveles de plomo puede causar vmitos, diarrea, convulsiones, coma e incluso la muerte. A largo plazo (crnica) la exposicin al plomo en los seres humanos da lugar a efectos en la sangre, sistema nervioso central (SNC), presin arterial, los riones y el metabolismo de la vitamina D. La exposicin al plomo en nios est relacionada con una disminucin de su coeficiente intelectual (IQ). El sistema nervioso es el sistema ms sensible a la exposicin al plomo, quizs no haya para el plomo un umbral mnimo que indique el inicio de efectos neurolgicos adversos en los nios. Se han detectado daos neurolgicos a niveles de exposicin que antes se consideraba que no causaran dao (<10 g/dL) (Canfield 2003; CDC 1997a). La exposicin aguda a niveles muy altos de plomo puede provocar encefalopata en nios y otros signos asociados como: Ataxia, coma, convulsiones, la muerte, hper irritabilidad, estupor. Los efectos adversos
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pueden presentarse a niveles bajos de plomo en sangre, de menos de 10 g/dL en algunos casos, y posiblemente no se puedan detectar mediante una exploracin clnica. [21] Algunos de los efectos neurolgicos del plomo que pueden persistir hasta la adultez son: Puede haber una diferencia en cuanto a los efectos neurolgicos entre un adulto expuesto al plomo en la edad adulta y un adulto expuesto al plomo en su niez, puesto que en este ltimo caso su cerebro se est desarrollando. Los efectos neurolgicos en los nios, incluyendo el ADHD, pueden persistir en la edad adulta. [21] Efectos al medio ambiente del plomo: Debido a la capacidad de unin de los minerales del suelo y el humus, las aguas subterrneas por lo general contiene concentraciones muy bajas de plomo, y la difusin de plomo de los depsitos de las aguas subterrneas se debe esperar como un proceso relativamente lento (Hansen et al., 2004a). La movilidad de plomo en el suelo depende del pH del suelo y de materia orgnica. En general la relativa inmovilidad de absorcin de plomo en el suelo disminuye su biodisponibilidad para los seres humanos y la vida terrestre otros (OCDE, 1993). Los compuestos orgnicos de plomo pueden bioacumularse en plantas y animales, El plomo se bioacumula en los organismos, en particular, en la biota que se alimenta principalmente de partculas, pero la biomagnificacin de plomo inorgnico en la cadena alimentaria acutica no es aparente, pues los niveles de plomo, as como los factores de bioacumulacin, disminuyen en el nivel trfico. Esto se explica en parte por el hecho de que en los vertebrados, el plomo se almacena principalmente en el hueso, que reduce el riesgo de transmisin de conducir a otros organismos en la cadena alimentaria (Tukker et al., 2001). La distribucin de plomo en los animales est estrechamente relacionada con el metabolismo del calcio. En los mariscos, las concentraciones de plomo son mayores en la cscara rica en calcio que en el tejido blando. En los delfines, el plomo se transfiere de madres a hijos durante el desarrollo fetal y la lactancia. Esto podra estar relacionado con el metabolismo del calcio (IPCS, 1995). [21] El plomo es altamente txico para las aves cuando se ingiere como perdigones de plomo, la ingestin de una sola pastilla de granalla de plomo es mortal en algunas especies de aves, aunque la sensibilidad vara entre las especies y depende de la dieta (IPCS, 1989). Las plomadas de plomo ingerido por las aves se reducen de tamao y forma por disolucin en el sistema digestivo acido, as como en la molienda fsica de la molleja del ave. La EPA de los EE.UU. lleg a la conclusin de que hay pruebas claras de que la ingestin de plomadas de pesca ha conducido en efectos txicos mortales para las aves, como los Somorgujos comunes, Mute y Tundra, Cisnes y Grullas Sandhill trompetista y otras aves con hbitos alimenticios similares estn en riesgo (EPA de los EE.UU., 1994).1 [21]
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5.4 ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA.

La espectroscopia de absorcin implica la medida de la fraccin de luz de una longitud de onda dada que pasa a travs de una muestra. La muestra no emite luz por si misma, por lo que se debe incluir una fuente de radiacin. La mayora de las fuentes producen luz con longitudes de onda no deseadas adems de la deseada. (La excepcin de esta caracterstica general est en las fuentes de radiofrecuencia y los lseres.) El paso de la luz a travs de un monocromador o un filtro selecciona la longitud de onda para el anlisis. Para los anlisis se hacen dos medidas de la cantidad de luz absorbida. En la primera se mide la cantidad de luz (a la longitud de onda elegida) que llega al transductor, cuando se coloca un blanco. Se denomina intensidad P0 del blanco, es cuanto la concentracin del material analizado es cero. La medida final se obtiene comparando la medida de las muestras o los patrones de calibracin con la medida del blanco. Se llama P a la intensidad que se mide con las muestras o con el estndar. La comparacin que siempre se hace implica la relacin P/P0, con ambas intensidades medidas en las mismas condiciones del instrumento: longitud de onda, geometra, etc. [23]

5.4.1 Equipo Espectrmetro de absorcin atmica: los instrumentos para espectroscopia de absorcin atmica constan de una fuente de radiacin, un soporte de muestra, un selector de longitud de onda, un detector y un procesador de seal y lectura. Atomizadores: la espectroscopia de absorcin atmica requiere que los tomos del analito estn en fase gaseosa, los iones o tomos de la muestra deben de estar disueltos y vaporizados en una fuente de alta temperatura como una llama u horno de grafito. [24] Hornos de grafito: Los hornos se utilizan principalmente para atomizar slidos, lodos y disoluciones para medidas por absorcin atmica. Un diseo frecuentemente utilizado consiste en un tubo de grafito con un dimetro interno de unos pocos milmetros. Debido a que el tubo del horno se calienta al hacer pasar una corriente elctrica a travs del grafito (que acta como una resistencia) el mtodo tambin se llama atomizacin electrotrmica.
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Cada tipo de muestra requiere un programa de calentamiento diferente. Por ejemplo, si la muestra es una disolucin o un lodo, el primer paso a tomar es calentarla hasta unos 100 C para eliminar todo el disolvente. A veces es interesante calentar el horno a una temperatura intermedia ms elevada (determinada empricamente) para vaporizar algunos de los interferentes de la matriz. A este paso se lo denomina etapa de calcinacin o pirlisis, y para que sea efectivo, el analito ha de estar presente en una forma trmicamente estable, para que no se pierda nada. A continuacin se eleva la temperatura tan rpidamente como sea posible hasta la temperatura de atomizacin y la muestra se vaporiza en el camino ptico de la radiacin. Es fundamental mantener el horno en una atmsfera inerte (como el argn) durante el perodo de calentamiento, para reducir al mnimo las reacciones qumicas no deseadas con las partculas atomizadas del analito. Este tipo de atomizacin electrotrmica se utiliza ocasionalmente para generar plasmas para emisiones atmicas. Los dispositivos calentados elctricamente, como los hornos de grafito y los analizadores de barras de carbn, son atomizadores sin flama usuales que complementan la AAS. Dada su brevedad, cualquier variacin en la rapidez de atomizacin durante el tiempo de medicin de la absorcin de la radiacin en el horno puede llevar a cometer serios errores analticos. Por lo tanto, es mucho ms fcil reproducir resultados usando un atomizador de flama, porque sus largos tiempos de medicin promedian y minimizan implcitamente las variaciones de la seal. El analizador de horno de grafito, tiene un cilindro hueco colocado de manera que la radiacin d la fuente externa (una lmpara de ctodo hueco) pasa por el centro del cilindro. El interior del cilindro est recubierto con grafito pirolizado. Los electrodos que se encuentran en los bordes del cilindro se conectan a una fuente de poder de alta corriente y bajo voltaje, capaz de liberar 3.6 kW en las paredes del cilindro. Las muestras lquidas se introducen con una microjeringa a travs de un orificio pequeo que se encuentra en la parte de arriba independientemente, con una rampa de temperatura y un tiempo de mantenimiento isotrmico disponibles para cada etapa. En el ciclo de secado, la muestra se calienta por 20-30 s a 110-I25C, para evaporar cualquier solvente o componente de la matriz que sea muy voltil. La muestra que queda despus de esta etapa aparece como una mancha (o costra) insignificante en el interior del tubo o de la barra de grafito. El ciclo de calcinacin (o carbonizacin) se hace a una temperatura intermedia, seleccionada para efectuar los procesos necesarios de volatilizacin de los componentes de la matriz con alto punto de ebullicin y de pirlisis de los materiales en ella, tales como grasas y aceites que se fraccionarn y se carbonizarn. A menudo, esta etapa conduce al analito a un estado qumico diferente. El problema obvio en esta etapa es la prdida de analito si la temperatura de calcinacin es demasiado alta o se mantiene por mucho tiempo.
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En la etapa final se aplica la potencia ptima mxima para elevar la temperatura del horno hasta la temperatura de atomizacin seleccionada. Los restos del analito se volatilizan y se disocian en tomos libres, que son los responsables de la absorcin observada. La seal transitoria producida por el breve perodo de absorcin provoca la salida al registrador o a la microcomputadora con sistema de procesamiento de datos. Tanto el rea del pico como su altura se han usado para determinar la concentracin del analito. La temperatura precisa de trabajo y la duracin de cada etapa del proceso electrotrmico deben ser cuidadosamente seleccionadas. La naturaleza del analito y la composicin de la matriz de la muestra son los factores que ms importan en la seleccin de estos parmetros. La evaporacin del solvente en el ciclo de secado debe ser suave y llana para evitar prdidas mecnicas por espumaje o por salpicaduras. El progreso de la etapa de secado puede ser observado por inspeccin de la seal de absorcin sin correccin del fondo. Los vapores que escapan producen una curva suave, sin la apariencia de jorobas o picos, los cuales indican que la rapidez de calentamiento es demasiado grande. El ciclo de calcinacin se sigue del mismo modo; usualmente no se pierde analito hasta que se alcanza una temperatura especfica, entonces la seal del analito aparece en forma de pico agudo. La mayora de los materiales orgnicos se pirolizan a 350C aproximadamente, dejando un residuo de carbn amorfo. A esta temperatura, una corriente de aire o de oxgeno puede introducirse en el horno para convertir este residuo carbonoso en dixido de carbono. Detectores e indicadores: el sistema de deteccin puede estar diseado con fotoceldas, fototubos, fotodiodos o fotomultiplicadores. Esto depende de los rangos de longitud de onda, la sensibilidad y de la velocidad de respuesta requeridas. El sistema de deteccin recibe la energa lumnica proveniente de la muestra y la convierte en una seal elctrica proporcional a la energa recibida. La seal elctrica puede ser procesada y amplificada, para que pueda interpretarse a travs del sistema de lectura que una vez procesada es presentada al analista de diferentes maneras. [25] Lmparas: una vez que han se han individualizado los tomos, estos absorben radiacin segn la Ley de Beer si esta corresponde a la diferencia de energa entre los niveles energticos de algunos de los tomos presentes, ya que los tomos de los diferentes elementos tienen lneas bien definidas que corresponden a transiciones entre diferentes niveles atmicos, estas transiciones tienen anchos espectrales de decimas o hasta centsimas de nanmetro, cada elemento va a corresponder a la excitacin de una radiacin de longitud de onda especifica ya que solo este elemento absorbe o emite tal tipo de radiacin, porque esta corresponde a la diferencia de energa entre dos niveles particulares de ese tomo. [26]
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 Lmpara de catodo hueco: Este tipo de fuente de radiacin es de las ampliamente difundidas en la EAA. Las lmparas de ctodo hueco (LCH o HCL [Hollow Cathode Lamp] consisten de un cilindro de vidrio sellado al vaco y con un gas inerte en su interior. Dentro de este mismo cilindro se encuentran dos filamentos; uno de ellos es el ctodo y el otro el nodo. El nodo generalmente es un alambre grueso hecho de nquel o tungsteno, el ctodo es en forma de un cilindro hueco, en el interior del cual se encuentra depositado en forma de una capa el elemento metlico que se va a excitar. Tambin regularmente y cuando esto es posible el ctodo est enteramente hecho del metal a analizar. [26] Lmpara de descarga sin electrodos: Las fuentes de radiacin de este tipo tienen la misma finalidad que las lmparas de ctodo hueco, solo que la forma de excitacin de los tomos emisores de radiacin es diferente. La lmpara de descarga sin electrodos se construye colocando una pequea cantidad de una sal del elemento metlico (generalmente un yoduro), o el elemento metlico mismo si as es ms conveniente, en un recipiente de cuarzo, el cual previamente se ha sometido al vaco antes de sellarse. Posteriormente, esta ampolleta de cuarzo se coloca dentro de un cilindro de cermica el cual est acoplado a un generador de radiofrecuencia. [26] Lectura: La mayora de los instrumentos estn equipados con un mecanismo de lectura digital. Instrumentos ms modernos estn equipados con microprocesadores y equipos independientes de control, capaces de integrar las seales de absorcin en el tiempo y linealizar la curva de calibracin en concentraciones altas. [29] Ventilacin: Lugar de un orificio de ventilacin de 15 a 30 cm por encima del quemador para eliminar los humos y vapores de la llama. Esta precaucin protege al personal de laboratorio de vapores txicos, protege el instrumento de vapores corrosivos, y evita la estabilidad de la llama se vean afectados por corrientes de aire ambiente. Un amortiguador o un soplador de velocidad variable es conveniente para el flujo de aire de modulacin y la prevencin de trastornos de llama. Seleccionar el tamao del ventilador para proporcionar el flujo de aire recomendado por el fabricante del instrumento.[29]

