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REAL FARMACOPEA ESPAOLA, 3. edicin

INMUNOSUEROS PARA USO VETERINARIO

Antitoxina de Clostridium novyi alfa para uso veterinario ................................................... Antitoxina de Clostridium perfringens beta para uso veterinario .............................................

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Antitoxina de Clostridium perfringens psilon para uso veterinario ..................................... Antitoxina tetnica para uso veterinario ............

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Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografas

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01/2005, 0339

Antitoxina de Clostridium novyi alfa para uso...


Determinacin de la dosis de prueba de la toxina. Preparar una disolucin de la preparacin de referencia en un lquido apropiado de forma que contenga 1 U.I./ml. Preparar una disolucin de la toxina en un lquido apropiado de forma que un mililitro contenga una cantidad conocida con exactitud, por ejemplo 1 mg. Preparar mezclas de la disolucin de la preparacin de referencia con la disolucin de la toxina de prueba, de forma que cada mezcla contenga 1,0 ml de la disolucin de la preparacin de referencia (1 U.I.) y una cantidad variable de la disolucin de la toxina de prueba; completar despus cada mezcla con el lquido apropiado para que todas alcancen el mismo volumen final de 2,0 ml. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 60 min. Usando para cada mezcla por lo menos dos ratones, de peso individual entre 17 y 22 g, inyectar 0,2 ml de la mezcla correspondiente, intramuscular o subcutneamente, en cada ratn. Observar los ratones durante 72 h. Si todos los ratones mueren, la cantidad de toxina presente en los 0,2 ml de la mezcla es superior a la dosis de prueba. Si ninguno de los ratones muere, la cantidad de toxina presente en los 0,2 ml de mezcla es inferior a la dosis de prueba. Preparar de nuevo mezclas tales que cada una de ellas contenga, en 2,0 ml, 1,0 ml de la disolucin de la preparacin de referencia (1 U.I.) y una cantidad variable de la disolucin de la toxina de prueba que d lugar a una serie en la que la cantidad de toxina en cada tubo no difiera de la del siguiente en ms de un 20 por ciento, tratando de asegurar que el punto final esperado est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Mantener las mezclas a temperatura ambiente durante 60 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos, por va intramuscular o subcutnea, 0,2 ml de la mezcla correspondiente. Observar los ratones 72 h. Repetir la determinacin por lo menos otra vez y sumar los resultados de los ensayos realizados con las mezclas de la misma composicin, de forma que se obtenga una serie de sumas totales en la que cada suma representa la mortalidad debida a una mezcla de composicin determinada. La dosis de prueba de la toxina es la cantidad presente en 0,2 ml de la mezcla que provoca la muerte de la mitad del total de los ratones inyectados con ella. Determinacin de la actividad del inmunosuero problema Ensayo preliminar. Disolver una cantidad de la toxina de prueba en un lquido apropiado de forma que la disolucin contenga 10 dosis de prueba por ml. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero objeto de examen conteniendo cada una 1,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable de la muestra. Ajustar el volumen final de todas las mezclas a 2,0 ml con el lquido apropiado y mantener a temperatura ambiente durante 60 min. Utilizando al menos dos ratones para cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos, por va intramuscular o subcutnea, 0,2 ml de la mezcla correspondiente. Observar los ratones durante 72 h. Si ninguno de los ratones muere, 0,2 ml de la mezcla contienen ms de 0,1 U.I. Si todos los ratones mueren, 0,2 ml de la mezcla contienen menos de 0,1 U.I. Ensayo definitivo. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero problema, de forma que cada mezcla contenga, en 2,0 ml, 1,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y cantidades variables del inmunosuero tales que formen una serie en la que la cantidad de inmunosuero en cada mezcla no difiera de la siguiente en ms del 20 por ciento y tratando de asegurar que el punto final esperado, basndose en los datos del ensayo

