Protena G

1. Introduo: As protenas G fazem parte de uma superfamlia de protenas que hoje compreende mais de 50 membros descritos. So protenas que, no estado inativo, encontram-se acopladas a receptores no meio intracelular e, graas a propriedades funcionais e estruturais, quando ativadas por estmulos adequados podem migrar pelo citosol e ativar enzimas amplificadoras ou canais inicos, consumando a transduo de sinais, que o processo de ativao dos eventos intracelulares por estmulos externos. Receptores que transmitem o sinal celular via protenas G possuem uma regio extracelular e uma regio transmembrana com sete domnios hidrofbicos, sendo denominados receptores 7TM. Protenas G so compostos de alto peso molecular e ditos heterotrimricos, pois so formadas por trs polipeptdios distintos, , e , formando o complexo transdutor de sinais melhor conservado entre os mamferos. Levam este nome por interagir com grupos guanlicos guanosina difosfato (GDP) e guanosina trisfofato (GTP). Recentemente, obtiveram-se indcios de que esse mecanismo sinalizador tambm estaria presente nos vegetais. 2. Histrico: Em 1971, M. Rodbell props a existncia de um intermedirio entre o receptor transmembrana e a enzima amplificadora intracelular. Esse composto ficou desconhecido at os anos 1980, quando Alfred G. Gilman conseguiu purificar uma protena que, aps ser inserida ao meio intracelular, devolvia a funo para as clulas que apresentavam receptores e enzimas amplificadoras sadias. Essa descoberta resultou a Gilman e Rodbell o Prmio Nobel de Fisiologia/ Medicina em 1994. Esse composto protico foi denominado protena G e extensivamente descrito por Gilman nos anos seguintes, sendo alvo at hoje de pesquisas farmacolgicas. Suas disfunes so relacionadas com a etiologia de muitas doenas, devido sua ampla distribuio no organismo. 3. Mecanismo de Transduo: Os receptores acoplados protena G (G protein coupled receptor, GPCR), so formados por sete domnios transmembrana, com o terminal amino no meio extracelular e o terminal carboxila no meio intracelular. Diferenas na estrutura e na sequncia desses receptores possivelmente contribuem para diferenas no reconhecimento de um ligante e no acoplamento especfico a uma determinada protena G. Os GPCR so as primeiras estruturas envolvidas na transduo celular. Logo aps a interao do primeiro mensageiro com o GPCR, so vistas mudanas conformacionais na estrutura deste ltimo, iniciando o ciclo de atividade da protena G. A cascata de ativao intracelular inicia sua dinmica graas ao de uma protena auxiliar, guanosine nucleotide exchange factor (GEF), que desloca o GDP e d lugar ligao do GTP, configurando o estado ativo dessa protena. Assim, a subunidade dissocia-se do dmero e inicia cascatas de sinalizao intracelular. Isso resulta na ativao de efetores, tais como adenilato ciclases, pequenas GTPases, fosfolipases e cinases, em ltima anlise podendo regular a expresso de genes envolvidos na sobrevivncia, proliferao, diferenciao e outros processos celulares. Esse estado de ativao mantido graas ao da protena guanine nucleotide dissociation inhibitor (GDI), que mantm o GTP ligado e a protena ativa pelo tempo necessrio. Uma caracterstica importante da subunidade sua atividade GTPase intrnseca, que dessa forma hidrolisa o -fosfato do GTP e devolve a afinidade da subunidade pelo dmero
Jos Edson de Oliveira