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6. METODOLOGIA

La metodologa que se sigui para las determinaciones de Cadmio y Plomo en agua potable por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito utilizando el espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000, fueron tomadas del Standard methods for the examination of water and wastewater. 22th edition, section 3113 pag 3-25. La parte experimental consisti en siete ensayos durante siete das diferentes; cuatro das seguidos y tres con fin de semana de por medio, donde se corrieron las muestras patrn (curva de calibracin), los estndares y las muestras naturales (matriz de agua tratada) y finalmente el registro de los resultados para cada grupo de ensayos de acuerdo al protocolo de de estandarizacin de mtodos analticos del IDEAM. [4]

6.1 EQUIPOS, REACTIVOS Y MATERIALES NECESARIOS PARA LA VALIDACIN DE CADMIO Y PLOMO POR ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO

Los equipos, reactivos y materiales necesarios para la validacin de este mtodo se nombran a continuacin

6.1.1 Equipos Espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000. Hornos de grafito pirolitico y convencional Lmpara de ctodo hueco de Cadmio. Lmpara de ctodo hueco de Plomo. Balanza analtica de precisin. Cabina de extraccin de gases.

6.1.2 Reactivos Solucin patrn de Cadmio de Solucin patrn de Plomo de

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cido ntrico al 65% Fosfato de amonio Nitrato de magnesio hexahidratado Agua desionizada Gas Argn

6.1.3 materiales Balones aforados clase A de: 50 mL, 100 mL, 250 mL, 500 mL Bureta clase A de: 50 mL. Pipetas aforadas clase A de: 1 mL, 5 mL, 50 mL Pipetas graduadas clase A de: 10 mL Beakers clase A de: 100 mL, 250 mL, 500 mL Erlenmeyers clase A de: 250 mL Goteros Embudos Varillas de agitacin Vidrio reloj Esptula

6.2 METODO DE ANALISIS

Para la cuantificacin de los metales se prepararon patrones, soluciones estndar y muestras naturales de concentraciones conocidas y posteriormente se midieron por medio de la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito, empleando el espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000, que consiste en una fuente de luz la cual emite el espectro de lneas de un elemento (lmpara de ctodo hueco o lmpara de descarga sin electrodos), un dispositivo para vaporizar la muestra (llama u horno de grafito), un medio de aislar una lnea de absorcin (monocromador o filtro y ranura de ajuste) y un detector fotoelctrico con sus asociados electrnica de amplificacin y equipos de medicin. [27] El mtodo de anlisis que se sigui fue tomado del Standard methods for the examination of water and wastewater. 22th edition, section 3113 pag 3-25. [29]

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6.2.1 Especificaciones bsicas del equipo. En la tabla 1. se muestran las especificaciones bsicas del espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000 con el cual se va a trabajar: Tabla 1. Especificaciones bsicas del equipo Rango de longitud de onda de medida Ancho de banda Detector Mtodo fotomtrico Sistema de medida Correccin fondo Numero conectores lmparas de 185,0 nm a 900,0 nm 0,2; 0,7; 1,3; 2,0 nm Fotomultiplicador Flama: doble haz ptico Horno: alto rendimiento especifico con un solo haz Auto inversin de alta velocidad (BGC-SR) Mtodo de lmpara de deuterio (BGC-D2) (185 a 430 nm) 6 conectores para lmparas, 2 lmparas simultaneas Emisin, NON-BGC, BGCSR, BGC-D2

de de

Modo de lmpara Rango de temperatura de calentamiento Mtodo de control de calentamiento Ambiente - 3000C

Secado: mtodo actual de control (con funcin de calibracin automtica de temperatura) Atomizacin: mtodo ptico de control de temperatura Mximo 20 etapas Modo calentamiento: RAMP/STEP Tipo de gas interno: interruptor de dos lneas Configuracin modo de alta sensibilidad Funcin programa de bsqueda optima del horno Tasa de flujo de gas interno

Configuracin parmetros calentamiento

de de

Caractersticas seguridad

de

Monitor de tasa de flujo de agua refrigerante Monitor de gas presurizado Inspeccin de enfriamiento del bloque del horno
47

6.2.2 Procedimiento de validacin. Para cada uno de los ensayos realizados con los metales Cadmio y Plomo se prepar un blanco y una serie de patrones, estndares, muestras naturales de diferentes concentraciones a las cuales se les adicion acido ntrico al 65% para su conservacin, stas se leyeron en el espectrofotmetro de absorcin atmica Shimadzu AA 7000 por medio de la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito. Las muestras se prepararon de acuerdo al procedimiento adoptado por el laboratorio [27]: BK = 1 mL acido ntrico (65 %) en agua desionizada, hasta 100 mL EB= estndares de concentracin baja, que nos permitan calcular el LDM EM= estndares de concentracin media; aproximadamente el 50% del rango EA= estndares de concentracin alta; aproximadamente el 90% del rango M1= Muestra natural para ver efectos de la matriz real, concentracin <50% del rango M2= Muestra natural para ver efectos de matriz real, concentracin >> M1 del rango M1.A.b= M1 adicionada con un nivel bajo, mximo el 30% del valor de M1 M1A.a = M1 adicionada con un nivel alto, mnimo el 50% del valor de M1

6.3 PARAMETROS ESTADISTICOS A ANALIZAR

Una vez obtenidos los datos se analizaron por medio de la Dcima de Grubbs para la aceptacin o el rechazo de los mismos [30].

48

Donde:

Los criterios de aceptacin o rechazo son los siguientes: Si el valor estadstico G es menor o igual al valor crtico correspondiente a un de un 5% se acepta como correcto. Si el valor estadstico es mayor al de su valor crtico para una de un 5% y menor o igual al de su valor crtico para un de un 1%, se considera dudoso y se trata de localizar la causa, si se determina se rechaza y en caso contrario se acepta. Si el valor del estadstico es mayor al de su valor critico para un de un 1% se considera estadsticamente incompatible y se rechaza. Los valores crticos para la Dcima de Grubbs se encuentran en la tabla 2. Tabla 2. Fragmento tabla de valores crticos N 95 % 3 1,15 4 1,46 5 1,67 6 1,82 7 1,94 8 2,03 9 2,11 N 95 % 10 2,18 11 2,24 12 2,29 13 2,33 14 2,37 15 2,41 16 2,44

Con los datos no rechazados se procedi a calcular los siguientes parmetros: 6.3.1 Desviacin estndar. Cantidad promedio en que cada uno de los puntajes individuales viaria respecto a la medida del conjunto de puntajes. [31]

49

Siendo:

6.3.2 Limite de deteccin. Mnima concentracin del analito que puede ser detectada con confianza, pero no cuantificada. Se expresa como concentracin del analito. [28]

Siendo: =

6.3.3 Limite de cuantificacin. Es la mnima cantidad de analito que puede ser cuantificada con una exactitud aceptable. Se expresa como concentracin del analito. [28]

Siendo:

50

6.3.4 Exactitud. Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de referencia aceptado (material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un cierto nmero de veces.

Donde:

6.3.5 Repetibilidad. Estudia la variabilidad del mtodo efectuando una serie de anlisis sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas (por un mismo analista, con los mismos aparatos y reactivos, entre otros), en un mismo laboratorio y en un periodo de tiempo corto. [1]

Donde:

6.3.6 Porcentaje de recuperacin. Medicin que se obtiene al evaluar la concentracin en un analito, una vez se ha evaluado las caractersticas iniciales de la matriz a examinar sumado a la cantidad de analito.

