UNIVERSIDADE FEDERAL DO TRINGULO MINEIRO Instituto de Cincias Tecnolgicas e Exatas Engenharia Qumica

APLICAES DE PROCESSOS BIOQUMICOS INDUSTRIAIS NAS INDSTRIAS FARMACUTICAS

Dilson David Luiz da Costa - 201010726 Fernando Pacheco Tofanello 201110854 Rafael Abumussi Evangelista 201110654 Srgio Ferreira de Moraes Jnior 201010715 Thiago Marques Luz Paulino 201110628

Disciplina: Bioqumica Industrial Professora: David Maikel

20 de Janeiro 2014 Uberaba MG

SUMRIO

1. INTRODUO .................................................................................................................... 3 2. MICRORGANISMOS ......................................................................................................... 3 3. MEIOS DE CULTURA........................................................................................................ 4 4. BIORREATORES ................................................................................................................ 4 5. TIPO DE REATORES ......................................................................................................... 5 6. MODO DE OPERAO ..................................................................................................... 5 7. RECUPERAO DO PRODUTO ..................................................................................... 6 8. BPFs BOAS PRTICAS DE FABRICAO ................................................................ 6 9. PRODUO DE ANTIBITICOS .................................................................................... 7 9.1. PENICILINA ......................................................................................................... 8 10. ENZIMAS NA INDSTRIA FARMACUTICA ........................................................... 9 11. PRODUO DE L-ASPARAGINASE .......................................................................... 11 12. PRODUO DE INSULINA .......................................................................................... 11 13. CONCLUSO................................................................................................................... 12 14. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................... 13

1. Introduo

histria da indstria farmacutica est relacionada diretamente ao desenvolvimento dos processos biotecnolgicos. Na primeira metade do sculo XX um dos grandes avanos da biotecnologia farmacutica foi

descoberta da penicilina, provocando uma grande revoluo no setor produo de vitaminas, enzimas , vacinas , antibiticos e hormnios. A produo de frmacos um dos mais desenvolvidos processos industriais que utilizam da biotecnologia principalmente a fermentao. Os quatro principais pilares que corroboram para o sucesso do processo so: microrganismos, meios de cultura, o desenvolvimento do processo e a recuperao do produto (downstream processes). Entretanto, uns dos grandes desafios da indstria farmacutica e da qumica fina esto relacionados aos requisitos especficos de limpeza e desinfeco. Assim, requerendo um tipo de produo singular. 2. Microrganismos Os microrganismos so divididos em vrus, procariontes (bactrias e cianofceas) e eucariontes (fungos, protozorios, algas, cultura de tecidos animais e vegetais). Para as vacinas, os vrus patognicos so os de principal interesse, j os vrus bacterifagos so importantes nos estudos genticos. Entretanto, a maioria dos processos biotecnolgicos farmacuticos tem os fungos e as bactrias como os principais agentes. H diferentes maneiras de se obter microrganismos como isolamento a partir de recursos naturais, compra em coleo de culturas, obteno e mutantes naturais ou induzidos por mtodos convencionais, microrganismos recombinantes atravs da engenharia gentica. Para a seleo de microrganismos algumas caractersticas devem ser apresentadas: Eficincia elevada na converso do substrato em produto; Permitir o acmulo do produto no meio, de modo a se obter elevada concentrao do produto no caldo; No produzir substncias que gerem incompatibilidade com o produto;

Comportamento fisiolgico constante; No apresentar patogenia; No exigir complexidade nas condies dos processos; No exigir meios de cultura dispendiosos; Permitir rpida liberao dos produtos para o meio.