, de forma a encerrar o ciclo de transduo e manter o trmero disponvel para um novo estmulo. Entretanto, essa atividade autocataltica fraca, sendo necessrias as aes de mais protenas inativadoras: a protena ativadora da GTPase (GTPase activating protein GAP) e os reguladores da sinalizao por protena G (regulators of G protein signaling RGS), que aumentam a atividade da GTPase. 4. Classificao das Protenas G As protenas G so classificadas de acordo com a estrutura e sequncia da subunidade , sendo que as trs principais isoformas so a Gs, a Gq e a Gi. Outras isoformas, como a Gt (protena transducina), que liga o fotorreceptor da rodopsina na retina, a Go, que regula canais de clcio, e a Gk, reguladora de canais de potssio,6 no sero abordadas nesta reviso. 4.1 Protena Gs A protena Gs (estimulatria), que ativa a adenilato ciclase enzima intracelular aderida membrana plasmtica que catalisa a formao de 3-5 adenosina monofosfato cclico (AMPc) a partir do trifosfato de adenosina (ATP) est relacionada com o aumento da resposta celular. Assim, aps a formao do complexo ligante/GPCR, a subunidade da protena Gs, que interage com o nucleotdeo guanlico, catalisa a troca de GDP por GTP, assumindo a forma ativa dessa isoforma. A poro da protena desloca-se ento do dmero e ativa a adenilato ciclase, resultando no aumento substancial da concentrao de AMPc. O aumento na concentrao de AMPc intracelular (na ordem de 10 nM) culmina na ativao da protena cinase dependente de AMPc (PKA). Essa enzima composta por duas subunidades: uma reguladora (R), com alta afinidade pelo AMPc, e uma cataltica (C). Na ausncia de AMPc, a subunidade C torna-se inativa pela formao de um complexo tetramrico R2C2. A ligao do AMPc subunidade R induz mudanas conformacionais que resultam na dissociao da haloenzima inibida e consequente ativao da PKA, que em seguida pode fosforilar diversas estruturas intracelulares, obtendo uma resposta especfica ao estmulo agonista. A protena Gs pode ser estudada pela superativao causada pela toxina produzida pelo Vibrio cholerae. O resultado dessa interao com a toxina colrica o aumento em 100 vezes ou mais na concentrao de AMPc intracelular, o que acontece porque parte da toxina uma enzima que entra na clula intestinal e catalisa a formao de uma ligao covalente do grupo adenosina difosfato ribosil (um processo denominado ribosilao) na arginina da poro da protena Gs, o que impede a auto-catlise, provocando a passagem macia de gua para a luz intestinal e levando rpida e intensa desidratao. 4.2 Protena Gq A protena Gq est envolvida na ativao da enzima fosfolipase C, que assim como a adenilato ciclase participa da formao de segundos mensageiros. Depois de ativada ela degrada o fosfatidil inositol 4,5 bifosfato (PIP2) presente na membrana em 1,4,5 trifosfato de inositol (IP3) e 1,2 diacilglicerol (DAG). Estes so os dois segundos mensageiros envolvidos nas respostas fisiolgicas mediadas pela protena Gq. O IP3, dada sua estrutura hidrossolvel, migra pelo citosol e se liga a receptores especficos de IP3 no retculo endoplasmtico e mitocndrias, promovendo a liberao do on Ca+2 no citosol e aumentando a concentrao desse on de forma brusca at cerca de 10-6 M. O on clcio funciona como um terceiro mensageiro que desencadeia respostas intracelulares, como exocitose nos neurnios e nas clulas endcrinas, contrao muscular e rearranjos do citoesqueleto durante os movimentos amebides. 2

Jos Edson de Oliveira

O DAG fica associado membrana plasmtica devido sua estrutura hidrofbica, tendo a funo de ativar a protena cinase C (PKC), uma enzima ligada membrana plasmtica que promove a fosforilao de radicais em diversas protenas intracelulares.9,10 Estudos com o gene GNAQ, que codifica a subunidade da isoforma Gq, relacionaram a substituio dos nucleotdeos CC por TT com a maior mortalidade entre afro-americanos por doenas cardacas, talvez por disfunes nas propriedades intrnsecas das clulas cardacas nessa populao. A transduo de sinais mediadas pela protena Gq apresenta importantes funes no crebro, como a transmisso neuronal, a plasticidade sinptica e a sobrevivncia dos neurnios. Levando isso em conta, estudos mostraram que a deficincia da protena Gq tem um importante papel nos processos de neurodegenerao na doena de Alzheimer. Os ensaios sobre a participao da protena Gq na doena de Alzheimer foram consumados pelo estudo de receptores de angiotensina (AT2), que no crebro apresentam funes relacionadas ao comportamento, memria e apoptose, e esto associados em sua fase citoslica isoforma Gq. Assim, oligmeros que inibem os receptores de AT2 induziram quadros de neurodegenerao em camundongos. Estudos adicionais confirmaram o papel da inibio da protena Gq na neurodegenerao, pois AT2 mutantes, que sequestravam os oligmeros inibitrios, atrasaram a neurodegenerao em camundongos com a doena de Alzheimer. 4.3 Protena Gi A protena Gi (inibitria) inibe a atividade da enzima Adenilato Ciclase. Essa isoforma, relacionada com a diminuio da resposta celular, responsvel pela mediao dos efeitos inibitrios de receptores na via adenilato ciclase. Estudos mostraram que os receptores de eritropoetina (Epo), possuem acoplados na face citoslica uma protena Gi, em precursores eritrides e, tambm, em clulas no hematopoticas.13 Em precursores eritrides a protena Gi regula o influxo de Ca+2 atravs da frao i2. J o dmero responsvel pela ativao da via MAPK. Essa ativao ficou evidente quando a fosforilao do MAPK em resposta Epo foi inibida pela expresso de um competidor extrado de receptores cinases adrenrgicos (ARK1). Dentre as clulas no hematopoticas que expressam receptores de Epo podem-se citar as clulas neuronais, onde a Epo parece estar relacionada com processos antiapoptticos e de neurognese no crebro. Ela tambm pode estar envolvida na proliferao e diferenciao de clulas musculares, alm de atuar na angiognese e estar presente em clulas endoteliais. Contudo, esses processos ainda so pouco documentados. A isoforma Gi sensvel toxina produzida pela bactria gram-negativa Bordetella pertussis. O resultado da interao dessa toxina com a protena Gi a inibio desta ltima por ADP-ribosilao, levando ao aumento excessivo de AMPc, o que na mucosa brnquica resulta na produo aumentada de muco que caracterstica da coqueluche. 5. Subunidade da Protena G A subunidade da protena G a melhor conservada entre os mamferos, bem como a frao do trmero com maior peso molecular (45 kDa), nela encontrando-se cinco regies: G1, G4, G5 (que esto relacionadas com a ligao ao GTP) G2 e G3 (responsveis pela atividade GTPase). So conhecidos 16 genes responsveis pela codificao dessa subunidade, e sua sequncia estrutural que caracteriza os diferentes tipos de protena G. Estudos recentes identificaram uma caracterstica gentica na famlia dos peixes-zebra, correspondente a uma nova classe de protenas G que pode ser introduzida como o quinto elemento em meio aos quatro j estabelecidos (Gs, Gq, Gi e G12). Esse novo elemento foi denominado Gv. O gene para essa protena (GNAV) foi encontrado em diversos reinos animais, como vertebrados, artrpodes, moluscos e algumas esponjas. Presume-se que essa protena 3

