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PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE SUERO DE LECHE

S. M. Carrin
1
, D. E. Molina
2
, Y. Pieros
3*
1, 2
Estudiantes Ingeniera de Alimentos, Universidad de Bogota Jorge Tadeo
Lozano, Bogot, Colombia.
3
Docente Ingeniera de Alimentos, Universidad de Bogot Jorge Tadeo Lozano,
Bogot, Colombia.
Direccin electrnica: yineth.pineros@utadeo.edu.co


1. RESUMEN

El objetivo del trabajo fue obtener etanol a partir de suero de leche mediante el
cultivo de Saccharomyces cerevisiae. Primero se hidroliz la lactosa mediante la
enzima -galactosidasa. Para lograr la hidrlisis y seleccionar el mejor sistema
de inmovilizacin enzimtica se utiliz como soportes alginato de calcio, alginato
de calcio con tierra de diatomceas y alginato de calcio con silica gel. Los
porcentajes de hidrlisis de la lactosa fueron 49.57%, 75.21% y 72.65%,
respectivamente, encontrndose superioridad del catalizador enzima-alginato de
calcio-slica gel. Teniendo en cuenta los resultados, se utilizaron estos
catalizadores biolgicos para la hidrlisis de la lactosa presente en el suero de
leche y la posterior produccin de etanol.


2. INTRODUCCIN

Durante miles de aos el etanol ha sido producido para el consumo humano,
especialmente para la obtencin de bebidas alcohlicas concentradas mediante
destilacin. En la actualidad el alcohol ha retomado mayor importancia debido a
su utilizacin como combustible (mezclado con gasolina) para automviles
(Trevan, 1990).

El alcohol se puede producir por rutas qumicas (hidratacin cataltica del etileno)
y por rutas biotecnolgicas (fermentacin). Mediante sta ltima se hace uso de
la capacidad de los microorganismos para la produccin de etanol sobre
sustratos baratos y disponibles, dentro de los cuales se encuentran lactosa,
xilosa y almidn. A travs de procesos biotecnolgicos se busca producir etanol
a partir de desechos orgnicos como el suero de leche (fuente de lactosa) el cual
se genera como un residuo en procesos lcteos. La levadura Saccharomyces
cerevisiae ha sido tradicionalmente usada para la produccin de etanol
(Trevan,1990). Para la produccin de etanol a partir de suero de leche mediante
el cultivo de S. cerevisiae, es necesario realizar la hidrlisis de la lactosa para
obtener glucosa y galactosa como sustratos, reaccin mediada por la -
galactosidasa.

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La inmovilizacin de enzimas se ha convertido en el mecanismo de estabilizacin
de las enzimas favoreciendo las condiciones de trabajo a gran escala (Madigan et
al., 1998).


3. METODOLOGA

3.1. Inmovilizacin de la enzima -galactosidasa

Se inmoviliz la enzima - galactosidasa (Novazym, Novozymes) mediante
alginato de calcio (alginato de sodio 1,5% en CaCl
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0.05M), alginato de calcio
ms silica gel 0.2% (Merck) y alginato de calcio mas tierra de diatomceas 0.2%
(Merck). La concentracin de la enzima en los inmovilizados fue del 10%.


3.2. Medicin de la actividad de la -galactosidasa inmovilizada

Se utiliz una solucin de lactosa al 1% como sustrato. La hidrlisis enzimtica
se llev a cabo a 30C durante 24 horas, en una columna de vidrio como soporte
para los inmovilizados, con una relacin 4,5 mL de enzima/100 mL de solucin
de lactosa. El contenido de lactosa se cuantific mediante el mtodo de Fheling
modificado (AOAC 974.06, 1996).