ANTITOXINA DE CLOSTRIDIUM NOVYI ALFA PARA USO VETERINARIO Immunoserum clostridii novyi alpha ad usum veterinarium
DEFINICIN La antitoxina de Clostridium novyi alfa para uso veterinario es una preparacin que contiene globulinas capaces de neutralizar especficamente la toxina alfa formada por Clostridium novyi (denominacin anterior: Clostridium oedematiens). Este inmunosuero est constituido por el suero, o una preparacin obtenida a partir del suero, de animales inmunizados contra la toxina alfa de Cl. novyi. IDENTIFICACIN La muestra neutraliza especficamente la toxina alfa formada por Cl. novyi, tornndola inofensiva para los animales susceptibles. ACTIVIDAD La actividad del suero en bruto no es inferior a 750 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 250 U.I./ml en el obtenido a partir de ganado vacuno. La actividad del suero concentrado no es inferior a 1500 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 500 U.I./ml en el obtenido a partir de ganado vacuno. Una Unidad Internacional (U.I.) es la actividad neutralizante especfica frente a la toxina alfa de Cl. novyi, que muestra una determinada cantidad del Patrn Internacional, consistente en suero de caballo inmunizado desecado. La equivalencia en Unidades internacionales del Patrn Internacional la establece la Organizacin Mundial de la Salud. La actividad de la muestra se determina comparando la dosis de muestra necesaria para proteger ratones, u otros animales apropiados, de los efectos txicos de una determinada dosis de toxina alfa de Cl. novyi, con la cantidad de una preparacin de referencia de inmunosuero anti Cl. novyi, calibrado en Unidades internacionales, necesario para proporcionar la misma proteccin. Para realizar esta comparacin es preciso utilizar una preparacin adecuada de toxina alfa de Cl. novyi como toxina de prueba. La dosis de toxina de prueba se determina en relacin con la preparacin de referencia; la actividad de la muestra se determina comparndola con la actividad de la preparacin de referencia, con ayuda de la toxina de prueba. Preparacin de la toxina de prueba. Preparar la toxina de prueba a partir de un filtrado estril de un cultivo, de 5 das aproximadamente, de Cl. novyi tipo B y desecar por un mtodo apropiado. Seleccionar la toxina de prueba determinando la dosis L+/10 y la DL50 para ratones durante un periodo de observacin de 72 h. Una toxina alfa de Cl. novyi apropiada debe contener al menos una dosis L+/10 en 0,05 mg y al menos 10 DL50 en cada dosis L+/10.

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Antitoxina de Clostridium perfringens beta para uso...


preliminar, est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Preparar otras mezclas de forma que 2,0 ml de cada una de ellas contengan 1,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable de la preparacin de referencia, a temperatura ambiente, durante 60 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, proceder como se ha indicado para el ensayo preliminar. La mezcla objeto de anlisis que contiene 0,1 U.I. en 0,2 ml es aquella que provoca la muerte del mismo, o casi del mismo, nmero de ratones que la mezcla de referencia que contiene 0,1 U.I. en 0,2 ml. Repetir la determinacin al menos otra vez y calcular la media de todos los resultados significativos. El ensayo slo es vlido si el resultado obtenido con la preparacin de referencia no difiere ms de un 20 por ciento del valor esperado. Los lmites de confianza estimados (P = 0,95) son los siguientes: 85 por ciento y 114 por ciento cuando se usan dos animales por dosis, 91,5 por ciento y 109 por ciento cuando se usan cuatro animales por dosis, 93 por ciento y 108 por ciento cuando se usan seis animales por dosis. ETIQUETADO La etiqueta indica si se trata de un suero en bruto o concentrado.