Siendo:
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6.4 CRITERIOS DE ACEPTACIN En la tabla 3. Se presentan los criterios de aceptacin definidos por el laboratorio para sus mtodos de analisis, donde se evala la exactitud, la repetibilidad y el porcentaje de recuperacin. Tabla 3. Criterios de aceptacin Estadstico Valor Unidades 10% Exactitud %E 10% Precisin % CV Recuperacin 15% %R

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7. RESULTADOS DEL MTODO DE ENSAYO PARA CADMIO

Para la validacin de la metodologa analtica en la determinacin de Cadmio en agua potable, se prepararon una serie de patrones, estndares y muestras de concentraciones conocidas, la metodologa consisti en siete ensayos siente das diferentes. Adems se determinaron los parmetros instrumentales ptimos de operacin del quipo y una vez obtenidos los resultados se realiz un anlisis estadstico con el fin de determinar si stos cumplan con los criterios de calidad establecidos por el Laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira.

7.1 PREPARACIN DE SOLUCIONES

7.1.1 Solucin de Cadmio 50

: sta solucin se prepar tomando 5 mL del

patrn de 1000 de Cadmio con una pipeta volumtrica de 5 mL, ste se llev a un matraz aforado de 100 mL, donde se le agreg 1 mL de cido ntrico al 65% y se afor con agua desionizada. 7.1.2 Solucin de Cadmio 1000 : Para preparar sta solucin se transfirieron

5 mL del patrn de 50 de Cadmio a un matraz de 250 mL, al cual se le haban agregado previamente 2.5 mL de cido ntrico al 65% y finalmente se afor con agua desionizada. 7.1.3 Solucin de Cadmio 10 : La solucin de 10 se prepar tomando 5 mL

del patrn de 1000 y llevndolos a un matraz aforado de 500 mL, seguidamente se agregaron 5 mL de cido ntrico al 65% y se llev a 500 mL con agua desionizada. 7.1.4 Modificador de matriz: La preparacin del modificador consisti en pesar 2,42 g de NH4H2PO4 (Fosfato de amonio) y 0.1729 g de Mg(NO3)2*6H2O (Nitrato de magnesio hexahidratado), los cuales se transfirieron a un matraz de 100 mL y se aforo con agua desionizada. Para la medicin se tomo 1 mL de la solucin y se llevo a 50mL con agua desionizada.

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7.2 PREPARACION DE PATRONES PARA LA CURVA DE CALIBRACION

7.2.1 Patrones de concentraciones conocidas. Se prepararon una serie de patrones de concentraciones conocidas a partir de la solucin de 10 de Cadmio y un blanco con el fin de realizar un anlisis de linealidad y la curva de calibracin. El rango de concentraciones fue determinado teniendo en cuenta que el valor mximo permitido por la norma para agua potable que es de 3 g/L. Los patrones fueron preparados en balones aforados de 100 mL, donde cada uno contena 1 mL de acido ntrico al 65%: Blanco: Para preparar el blanco se tomo un matraz de 100 mL y se le adicion 1 mL de acido ntrico y se aforo con agua desionizada. Patrn de 2 de 10 : Se transfirieron a un matraz de 100 mL, 20 mL del patrn

de Cadmio y se afor con agua desionizada. de Cadmio

Patrn de 3 : Se adicionaron 30 mL de la solucin de 10 a un matraz de 100 mL y de aforpo con agua desionizada

Patrn de 4 : Se tomaron 40 mL de la solucin de 10 de Cadmio y se llevaron al matraz de 100 mL donde se afor con agua desionizada. Patrn de 5 solucin de 10 : A un matraz de 100 mL se adicionaron 50 mL de la de Cadmio y se afor con agua desionizada. de Cadmio a

Patrn de 6 : Se adicionaron 60 mL de la solucin 10 un matraz de 100 mL y se afor con agua desionizada.

Nota: Los volmenes tomados para la preparacin de los patrones fueron medidos con bureta de 50 mL y los volmenes del acido ntrico fueron medidos con una pipeta graduada de 1mL.

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7.3 MUESTRAS DE ANALISIS

7.3.1 Preparacin de soluciones estndar. Se prepararon una serie de muestras estndar de concentraciones conocidas a partir de la solucin patrn de 10 de Cadmio con el fin de corroborar el mtodo, teniendo en cuenta que con el estndar ms bajo se determin el lmite de deteccin y los estndares medio y alto correspondan al 50% y 90% de la curva de calibracin respectivamente en la determinacin de Cadmio por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito. El procedimiento seguido para la preparacin de las soluciones se muestra a continuacin, donde se emplearon balones aforados de 100 mL, los cuales contenan 1 mL de acido ntrico al 65%: Solucin estndar (bajo) 1 : Se tomaron 10 mL de el patrn de 10 de Cadmio y se transfirieron a un matraz aforado de 100 mL, finalmente se aforo con agua desionizada. Solucin estndar (medio) 3,5 : Se llevaron 35 mL de la solucin de

10 de Cadmio, a un matraz de 100 mL donde se aforo con agua desinizada. Solucin estndar (alto) 5,5 : A un matraz de 100 mL se le

transfirieron 55 mL del patrn de 10 agua desionizada.

de Cadmio y se llev al aforo con

7.3.2 Preparacin de muestras naturales. Se prepararon una serie de muestras naturales de diferentes concentraciones, donde la matriz fue agua tratada ya que no se dispona de muestras naturales con un contenido de Cadmio; con el fin de ver los efectos de la matriz real en el mtodo. Consisti en 4 soluciones diferentes, preparadas segn la metodologa para la determinacin de Cadmio empleando el patrn de 10 ; por absorcin atmica con horno de grafito. M1= <50% del rango M2 >> M1 del rango M1.A.b= M1 adicionada, mximo el 30% del valor de M1 M1A.a = M1 adicionada, mnimo el 50% del valor de M1

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Las muestras fueron preparadas en balones aforados de 100 mL, lo cuales contenan 1 mL de acido ntrico al 65% M1: Se tomaron 28 mL de la solucin patrn de 10 de Cadmio y se transfirieron a un baln aforado de 100 mL y se afor con agua de la llave (agua tratada). M2: Se transfirieron 55 mL del patrn de 10 de Cadmio a un matraz de 100 mL, donde se afor con agua de la llave (agua tratada). M1 Ab: A un matraz de 100 mL se le adicion 5 mL del patrn de 10 Cadmio y 10 mL de M1 y finalmente se afor con agua desionizada. de

M1 Aa: Se llevaron 16 mL de la solucin de 10 de Cadmio y 15 mL de M1 a un matraz de 100 mL y se afor con agua desionizada.

7.4 DETERMINACION DE PARAMETROS INSTRUMENTALES

7.4.1 Parmetros pticos. Se utilizaron los parmetros por defecto del instrumento, con correccin de fondo de fuente continua (lmpara de deuterio). En la tabla 4 se muestran las condiciones del sistema ptico: Tabla 4. Parmetros pticos para Cadmio Parmetros Longitud de onda 228,8 nm Ancho de banda 0,7 nm Lmpara Deuterio Pico de corriente 8 mA 7.4.2 Programa del horno. Inicialmente se deba determinar el programa de temperatura del horno que consiste bsicamente en tres etapas: Etapa de secado: consiste en la volatilizacin del disolvente. Mineralizacin: obtencin de sales y compuestos de la matriz, calcinacin de materia orgnica. Atomizacin: formacin de la nube de tomos en estado fundamental y gaseoso.
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Inicialmente se utilizaron las condiciones de temperatura que vienen por defecto en el instrumento para el mtodo, al realizar las mediciones se observ que se presentaban problemas de repetibilidad en la absorbancia para una misma solucin. Se decidi disminuir la temperatura y aumentar el tiempo para la etapa de secado, utilizando las temperaturas de mineralizacin sugeridas en las fuentes bibliogrficas y se procedi a determinar la temperatura ptima de atomizacin. Los ensayos para determinar la temperatura ptima de atomizacin se muestran en la tabla 5. Estos ensayos se realizaron teniendo en cuenta los siguientes parmetros: Volumen de muestra: 25 L Concentracin del patrn: 5 g/L Mezclador: 500 L de muestra y 100 L modificador Tabla 5. Determinacin de temperatura ptima para Cadmio Temperatura Absorbancia (C) 1200 0,929 1300 1,014 1400 0,904 1500 0,823 1600 0,788 1700 0,750 1800 0,695 1900 0,667

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Con los datos de la tabla 5 se construy la grafica 1:

0,9 Absorbancia

0,8

0,7

0,6 1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

2000

Temperatura (C)

Grafica 1. Determinacin de temperatura ptima para Cadmio

De acuerdo a los resultados obtenidos se defini como temperatura de atomizacin 1500 C. El programa de temperaturas completo se muestra en la tabla 6. Tabla 6. Programa de temperaturas para Cadmio Etapa Temperatura (C) Tiempo (s) Modo Flujo gas ( )

1 95 2 rampa 0,25 2 95 20 constante 0,25 3 130 5 constante 0,25 4 130 30 constante 0,25 5 750 10 rampa 0,25 6 750 25 constante 0,25 7 1500 5 constante 0 8 2500 5 rampa 0,25 9 2500 5 constante 0,25 El gas inerte empleado fue argn. En la etapa 7 se suspende el flujo de argn y se realiza la lectura (sensitivity).
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7.4.3 Automuestreador. Se definieron los parmetros del automuestreador, utilizando el sistema de mezcla, como se muestra en la tabla 7. Tabla 7. Parmetros de automuestreador para Cadmio Mezclador Parmetros de inyeccin Velocidad de succin 15 L/s volumen 17 L Velocidad de descarga 150 L/s velocidad 15 L/s

7.4.4 Condiciones de repeticin de mediciones. Es posible programar en el instrumento el nmero de repeticiones mnimo y mximo, de acuerdo al cumplimiento de las condiciones de repetibilidad establecidas (desviacin estndar lmite). Dichas condiciones se resumen en la tabla 8. Tabla 8. Condiciones de repetibilidad para Cadmio Nmero de repeticiones Blanco 2 Estndar 2 Muestra 2 Nmero mximo de repeticiones 3 3 3 RDS limite SD limite 7 7 7 0 0 0

7.4.5 Parmetro de medicin. El equipo puede procesar seales de absorbancia en dos modos: rea de pico o altura del pico. Aunque las mediciones por altura de pico arrojaron una mejor sensibilidad (aproximadamente el doble que por rea), se opt por el modo de rea de pico ya que se obtuvieron mejores resultados de repetibilidad.