3. Meios de Cultura O meio de cultura deve ser formulado levando em considerao as necessidades nutricionais do microrganismo. Ou seja, cada microrganismo exigir um meio de cultivo diferente. Por essa variao de composio, a fabricao de um meio de cultura um tanto quanto complexa, podendo conter solues tamponadas e tamponantes de sais minerais, vitaminas, glucose, aminocidos, fatores de crescimento, soro, extratos fetais, etc. Algumas vezes, a introduo de antibiticos ao meio de cultivo necessria a fim de se evitar a contaminao por bactria. Alguns meios podem ser slidos ou em suspenses principalmente clulas vegetais. Com acrscimo de carboidratos em caso de fotossntese ineficiente para suprir as necessidades microbianas. Os cultivos dependem diretamente do pH, temperatura, teor de oxignio e umidade e agitao. 4. Biorreatores Biorreatores so reatores que fornecem o ambiente ideal para a reao cataltica, catalisada pelos biocatalisadores (microrganismos). Eles previnem a liberao de biomassa interna para o ambiente e a invaso de substancias estranhas para o ambiente da reao. Essa ambientao da reao deve levar em conta aspectos muito importantes, biolgicos, qumicos e fsicos. Para o meio biolgico deve-se eliminar qualquer outro microrganismo que interfira no processo (assepsia). J o meio qumico se relaciona s necessidades dos microrganismos, para que realize com sucesso o processo de fermentao (nutrientes, pH timos, adio ou eliminao de oxignio). Por fim, os aspectos fsicos mostram o controle da temperatura, homogeneizao do meio, etc.
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5. Tipos de biorreatores Para a seleo de um biorreator, deve ser analisada a sensibilidade do processo, principalmente dos microrganismos, ao ambiente. Alm disso, o seu modo de construo, como tipo de matria, grau de sofisticao e desenho devem apresentar segurana ao processo. Os biorreatores qumicos acontecem na ausncia de clulas vivas, assim so essencialmente enzimticos. Outro modo so os biorreatores biolgicos que possuem clulas no processamento. So exemplos de utilizao de biorreatores biolgicos a produo de enzimas, antibiticos, vitaminas, cidos orgnicos, solventes, bebidas e tratamento de resduos orgnicos industriais ou domsticos. Outros fatores que devem ser levados em considerao o tipo de biocatalisador, a sua configurao, forma de agitao. 6. Modo de Operao Comea-se a classificao do modo de operao dos biorreatores com os reatores em fase aquosa, ou de fermentao submersa. Para esse tipo de reator pode se usar clulas livres, e de acordo com a sensibilidade da clula determina-se a agitao: reatores agitados mecanicamente, pneumaticamente (Coluna de ar ou air-lift), ou fluxo pistonado. J os reatores em fase no-aquosa, ou de fermentao semi-slida, podem se diferenciar em reatores de clulas imobilizadas, de leito fixo, de leito fluidizado, de clulas

confinadas entre membranas, de membranas planas, de fibra oca. Os reatores estticos (reatores de bandeja), reatores de agitao (tambor rotativo), reatores de leito fixo e reatores de leito fluidizado gs-slido so outros importantes tipos de reatores. Os biorreatores mais empregados atualmente so os agitados mecanicamente (STR), com cerca de 90% dos biorreatores em utilizao industrial. O tamanho dos reatores depender da finalidade da produo: 1-2 m: cultivo de microrganismos patognicos, clulas animais ou vegetais (produtos ligados sade).
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100-200 m: produo de enzimas, antibiticos e vitaminas. >1000 m: processo que no necessita de grande assepsia.

7. Recuperao do Produto a etapa mais difcil e cara do processo, chegando a representar de 80% - 90% do custo total do processo. Os procedimentos utilizados podem ser fsicos, qumicos ou biolgicos. . Filtrao , centrifugao e flotao ( separao de clulas do lquido) . Rompimento de clulas (caso produto seja intracelular). . Extrao com solvente especfico . Cromatografia . Filtrao por membranas . Adsoro .Cristalizao .Secagem

EXPLICITAO DE PROCESSOS DE PRODUO DE FRMACOS 8. BPF Boas prticas de fabricao As Boas Prticas de Fabricao so normas para a fabricao adequada de medicamentos com o objetivo de evitar contaminaes, confuses e erros que possam tornar os medicamentos inadequados para o consumo. Sendo que sua importncia pautada em garantia a mxima qualidade dos medicamentos produzidos, segurana no uso e eficcia teraputica.

As Boas Prticas de Fabricao determinam que:

1. Processos de Fabricao devem ser definidos e revisados sistematicamente. 2. Qualificaes e validaes necessrias devem ser efetuadas. 3.Sejam fornecidos recursos necessrios como: a. Pessoal qualificado e treinado; b. Instalaes adequadas; c. Equipamentos e sistemas adequados; d. Materiais, recipientes e rtulos adequados; e. Procedimentos e instrues aprovados; f. Armazenamento e transporte adequados; 4. Os funcionrios devem estar treinados para desempenharem corretamente os procedimentos. 5. Sejam feitos registros de todas as etapas de produo. 6. O armazenamento e distribuio devem ser adequados para no oferecerem risco qualidade. 7. Deve estar implantado um sistema de recolhimento de lotes aps a comercializao. 8. As reclamaes sobre os produtos devem ser registradas e examinadas. 9. Produo de antibiticos Antibiticos so substncias que inibem o crescimento microbiano. Eles so produtos do metabolismo secundrio de microrganismos especficos (metablitos secundrios). A produo dos antibiticos pode se dar por diferentes mtodos. Um deles por fermentao, outro por compostos semissintticos e por ltimo por sntese. Os antibiticos so classificados em diversas formas e essa classificao depende do seu mecanismo de ao, do espectro microbiano, da cepa produtora, da forma de biossntese e tambm da estrutura qumica.

