Pagina 872, Voet. Captulo 24.

Replicacin, reparacin y recombinacin del DNA Arthur Kornberg y la DNA polimerasa I Al igual que muchos de sus contemporneos, en los aos de la gran depresin, Arthur Kornberg ingres en la Facultad de Medicina debido a la falta de trabajo en la enseanza o la industria. Luego, sirvi en la Guardia Costera de los Estados Unidos como mdico en un buque, pero rpidamente se dio cuenta de que se adaptaba mejor al laboratorio que al mar. Cuando comen su trabajo en los National Institutes of Health en 1942, los estudios clsicos de nutricin y vitaminas dieron paso a la nueva ciencia de la enzimologa. Luego de purificar la aconitasa a partir de corazones de rata, Kornberg afirm que encontraba que las enzimas eran fascinantes. Compar la purificacin de una enzima con el ascenso a una montaa sin gua, con el premio de tener la vista desde arriba y la satisfaccin de ser el primero all. Kornberg pas seis meses en el laboratorio de Cori y en 1948, mientras trabajaba en enzimas, se involucr en los cofactores nucleotdicos. Descubri que la enzima nucletido pirofosfatasa cataliaba una reaccin en la que un nucletido se incorporaba en una coenzima. Nicotinato ribonucletido + ATP NAD+ + PPi

Luego, Kornberg comenz a buscar una enzima que pudiera ensamblar muchos nucletidos para poder hacer una cadena de cidos nucleicos. Algunas personas asumieron por error que Kornberg estaba inspirado en la publicacin de Watson y Crick de 1953 para buscar la DNA polimerasa. De hecho, Kornberg estaba siguiendo sus instintos como enzimlogo y su curiosidad se originaba a partir de su familiaridad con otras enzimas, como la glucgeno fosforilasa, que es capaz de sintetizar el polmero de glucgeno in vitro. Kornberg tambin experiment con las enzimas involucradas en la sntesis de los fosfolpidos, que al igual que el DNA, contiene enlaces fosfodister ( abandon esta lnea de investigacin porque no le gustaba trabajar con molculas grasosas). Para purificar una enzima que sintetice DNA, Kornberg comenz con los extractos de las bacterias E. coli, de crecimiento muy rpido, que reemplazaron las levaduras de crecimiento ms lento usadas habitualmente en el laboratorio. Agregaba timidina radiactiva a los extractos y meda la produccin de DNA radioactivo. Lamentablemente la incorporacin de timidina era en extremo lenta, pero el uso de la timidina fosfato era mejor y, ms an, la timidina trifosfato (TTP) lo haca mejor. Kornberg tambin descubri que la cantidad de DNA recientemente sintetizado aumentaba cuando se inclua en la mezcla de reaccin una pequea cantidad de DNA. Esto no era del todo inesperado, dado que Kornberg ya saba que una pequea cantidad de glucgeno serva como cebador para la sntesis de ms glucgeno. Sin embargo, al principio, Kornberg crea que el DNA que agregaba a la mezcla de reaccin actuaba como sustrato para las nucleasas que estaban presentes en los extractos celulares y de esta forma protegan de la degradacin el DNA radiactivo recientemente sintetizado. Posteriormente, se dio cuenta de que el DNA agregado funcionaba como molde para la sntesis de una hebra nueva de DNA y por medio de su degradacin parcial tambin le proporcionaba a la otra hebra los nucletidos no radioactivos requeridos para la

polimerizacin. La idea de un molde fue extraa para ese momento tanto para la mayora de los enzimlogos como para los otros bioqumicos, pero los bilogos parecan ms receptivos al papel de un molde en la sntesis del DNA. Por su descubrimiento y la caracterizacin de la DNA polimerasa (luego conocida como DNA polimerasa I o Pol I) Kornberg recibi en 1959 el Premio Nobel en fisiologa o medicina. An con la Pol I purificada en la mano, Kornberg se encontr con la necesidad de probar que el producto de la reaccin era biolgicamente activo. En consecuencia, utiliz la Pol I para sintetizar el DNA del bacterifago X174 de 5 386 pb sobre moldes de DNA viral, y luego la DNA ligasa para cerrar las molculas de DNA sinttico y produir DNA circular que fuera infeccioso. Para desilusin de Kornberg, la prensa popular no comprendi su trabajo y afirm que era la creacin de vida en un tubo de ensayo. Posteriormente Kornberg confes que estaba asombrado por la virtuosidad de la DNA polimerasa que haba aislado a partir de E. coli. La enzima poda sintetizar una cadena de miles de nucletidos con una exactitud que exceda las predicciones qumicas. Sin embargo, durante la dcada de 1970, los estudios genticos y otras evidencias indicaron claramente que otras protenas eran las responsables de la replicacin del DNA en E. coli y pronto se descubrieron y caracterizaron las DNA polimerasas II y III. En las dos dcadas siguientes, Kornberg centr su esfuerzo en la determinacin del mecanismo de replicacin del DNA. De hecho, muchos de los cientficos lderes en este campo se entrenaron en su laboratorio.

Kornberg A. Active center of DNA polymerase. Science 1969; 163, 1410-1418. Kornberg A. For Love of Enzymes: Thr Odyssey of Biochemist, Harvard University Press, 1989. (Una autobiografa cientfica).