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La actividad del suero concentrado no es inferior a 3000 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 1000 U.I./ml en el obtenido a partir de ganado vacuno. Una Unidad Internacional es la actividad neutralizante especfica frente a la toxina beta Cl. perfringens, que muestra una determinada cantidad del Patrn Internacional, consistente en suero inmunizado de caballo desecado. La equivalencia en Unidades internacionales del patrn internacional la establece la Organizacin Mundial de la Salud. La actividad de la muestra se determina comparando la dosis de muestra necesaria para proteger ratones, u otros animales apropiados, de los efectos txicos de una determinada dosis de toxina beta de Cl. perfringens, con la cantidad de una preparacin de referencia de inmunosuero anti Cl. perfringens, calibrado en unidades internacionales, necesario para proporcionar la misma proteccin. Para realizar esta comparacin es preciso utilizar una preparacin adecuada de toxina beta de Cl. perfringens como toxina de prueba. La dosis de toxina de prueba se determina en relacin con la preparacin de referencia y la actividad de la muestra se determina comparndola con la actividad de la preparacin de referencia, con ayuda de la toxina de prueba. Preparacin de la toxina de prueba. Preparar la toxina de prueba a partir de un filtrado estril de un cultivo en medio lquido de Cl. perfringens, tipo B o tipo C, y desecar por un mtodo apropiado. Seleccionar la toxina de prueba determinando la dosis L+ y la DL50 para ratones durante un perodo de observacin de 72 h. Una toxina beta apropiada debe contener al menos una dosis L+ en 0,2 mg y al menos 25 DL50 en cada dosis L+. Determinacin de la dosis de prueba de la toxina. Preparar una disolucin de la preparacin de referencia en un lquido apropiado, de forma que contenga 5 U.I./ml. Preparar una disolucin de la toxina en un lquido apropiado de forma que 1 ml contenga una cantidad conocida con exactitud, por ejemplo 10 mg. Preparar mezclas de la disolucin de la preparacin de referencia con la disolucin de la toxina de prueba, de forma que cada mezcla contenga 2,0 ml de la preparacin de referencia (10 U.I.) y una cantidad variable de la disolucin de la toxina de prueba; completar despus cada mezcla con el lquido apropiado para que todas alcancen el mismo volumen final de 5,0 ml. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 30 min. Usando al menos 2 ratones para cada mezcla, de peso individual entre 17 y 22 g, inyectar 0,5 ml de la mezcla correspondiente, por va intravenosa o intraperitoneal, en cada ratn. Observar los ratones durante 72 h. Si todos los ratones mueren, la cantidad de toxina presente en los 0,5 ml de la mezcla es superior a la dosis de prueba. Si ninguno de los ratones muere, la cantidad de toxina presente en los 0,5 ml de mezcla es inferior a la dosis de prueba. Preparar de nuevo mezclas tales que cada una de ellas contenga en 5,0 ml, 2,0 ml de la disolucin de la preparacin de referencia (10 U.I.) y una cantidad variable de la disolucin de la toxina de prueba que d lugar a una serie en la que la cantidad de toxina en cada tubo no difiera de la del siguiente en ms de un 20 por ciento, tratando de asegurar que el punto final esperado est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 30 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos, por va intravenosa o intraperitoneal, 0,5 ml de la mezcla correspondiente. Observar los ratones du-

01/2005, 0340

ANTITOXINA DE CLOSTRIDIUM PERFRINGENS BETA PARA USO VETERINARIO Immunoserum clostridii perfringentis beta ad usum veterinarium
DEFINICIN
Inmunosueros

La antitoxina de Clostridium perfringens beta para uso veterinario es una preparacin que contiene esencialmente globulinas capaces de neutralizar especficamente la toxina beta formada por los tipos B y C de Clostridium perfringens. Este inmunosuero est constituido por el suero, o una preparacin obtenida a partir del suero de animales inmunizados contra la toxina beta del Cl. perfringens. IDENTIFICACIN La muestra neutraliza especficamente la toxina beta formada por Cl. perfringens, tornndola inofensiva para los animales susceptibles. ACTIVIDAD La actividad del suero en bruto no es inferior a 1000 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 250 U.I./ml en el obtenido a partir de ganado vacuno.

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Antitoxina de Clostridium perfringens psilon para uso...