Atualmente so conhecido mais de 8000 tipos de antibiticos. E seus principais processos produtivos vm de bactrias (cerca de 950), actinomicetos - filo de bactrias Gram-positivas (cerca de 4600) e fungos (cerca de 1600). As aplicaes dos antibiticos so incalculveis. Sua utilizao vai desde antibiticos estimuladores, passando por antibiticos para preservao de alimentos e contra doenas em plantas, at a aplicao como antibitico quimioterpico, representando a soluo de inmeras doenas e salvando incontveis vidas. Os antibiticos devem ser constantemente estudados afim de se obter maiores atividades com menor ou igual toxicidade, diminuir os efeitos colaterais, aumentar a faixa microbiana de atuao, aumentar as propriedades farmacolgicas e a seletividades contra certos microrganismos patognicos. 9.1 Penicilina

Figura 1 Estrutura molecular da penicilina A descoberta que revolucionou a indstria farmacutica foi feita em 1929 por Alexander Flemming. Sendo a primeira aplicao clnica realizada em 1941 por Walter Floreye Boris Chain. A penicilina tem sua eficcia contra bactrias gram-positivas, atuando na inibio da sntese da parede celular. A toxicidade da penicilina muito baixa (entre 0,5-2% de alergia). Sendo que para processos industriais, somente a penicilina G e a penicilina V so interessantes. As quais 38% so utilizadas em medicina humana, 12% em medicina veterinria e 43% como matria prima para semissintticas. O processo de produo da penicilina se d por fermentao aerbica, em batelada (melhores resultados e menores ricos de contaminao). O processo submerso, em biorreatores de capacidade entre 40 e 200 litros. A agitao deve ser mantida entre 120150 rpm, e temperatura de 25-27C.

O meio do cultivo do processo produtivo depende da cepa utilizada. J as fontes de nitrognio so vrias: gua de milho, farinha de soja, extrato de levedura ou soro de leite. A glicose em alguns casos pode causar inibio do processo, ento as fontes de carbono so basicamente provindas da Lactose. O pH deve ser impreterivelmente mantido constante a 6,5. Para que isso realmente ocorra, e para que no haja risco de desnaturao proteica, devem ser utilizados vrios tampes. O processo de produo da penicilina alcana rendimentos ao redor de 90%. 10. Enzimas na indstria Farmacutica Aps os antibiticos, enzimas so os produtos microbianos mais explorados na indstria biotecnolgica. Podemos afirmar que hoje a indstria farmacutica representa um dos maiores produtores e usurios de enzimas. Elas podem ser aplicadas tanto na produo de medicamentos e desenvolvimento de novos produtos, quanto em diagnstico clnico e terapia. Somado a isso, na rea de cosmtica, tambm chamado de Enzimocosmtica, as enzimas esto inseridas cada vez mais em produtos de higiene pessoal, esfoliao de pele e anti-sinais. O mercado de enzimas considerado hoje o mais promissor para as indstrias farmacuticas, e uma nica enzima com aplicao teraputica pode, por exemplo, custar US$ 5 mil/grama. Tabela 1 Principais enzimas de uso teraputico