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7.5 RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE CADMIO Los resultados de los siete ensayos se presentan en las tablas 9 hasta la 22, y las curvas de calibracin respectivas en la graficas 2 hasta la 8. 7.5.1 Resultados ensayo 1 Tabla 9. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 1 para Cadmio Ensayo 1 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0147 0,0160 0,2998 0,3037 0,4423 0,4435 0,5724 0,5666 0,6847 0,6840 0,7777 0,7690

Concentracin patrn ( ) Blanco 2 3 4 5 6

Absorbancia promedio 0,0122 0,3017 0,4429 0,5695 0,6843 0,7733

Con los resultados presentados en la tabla 9 se construy la curva de calibracin para el ensayo 1. La cual se presenta en la grafica 2.

0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1185x + 0,0805 R = 0,9931

Grafica 2. Curva de calibracin para el ensayo 1 para Cadmio

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Una vez realizada la curva de calibracin se procedi a medir las muestras de anlisis. Los resultados se presentan en la tabla 10. Tabla 10. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 1 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 1,0856 1,0076 EMedia 3,5 3,5276 3,5522 EAlta 5,5 5,5445 5,5242 M1 2,3707 2,6514 M2 4,7786 4,8109 M1 Ab 0,5666 0,5513 M1 Aa 2,2994 2,2553

Para cada uno de los ensayos se procedi de la misma manera, obtenindose los resultados de cada ensayo, con su curva de calibracin respectiva y las medidas de las muestras de anlisis.

61

7.5.2 Resultados ensayo 2 Tabla 11. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 2 para Cadmio Ensayo 2 Concentracin patrn Absorbancia Absorbancia Absorbancia ( ) 1 2 promedio Blanco 0,0079 0,0085 0,0082 2 0,2570 0,2731 0,2650 3 0,3693 0,3796 0,3744 4 0,4845 0,5037 0,4941 5 0,5988 0,5957 0,5972 6 0,7430 0,7230 0,7330

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1159x + 0,0292 R = 0,9983

Grafica 3. Curva de calibracin para el ensayo 2 para Cadmio Tabla 12. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 2 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 1,3029 1,2451 EMedia 3,5 3,6614 3,8245 EAlta 5,5 5,1275 5,3778 M1 2,4886 2,4256 M2 4,6598 4,5123 M1 Ab 0,7049 0,7799 M1 Aa 2,2504 2,2012
62

7.5.3 Resultados ensayo 3 Tabla 13. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 3 para Cadmio Ensayo 3 Concentracin patrn Absorbancia Absorbancia Absorbancia ( ) 1 2 promedio Blanco 0,0151 0,0166 0,0158 2 0,2339 0,2493 0,2416 3 0,3479 0,3549 0,3514 4 0,4656 0,4938 0,4797 5 0,5668 0,5706 0,5687 6 0,6790 0,6941 0,6866

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1107x + 0,0227 R = 0,9978

Grafica 4. Curva de calibracin para el ensayo 3 para Cadmio Tabla 14. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 3 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 1,2130 1,2799 EMedia 3,5 3,4012 3,6957 EAlta 5,5 5,2589 5,3239 M1 2,3609 2,5117 M2 4,8119 4,8607 M1 Ab 0,7904 0,7814 M1 Aa 2,4683 2,4873
63

7.5.4 Resultados ensayo 4 Tabla 15. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 4 para Cadmio Concentracin patrn ( ) Blanco 2 3 4 5 6 Ensayo 4 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0060 0,0068 0,2868 0,2745 0,3805 0,3689 0,4984 0,4978 0,5726 0,5867 0,7025 0,6980

Absorbancia promedio 0,0064 0,2806 0,3747 0,4981 0,5796 0,7002

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1044x + 0,069 R = 0,9968

Grafica 5. Curva de calibracin para el ensayo 4 para Cadmio Tabla 16. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 4 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 0,9137 1,0746 EMedia 3,5 3,5418 3,5677 EAlta 5,5 4,9660 4,9009 M1 2,3561 2,5141 M2 4,6174 4,8721 M1 Ab 0,5507 0,6522 M1 Aa 2,2057 2,1128
64

7.5.5 Resultados ensayo 5 Tabla 17. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 5 para Cadmio Ensayo 5 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0133 0,0122 0,2480 0,2526 0,3514 0,3767 0,4854 0,4903 0,5802 0,5827 0,6787 0,6905

Concentracin patrn ( ) Blanco 2 3 4 5 6

Absorbancia promedio 0,0128 0,2503 0,3640 0,4878 0,5814 0,6846

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1086x + 0,0392 R = 0,9976

Grafica 6. Curva de calibracin para el ensayo 5 para Cadmio Tabla 18. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 5 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 1,1048 1,1527 EMedia 3,5 3,8691 3,661 EAlta 5,5 5,5514 5,1186 M1 2,5901 2,718 M2 4,6665 4,8792 M1 Ab 0,7411 0,6987 M1 Aa 2,3 2,2908
65

7.5.6 Resultados ensayo 6 Tabla 19. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 6 para Cadmio Ensayo 6 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0057 0,0077 0,2713 0,2832 0,3514 0,3680 0,4786 0,5098 0,6128 0,5998 0,6861 0,6937

Concentracin patrn ( ) Blanco 2 3 4 5 6

Absorbancia promedio 0,0067 0,2772 0,3597 0,4942 0,6063 0,6899

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1072x + 0,0567 R = 0,9936

Grafica 7. Curva de calibracin para el ensayo 6 para Cadmio Tabla 20. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 6 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 0,9099 0,9854 EMedia 3,5 3,394 3,3978 EAlta 5,5 5,0647 5,2047 M1 2,533 2,4854 M2 4,409 4,2933 M1 Ab 0,6869 0,6142 M1 Aa 2,2047 2,1188
66

8.5.7 Resultados ensayo 7 Tabla 21. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 7 para Cadmio Concentracin patrn ( ) Blanco 2 3 4 5 6 Ensayo 7 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0138 0,0060 0,2681 0,2833 0,3740 0,3974 0,4702 0,5179 0,5976 0,6283 0,6946 0,7376

Absorbancia promedio 0,0099 0,2757 0,3857 0,4940 0,6130 0,7161

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 2 4 Concentracin (/L) 6

Absorbancia

y = 0,1108x + 0,0537 R = 0,9997

Grafica 8. Curva de calibracin para el ensayo 7 para Cadmio Tabla 22. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 7 para Cadmio Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 1 0,9561 1,031 EMedia 3,5 3,3963 3,5407 EAlta 5,5 4,9783 5,0369 M1 2,4325 2,5904 M2 4,5216 4,3655 M1 Ab 0,6276 0,7268 M1 Aa 2,1274 2,2312
67

Los resultados consolidados se muestran en la tabla 23.

Tabla 23. Datos consolidados de los ensayos para Cadmio Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 Bk (Abs) 0,0147 0,0160 0,0079 0,0085 0,0151 0,0166 0,0060 0,0068 0,0133 0,0122 0,0057 0,0077 0,0138 0,0060 EB ( ) 1,0865 1,0076 1,3029 1,2451 1,2130 1,2799 0,9137 1,0746 1,1048 1,1527 0,9099 0,9854 0,9561 1,0310 EM ( ) 3,5276 3,5522 3,6614 3,8245 3,4012 3,6957 3,5418 3,5677 3,8691 3,6610 3,3940 3,3978 3,3963 3,5407 EA ( ) 5,5445 5,5242 5,1275 5,3778 5,2589 5,3239 4,9660 4,9009 5,5514 5,1186 5,0647 5,2047 4,9783 5,0369 M1 ( ) 2,3707 2,6514 2,4886 2,4256 2,3609 2,5117 2,3561 2,5141 2,5901 2,7180 2,5330 2,4854 2,4325 2,5904 M2 ( ) 4,7786 4,8109 4,6598 4,5123 4,8119 4,8607 4,6174 4,8721 4,6665 4,8792 4,4090 4,2933 4,5216 4,3655 M1 Ab ( ) 0,5666 0,5513 0,7049 0,7799 0,7904 0,7814 0,5507 0,6522 0,7411 0,6987 0,6869 0,6142 0,6276 0,7268 M1 Aa ( ) 2,2994 2,2553 2,2504 2,2012 2,4683 2,4873 2,2057 2,1128 2,3000 2,2908 2,2047 2,1188 2,1274 2,2312

Para la determinacin del rango de linealidad, en primer lugar se determin la temperatura ptima para la medicin, esto se realiz midiendo un patrn de concentracin conocida a diferentes temperaturas y analizando las abosrbancias obtenidas, posterior a este anlisis se determin un rango en el cual la absorbancia no sobrepasara un valor de 0,8 A, despus de este valor segn la ley de beer, la relacin entre absorbancia y concentracion no es lineal; ademas se tuvo en cuenta que el valor mximo permitido por la norma para la determinacin de Cadmio en agua potable se pudiera determinar confiablemente en el anlisis.