01/2005, 0341

rante 72 h. Repetir la determinacin por lo menos otra vez y sumar los resultados de los ensayos realizados con las mezclas de la misma composicin, de forma que se obtenga una serie de sumas totales en la que cada suma representa la mortalidad debida a una mezcla de composicin determinada. La dosis de prueba de la toxina es la cantidad presente en 0,5 ml de la mezcla que provoca la muerte de la mitad del total de los ratones inyectados con ella. Determinacin de la actividad del inmunosuero problema Ensayo preliminar. Disolver una cantidad de la toxina de prueba en un lquido apropiado de forma que 2,0 ml contengan 10 dosis de prueba. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero en examen conteniendo cada una 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable del inmunosuero en examen. Ajustar el volumen final de todas las mezclas a 5,0 ml con un lquido apropiado y dejar en reposo, a temperatura ambiente, durante 30 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos, por va intravenosa o intraperitoneal, 0,5 ml de la mezcla correspondiente. Observar los ratones durante 72 h. Si ninguno de los ratones muere, 0,5 ml de la mezcla contienen ms de 1 U.I. Si todos los ratones mueren, 0,5 ml de la mezcla contienen menos de 1 U.I. Ensayo definitivo. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero en examen, de forma que cada mezcla contenga, en 5,0 ml, 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y cantidades variables del inmunosuero tales que formen una serie en la que la cantidad de inmunosuero en cada mezcla no difiera de la siguiente en ms del 20 por ciento y tratando de asegurar que el punto final esperado en funcin de los datos del ensayo preliminar est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Preparar otras mezclas de forma que 5,0 ml de cada una de ellas contengan 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable de la preparacin de referencia, con el fin de confirmar la dosis de prueba de la toxina. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 30 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, proceder como se ha indicado para el ensayo preliminar. La mezcla objeto de anlisis que contiene 1 U.I. en 0,5 ml es aquella que provoca la muerte del mismo, o casi del mismo, nmero de ratones que la mezcla de referencia que contiene 1 U.I. en 0,5 ml. Repetir la determinacin al menos otra vez y calcular la media de todos los resultados significativos. El ensayo slo es vlido si el resultado obtenido con la preparacin de referencia no difiere ms de un 20 por ciento del valor esperado. Los lmites de confianza estimados (P = 0,95) son los siguientes: 85 por ciento y 114 por ciento cuando se usan dos animales por dosis, 91,5 por ciento y 109 por ciento cuando se usan cuatro animales por dosis, 93 por ciento y 108 por ciento cuando se usan seis animales por dosis. ETIQUETADO La etiqueta indica si se trata de un suero en bruto o concentrado.

ANTITOXINA DE CLOSTRIDIUM PERFRINGENS PSILON PARA USO VETERINARIO Immunoserum clostridii perfringentis epsilon ad usum veterinarium
DEFINICIN La antitoxina de Clostridium perfringens psilon para uso veterinario es una preparacin que contiene globulinas capaces de neutralizar especficamente la toxina psilon formada por Clostridium perfringens tipo D. Este inmunosuero est constituido por el suero o una preparacin obtenida a partir del suero de animales inmunizados contra la toxina psilon de Cl. perfringens. IDENTIFICACIN El inmunosuero neutraliza especficamente la toxina psilon formada por el tipo D de Cl. perfringens, tornndola inofensiva para los animales susceptibles. ACTIVIDAD La actividad del suero en bruto no es inferior a 120 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 100 U.I./ml en el obtenido a partir de ganado vacuno. La actividad del suero concentrado no es inferior a 300 U.I./ml cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 150 U.I/ml en el obtenido a partir de ganado vacuno. Una Unidad Internacional (U.I.) es la actividad neutralizante especfica frente a la toxina psilon de Cl. perfringens, que muestra una determinada cantidad del patrn internacional, consistente en suero inmunizado de caballo desecado. La equivalencia en Unidades internacionales del Patrn Internacional la establece la Organizacin Mundial de la Salud. La actividad de la muestra se determina comparando las dosis necesarias para proteger ratones, u otros animales apropiados, de los efectos txicos de una determinada dosis de toxina psilon de Cl. perfringens, con la cantidad de una preparacin de referencia de inmunosuero anti-Cl. perfringens psilon, calibrado en Unidades internacionales, necesario para proporcionar la misma proteccin. Para realizar esta comparacin es preciso utilizar una preparacin adecuada de toxina psilon de Cl. perfringens como toxina de prueba. La dosis de toxina de prueba se determina en relacin con la preparacin de referencia; la actividad de la muestra se determina comparndola con la actividad de la preparacin de referencia con ayuda de la toxina de prueba. Preparacin de la toxina de prueba. Preparar la toxina de prueba a partir de un filtrado estril de un cultivo en medio lquido, de Cl. perfringens tipo D, y desecar por un mtodo apropiado. Seleccionar la toxina de prueba determinando la dosis L+/10 y la DL50, para ratones durante un perodo de observacin de 72 h. Una toxina psilon apropiada contiene al menos 1 dosis L+/10 en 0,005 mg y al menos 20 DL50 en cada dosis L+/10.