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11. Produo de L-asparaginase A L-asparaginase, um importante biofrmaco, oriundo de bactrias, tem sido utilizada como um eficaz agente teraputico no tratamento de leucemia linfoide aguda (LLA) por mais de 40 anos. O processo de produo consiste no crescimento da bactria em um meio fermentativo, com diferentes fontes de carbono e de nitrognio. Com o substrato L-asparagina como fonte de nitrognio, observa-se a produo enzima L-asparaginase a partir da formao do aspartato e da liberao de amnia. Experimentos realizados em meio sinttico sem asparagina e em meio contendo apenas glicose extrato de levedura tambm resultaram na formao da enzima, mostrando que a mesma constitutiva e que pode ser produzida em diferentes meios e condies de fermentao. Alm disso, devido aos efeitos colaterais relacionados s L-asparaginases comerciais, a formao de L-asparaginase a partir da bactria zymomonas mobilis, mesmo com uma produtividade menor, tem a vantagem de que o caldo fermentativo deste microrganismo j utilizado no tratamento de doenas. 12. Produo de insulina A insulina uma protena com duas cadeias polipeptdicas ligadas, contendo 21 aminocidos na cadeia A e 30 aminocidos na cadeia B. Ela um hormnio neurotransmissor. Ela age reduzindo a taxa de glicose no sangue ao auxiliar no seu transporte para o interior de algumas das clulas do organismo, como as musculares e as do tecido adiposo. Com isso, promove varias reaes celulares e estimula a captao de nutriente na clula. Ou seja, a taxa de glicose ser equilibrada pela ao da insulina (e do glucagon). A deficincia ocasiona hiperglicemia a diabetes alm de problemas de crescimento e deficincia metablica. O processo clssico de produo de insulina consiste em sua extrao a partir do pncreas de bois e porcos, que produzem insulina semelhante humana. Entretanto,
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esse mtodo no tem sido mais utilizado em larga escala por poder provocar reaes de rejeio pelo organismo. A nova tcnica utilizada foi instaurada com o isolamento do gene responsvel pela produo de insulina e descobriu-se que a bactria Escherichia coli pode sintetizar o hormnio a partir da introduo de segmento de DNA humano no seu material gentico. Esse procedimento realizado por meio de enzimas que isolam os pedaos de DNA responsveis pela produo de insulina. O material gentico humano introduzido na bactria, que multiplicado em tanques de fermentao. Aps o processo, a insulina passa pelos processos downstream visando purificao e obedincia s normas de sade, e s BPF. As vantagens dessa nova tcnica em relao tcnica antiga so que h reduo de custos (fabricao de insulina em 30 dias, um tero do tempo do mtodo antigo) e a reduo drstica dos ndices de rejeio. No Brasil, a produo deve cobrir 50% da demanda do Ministrio da Sade. Sendo a produo vinda de uma parceria entre Farmanguinhos/Fiocruz e o instituto ucraniano Indar, que envolvem a utilizao de Escherichia coli transgnica. 13. Concluso A biotecnologia tem contribudo de forma decisiva para o aprimoramento de processos relacionados ao desenvolvimento e produo de novos frmacos ou ao aprimoramento dos j existentes para que se tornem mais seguros e eficazes. O processo depende de vrios fatores que convergem para o sucesso da produo. Microrganismos, meio de cultura, desenvolvimento do processo e recuperao do produto so os pilares do processo bioqumico. As BPF boas prticas de fabricao , implantadas pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, regem o processamento com o objetivo de garantir a mxima qualidade, segurana e eficcia.

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Os processos so constantemente atualizados, buscando a otimizao do processo. A penicilina, a L-asparaginase e a insulina foram exemplos claros de processos produtivos dentro da indstria farmacutica que utilizam processamento bioqumico. 14. Referncias Bibliogrficas [1] BORZANI, Walter (Coord.) et al. Biotecnologia industrial. So Paulo (SP): Blucher, 2011. 2 v. [2] NORRIS, S. et al. Indstrias de Processos Qumicos. 4 ed. So Paulo: LTC, 1997. [3] SCHMIDELL,et al.2001. Biotecnologia Industrial-Engenharia Bioqumica v.2, Ed. Edgard Blucher Ltda.-SP. [4] LEHNINGER, Albert Lester; NELSON, David L; COX, Michael M. Princpios de bioqumica de Lehninger. 5. ed. Porto Alegre (RS): Artmed, 2011. [5] VAZ, R. S., PRADO, M. R. M., CARVALHO, F. Biotecnologia na Indstria Farmacutica. Disponvel em: <http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio37/industria.pdf > acesso em: 16 jan. 2014 [6] RUBIN, C. Produo de Insulina. Disponvel em:

<http://www.univesp.ensinosuperior.sp.gov.br/preunivesp/815/a-produ-o-deinsulina.html> acesso em: 16 jan. 2014. [7] MONTEIRO, V. N., SILVA, R. N. Aplicaes Industriais da Biotecnologia Enzimtica. Revista Processos Qumicos. Artigo Convidado 1. Ed Jan/Jun 2009. [8] McBRIGDE, A., Produo industrial de vacinas. Disponvel em:

<http://www2.ufpel.edu.br/biotecnologia/gbiotec/site/content/paginadoprofessor/upload sprofessor/6f5f5dda6c3a1103d5f31a66b5185925.pdf?PHPSESSID=faaa31248d8149ee 235c5eb0cb54830e> acesso em: 16 jan. 2014.

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