Analytisch Chemisches Praktikum II WS 2013/2014

Analytisch Chemisches Praktikum II

WS 2013/2014

Allgemeine Unterlagen und Arbeitsvorschriften

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Bachelor-Arbeiten
Am Institut fr Analytische Chemie sind auch in diesem Semester wieder eine Reihe von Bachelor-Arbeiten zu vergeben. Arbeitsbeginn ist jederzeit mglich. Einige zur Auswahl stehende Themen sind unter anderem:

Neue Extraktionsmethoden fr Polymeradditive Untersuchungen zur Migration von Kunststoffadditiven Bestimmung synthetischer Komplexbildner in Wssern
Bei Interesse kontaktieren Sie bitte: o.Univ.Prof. DI Dr. Wolfgang Buchberger a.o. Univ. Prof. Mag. Dr. Christian Klampfl DI Dr. Markus Himmelsbach

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Analytisch Chemisches Praktikum II 2013/2014

Erster Praktikumstag: Letzter Praktikumstag: Praktikumszeiten:

Mo, 02.12.2013 Mi, 22.01.2014 Mo Mi, vormittag + nachmittag

Programm:

Angebotener Zeitraum/

Aufgabe
Ionenselektive Elektrode AAS

Betreuer/in 02.12. 11.12. Maringer 02.12. 11.12. Beimann

GC

02.12. - 11.12. Hlzl

IC

16.12. 15.01. Klampfl

HPLC

16.12. 15.01. Reisinger/Himmelsbach

GC-MS

07.01. - 22.01. Kreisberger/Sternbauer

CE

07.01. 22.01. Buchberger T

nach Absprache sind auch Termine am Do bzw. Fr mglich. Die Jnner-Termine bei Ionenchromatographie, HPLC sind vorrangig fr Studierende der Studienrichtung Biological Chemistry reserviert.

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Allgemeine Richtlinien
1) Der Termin fr die praktische Arbeit Termin ist in die auf dem Gang angebrachte Liste einzutragen. Um eine zeitgerechte Absolvierung des Praktikums fr alle Teilnehmenden zu ermglichen mssen pro Termin 3 Studierende eingetragen sein. 2) Die Stichwortlisten fr die kurze Besprechung direkt vor Absolvierung der Beispiele befinden sich vor den jeweiligen Arbeitsvorschriften. 3) Das Protokoll der durchgefhrten Arbeit ist innerhalb von 2 Wochen dem/der Betreuer/in vorzulegen. notwendige Korrekturen sind wiederum innerhalb von maximal 2 Wochen durchzufhren. Bei Nichteinhaltung der Fristen wird ein Minuspunkt vergeben. 4) Es drfen maximal 2 Protokolle ausstndig sein. Letzter Termin fr die erstmalige Abgabe von Protokollen ist der 31.01.2014. Spter abgegebene Protokolle werden nicht mehr bercksichtigt! 5) Die Abschlubesprechung (bis dahin mssen auch alle Protokolle besttigt und angenommen sein) muss bis 21.03.2014 bei Prof. Buchberger abgelegt werden. Wird dieser Termin ohne ausreichende Begrndung nicht eingehalten wird das Praktikum nicht beurteilt! 6) Fr jede negative Besprechung, negativ beurteilte praktische Arbeit und jedes negativ bewertete Protokoll wird ein Minuspunkt vergeben. Bei Erreichen von insgesamt 5 Punkten gilt das Praktikum als negativ bewertet und muss wiederholt werden.

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Bestimmung von Calcium in Mineralwasser mittels AAS

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel AAS:

Wellenlngenbereiche UV, vis; Prinzip der UV Spektroskopie (gilt auch fr AAS); Prinzip der AAS; AAS Spektrometer, Aufbau; Ablauf bis zur Atomisierung in der Flamme; Interferenzen (spektrale, nichtspektrale) bei Flammen-AAS; Quantifizierung bei Flammen-AAS; Standardadditionsverfahren;

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Bestimmung von Calcium in Mineralwasser mittels AAS