Jos Edson de Oliveira

foi perdida nos animais superiores, como nematdeos, mosca das frutas e mamferos, por isso ainda no havia sido descrita. Algumas mutaes na subunidade G so responsveis por certas endocrinopatias, j que a maioria dos hormnios tem como stio de ligao um GPCR. A sndrome de McCune Albright, resultado de uma mutao somtica de substituio da arginina por uma histidina ou cistena, uma doena espordica definida pela presena de displasia ssea fibropoliosttica, manchas caf au lait e puberdade precoce. Esta trade pode apresentar associaes com outras endocrinopatias, tais como hipertireoidismo, acromegalia, prolactinoma e sndrome de Cushing. 6. Dmero da Protena G Existem no mnimo cinco tipos de subunidades , que podem ser codificadas por seis genes conhecidos: 1 a 4 (que apresentam homologia estrutural) e 5, que um pouco menor, o que sugere ter diferentes papis ainda no esclarecidos. J a subunidade apresenta 12 tipos diferentes, sendo conhecidos 12 genes que a codificam. Essas duas subunidades esto associadas fortemente por ligaes no covalentes, e quando se encontram ligadas subunidade , configuram o estado inativo da protena G. Por muitos anos pensou-se que o dmero apenas ancorava a frao , porm vrios estudos comprovaram que esse dmero tambm influencia processos celulares especficos, e essa especificidade parece estar relacionada com as combinaes entre as subunidades.16,17 A inibio de canais de clcio est ligada seletivamente s pores 2-2, e se demonstrou tambm que 3 foi importante no acoplamento de somatostatina nos receptores de Ca+2 tipoL. Esse complexo dimrico tambm est ligado a processos de endocitose mediados por receptores, o que ficou evidenciado quando se injetaram subunidades mutantes que se ligavam ao dmero independentemente da sua ligao ao GTP. Esse sequestro resultou na diminuio da formao de vesculas revestidas por clatrina, protena responsvel pela formao das vesculas membranares nas clulas. Assim, doenas que causem mutao na subunidade podem interferir na endocitose de transferrina, fator de crescimento epidrmico e lipoprotenas de baixa densidade (LDL), uma vez que as clulas absorvem esses compostos atravs dos receptores. Os fatores ligados hereditariedade de distrbios gastrointestinais, como a dor epigstrica, podem ser resultado do polimorfismo do gene GNB3, que codifica a subunidade 3. Indivduos que apresentavam o gentipo 825TT tiveram maior prevalncia da sndrome da dor epigstrica. A via exata da transduo ainda no foi elucidada, mas acredita-se que o gentipo 825TT apresenta uma transduo de sinal mais intensa, levando a uma maior motilidade gastroduodenal. O polimorfismo do GNB3 no exclui fatores externos, como tabagismo, etilismo e dieta, mas pode servir como teste preventivo em pessoas com histrico familiar de sndromes gstricas. 7. CONCLUSES Embora a reviso da literatura mostre que o tema protena G no tem gerado muitos trabalhos experimentais, as protenas G e seus receptores constituem papel crucial na sobrevivncia celular, haja vista os achados evolutivos que comprovam sua presena em organismos primitivos e perduram at os organismos mais complexos. Dessa forma, a transduo de estmulos externos em sinais intracelulares comprovadamente um dos fatores de grande importncia para a perpetuao das caractersticas viveis na escada evolutiva. Tendo em vista seu papel abrangente, disfunes nessa estrutura so responsveis por estados patolgicos diversos, que em muitos casos se mostram to importantes quanto sua prpria funo fisiolgica. Estudos que correlacionem a anormalidade dos complexos
Jos Edson de Oliveira