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Antitoxina tetnica para uso veterinario


Determinacin de la dosis de prueba de la toxina. Preparar una disolucin de la preparacin de referencia en un lquido apropiado de forma que contenga 0,5 U.I. por mililitro. Preparar una disolucin de la toxina en un lquido apropiado de forma que 1 ml contenga una cantidad conocida con exactitud, por ejemplo 1 mg. Preparar mezclas de la disolucin de la preparacin de referencia con la disolucin de la toxina de prueba, de forma que cada mezcla contenga 2,0 ml de disolucin de la preparacin de referencia (1 U.I.) y una cantidad variable de la disolucin de la toxina de prueba; completar despus cada mezcla con el lquido apropiado para que todas alcancen el mismo volumen final de 5,0 ml. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 30 min. Usando para cada mezcla por lo menos dos ratones, de peso individual entre 17 g y 22 g, inyectar 0,5 ml de la mezcla correspondiente (por va intravenosa o intraperitoneal) a cada ratn. Observar los animales durante 72 h. Si todos los ratones mueren, la cantidad de toxina presente en los 0,5 ml de la mezcla es superior a la dosis de prueba. Si ninguno de los ratones muere, la cantidad de toxina presente en los 0,5 ml de muestra, es inferior a la dosis de prueba. Preparar de nuevo mezclas tales que cada una de ellas contenga, en 5,0 ml, 2,0 ml de la disolucin de la preparacin de referencia (1 U.I.) y una cantidad variable de la toxina de prueba tal que se forme una serie en la que la cantidad en cada mezcla no difiera de la del siguiente en ms de un 20 por ciento, tratando de asegurar que el punto final esperado est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Dejar en reposo las mezclas, a temperatura ambiente, durante 30 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos, por va intravenosa o intraperitoneal, una dosis de 0,5 ml. Observar los ratones durante 72 h. Repetir la determinacin por lo menos otra vez sumar los resultados de los ensayos realizados con las mezclas de la misma composicin, de forma que se obtenga una serie de sumas totales en la que cada suma representa la mortalidad debida a una mezcla de composicin determinada. La dosis de prueba de la toxina es la cantidad presente en 0,5 ml de la mezcla que provoca la muerte de la mitad de todos los ratones inyectados con ella. Determinacin de la actividad del inmunosuero problema Ensayo preliminar. Disolver una cantidad de la toxina de prueba en un lquido apropiado de forma que 2,0 ml contengan 10 dosis de prueba (disolucin de la toxina de prueba). Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero objeto de examen, conteniendo cada una 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable del inmunosuero en examen. Ajustar el volumen final de todas las mezclas a 5,0 ml con un lquido apropiado y dejar reposar, a temperatura ambiente, durante 30 min. Utilizar al menos 2 ratones para cada mezcla e inyectar a cada uno de ellos, por va intravenosa o intraperitoneal, una dosis de 0,5 ml. Observar los ratones durante 72 h. Si ninguno de los ratones muere, 0,5 ml de la mezcla contienen ms de 0,1 U.I. Si todos los ratones mueren, 0,5 ml de la mezcla contienen menos de 0,1 U.I. Ensayo definitivo. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y del inmunosuero a examinar, de forma que cada mezcla contenga, en 5,0 ml, 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y cantidades variables del inmunosuero tales que formen una serie en la que la cantidad de inmunosuero en cada mezcla no difiera de la siguiente en ms del 20 por ciento y tratando de asegurar que el punto final esperado, estimado en el ensayo preliminar, est comprendido en el intervalo de cantidades utiliza-

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do. Preparar otras mezclas de forma que 5,0 ml de cada una de ellas contengan 2,0 ml de la disolucin de la toxina de prueba y una cantidad variable de la preparacin de referencia, con el fin de confirmar la dosis de prueba de la toxina. Dejar en reposo las mezclas a temperatura ambiente durante 30 min. Utilizando al menos 2 ratones para cada mezcla, proceder como se ha indicado para el ensayo preliminar. La mezcla objeto de anlisis que contiene 0,1 U.I. en 0,5 ml es aquella que provoca la muerte del mismo, o casi del mismo, nmero de ratones que la mezcla de referencia que contiene 0,1 U.I. en 0,5 ml. Repetir la determinacin al menos otra vez y calcular la media de todos los resultados significativos. El ensayo slo es vlido si el resultado obtenido con la preparacin de referencia no difiere ms de un 20 por ciento del valor esperado. Los lmites de confianza estimados (P = 0,95) son los siguientes: 85 por ciento y 114 por ciento cuando se usan 2 animales por dosis, 91,5 por ciento y 109 por ciento cuando se usan 4 animales por dosis, 93 por ciento y 108 por ciento cuando se usan 6 animales por dosis. ETIQUETADO La etiqueta indica si se trata de un suero en bruto o concentrado.

