ESPECTROFOTOMETRA.

La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin visible colorimetra!, ultravioleta, infrarro"a.

MTODOS ESPECTRO ANALITICOS

#n mtodo analtico, depende del sistema qumico observado y de la calidad de los instrumentos utilizados para observarlo. La cantidad de ruido presente en un sistema qumico y$o instrumental determina la concentracin de analito ms peque%a que puede medirse con e&actitud, y tambin fi"a la precisin de la medida a concentraciones ms grandes. 'onforme las concentraciones disminuyen (acia el nivel de traza o las fuentes de se%ales se tornan dbiles, el problema de distinguir las se%ales respecto al ruido se (ace cada vez ms difcil, ocasionando una disminucin en la e&actitud y la precisin de las medidas. La capacidad de un sistema instrumental para discriminar entre se%ales y ruido se e&presa, usualmente como la relacin seal-ruido: S$) * amplitud media de la se%al $ amplitud media del ruido +arios parmetros permiten caracterizar una medida o un mtodo analtico, 1. El lmite de deteccin mnimo, S, se define como la razn de cambio en la respuesta del instrumento al cambiar el correspondiente estmulo, concentracin, temperatura, masa, etc, por e"emplo, S = dG/dC donde - * Se%al de salida, ' * 'oncentracin del analito La sensibilidad de un mtodo analtico, S, se define como la endiente, m, de la cur!a de calibracin, ya que sta define la razn de cambio de la propiedad medida por unidad de concentracin. .ara los mtodos espectrofotomtricos, S = mcal = " #/ " C de la curva de calibracin /bsorbancia vs. 'oncentracin. La sensibilidad tambin puede e&presarse en trminos de concentracin como, S = $.$$%%/ mcal relacin cuyas unidades corresponden a concentracin. 0l valor 1.1122 es la absorbancia que corresponde a la mnima diferencia medible con precisin 3 4 * 5.16 4 ! en instrumentos con escala de 6 4 entre 1.1 y 511.1 7 una absorcin de 56 corresponde a 1.1122 unidades de absorbancia, aplicando, / * log 8511 $ 51196 absorcin! : * log 8511 $ 51195!: * 1.112;< #na respuesta no lineal en la grfica de / vs ' indica un cambio en el valor de la sensibilidad en funcin de la concentracin. 'onforme la concentracin del analito se apro&ima a cero, la se%al desaparece dentro del ruido y se rebasa el lmite de deteccin. &- El lmite de deteccin mnimo ('"( la concentracin mnima detectable es un parmetro estadstico que (a sido muy controvertido. 3iferentes autores (an dado diversas definiciones y metodologas para su determinacin e&perimental. /ctualmente, algunos autores lo definen como la cantidad o concentracin mas e)uea del analito )ue roduce una seal

*' si+nificati!amente diferente de la seal del ruido de fondo *b. /nalyst, 5=>?,112,5==9@1=! 0l criterio utilizado para que la concentracin mnima detectable sea distin+uible con certe,a significativamente diferente o estadsticamente diferente! del ruido de fondo es que la diferencia entre la seal del analito, de concentracin muy ba"a, y la seal de los blancos sea i+ual a tres !eces la des!iacin estandar de la seal de los blancos , utilizados para medir el ruido de fondo. 0s decir que, en donde AL es la seal lmite, obtenida para la concentracin mnima detectable de analito, Ab es la se%al promedio de los blancos, y s b es la desviacin estndar de las lecturas del blanco. 0&perimentalmente, el lmite de deteccin se determina involucrando todos los factores que afectan la medida y se define , en general, para obtenerlo en unidades de concentracin como, '" = -sb / mcal ba.as concentraciones 3onde, sb * desviacin estndar de los blancos, mcal es la pendiente de una curva de calibracin del sistema, preparada a muy ba"as concentraciones. 0ste criterio es recomendado por B#./'. /plicado a los mtodos espectrofotmtricos, entonces, sb * desviacin estndar de los blancos en absorbancia y mcal pendiente de la curva de calibracin / vs '! en unidades de /bsorbancia$'oncentracin, por lo tanto, al calcular la relacin el lmite de deteccin se obtiene en unidades de concentracin. Ctros autores, utilizan para calcular el lmite de deteccin, la siguiente e&presin,