7.6 PARMETROS ESTADSTICOS

7.6.1 Prueba para rechazo de datos. Se empleo la prueba de Dcima de grubbs (ver seccin 7.3). Para el estndar EB, como se muestra a continuacin:
68

Segn los valores crticos de la Dcima de Grubbs (ver tabla 2), donde los datos estadsticos son menores a su valor critico (2,37) para un N= 14, no se rechaza el valor mnimo Gi, ni el valor mximo Gn del estndar EB. Los resultados de la prueba se presentan en la tabla 24. Tabla 24. Prueba de rechazo de datos Dcima de Grubbs para Cadmio Parmetros Media Mnimo Mximo Desviacin estndar Gi Gn Mximo rechazado? Mnimo rechazado? EB ( ) 1,0902 0,9099 1,3029 0,1323 1,3628 1,6071 No No EM ( ) 3,5736 3,3940 3,8691 0,1543 1,1641 1,9147 No No EA ( ) 5,2127 4,9009 5,5514 0,2228 1,3993 1,5196 No No M1 ( ) 2,5020 2,3561 2,718 0,1093 1,3350 1,9757 No No M2 ( ) 4,6470 4,2933 4,8792 0,1995 1,7723 1,1630 No No M1 Ab ( ) 0,6766 0,5507 0,7904 0,0846 1,4870 1,3436 No No M1 Aa ( ) 2,2538 2,1128 2,4873 0,1137 1,2396 2,0526 No No

69

Al realizar la prueba de la Dcima de Grubbs se pudo establecer que los resultados de los ensayos son homogneos entre si, por esta razn no se rechaza ningn dato, por lo tanto todos sern incluidos para calcular los parmetros estadsticos. 7.6.2 Limite de deteccin y limite de cuantificacin. Los lmites de deteccin y cuantificacin se determinaron a partir de la desviacin estndar de la concentracin del blanco, sta se calcul a partir de la ecuacin de la curva de calibracin de cada uno de los ensayos. La concentracin del blanco para el ensayo 1 se clculo de la siguiente manera:

Para el blanco del ensayo 1 el valor de la absorbancia es 0,0147, la concentracin ser:

Los valores de concentracin para el resto de ensayos se muestran en la tabla 25. Tabla 25. Concentraciones de blanco para cada ensayo BK Ensayo (Abs) Pendiente Intercepto 1 2 3 4 5 6 0,0147 0,016 0,0079 0,0085 0,0151 0,0166 0,006 0,0068 0,0133 0,0122 0,0057 0,0077 0,1158 0,1158 0,1159 0,1159 0,1107 0,1107 0,1044 0,1044 0,1086 0,1086 0,1072 0,1072
70

Ecuacin recta

BK ( ) -0,5682 -0,5570 -0,1838 -0,1786 -0,0687 -0,0551 -0,6034 -0,5958 -0,2385 -0,2486 -0,4757 -0,4571

0,0805 0,0805 0,0292 0,0292 0,0227 0,0227 0,0690 0,0690 0,0392 0,0392 0,0567 0,0567

0,0138 0,1108 0,0537 -0,3601 0,006 0,1108 0,0537 -0,4305 A partir de las concentraciones de los blancos se calcula su desviacin estndar, obtenindose un valor de 0,1948 g/L 7 El lmite de deteccin es tres veces sa desviacin estndar:

El lmite de cuantificacin es diez veces sa desviacin estndar:

Los resultados obtenidos, la cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser detectada en la medicin es de 0,5847g/L y la cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con una exactitud aceptable es de 1,9848 g/L, por lo tanto la metodologa empleada para la determinacin de Cadmio en agua potable por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito es adecuada, ya que la concentracin mxima de Cadmio en agua potable permitida por la norma es de 3 g/L.

7.6.3 Exactitud. A partir de las concentraciones de los estndares se calcula la exactitud del mtodo, para el estndar EB se calcul de la siguiente manera:

71

Los resultados para el resto de ensayos se encuentran en la tabla 26: Tabla 26. Exactitud para Cadmio EB (1 ) 1,0865 1,0076 1,3029 1,2451 1,213 1,2799 0,9137 1,0746 1,1048 1,1527 0,9099 0,9854 0,9561 1,031 1,0902 EM (3,5 ) 3,5276 3,5522 3,6614 3,8245 3,4012 3,6957 3,5418 3,5677 3,8691 3,661 3,394 3,3978 3,3963 3,5407 3,5736 EA (5,5 ) 5,5445 5,5242 5,1275 5,3778 5,2589 5,3239 4,966 4,9009 5,5514 5,1186 5,0647 5,2047 4,9783 5,0369 5,2127 %E EB (1 ) 8,6514 0,7634 30,2900 24,5100 21,3000 27,9900 -8,6300 7,4600 10,4800 15,2700 -9,0100 -1,4600 -4,3900 3,1000 9,0231 %E EM (3,5 ) 0,7876 1,4904 4,6114 9,2714 -2,8229 5,5914 1,1943 1,9343 10,5457 4,6000 -3,0286 -2,9200 -2,9629 1,1629 2,1039 %E EA (5,5 ) 0,8096 0,4395 -6,7727 -2,2218 -4,3836 -3,2018 -9,7091 -10,8927 0,9345 -6,9345 -7,9145 -5,3691 -9,4855 -8,4200 -5,2229

Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 Promedio

La exactitud se expres como porcentaje de error relativo y se determin analizando tres estndares de concentracin conocida (Eb, Em y Ea), la exactitud calculada para estos tres estndares est dentro del criterio de aceptacin establecido por el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la universidad tecnolgica de Pereira, el cual establece que el valor de sta debe ser 10 % E, se observa que a concentraciones ms bajas, la exactitud de la tcnica tiende a disminuir.

7.6.4 Repetibilidad. Se obtuvieron las desviaciones estndar y el promedio de las series de datos de cada ensayo, obteniendo el %CV, para el estndar EB es: La desviacin estndar del EB es: 0,1323 g/L Y el promedio: 1,0902 g/L
72

El %CV para los dems estndares, se encuentra en la tabla 27. Tabla 27. Porcentaje de variacin para Cadmio EB (1 ) EM EA M1 M2 M1 Ab M1 Aa (3,5 ) (5,5 ) (2,8 ) (5,5 ) (0,78 ) (2,02 ) 2,5020 0,1093 4,3687 4,6471 0,1996 4,2951 0,6766 0,0847 12,5153 2,2538 0,1138 5,0471

Promedio 1,0902 3,5736 5,2127 Desviacin 0,1323 0,1543 0,2229 estandar %CV 12,1372 4,3180 4,2751

En la tabla 27 se resumen los resultados de precisin obtenidos en la validacin, expresados como coeficiente de variacin, se incluyen todos los estndares y todas las muestras adicionadas, en estos resultados se puede evidenciar el comportamiento sealado anteriormente en la seccin de exactitud, se presenta una relacin inversamente proporcional entre concentracin y coeficiente de variacin, es decir, a menores concentraciones se obtiene un mayor coeficiente de variacin, esto se deduce segn los resultados de repetiblidad, en los estndares es buena para concentraciones medias y altas, ya que para concentraciones bajas el porcentaje de variacin es de 12,1372 %, el cual no cumple con los criterios de aceptacin, donde el valor mximo es del 10%, mientras que en las concentraciones media y alta sus valores son menores al establecido. Uno de los factores que puede influir en la repetibilidad es la concentracin del analito, debido a que la desviacin estndar de las respuestas obtenidas aumenta al disminuir la concentracin del analito. Este comportamiento era de esperarse ya que si se observa el lmite de cuantificacin, ste es mucho mayor que el EB, por tanto el mtodo no arroja resultados confiables a concentraciones menores a 1,9848 g/L.

7.6.5 Porcentaje de recuperacin. El porcentaje de recuperacin se obtuvo a partir de las concentraciones de M1 y sus adicionadas (), para el ensayo 1 los porcentajes de recuperacin para m1Ab y M1Aa, se calcularon de la siguiente manera:

73

Los valores para M1Ab son:

Los valores para M1Aa son:

74

Los porcentajes de recuperacin para el resto de ensayos se muestran en la tabla 28. Tabla 28. Porcentajes de recuperacin para Cadmio
M1 Aa Concentracin no adicionada baja Concentracin adicionada baja M1 Aa Leda Concentracin no adicionada alta Concentracin adicionada baja %R M1Ab %R M1Aa

M1

M1 Ab M1 Ab Leda

Ensayo

M1 Leda

( ) 2,3707 2,6514 2,4886 2 2,4256 2,3609 3 2,5117 2,3561 4 2,5141 2,5901 5 2,7180 2,5330 6 2,4854 2,4325 7 2,5904 Promedio 2,5020 1

( ) 0,5666 0,5513 0,7049 0,7799 0,7904 0,7814 0,5507 0,6522 0,7411 0,6987 0,6869 0,6142 0,6276 0,7268 0,6766

( ) 0,2371 0,2651 0,2489 0,2426 0,2361 0,2512 0,2356 0,2514 0,2590 0,2718 0,2533 0,2485 0,2433 0,2590

( 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

( ) 2,2994 2,2553 2,2504 2,2012 2,4683 2,4873 2,2057 2,1128 2,3000 2,2908 2,2047 2,1188 2,1274 2,2312 2,2538

( ) 0,3556 0,3977 0,3733 0,3638 0,3541 0,3768 0,3534 0,3771 0,3885 0,4077 0,3800 0,3728 0,3649 0,3886

( 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

) 65,9033 57,2349 91,2080 107,4680 110,8620 106,0460 63,0180 80,1580 96,4180 85,3800 86,7200 73,1320 76,8700 93,5520 85,2836 121,4880 116,0994 117,3194 114,8350 132,1353 131,9091 115,7678 108,4803 119,4678 117,6938 114,0469 109,1244 110,1578 115,1650 117,4064

75

Segn los resultados para determinacin de cadmio, la tcnica presenta una recuperacin adecuada, ya que la muestra adicionada baja present una recuperacin de 85 % y la muestra adicionada alta present una recuperacin de 117%, los limites de aceptacin del Laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira para la recuperacin de analito se encuentran entre el 75 - 125 %.

76

8. RESULTADOS DEL MTODO DE ENSAYO PARA PLOMO

Para la validacin de la metodologa analtica en la determinacin de Plomo en agua potable, se prepararon una serie de patrones, estndares y muestras de concentraciones conocidas, la metodologa consisti en siete ensayos siente das diferentes. Adems se determinaron los parmetros instrumentales ptimos de operacin del quipo y una vez obtenidos los resultados se realiz un anlisis estadstico con el fin de determinar si stos cumplan con los criterios de calidad establecidos por el Laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira.

8.1 PREPARACION DE SOLUCIONES

8.1.1 Solucin de Plomo 50

: La solucin se prepar a partir del patrn de

1000 de Plomo, tomando 5 mL de ste y transfirindolos a un matraz de 100 mL el cual contena 1 mL de cido ntrico al 65%, finalmente se aforo con agua desionizada. 8.1.2 Solucin de Plomo 5 : Para preparar esta solucin se empleo un matraz

aforado de 50 mL al cual se le adicionaron 5 mL del patrn de 50 y 0.5 mL de cido ntrico al 65% y se llevo hasta 50 mL con agua desionizada. 8.1.3 Solucin de Plomo 200 : sta solucin de prepar tomando 20 mL del

patrn de 5 de Plomo y se llevaron a un matraz de 500 mL el cual contena 5 mL de acido ntrico al 65% y se aforo con agua desionizada. 8.1.4 Modificador de matriz: El modificador de matriz que se empleo en las mediciones para Plomo, fue el mismo que se utilizo en la determinacin de Cadmio.