01/2005, 0343

ANTITOXINA TETNICA PARA USO VETERINARIO Immunoserum tetanicum ad usum veterinarium


DEFINICIN La antitoxina tetnica para uso veterinario es una preparacin que contiene principalmente globulinas capaces de neutralizar especficamente la neurotoxina formada por Clostridium tetani. Este inmunosuero est constituido por el suero, o una preparacin obtenida a partir del suero, de animales inmunizados contra la toxina tetnica. IDENTIFICACIN La muestra neutraliza especficamente la neurotoxina formada por Cl. tetani, tornndola inofensiva para los animales susceptibles. ACTIVIDAD La actividad del suero en bruto no es inferior a 300 U.I. por mililitro cuando se obtiene a partir de caballos, ni inferior a 150 U.I. por mililitro cuando se obtiene de ganado vacuno. La actividad del suero concentrado no es inferior a 1000 U.I. por mililitro en el obtenido a partir de caballos, ni inferior

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a 500 U.I. por milmetro cuando se obtiene de ganado vacuno. Una Unidad Internacional (U.I.) es la actividad neutralizante especfica frente a la toxina tetnica contenida en una determinada cantidad del Patrn Internacional, consistente en suero desecado de caballo inmunizado. La equivalencia en Unidades internacionales del Patrn Internacional la establece la Organizacin Mundial de la Salud. La actividad de la antitoxina se determina comparando la dosis de muestra necesaria para proteger ratones (o cobayas) de los efectos txicos de una determinada dosis de toxina tetnica con la cantidad de antitoxina tetnica de referencia, calibrada en Unidades internacionales, necesaria para proporcionar la misma proteccin. En pases en los que el mtodo paralizante no es obligatorio se puede usar el mtodo letal. Para este ltimo mtodo se usa el mismo nmero de animales y procedimiento que los descritos para el mtodo paralizante, salvo que se tiene en cuenta la muerte de los animales y no el comienzo de la parlisis. Consecuentemente se usan las dosis L+/10 y DL50 en vez de las dosis Lp/10 y la dosis paralizante 50 por ciento. Para realizar esta comparacin es preciso utilizar una preparacin adecuada de toxina tetnica como toxina de prueba. La dosis de toxina de prueba se determina en relacin con la preparacin de referencia; la actividad de la muestra se determina comparndola con la actividad de la preparacin de referencia, con ayuda de la toxina de prueba. Preparacin de la toxina de prueba. Preparar la toxina de prueba a partir de un filtrado estril de un cultivo de 8 a 10 das en medio lquido de Cl. tetani. La toxina de prueba se puede preparar aadiendo glicerol R a este filtrado, en la proporcin de un volumen de filtrado por 1 2 volmenes de glicerol R. La disolucin de toxina de prueba se puede conservar a una temperatura igual o ligeramente inferior a 0 C. Tambin puede desecarse por un mtodo apropiado. Seleccionar la toxina de prueba determinando la dosis Lp/10 y la dosis paralizante 50 por ciento para ratones. Una toxina de prueba apropiada contiene por lo menos 1000 dosis paralizantes 50 por ciento en cada dosis Lp/10. Dosis Lp/10 (Limes paralyticum). Esta dosis es la cantidad ms pequea de toxina capaz, cuando se mezcla con 0,1 U.I. de antitoxina y se inocula por va subcutnea en ratones (o cobayas), de provocar parlisis tetnica en dichos animales, en los cuatro das siguientes a la inoculacin. Dosis paralizante 50 por ciento. Esta dosis es la cantidad de toxina capaz, cuando se inocula por va subcutnea en ratones (o cobayas), de provocar parlisis tetnica en la mitad de los animales inoculados, en los cuatro das siguientes a la inoculacin. Determinacin de la dosis de prueba de la toxina. Reconstituir o diluir la preparacin de referencia en un lquido apropiado, de forma que contenga 0,5 U.I. por mililitro. Medir o pesar una cantidad de la toxina de prueba y diluir con o disolver en un lquido apropiado. Preparar mezclas de las disoluciones de la preparacin de referencia de la disolucin de toxina de prueba, de forma que contenga cada una 0,1 U.I. de antitoxina en el volumen escogido, y una cantidad variable de la toxina de prueba, dando lugar a una serie en la que la cantidad contenida en cada tubo no difiera de la del siguiente en ms de un 20 por ciento, tratando de asegurar que el punto final esperado est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Completar cada mezcla con el lquido apropiado para ajustar el volumen final (de 0,4 ml a 0,6 ml en caso de utilizar rato-