0n donde ' nominal es la concentracin del patrn de ba"a concentracin y ' promedio corresponde al promedio aritmtico, de las concentraciones (alladas e&perimentalmente por interpolacin despus de interpolar la absorbancia en una curva de calibracin!, de por lo menos diez replicas de la solucin de ba"a concentracin. 0ste criterio aunque no lo recomienda B#./' es muy utilizado en diferentes laboratorios. -- El lmite de deteccin m/0imo: Se define como la m&ima concentracin de un analito que se puede analizar. -eneralmente, lo que ocurre, es que las soluciones se (acen tan concentradas, que en el caso de los mtodos espectrofotomtricos, toda la luz es atrapada por el analito y tenemos una situacin equivalente al a"uste del 1 6 de transmitancia. 0n este caso, el detector no diferencia dos soluciones de concentraciones altas. La determinacin queda limitada a concentraciones menores del valor de lmite de deteccin m&imo, pero en este caso, a diferencia del lmite de deteccin mnimo, el problema se soluciona fcilmente mediante una dilucin adecuado. 0n el caso del lmite de deteccin mnimo, las soluciones son concentrar la muestra o usar otra tcnica con lmite de deteccin menor. 0l lmite de deteccin m&imo, se puede obtener de la parte superior de la curva de Dingbom, como se ver ms adelante.

%-'mite de cuantificacin, 'orresponde a la cantidad o concentracin del analito a partir de la cual es confiable realizar determinaciones cuantitativas y se define como, 'mite de cuantificacin = '1 = 1$s b / m cal ba.as concentraciones 2- 'a recisin de una medida o de un mtodo analtico tambin se determina por un ar/metro estadstico que indique la dis ersin de las medidas con relacin al !alor medio la mediana o la moda de la medida realizada. -eneralmente se e&presa por la des!iacin media o des!iacin est/ndar. 0n los mtodos espectrofotomtricos se determina tanto la precisin del instrumento como la del mtodo en general.. La precisin del instrumento se define entonces por el error instrumental o error fotomtrico " 3. 0&perimentalmente se obtiene midiendo la transmitancia de unas 519@1 porciones de una solucin y calculando la desviacin media de esas mediciones. 'ada medida debe incluir las operaciones de vaciado, llenado y colocacin de la celda en el porta celdas, as como el a"uste del 1.16 4 con el obturador! y del 5116 4 con el disolvente puro. <9 0l error fotomtrico o instrumental que indica la repetibilidad de las lecturas en un espectrofotmetro es comn tomarlo como, " 4 * &S 3- 3 romedio / n , el doble de la sumatoria de las desviaciones de las lecturas de 4 con respecto a la transmitancia promedio 4 , en valor absoluto, dividido entre el nmero de datos, n. Sobre la determinacin de la precisin del mtodo analtico se comentar posteriormente. La calidad de las medidas, como se observa, depende del ruido de fondo, ya sea del ruido originado por los componentes del instrumento o ruido instrumental o el ruido originado or la matri, de an/lisis del sistema )umico. Las principales fuentes de ruido instrumental asociados a dispositivos elctricos o electrnicos en estado slido son, - 4uido trmico, originado por el movimiento trmico de los electrones en las resistencias u otros elementos resistivos de un circuito elctrico. Su magnitud se calcula por, 5rms = 6 %734 " f (1/& 3onde 5rms es el ruido medio cuadrtico en el volta"e, dentro de una banda de frecuencias 3 f, E constante de Foltzmann 5.;>&51 95< erg $ grado! ,4 temperatura absoluta. 9 4uido de dis aro o de +ol eteo, tiene origen cada vez que una corriente transfiere electrones u otras partculas cargadas a travs de uniones o cuando los portadores de carga atraviesan las uniones n9p, o llegan a la superficie de los electrodos. Su magnitud se calcula por: irms = 6&8e" f (1/& , 3onde i rms es la fluctuacin de la corriente media cuadrtica relacionada con la corriente media B, e es la carga del electrn 5.<&51 95= coulombs y 3 f el anc(o de la banda de frecuencia considerado. - 4uido de ar adeo o fluctuacin , Su magnitud es inversamente proporcional a la frecuencia de la se%al observada, se denomina ruido 1/f. Su magnitud es importante para frecuencias menores que 511 Gz. 0&iste otro tipo de ruido que es el ambiental el cual implica la transferencia de energa desde los alrededores (asta el sistema de medicin. Las fuentes

comunes son, campos elctricos y magnticos, producidos por las lneas de transmisin de potencia a <1Gz y sus correspondientes armnicos7 energa radiante refle"ada, vibraciones mecnicas y las interacciones elctricas entre los diferentes instrumentos. 0l ruido instrumental se mide por la desviacin estndar de la se%al producida por los blancos, razn por la que este parmetro aparece en la determinacin del lmite de deteccin.