77

8.2 PREPARACIN DE PATRONES PARA LA CURVA DE CALIBRACIN

8.2.1 Patrones de concentraciones conocidas. Se prepararon una serie de patrones de concentraciones conocidas a partir de la solucin de 200 de Plomo y un blanco con el fin de realizar un anlisis de linealidad y la curva de calibracin. El rango de concentraciones se determin de acuerdo al valor mximo de Plomo permitido por la norma, que es de 10 g/L. El procedimiento seguido para la preparacin de las soluciones se muestra a continuacin, teniendo en cuenta que para dichas soluciones se emplearon balones aforados de 100 mL, los cuales contenan 1 mL de acido ntrico al 65%: Blanco: Para preparar el blanco se tomo un matraz de 100 mL y se le adicion 1 mL de acido ntrico y se aforo con agua desionizada. Patrn de 20 de 200 : Se transfirieron a un matraz de 100 mL, 10 mL del patrn

de Plomo y se afor con agua desionizada.

Patrn de 40 : Se tomaron 20 mL de la solucin de 200 de Plomo y se llevaron al matraz de 100 mL donde se afor con agua desionizada. Patrn de 60 : Se adicionaron 30 mL de la solucin 200 matraz de 100 mL y se afor con agua desionizada. Patrn de 80 solucin de 200 de Plomo a un

: A un matraz de 100 mL se adicionaron 40 mL de la de Plomo y se afor con agua desionizada.

Nota: Los volmenes tomados para la preparacin de los patrones fueron medidos en bureta de 50 mL y los volmenes del acido ntrico fueron medidos con una pipeta graduada de 1mL.

78

8.3 MUESTRAS DE ANALISIS

8.3.1 Preparacin de soluciones estndar. Se prepararon una serie de muestras estndar de concentraciones conocidas a partir de la solucin patrn de 200 de Plomo con el fin de corroborar el mtodo. El estndar bajo se utiliz para determinar el lmite de deteccin y los estndares medio y alto correspondan al 50% y 90% de la curva de calibracin respectivamente en la determinacin de Plomo por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito. Las soluciones se prepararon de la siguiente manera, donde se emplearon balones aforados de 100 mL, los cuales contenan 1 mL de acido ntrico al 65%: Solucin estndar (bajo) 15 : A un matraz de 100 mL se le

transfirieron 7,5 mL del patrn de 200 con agua desionizada. Solucin estndar (medio) 40

de Plomo y se llev al aforo

: Se llevaron 20 mL de la solucin de

200 de Plomo, a un matraz de 100 mL donde se aforo con agua desionizada. Solucin estndar (alto) 72 : Se tomaron 36 mL de el patrn de 200

de Plomo y se transfirieron a un matraz aforado de 100 mL, finalmente se aforo con agua desionizada. Nota: Los volmenes tomados para la preparacin de los patrones fueron medidos en bureta de 50 mL y los volmenes del acido ntrico fueron medidos con una pipeta graduada de 1mL.

8.3.2 Preparacin de muestras naturales. Se prepararon una serie de muestras naturales de diferentes concentraciones, donde la matriz fue agua tratada ya que no se dispona de muestras naturales con un contenido de Plomo; con el fin de ver los efectos de la matriz real en el mtodo. Consisti en 4 soluciones diferentes, preparadas segn la metodologa para la determinacin de Cadmio empleando el patrn de 200 ; por absorcin atmica con horno de grafito, la cual fue tomada del Standard methods for the examination of water and wastewater 21th edition.

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M1= <50% del rango M2 >> M1 del rango M1.A.b= M1 adicionada, mximo el 30% del valor de M1 M1A.a = M1 adicionada, mnimo el 50% del valor de M1 Las muestras fueron preparadas en balones aforados de 100 mL, lo cuales contenan 1 mL de acido ntrico al 65% M1: Se llevaron 19 mL de la solucin de 200 de Plomo a un matraz de 100 mL y se afor con agua de la llave (agua tratada). M2: Se transfirieron 38 mL del patrn de 200 de Plomo a un matraz de 100 mL, donde se afor con agua de la llave (agua tratada). M1 Ab: A un matraz de 100 mL se le adicion 4 mL del patrn de 200 de Plomo y 10 mL de M1 y finalmente se afor con agua desionizada. M1 Aa: Se tomaron 14 mL de la solucin patrn de 200 de Plomo y 15 mL de M1 los cuales se transfirieron a un baln aforado de 100 mL y se afor con agua desionizada. Nota: Los volmenes tomados para la preparacin de los patrones fueron medidos en bureta de 50 mL y los volmenes del acido ntrico fueron medidos con una pipeta graduada de 1mL.

8.4 DETERMINACIN DE PARAMETROS INSTRUMENTALES

8.4.1 Parmetros pticos. Se utilizaron los parmetros por defecto del instrumento, con correccin de fondo de fuente continua (lmpara de deuterio). En la tabla 29, se muestran las condiciones del sistema ptico: Tabla 29. Parmetros pticos para Plomo Parmetros Longitud de onda Ancho de banda Lmpara Pico de corriente 283.3 nm 0.7 nm Deuterio 10 mA

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8.4.2 Programa del horno. Se determin el programa de temperatura para el horno el cual consiste bsicamente de tres etapas: Etapa de secado Mineralizacin Atomizacin Los ensayos para determinar la temperatura ptima de atomizacin se muestran en la tabla 30: Estos ensayos se realizaron teniendo en cuenta los siguientes parmetros: Volumen de muestra: 25 L Concentracin del patrn: 5 g/L Mezclador: 500 L de muestra y 100 L modificador Tabla 30. Determinacin de temperatura ptima para Plomo Temperatura (C) 1400 1450 1500 1550 1600 1650 1700 1750 1800 1850 1900 Absorbancia 0,155 0,148 0,174 0,154 0,176 0,166 0,161 0,135 0,174 0,171 0,182

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Con los datos de la tabla 30 se construy la grafica 9, como se muestra a continuacin:

0,19 0,18 0,17 Absorbancia 0,16 0,15 0,14 0,13 0,12 0,11 0,1 1300 Temperatura (C) 1800

Grafica 9. Determinacin de temperatura optima para Plomo De acuerdo con los resultados obtenidos, se defini que la temperatura optima de atomizacin 1600 C. El programa de temperaturas completo, se presenta en la tabla 31. Tabla 31. Programa de temperaturas para Plomo Temperatura Tiempo Etapa (C) (s) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 110 110 200 200 800 800 850 850 1700 2500 2500 10 10 10 10 10 10 5 5 3 1 3 Flujo gas Modo rampa constante rampa constante rampa constante rampa constante constante rampa rampa ( )

0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0 1 1

82

El gas inerte empelado fue argn. En la etapa 9 se suspende e flujo de argn y se realiza la lectura 8.4.3 Automuestrador. Se definieron los parmetros del automuestreador, utilizando el sistema de mezcla, como se muestra en la tabla 32. Tabla 32. Parmetros de automuestreador para Plomo Mezclador Parmetros de inyeccin Velocidad de succin 130 L/s volumen 20 L Velocidad de descarga 150 L/s velocidad 25 L/s

8.4.4 Condiciones de repeticin de mediciones. El instrumento fue programado con el nmero de repeticiones mximo y mnimo, acorde al cumplimiento de las condiciones de repetibilidad establecidas (desviacin estndar lmite). Las cuales se resumen en la tabla 33. Tabla 33. Condiciones de repetibilidad para Plomo Nmero de repeticiones Blanco 2 Estndar 2 Muestra 2 Nmero mximo de repeticiones 3 3 3 RDS limite 7 7 7 SD limite 0 0 0

8.4.5 Parmetro de medicin. El procesamiento de seal de absorbancia elegido fue rea de pico, ya que con ste se obtuvieron mejores resultados de repetibilidad.

83

8.5 RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE PLOMO

Los resultados de los siete ensayos para la validacin de plomo se encuentran en las tablas 34 hasta la 48, con sus respectivas curvas de calibracin en las graficas 10 hasta la 1.

8.5.1 Resultados ensayo 1 Tabla 34. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 1 para Plomo Ensayo 1 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0756 0,0767 0,0778 0,0783 0,1349 0,1377 0,1920 0,1822 0,2292 0,2247

Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80

Absorbancia promedio 0,0761 0,0780 0,1363 0,1871 0,2270

Empelando los resultados de la tabla 34, se construy la curva de calibracin que se presenta en la grafica 9.

0,25 Absorbancia 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0 20 40 60 80 100 Concentracin (/L) y = 0,0025x + 0,0327 R = 0,9932

Grafica 10. Curva de calibracin para el ensayo 1 para Plomo

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Una vez realizada la curva de calibracin se procedi a medir las muestras de anlisis, los resultados se muestran en la tabla 35: Tabla 35. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 1 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 10,1045 8,6581 EMedia 40 43,2101 38,5496 EAlta 72 72,4588 72,0571 M1 38,5094 35,4560 M2 67,6376 69,7268 M1 Ab 8,1358 6,20730 M1 Aa 27,6215 27,3001 Para cada uno de los ensayos se procedi de la misma manera, obtenindose los resultados para cada ensayo, con su curva de calibracin respectiva y las medidas de las muestras de anlisis:

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8.5.2 Resultados ensayo 2 Tabla 36. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 2 para Plomo Ensayo 2 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0700 0,0718 0,0700 0,0634 0,1243 0,1249 0,1738 0,1701 0,2046 0,2077

Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80

Absorbancia promedio 0,0709 0,0667 0,1246 0,1720 0,2062

0,25 Absorbancia 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0 20 40 60 80 100 Concentracin (/L) y = 0,0023x + 0,0259 R = 0,9872

Grafica 11. Curva de calibracin para el ensayo 2 para Plomo Tabla 37. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 2 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 14,7242 16,5701 EMedia 40 40,9530 42,2458 EAlta 72 72,7624 76,6259 M1 38,7208 40,3520 M2 66,7954 69,8004 M1 Ab 13,2217 10,7748 M1 Aa 30,4786 32,1099

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8.5.3 Resultados ensayo 3 Tabla 38. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 3 para Plomo Ensayo 3 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0436 0,0456 0,0504 0,0539 0,0856 0,0843 0,1353 0,1457 0,1736 0,1656

Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80

Absorbancia promedio 0,0446 0,0522 0,0850 0,1405 0,1696

0,2 0,18 0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 Concentracin (/L)