Antitoxina tetnica para uso veterinario


nes, o 4,0 ml en cobayas). Dejar reposar las mezclas a temperatura ambiente durante 60 min. Utilizar dos animales, por lo menos, para cada mezcla e inyectar a cada uno de ellos, subcutneamente, el volumen escogido. Observar los animales durante 96 h y anotar cada da el grado de ttanos desarrollado en cada grupo de animales inoculados. Repetir la determinacin al menos otra vez y calcular la dosis de prueba como la media de los diferentes ensayos. La dosis de prueba de la toxina es la cantidad contenida en la mezcla que provoca parlisis en la mitad de los animales inyectados. Una vez que se ha determinado la dosis de prueba de la toxina, se puede preparar una disolucin concentrada de la toxina de prueba en una mezcla de 1 volumen de cloruro de sodio R de 9 g/l y 1 2 volmenes de glicerol R. Esta disolucin concentrada puede conservarse congelada y diluirla para su empleo. La actividad especfica de la disolucin concentrada se debe determinar a intervalos frecuentes. Determinacin de la actividad de la antitoxina problema Ensayo preliminar. Medir o pesar una cantidad de la toxina y diluir o disolver en un lquido apropiado de forma que la disolucin contenga 5 dosis de prueba por mililitro (disolucin de la toxina de prueba). Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y de la antitoxina a examinar, de forma que cada una contenga una dosis de prueba de la toxina y una cantidad variable de la antitoxina, en el volumen escogido. Ajustar el volumen de todas las mezclas con un lquido apropiado hasta un mismo volumen final y mantener a temperatura ambiente durante 60 min. Utilizar un grupo de dos animales, por lo menos, para cada mezcla. Inyectar a cada uno de ellos, por va subcutnea, el volumen escogido de la mezcla correspondiente. Observar los animales inyectados durante 96 h y anotar cada da el grado de ttanos desarrollado en cada grupo de animales. Segn los resultados obtenidos, escoger las mezclas apropiadas para el ensayo definitivo. Ensayo definitivo. Preparar una serie de mezclas de la disolucin de la toxina de prueba y de la antitoxina a examinar, de forma que el volumen escogido contenga una dosis de prueba de la toxina y una cantidad variable de la antitoxina, que d lugar a una serie en la que la cantidad de antitoxina contenida en cada tubo no difiera de la del siguiente en ms de un 20 por ciento, tratando de asegurar que el punto final esperado, basndose en los datos del ensayo preliminar, est comprendido en el intervalo de cantidades utilizado. Preparar otras mezclas con la misma cantidad de toxina de prueba y una cantidad variable de la disolucin de la preparacin de referencia, de forma que la concentracin media sea 0,1 U.I., para verificar la dosis de prueba de la toxina. Diluir las mezclas con el lquido apropiado para alcanzar el mismo volumen final. Dejar reposar a temperatura ambiente durante 60 min y utilizando un grupo de al menos 2 animales por cada mezcla, inyectar a cada uno de ellos por va subcutnea el volumen escogido de la mezcla correspondiente. Observar los animales durante 96 h y anotar cada da el grado de ttanos desarrollado en cada grupo de animales. La mezcla problema que contiene 0,1 U.I. en el volumen escogido es la que provoca la parlisis tetnica en el mismo, o casi el mismo, nmero de animales que la mezcla de referencia que contiene 0,1 U.I. en el volumen escogido. Repetir la determinacin al menos otra vez y calcular la media de todos los resultados significativos. El ensayo slo es vlido si el resultado obtenido con la preparacin de referencia no difiere en ms de un 20 por ciento de los resultados esperados.

Las Normas generales (1) son aplicables a todos los textos y monografas

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Los lmites de confianza estimados (P = 0,95) son los siguientes: 85 por ciento y 114 por ciento cuando se usan 2 animales por dosis, 91,5 por ciento y 109 por ciento cuando se usan 3 animales por dosis,

REAL FARMACOPEA ESPAOLA, 3. edicin


93 por ciento y 108 por ciento cuando se usan 6 animales por dosis. ETIQUETADO La etiqueta indica si se trata de un suero en bruto o concentrado.

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