METODO COLORIMTRICOS
Fotometra. 3entro de los mtodos colorimtricos, un gran nmero de determinaciones que se realizan (abitualmente en el laboratorio, utiliza medidas de energa radiante, ya sea emitida, absorbida o refle"ada. 0stas medidas se determinan a travs de tcnicas fotomtricas. Las tcnicas fotomtricas tienen su fundamento en las interacciones de las radiaciones electromagnticas sobre la materia. Radiaciones Electromagnticas .ueden considerarse como un con"unto de corpsculos, llamados fotones, los cuales llevan asociada una onda. La energa de radiacin esta relacionada con la longitud de onda. Las longitudes de onda ms cortas poseen mayor energa que las longitudes de onda ms largas. 3e tal manera que podemos (ablar de un espectro electromagntico constituido por las radiaciones electromagnticas, mismo que se (a dividido en varias regiones, de acuerdo con la longitud de onda H! y la energa. 5. @. ;. 2. I. Dayos A 59511 nm! #ltravioleta 5119;=1 nm! +isible ;=19?11 nm! Bnfrarro"o ?119511 111 nm! Jicroondas 511 1119 5 111 111 nm! MTODO ESPECTROFOTOMETRICO un mtodo espectrofotomtrico para que sea cuantitativo son, Kue el mtodo sea selectivo al analito que se desea analizar. Kue est libre de interferencias que afecten el resultado analtico que las interferencias se puedan controlar. Kue tenga alta precisin y e&actitud. Kue tenga una alta sensibilidad y Kue el lmite de deteccin corresponda a una concentracin ba"a. 0&perimentalmente para el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico, despus de optimizar las condiciones qumicas del sistema pG, temperatura, control de interferentes, concentracin adecuada de reactivos, solvente apropiado, proteccin a la luz para evitar reacciones fotoqumicas, etc.! que

garanticen que se tiene la especie de inters en condiciones adecuadas para la medida, se establecen los siguientes parmetros, 59'on+itud de onda analtica, Se escoge mediante el registro y$o la observacin de la curva espectral o espectro de la sustancia que indicar si es adecuado tomar la longitud de onda de m&ima absorcin u otra banda caracterstica de la sustancia como longitud de onda para realizar las medidas, la longitud de onda escogida se conoce como longitud de onda analtica. @9 8nter!alo timo de concentraciones , Se debe traba"ar, en lo posible, con concentraciones que permitan que se cumpla la ley de Feer, con el fin de obtener una curva de calibracin que tenga una relacin lineal. .ara obtener el intervalo ptimo de concentraciones primero se construye la cur!a de 4in+bom, que consiste en construir una grfica de absortancia 61$$- 93( !s. l+ Concentracin. Los datos se obtienen preparando una serie de soluciones patrn del analito, que cubran una variacin de por lo menos dos rdenes de magnitud de concentracin de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de onda analtica escogida. .ara la mayora de los sistemas la curva de Dingbom corresponde a una curva en forma de S. La parte lineal de esta grfica permite obtener el intervalo de concentraciones ptimo o el intervalo que presentara una relacin lineal entre absorbancia y concentracin. 0n esta grfica, los cruces de la parte recta la intermedia!, con la parte ba"a y con la parte alta, pueden servir para determinar un valor para los lmites de deteccin mnimo y m&imo, respectivamente. ;9 Cur!a de Calibracin, 'on los datos de la parte recta de la curva de Dingbom se construye la curva de calibracin #bsorbancia 6 en las ordenada ( !s. Concentracin 6en la abcisa( previo a.uste de los datos or mnimos cuadrados que incluyen el punto 1.1, 1.1111! revisando que el coeficiente de correlacin sea estadsticamente si+nificati!o . La grfica de la recta de calibracin debe incluir los puntos e&perimentales. La recta a.ustada tambin se conoce con el nombre de cur!a de traba.o. 29 Cur!a de Cra:ford, 'on todos los datos obtenidos para la curva de Dingbom, se calcula el error analtico por unidad de error fotomtrico, y se construye la curva del error para el sistema de inters, previa determinacin e&perimental del error fotomtrico o instrumental. Si no se conoce 3 3, entonces solo se puede obtener 3 C/C(/" 3. I9 Sensibilidad del mtodo analtico , Se calcula la sensibilidad del mtodo de la pendiente de la curva de calibracin y se e&presa como se indic anteriormente. 'mite de deteccin, Se preparan, por lo menos, diez soluciones del blanco de procedimiento, se leen las transmitancias o absorbancia respectivas y se calcula como se indic anteriormente. ;recisin del mtodo. Carta de dis ersin, La precisin indica la dispersin de las medidas o la variabilidad del mtodo. La precisin se mide mediante un