1. Allgemeines Die quantitative Bestimmung erfolgt durch externe Kalibrierung und durch Standardaddition. 2. Arbeitsstandards Standardlsungen der Konzentrationen 1, 2, 3, 4 und 5 mg/l werden durch Verdnnen der vorhandenen Calciumstammlsung (c = 1000 mg/l) mit 18 M Wasser hergestellt (in 100ml Messkolben). Jedem Standard werden vor dem Auffllen mit Wasser 1ml Puffer (10g/l Cs-chlorid/100g/l La-chlorid-Puffer) zupipettiert. 3. Probenvorbereitung Das Mineralwasser wird im Ultraschallbad entgast und mit 18 M Wasser verdnnt. Die Probelsung wird ebenfalls mit 0.5 ml Cs/la-chlorid-Puffer versetzt und anschlieend mit Wasser auf 50ml aufgefllt. Zustzlich wird eine Verdnnung ohne Zugabe von Puffer hergestellt. Das Verdnnungsverhltnis wird am Arbeitstag vom Betreuer bekannt gegeben. Diese Probenlsung wird zur Bestimmung verwendet. 4. Herstellen der aufgestockten Probelsungen Zu 5 ml Probenlsung (Verdnnung ohne Puffer) in einem 10 ml Messkolben werden 1, 2, 3 und 4 ml des 5 mg/l Arbeitsstandards pipettiert und nach Zugabe von 0.1 mL Cs/la-chlorid-Puffer mit 18 M Wasser aufgefllt. Zustzlich wird eine Lsung ohne Aufstockung hergestellt. 5. Messung der Lsungen Die Kalibrierlsungen werden mit steigender Konzentration vor der Probelsung vermessen. Je Konzentration und Probe sollten mindestens 3 Messungen durchgefhrt werden. Die vorbereiteten aufgestockten Lsungen werden beginnend mit der nicht aufgestockten Lsung in ansteigender Reihenfolge vermessen. Je Aufstockung sollten zumindest 3 Messungen durchgefhrt werden. Gerteparameter:
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Ca-Lampe, 20 mA Strom, Wellenlnge 422.7 nm, Spalt 0.7 nm; Integrationszeit 3s

6. Auswertung Die Auswertung erfolgt ber die Berechnung der Ausgleichsgeraden der gemittelten Absorptionen. Als Ergebnis der Probe ist der Mittelwert und das Vertrauensintervall (95% Wahrscheinlichkeit) an Ca in mg/l anzugeben (z.B.: 100 3 mg/l (95;3))

7.Protokoll Im Protokoll sollten folgende Punkte enthalten sein: eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten (Herstellung der Kalibrierlsungen) alle Messwerte (auch Ausreier) Mittelwerte und relative Standardabweichungen Vergleich externe Kalibrierung/Standardadditionsmethode der Graph der Kalibriergerade (gemittelte Absorptionen gegen Konzentration, incl. Ausgleichsgerade und Bestimmtheitsma) eine Grafik der Empfindlichkeiten (Absorption pro tatschlich gemessener Konzentration gegen Konzentration) eine Grafik der Residuen (Differenz zwischen gemessener und aus der Kalibriergeraden berechneten Absorption gegen Konzentration)

Die Protokolle mssen binnen 2 Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung von Terpenen mittels GC

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel GC:

GC System, Aufbau (Injektor; Sule Detektor); GC Trennsulen, welche sind fr welche Analytklassen geeignet; GC Parameter; Bestimmung von Totzeit, Sulenvolumen, Sulenfluss und Split;

GC Parameter aus Chromatogramm (Retentionsindex, Bodenzahl..); GC Detektoren; Funktionsprinzip; welcher ist fr welche Analytklassen geeignet;

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Bestimmung von Terpenen mittels GC

1. Allgemeines Im Rahmen dieses Beispiels sind drei unterschiedliche Aufgabestellungen zu erledigen: Bestimmung von Totzeit, Sulenvolumen, Sulenfluss und Split Herstellung einer Kalibrierlsung und Berechnung der relativen

Responsefaktoren Gehaltsbestimmung von Terpenen in einer realen Probe (Feststoff, Duftl) in Bezug zu einem internen Standard

2. Gaschromatographie Folgende Gerte/parameter werden fr die gaschromatographischen Bestimmungen eingesetzt/angewandt:

GC: HP 5890 Series II Sule: HP-5, 30 m x 0,32 mm ID x 0,25 m Filmdicke Detektor: FID Trgergas: Helium Injektortemperatur: 220 C Detektortemperatur: 280 C Temperaturprogramm: 65 C isotherm fr 1 min, dann mit 20 C/min auf 120 C, dann mit 40 C/min auf 280 C, isotherm fr 30 s Injektionsvolumen: 1 l

3. Reagentien Folgende Reagentien werden verwendet:

(1R)-(+)--Pinen, 97 % R-(+)-Limonen, purum > 98 % -Terpinen, 97 % n-Hexan, p.A.