3.3. Produccin de etanol

El suero de leche fue obtenido de una fbrica de quesos ubicada en Bogot. Se
esteriliz a 121C durante 15 minutos. Posteriormente se tomaron 200 mL de
sobrenadante; para la hidrlisis de la lactosa se utiliz -galactosidasa
inmovilizada aspticamente (4.5 mL de enzima). Luego se adicionaron 0,1 g de
levadura Saccharomyces cerevisae (Levapan) y se dej en fermentacin durante
4 das a 30C, sin agitacin. Posteriormente se realiz una destilacin simple a
temperatura controlada de 75C. El porcentaje de etanol en el destilado se
cuantific mediante ndice de refraccin (Refractmetro Fisher Scientific, rango
0-28).


4. RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1. Inmovilizacin de -galactosidasa

Los resultados de los ensayos relacionados con la actividad de la -galactosidasa
inmovilizada, se presentan en la Tabla 1. Se puede observar que la menor
cantidad de lactosa presente luego de la hidrlisis se present con la enzima
inmovilizada en alginato de calcio con silica gel. Con este catalizador
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enzimtico se logr un porcentaje de hidrlisis de la lactosa de un 75,21%, es
decir un 51.72% ms que con el inmovilizado realizado nicamente con alginato
de calcio. Este comportamiento puede deberse a las propiedades de superficie
de la silica gel, ya que permite el mejor desempeo de la enzima y adems
favorece los procesos difusivos al interior del catalizador. Teniendo en cuenta
este resultado, se utiliz -galactosidasa inmovilizada en alginato de calcio con
slica gel para la hidrlisis de suero de leche, para producir etanol.


Tabla 1. Hidrlisis de lactosa mediante -galactosidasa inmovilizada.

Sistema de inmovilizacin Concentracin de lactosa
luego de la hidrlisis (% p/V)
% de hidrlisis
Alginato 0.59% 49.57%
Alginato + silicagel 0.29% 75.21%
Alginato + tierra
diatomea
0.32% 72.65%


4.2. Produccin de etanol

Luego del cultivo de Saccharomyces cerevisiae sobre el suero de leche
hidrolizado, se destil para encontrar el rendimiento producto sustrato (Yps) en
gramos de etanol/gramos de lactosa. Para cuantificar la concentracin de etanol
en el destilado se realiz una curva de calibracin mediante ndice de refraccin
utilizando etanol al 96%. Esta curva present un factor de correlacin lneal de
0.9849, correspondiente a IR (ndice de refraccin) = 26.89 * (Concentracin
de etanol en mL etanol/mL solucin) 0.1494. La concentracin de etanol en
el destilado fue de 0.027 ml/ml de destilado, por lo tanto el valor del
rendimiento producto sustrato (Yps) es 2,722 x 10-3 g etanol/g lactosa.

El rendimiento obtenido presenta un valor bajo; por lo tanto se debe realizar un
estudio ms profundo acerca de las condiciones de hidrlisis del suero de leche y
del cultivo de Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol. Lo mismo
que establecer mecanismos que permitan hacer el seguimiento de las reacciones
bioqumicas.


5. CONCLUSIONES

Se logr establecer un sistema de inmovilizacin de la -galactosidasa, que
favorece la actividad enzimtica, conformado por alginato de calcio y slica gel.
Por otro lado, se logr obtener etanol a partir de lactosa presente en el suero de
4
leche, mediante el cultivo de Saccharomyces cerevisiae. Este tipo de procesos
favorece el aprovechamiento de desechos orgnicos de la industria lctea.


6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

A.O.A.C. 1996. Official Methods of Analysis of AOAC International. 16
th
ed.,
AOAC International. Gaithersburg, M.D.

Doran, P. 1998. Principios de la Ingeniera de los Bioprocesos. Editorial Acribia
S.A. Zaragoza, Espaa. 468p.

Madigan, M.; Martinko, J.; Parker, J. 1998. Brock Biologa de los
Microorganismos. Editorial Prentice Hall. Madrid, Espaa. 986p.

Trevan, M.D. 1990. Biotecnologa: Principios biolgicos. Editorial Acribia.
Zaragoza, Espaa. 284p

Whiteburst, R. 2002, Enzymes in Food Technology. Editorial Sheffield Academic
Press. Nueva York, USA. 225p.