Absorbancia

y = 0,002x + 0,0099 R = 0,9853

100

Grafica 12. Curva de calibracin para el ensayo 3 para Plomo Tabla 39. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 3 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 11,3319 9,7621 EMedia 40 36,8899 34,0937 EAlta 72 75,2024 77,9985 M1 36,0069 35,2710 M2 71,3760 69,4628 M1 Ab 15,6978 14,6186 M1 Aa 37,4785 37,0861

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8.5.4 Resultados ensayo 4 Tabla 40. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 4 para Plomo Ensayo 4 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0383 0,0364 0,0451 0,044 0,0775 0,0779 0,1203 0,1310 0,1523 0,1584

Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80

Absorbancia promedio 0,0373 0,0446 0,0777 0,1256 0,1554

0,18 0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 Concentracin (/L)

Absorbancia

y = 0,0019x + 0,0057 R = 0,9922

100

Grafica 13. Curva de calibracin para el ensayo 4 para Plomo Tabla 41. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 4 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 12,5953 12,6479 EMedia 40 39,7318 40,3629 EAlta 72 75,6508 76,4397 M1 40,4681 37,5230 M2 74,4938 75,2827 M1 Ab 16,6973 15,4352 M1 Aa 37,3126 38,9955

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8.5.5 Resultados ensayo 5 Tabla 42. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 5 para Plomo Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80 Ensayo 5 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0569 0,0593 0,0635 0,0612 0,0769 0,0792 0,1184 0,1157 0,1352 0,1422

Absorbancia promedio 0,0581 0,0624 0,0780 0,1170 0,1387

0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 Concentracin (/L)

Absorbancia

y = 0,0013x + 0,0321 R = 0,975

100

Grafica 14. Curva de calibracin para el ensayo 5 para Plomo Tabla 43. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 5 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 14,2964 11,9821 EMedia 40 33,8559 36,1702 EAlta 72 66,5547 70,8847 M1 36,1702 34,4532 M2 77,6036 77,6036 M1 Ab 9,3692 10,6383 M1 Aa 36,8421 36,1702

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8.5.6 Resultados ensayo 6 Tabla 44. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 6 para Plomo Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80 Ensayo 6 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0383 0,0364 0,0380 0,0347 0,0630 0,0621 0,0986 0,0918 0,1179 0,1177

Absorbancia promedio 0,0373 0,0364 0,0626 0,0940 0,1178

0,14 0,12 Absorbancia 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 100 Concentracin (/L) y = 0,0014x + 0,0088 R = 0,9975

Grafica 15. Curva de calibracin para el ensayo 6 para Plomo Tabla 45. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 6 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 15,7475 13,8607 EMedia 40 35,7765 36,2845 EAlta 72 69,9565 70,1016 M1 39,0421 38,4615 M2 72,0203 79,1727 M1 Ab 16,1829 12,1916 M1 Aa 30,1161 32,5835

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8.5.7 Resultados ensayo 7 Tabla 46. Datos de la curva de calibracin para el ensayo 7 para Plomo Concentracin patrn ( ) Blanco 20 40 60 80 Ensayo 7 Absorbancia Absorbancia 1 2 0,0235 0,0245 0,0244 0,0290 0,0549 0,0597 0,0856 0,0842 0,1169 0,1110

Absorbancia promedio 0,0240 0,0267 0,0573 0,0849 0,1140

0,12 0,1 Absorbancia 0,08 0,06 0,04 0,02 0 0 20 40 60 80 100 Concentracin (/L) y = 0,0014x - 0,0016 R = 0,9996

Grafica 16. Curva de calibracin para el ensayo 7 para Plomo Tabla 47. Resultados de las muestras de anlisis ensayo 7 para Plomo Muestra Concentracin 1 Concentracin 2 ( ) ( ) ( ) EBaja 15 18,8256 16,2003 EMedia 40 41,9689 44,1796 EAlta 72 76,6494 69,6028 M1 40,5181 39,2746 M2 73,8860 76,0967 M1 Ab 13,4370 12,3316 M1 Aa 29,8791 30,8463

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Los resultados consolidados de los ensayos se muestran en la tabla 48.

Tabla 48. Datos consolidados de los ensayos para Plomo Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 Bk (Abs) 0,0756 0,0767 0,0700 0,0718 0,0436 0,0456 0,0383 0,0364 0,0569 0,0593 0,0383 0,0364 0,0235 0,0245 EB ( ) 10,1045 8,6581 14,7242 16,5701 11,3319 9,7621 12,5953 12,6479 14,2964 11,9821 15,7475 13,8607 18,8256 16,2003 EM ( ) 43,2101 38,5496 40,953 45,2458 36,8899 34,0937 39,7318 40,3629 33,8559 36,1702 35,7765 36,2845 41,9689 44,1796 EA ( ) 72,4588 72,0571 72,7624 76,6259 75,2024 77,9985 75,6508 76,4397 66,5547 70,8847 69,9565 70,1016 76,6494 69,6028 M1 ( ) 38,5094 35,456 38,7208 40,352 36,0069 35,271 40,4681 37,523 36,1702 34,4532 39,0421 38,4615 40,5181 39,2746 M2 ( ) 67,6376 69,7268 66,7954 69,8004 71,376 69,4628 74,4938 75,2827 77,6036 77,6036 74,0203 79,1727 73,886 76,0967 M1 Ab ( ) 8,1358 6,2073 13,2217 10,7748 15,6978 14,6186 16,6973 15,4352 9,3692 10,6383 16,1829 12,1916 13,437 12,3316 M1 Aa ( ) 27,6215 27,3001 30,4786 32,1099 37,4785 37,0861 37,3126 38,9955 36,8421 36,1702 30,1161 32,5835 29,8791 30,8463

La linealidad del mtodo para la determinacin de plomo en agua potable, es buena ya que proporciona en todas las curvas de calibracin resultados que son directamente proporcionales a la concentracin del analito, con coeficientes de correlacin cercanos a 1. Por lo tanto el rango establecido es ptimo para la validacin. El rango de concentracin se estableci de acuerdo a los resultados en la determinacin de la temperatura ptima de medicin, a partir del anlisis realizado se hicieron experimentos previos en los cuales se observ que a concentraciones altas (> 100 g/L) se perda la linealidad de la curva y a concentraciones bajas (<20 g/L) el intercepto con el eje era alto, provocando porcentajes de error muy altos.

92

8.6 PARMETROS ESTADSTICOS

8.6.1 Prueba de rechazo de datos. Se empleo la prueba de Dcima de grubbs (ver seccin 7.3). Para el estndar EB, como se muestra a continuacin:

Segn los valores crticos de la Dcima de Grubbs (ver tabla 2), donde los datos estadsticos son menores a su valor critico (2,37) para un N= 14, no se rechaza el valor mnimo Gi, ni el valor mximo Gn del estndar EB.

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Los resultados de la prueba para las dems muestras de anlisis se muestran en la tabla 49. Tabla 49. Prueba de rechazo de datos Dcima de Grubbs para Plomo Parmetros EB ( ) EM ( ) EA ( ) M1 ( ) M2 ( ) 73,0685 66,7954 79,1727 3,9481 1,5889 1,5461 No No M1 Ab ( ) 12,4957 6,2073 16,6973 3,1735 1,9815 1,3240 No No M1 Aa ( ) 33,2014 27,3001 38,9955 3,9902 1,4790 1,4521 No No

Media 13,3791 39,0909 73,0675 37,8734 Mnimo 8,6581 33,8559 66,5547 34,4532 Mximo 18,8256 45,2458 77,9985 40,5181 Desviacin estndar 2,9047 3,7152 3,4144 2,0660 Gi 1,6253 1,4091 1,9075 1,6554 Gn 1,8751 1,6567 1,4442 1,2801 Mximo rechazado? No No No No Mnimo rechazado? No No No No

Al realizar la prueba de la Dcima de Grubbs se pudo establecer que los resultados de los ensayos son homogneos entre si, por esta razn no se rechaza ningn dato, por lo tanto todos sern incluidos para calcular los parmetros estadsticos.

8.6.2 Limite de deteccin y limite de cuantificacin. Para determinar los lmites de deteccin y cuantificacin primero se calcul la desviacin estndar de la concentracin del blanco, la cual se obtuvo a partir de la ecuacin de la curva de calibracin para cada ensayo. La concentracin del blanco para el ensayo 1, se calcul como se muestra a continuacin:

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Para el blanco del ensayo 1 el valor de la absorbancia es 0,0756 la concentracin ser:

Los valores de concentracin del blanco para el resto de ensayos se presentan en la tabla 50. Tabla 50. Concentraciones de blanco para cada ensayo BK Ensayo (Abs) Pendiente Intercepto 1 2 3 4 5 6 7 0,0756 0,0767 0,0700 0,0718 0,0436 0,0456 0,0383 0,0364 0,0569 0,0593 0,0383 0,0364 0,0235 0,0245 0,0025 0,0025 0,0023 0,0023 0,002 0,002 0,0019 0,0019 0,0013 0,0013 0,0014 0,0014 0,0014 0,0014 0,0327 0,0327 0,0259 0,0259 0,0099 0,0099 0,0058 0,0058 0,0321 0,0321 0,0088 0,0088 0,0016 0,0016 Ecuacin recta BK ( ) 17,1600 17,6000 19,1739 19,9565 16,8500 17,8500 17,1053 16,1053 19,0769 20,9231 21,0714 19,7143 15,6429 16,3571

A partir de las concentraciones de los blancos se calcula su desviacin estndar, obtenindose un valor de 1,7902 g/L El lmite de deteccin es tres veces sa desviacin estndar:

El lmite de cuantificacin es diez veces sa desviacin estndar:

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El lmite de deteccin para la determinacin de plomo es de 5,3706 g/L, por lo tanto sta es la cantidad ms pequea de analito en la muestra que puede ser detectada; observando el lmite de cuantificacin que tiene un valor de 17,902 g/L el cual es la cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con una exactitud aceptable y teniendo en cuenta que la concentracin mxima de Plomo en agua segn la normatividad es de 10 g/L, se puede inferir que el mtodo no es confiable para concentraciones bajas ya que los valores menores a el lmite de cuantificacin no van a ser medidos con exactitud.