transdutores com processos patolgicos podem ser a base para descobertas farmacolgicas empregadas na teraputica de muitas doenas. 8. REFERNCIAS Fragoso MCBV. Manifestaes endcrinas das mutaes da protena Gs alfa e do imprinting do gene GNAS1. Arq Bras Endocrinol Metab. 2002;46:372-80. Coosta R. Departamento de Cincias da Vida. Faculdade de Cincias e Tecnologia. As protenas G em vegetais. Coimbra: Universidade de Coimbra, Portugal, 2009. Kresge N, Simoni RD, Hill RL. The Regulation of Adenyl Cyclase by G-protein: the Work of Alfred G. Gilman. J Biol Chem. 2005;280:e41-3. Hauacher OM. Receptores acoplados protena G: implicaes para a fisiologia e doenas endcrinas. Arq Bras Endocrinol Metab. 2001;45:228-39. 5. Zhang Y, Scoumanne A, Chen X. G Protein-coupled receptor 87: a promising opportunity for cancer drug discovery. Mol Cell Pharmacol. 2010;2:111-6. Evora PRB, Nobre F. O Papel das G protenas na fisiopatologia das doenas cardiovasculares. Arq. Bras Cardiol.1999;72:209-19. Oka Y, Saraiva LR, Kwan YY, Korshing SI. The fifth class of G proteins. Proc Natl Acad Sci

Silva BV, Horta BAC, Alencastro RB, et al. Protenas quinases: caractersticas estruturais e inibidores qumicos. Quim Nova. 2009;32:453-62. Nelson DL, Cox MM. Biossinalizao. In: Simes AA, Lodi WRN [Coord.] Traduo. Lehninger Princpios de Bioqumica, 4 Ed. So Paulo: Ed. Sarvier; 2006. p. 440-4. Ruggiero GM, Rosa MA, de Mello MF. Mecanismo de ao do ltio: o papel do fosfatidil inositol. Infanto Rev Neuropsiq da Infncia e Adolescncia. 1994;2:34-41. Liggett SB, Kelly RJ, Parekh RR, et al. A functional polymorphism of the Galphaq (GNAQ) gene is associated with accelerated mortality in African-American heart failure. Hum Mol Genet. 2007;16:2740-50. AbdAlla S, Loher H, el Missiry A, et al. Angiotensin II AT2 receptor oligomers mediated gprotein dysfunction in an animal model of Alzheimer disease. J Biol Chem. 2009;284:6554-65. Guillard C, Chrtien S, Pelus AS, et al. Activation of the mitogen-activated protein kinases Erk1/2 by erythropoietin receptor via a G(i) protein beta gamma-subunit-initiated pathway. J Biol Chem. 2003;278:11050-6. Milligan G, Kostenis E. Heterotrimeric G-proteins: a short history. Br J Pharmacol. 2006;147:S46-55. Neto MA, Rasacado RR, Bendhack LM. Receptores betas adrenrgicos no sistema cardiovascular. Medicina (Ribeiro Preto). 2006;39:3-12. 5

Jos Edson de Oliveira

Bezerra MGT, Latronico AC, Fragoso MCBV. Tumores endcrinos associados s mutaes das protenas Gs alfa e Gi alfa2. Arq Bras Endocrinol Metabol. 2005;49:784-90. McCuden CR, Hains MD, Kimple RJ, et al. G-protein signaling: back to the future. Cell Mol Life Sci. 2005; 62:551-7. Hsin CL, Duncan JA, Kozasa T, et al. Sequestration of the G-protein beta gama subunit complex inhibits receptor-mediated endocytosis. Proc Natl Acad Sci USA. 1998;95:5057-60. Oshima T, Nakajima S, Yokoyama T, et al. The G-Protein 3 subunit 825 TT genotype is associated with epigastric pain syndrome-like dyspepsia. BMC Med Genet. 2010;11:13. Williamson EA, Ince PG, Harrison D, et al. G-protein mutations in human pituitary adrenocorticotrophic hormonesecreting adenomas. Eur J Clin Invest. 1995;25:128-31. Villapun JCP, Haro RMS, Sierra MJC, et al. Importancia de las protenas G heterotrimricas en la biologa molecular del cncer de prstata. Actas Urol Esp. 2005;29:948-54. Revistaseletronicas.pucrs.br/ojs/index.php/scientiamedica/article/.../594.

Jos Edson de Oliveira