parmetro estadstico de dispersin, generalmente se utiliza la desviacin estndar, S: S = <= 6 *- * romedio(& /6 n -1(> 5$@ donde * es la variable medida concentracin, absorbancia, etc., * romedio el valor medio de la variable medida y n el nmero de medidas o datos. #n valor peque%o de desviacin estndar con relacin al valor medio, indica que las medidas presentan poca dispersin o que son precisas. 0n muc(os casos, se observa si todos los datos de una serie de medidas caen entre el valor medio y ms o menos dos desviaciones estndar, * romedio ? &S, si es as, se dice que el mtodo tiene una precisin del =I 6. 0l procedimiento que se sigue para obtener los datos que permitan el calculo de la desviacin estndar en concentracin, se ilustra a continuacin, Se preparan, por lo menos, diez soluciones patrn del analito de la misma concentracin concentracin que produzca una transmitancia cercana a ;?.16! si+uiendo todos los asos del rocedimiento , se lee su transmitancia, se calcula la absorbancia para cada solucin, se interpolan los valores en la curva de calibracin y se obtienen las concentraciones respectivas. 'on las concentraciones (alladas se obtiene el !alor romedio de concentracin @ la des!iacin est/ndar, S, que corresponde a la medida de la dispersin de los datos. Se construye la carta de dis ersin de los datos y se calcula el coeficiente de !ariacin del mtodo as, 6 Coeficiente de !ariacin = 6des!iacin est/ndar / !alor medio( Fotometra de Absorcin Ku sucede cuando las molculas absorben o emiten luzL .or qu diferentes sustancias absorben radiacin de slo cierta energa especfica, o frecuencia o longitud de onda, en las diferentes zonas del espectro electromagntico o por qu una sustancia permite la transmisin de luz de ciertas longitudes de onda o energa mientras otras energas o longitudes de onda son absorbidas en forma selectivaL 'mo se produce y qu efectos tiene sobre las sustancias la interaccin del campo elctrico y$o magntico de la radiacin sobre la materia que a su vez esta constituida por partculas que tambin generan o poseen campos elctricos y$o magnticosL Ku sucede con la energa de tomos y molculas cuando absorben o irradian luz de una cierta frecuencia o energaL Las diferentes observaciones realizadas, a travs de muc(os a%os, desde diferentes campos de la ciencia (an llevado al planteamiento de diferentes modelos y varias teoras para responder el fenmeno de la absorcin y emisin de luz por tomos y molculas. /lgunas teoras (an sido rebatidas porque los (ec(os e&perimentales las contradicen, otras se (an mantenido y confirmado porque los (ec(os e&perimentales o son e&plicados por ellas o la confirman. 0l conocimiento actual, tanto terico como e&perimental indica que la absorcin y emisin de luz por parte de las sustancias se origina en la estructura misma de las molculas y de los tomos. 0l tama%o, la forma, la fle&ibilidad de las molculas, la distribucin de los electrones en tomos y molculas, es decir la estructura de la sustancia origina la especificidad en la radiacin absorbida por ellas o emitida por ellas. La es ectrosco ia es el campo de la ciencia que estudia los espectros de las sustancias y la relacin entre la absorcin y$o emisin de luz con la estructura de la materia. Si se observa absorcin de luz se denomina espectroscopia de

absorcin y si se observa emisin de luz, espectroscopia de emisin. Segn la zona del espectro utilizada, se clasifica como, 0spectroscopia Jossbauer o de rayos g , de rayos A, espectroscopia ultravioleta, visible, infrarro"a, de microondas, de resonancia spin electrn, de resonancia magntica nuclear, etc. 3entro de la fotometra de absorcin, uno de los aparatos ms utilizados en la determinacin de las concentraciones de los analitos es el espectrofotmetro7 que es un instrumento que utiliza medidas de absorcin de las radiaciones electromagnticas. /dems ste ser nuestra principal (erramienta de traba"o, ya que en l se (arn las lecturas de absorbancia para la determinacin de las concentraciones de los diferentes analitos a determinar durante el semestre. Las determinaciones por espectrofotometra requieren que se lleve a cabo previamente una reaccin qumica especfica que varia segn el analito a determinar. Los productos finales de esta reaccin son los que se cuantifican utilizando la lectura de la absorbancia de la muestra, as como la de estndares conocidos 'alibradores!. Las determinaciones en el Laboratorio requieren un control de calidad por lo que es importante obtener los valores de desviacin Standard. 0l principio del 0spectrofotmetro esta basado en la Ley de Lambert9Feer, que relaciona la intensidad de luz incidente y la de la luz transmitida, cuando es atravesada una longitud de onda de un medio que absorbe.