8.6.3 Exactitud. A partir de las concentraciones de los estndares se calcula la exactitud del mtodo, para el estndar EB se calcul de la siguiente manera:

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Los resultados para el resto de ensayos se encuentran en la tabla 51: Tabla 51. Exactitud para Plomo EB (15 ) 10,1045 8,6581 14,7242 16,5701 11,3319 9,7621 12,5953 12,6479 14,2964 11,9821 15,7475 13,8607 18,8256 16,2003 13,3790 EM (40 ) 43,2101 38,5496 40,953 45,2458 36,8899 34,0937 39,7318 40,3629 33,8559 36,1702 35,7765 36,2845 41,9689 44,1796 39,0908 EA (72 ) 72,4588 72,0571 72,7624 76,6259 75,2024 77,9985 75,6508 76,4397 66,5547 70,8847 69,9565 70,1016 76,6494 69,6028 73,0675 %E EB (15 ) 32,6367 42,2793 1,8387 -10,4673 24,4540 34,9193 16,0313 15,6807 4,6907 20,1193 -4,9833 7,5953 -25,5040 -8,0020 10,8063 %E EM (40 ) 8,0252 -3,6260 2,3825 13,1145 -7,7753 -14,7658 -0,6705 0,9073 -15,3603 -9,5745 -10,5588 -9,2888 4,9222 10,4490 -2,2728 %E EA (72 ) 0,6372 0,0793 1,0589 6,4249 4,4478 8,3313 5,0706 6,1663 -7,5629 -1,5490 -2,8382 -2,6367 6,4575 -3,3294 1,4827

Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 Promedio

Para evaluar la exactitud como porcentaje de error relativo se analizaron tres muestras de concentraciones conocidas ( Eb, Em y Ea), los datos se analizaron con la prueba de la Dcima de Grubbs, ya que ningn mximo o minimo fue rechazado se puede decir que los datos son estadsticamente iguales, de los parmetros de aceptacin establecidos por el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la universidad tecnolgica de Pereira solamente el Eb no cumple con el criterio aunque no esta muy alejado del mximo establecido, esto se debe a que el limite de cuantificacin es mayor que el estndar bajo, por lo tanto la exactitud del mtodo se ve afectada. Por otra parte el Em y el Ea cumplen con el criterio de aceptacin, se observa, al igual que en la determinacin de cadmio, que el porcentaje de error disminuye a medida que la concentracin de las muestras analizadas es ms alta.

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8.6.4 Repetibilidad. Se obtuvieron las desviaciones estndar y el promedio de las series de datos de cada ensayo, obteniendo el %CV, para el estndar EB es: La desviacin estndar del EB es: 2,9047 g/L Y el promedio: 13,3791 g/L

El %CV para los dems estndares, se encuentra en la tabla 52.

Tabla 52. Porcentaje de variacin para Plomo EB (15 ) Promedio 13,3791 Desviacin 2,9047 estndar %CV 21,7107 EM (40 ) 39,0909 3,7152 9,5039 EA (72 ) 73,0675 3,4144 4,6729 M1 (38 ) 37,8734 2,0660 5,4551 M2 (76 ) 73,0685 3,9481 5,4032 M1 Ab (12 ) 12,4957 3,1735 25,3966 M1 Aa (34 ) 33,2014 3,9902 12,0180

Los resultados de repetibilidad expresados como coeficiente de variacin para los estndares y muestras analizadas presentan dispersin entre ellos, el comportamiento es similar al mencionado antes en la seccin donde se mostraron los resultados de exactitud, a concentraciones bajas se evidencia un coeficiente de variacin mayor, siendo el caso del Eb y M1ab las cuales presentan coeficientes de variaciones muy grandes (21,7 % y 25,4 % respectivamente); M1aa tambin present un coeficiente de variacin que no cumple con los parmetros de aceptacin para la validacin (12,02 %) pero no fue un valor tan alto como los anteriormente mencionados.

98

8.6.5 Porcentaje de recuperacin. El porcentaje de recuperacin se obtuvo a partir de las concentraciones de M1 y sus adicionadas (), para el ensayo 1 los porcentajes de recuperacin para m1Ab y M1Aa, se calcularon de la siguiente manera:

Los valores para M1Ab son:

Los valores para M1Aa son:

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Los porcentajes de recuperacin para el resto de ensayos se muestran en la tabla 53. Tabla 53. Porcentajes de recuperacin para Plomo

M1

M1 Ab

M1 Aa

Ensayo
M1 Leda M1 Ab Leda Concentracin no adicionada baja Concentracin adicionada baja M1 Aa Leda Concentracin no adicionada alta Concentracin adicionada baja

%R M1Ab

%R M1Aa

( ) 38,5094 35,4560 38,7208 2 40,3520 36,0069 3 35,2710 40,4681 4 37,5230 36,1702 5 34,4532 39,0421 6 38,4615 40,5181 7 39,2746 Promedio 37,8734 1

( ) 8,1358 6,2073 13,2217 10,7748 15,6978 14,6186 16,6973 15,4352 9,3692 10,6383 16,1829 12,1916 13,4370 12,3316 12,4957

( ) 3,8509 3,5456 3,8721 4,0352 3,6007 3,5271 4,0468 3,7523 3,6170 3,4453 3,9042 3,8462 4,0518 3,9275

( 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8

( ) 27,6215 27,3001 30,4786 32,1099 37,4785 37,0861 37,3126 38,9955 36,8421 36,1702 30,1161 32,5835 29,8791 30,8463 33,2014

( ) 5,7764 5,3184 5,8081 6,0528 5,4010 5,2907 6,0702 5,6285 5,4255 5,1680 5,8563 5,7692 6,0777 5,8912

( 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28

) 53,5608 33,2713 116,8703 84,2450 151,2139 138,6438 158,1311 146,0363 71,9023 89,9123 153,4836 104,3181 117,3149 105,0518 108,8539 78,0182 78,5061 88,1089 93,0611 114,5624 113,5552 111,5799 119,1680 112,2020 110,7222 86,6421 95,7653 85,0049 89,1254 98,2873

100

Los resultados obtenidos para la recuperacin de analito en la tcnica indican que el mtodo es adecuado ya que posee una buena recuperacin de analito en la muestra, cumpliendo plenamente con los parmetros de aceptacin, ya que las muestra M1Ab presento un valor de recuperacin de 108,85 % y M1Aa un valor de 98,29 % de recuperacin.

101

9. RESUMEN DE RESULTADOS

Resultados en el anlisis de Cadmio Tabla 54. Resultados de los parmetros de calidad para Cadmio Parmetro Limite de deteccin Limite de cuantificacin Exactitud Resultado 0,5847 g/L 1,9480 g/L EB 9,0231 % EM 2,1039 % EA 5,2229 % EB 12,1372 % EM 4,3180 % EA 4,2751 % M1 4,3687 % M2 4,2951 % M1Ab 12,5153 % M1Aa 5,0471 % M1Ab 85,2836 % M1Aa 117,4064 %

Repetibilidad

Recuperacin

Resultados en el anlisis de Plomo Tabla 55. Resultados de los parmetros de calidad para Plomo Parmetro Limite de deteccin Limite de cuantificacin Exactitud Resultado 5,3706 g/L 17,902 g/L EB 10,8063 % EM 2,2728 % EA 1,4827 % EB 21,7107% EM 9,5039% EA 4,6729% M1 5,4551% M2 5,4032% M1Ab 25,3966% M1Aa 12,0180% M1Ab 108,8539% M1Aa 98,2873%

Repetibilidad

Recuperacin

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10. CONCLUSIONES Se valid la metodologa para la determinacin de Cadmio en agua tratada por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito, a partir de siete ensayos de laboratorio seguidos, en donde se realiz la medicin de estndares y muestras con matriz de agua tratada por duplicado; con los resultados de stos se demostr que el mtodo es efectivo para la anlisis de Cadmio ya que se puede determinar con confiablidad muestras de concentraciones cercanas al valor mximo permitido por la norma.

Se determinaron las condiciones instrumentales experimentales ptimas para la metodologa para la determinacin de Cadmio en agua potable por espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito.

Segn los criterios de aceptacin establecidos por el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira, la metodologa para la determinacin de Cadmio en agua potable, cumple con los requisitos de exactitud, repetibilidad y recuperacin, por lo tanto el mtodo el aplicable para dicha determinacin en una matriz de agua potable.

Se valid la metodologa para la determinacin de Plomo en agua potable empleando la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito, donde se realiz la medicin por duplicado de estndares y muestras con matriz de agua tratada, durante siete das seguidos; con los resultados de stos se demostr que el mtodo es efectivo para la anlisis de Plomo.

La metodologa empleada para la determinacin de plomo en agua potable presenta resultados satisfactorios en cuanto a exactitud, precisin y recuperacin para concentraciones superiores al lmite de deteccin (17,902 g/L), las concentraciones menores a ste pueden ser detectadas fcilmente, pero su medida no presenta buena exactitud.

Se determinaron los parmetros instrumentales experimentales ptimos para la metodologa en la determinacin de Plomo en agua potable empleando la tcnica de espectroscopia de absorcin atmica con horno de grafito.

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11. RECOMENDACIONES Las soluciones patrn, las soluciones estndares y la solucin blanco de reactivos, se deben preparar a partir de una misma solucin madre y y emplear la misma agua desionizada para el aforo de las soluciones con el fin de evitar interferencias en la lectura. Los elementos para el almacenamiento de patrones, estndares y muestras, deben ser en recipientes plsticos ya que los metales en solucin reaccionan con el vidrio y esto causa cambios en la concentracin o prdidas de analito. Se recomienda lavar todos los elementos de vidrio con una solucin de cido ntrico al 50%, con el fin de eliminar sustancias presentes en el material de vidrio que puedan contaminar la muestra y afectar la lectura. Se recomienda utilizar inyeccin directa de la muestra y el modificador de matriz por el automestreador en lugar de permitir que el equipo los mezcle para su posterior inyeccin al horno. La limpieza peridica y mantenimiento al sistema de inyeccin es importante, por lo tanto se debe realizar ya que el mal estado de ste puede provocar fugas o errores al aspirar el volumen de muestra.

104

12. BIBLIOGRAFIA

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ANEXOS

A continuacin de anexan las imgenes de las condiciones instrumentales del equipo, para la medicin de cada uno de los metales:

Imagen 1. Parmetros pticos para Cadmio

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Imagen 2. Programa del horno para Cadmio

Imagen 3. Automuestreador para Cadmio

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Imagen 4. Condiciones de repeticin de mediciones para Cadmio

Imagen 5. Parmetro de medicin para Cadmio

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Imagen 6. Parmetros pticos para Plomo

Imagen 7. Programa del horno para Plomo

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Imagen 8. Automuestreador para Plomo

Imagen 9. Condiciones de repeticin de mediciones para Plomo

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Imagen 10. Parmetro de medicin para Plomo

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