0st basada en la Ley de Lambert9Feer, que relaciona la intensidad de luz incidente y la de la luz transmitida, cuando es atravesada una longitud deonda de un medio que absorbe.

Material para la espectrofotometra Dango de 4raba"o, @119<211 cm95. 3etector 34-S9'sB. 3imetro de apertura variable. Bnterfermetro de sistema /uto4une alineacin dinmica!. .urga continua de 'C@. /ccesorio interno de reflectancia total atenuada, dotado con cristal de MnSe, que permite obtener espectros de infrarro"o de slidos y lquidos en un rango de traba"o de <I19<211 cm95. Librera de espectros. 'elda de gases para anlisis de los gases desprendidos en el analizador termogravimtrico ver foto!.

Espectrofotometro ultravioleta visible 4200

!o"#itu e o" a Mo elo 4200/20 4200/51 4210/20 4210/50 4250/50

E$actitu

A"c%o Co"ce"traci&"'RS e 2(2 ba" a

325-1000 +/- 0.8% T mm 200-1000 +/- 0.8% T mm

5 nm 5 nm

Si Si Si Si Si

320-1000 +/5 nm nm 0.004A@0.5A 190-1000 +/5 nm nm 0.004A@0.5A 190-1000 +/5 nm

nm Espectrofotometro visible 4)00

0.004A@0.5A

!o"#itu E$actitu e o" a

A"c%o Co"ce"traci&" e 'RS 2(2 ba" a

Mo elo 4100 4110 RS 4110 UV 360-1000 +/- 2% T mm 330-1000 +/- 2% T mm 200-450 +/- 1% T mm 8 nm 8 nm 6 nm No Si Si

Espectrofotometro *+,+-S co" barri o 44).

E$actitu !o"#itu e o" a +/0.002A@0.5A e

A"c%o Co"ce"traci&"'RS e 2(2 ba" a

200-1100 nm

2 nm

Si

Espectrofotometro *+,+-S

oble %a/. 44)0

A"c%o

e ba" a

Co"ce"traci&"'RS 2(2

!o"#itu

e o" a 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 y 5.0 nm Si

190-900 nm

NSe refiere al mtodo qumico cuantitativo de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracinL A( Atodo de la es ectrofotometra B) Mtodo analtico C) Mtodo de la absorcin D) Mtodo calorimtricos C) Mtodo Lambert9Feer NSe define como la m&ima concentracin de un analito que se puede analizarL A) El lmite de deteccin m/0imo B) El lmite de deteccin mnimo '! El lmite de deteccin mnimo D) Lmite de cuantificacin E) La precisin de una medida 'ampo de la ciencia que estudia los espectros de las sustancias y la relacin entre la absorcin y$o emisin de luzL /! La es ectrosco ia F! La espectrofotometra '! La fonometra 3! La espectrofotometra analtica 0! La espectrofotometra de absorcin N'mo se le denomina a la relacin entre la absorcin y$o emisin de luz con la estructura de la materiaL A) La es ectrosco ia F! La espectrofotometra '! La fonometra 3! La espectrofotometra analtica 0! La espectrofotometra de absorcin N0s uno de los aparatos ms utilizados en la determinacin de las concentraciones de los analitosL /! Espectrofotmetro F! 'alibradores '! 0spectroscopia 3! Ootoqumicas 0! 'alculador de e&actitud NSe escoge mediante el registro y$o la observacin de la curva del espectroL /! 'on+itud de onda analtica F! Bntervalo optimo '! 'urva de calibracin 3! Curva de Crawford 0! Jtodo analtico

N'ul es la ley que relaciona la intensidad de luz incidente y la de la luz transmitidaL A) Ley de lambert- eer B) Ley de crawford '! Ley de Feer 3! Ley de la espectrofotometra 0! Ley de la absorcin de luz N0s un con"unto de corpsculos llamados fotones, los cuales llevan asociada una ondaL /! Radiaciones Electromagnticas F! 0spectrofotometrico '! Cndas largas 3! Cndas cortas 0! Ootones N)ombre que recibe el instrumento para determina tanto la precisin del instrumento como la del mtodo en generaL /! Error instrumental o error fotomtrico F! Ruido intomental '! Sistema qumico 3! +alor medio 0! 0rror de calculo N4ipo de ruido que cada vez que una corriente transfiere electrones u otras partculas cargadas a travs de unionesL /! 4uido de dis aro o de +ol eteo F! Ruido trmico '! Ruido de parpadeo o fluctuacin 3! Duido electromagntico 0! Duido de ondas