MM: 136,24 g/mol MM: 136,24 g/mol MM: 136,24 g/mol

bp: 156 C bp: 178 C bp: 183 C bp: 69 C

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4. Bestimmung der Totzeit Fr die Bestimmung der Totzeit dies ist die Zeit in Minuten vom Zeitpunkt der Injektion bis zum Signal am Detektor fr eine nicht mit der stationren Phase in Wechselwirkung tretende Substanz wird der erste Peak des Lsungsmittels (nHexan) aus den Chromatogrammen der Kalibrierungen herangezogen. Aus den Sulenangaben wird das Sulenvolumen mit folgender Formel berechnet:
V = r 2 * * L

Sulenvolumen (ml)

r L

Sulenradius (cm) Sulenlnge (cm)

Aus dem Sulenvolumen und der Totzeit wird der Sulenfluss wie folgt ermittelt:
V T0

F=

F T0

Sulenfluss (ml/min) Totzeit (min)

Daraus ergibt sich der Split:

S F

SP =

SP S

Splitverhltnis Splitfluss (ml/min)

Angegeben wird der Split in:

1:SP

5. Bestimmung der relativen Responsefaktoren Jeweils 5 ml der zur Verfgung gestellten Standardlsungen (-Pinen und Limonen in n-Hexan) werden mit 5 ml des internen Standards (ISTD) (-Terpinen in n-Hexan) in einen 25 ml Messkolben gegeben und mit n-Hexan bis zur Marke aufgefllt. Von dieser Lsung wird 1 l injiziert und das Temperaturprogramm gestartet. Dieser Vorgang wird 3 mal wiederholt. Daraus werden mit folgender Formel die entsprechenden Responsefaktoren ermittelt:

RFx =

Mengex * Flche ISTD MengeISTD * Flche x

RFx

Responsefaktor der Substanz x

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6. Gehaltsbestimmung von Terpenen in einer realen Probe Im nchsten Schritt wird die Realprobe vorbereitet. Von festen Proben (Kmmel, Fenchel, Wacholderbeeren,) werden 0,5 1,0 g in ein verschliebares Gef eingewogen, mit ca. 12 ml n-Hexan versetzt und unter gelegentlichem Schwenken 30 40 min stehen gelassen. Die Lsung wird dann ber ein Sulchen mit ca. 0,5 g Florisil gereinigt (Florisil zuerst mit 1 - 2 ml n-Hexan konditionieren) und das Eluat in einem 25 ml Messkolben aufgefangen. Anschlieend wird mit wenigen Millilitern nHexan nachgewaschen und ebenfalls in dem 25 ml Messkolben aufgefangen. Dann werden noch 5 ml der ISTD-Lsung in den 25 ml Messkolben berfhrt und mit nHexan bis zur Marke aufgefllt. Bei flssigen Proben (Duftle) sind die entsprechenden Verdnnungen herzustellen (50 l auf 25 ml), mit 5 ml ISTD-Lsung zu versetzen und mit n-Hexan bis zur Marke aufzufllen.

Von

den

so

erhaltenen

Probelsungen

wird

je

injiziert

und

das

Temperaturprogramm gestartet. Dieser Vorgang wird 3 mal wiederholt. Die in der Probe enthaltene Menge an Analyten ergibt sich wie folgt:

Mengex =

Flche x * MengeISTD * RFx Flche ISTD

7.Protokoll Im Protokoll sollten folgende Punkte enthalten sein: eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten (Herstellung der Kalibrierlsungen) alle Messwerte (auch Ausreier) Mittelwert (in mg/g fr Feststoffe sowie mg/ml fr flssige Proben) und relative Standardabweichung der Graph der Kalibriergerade (gemittelte Absorptionen gegen Konzentration, incl. Ausgleichsgerade und Bestimmtheitsma)

Die Protokolle mssen binnen 2 Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

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Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung von Pestiziden in Honig mittels GC-MS

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel GC-MS:

Aufbau eines Massenspektrometers; Ionenquellen und Ionisation in der GC-MS (EI, CI) Massentrennteile fr GC-MS (Quad, Ionenfalle, TOF); Funktionsweise, Aufbau;

Detektortypen in der MS Definition von Auflsung, Massengenauigkeit; Isotopenmuster;

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Bestimmung von Pestiziden in Honig mittels GC-MS

1. Aufgabenstellung

Die Pestizide Amitraz, Thymol, Brompropylat, Tetradifon und N,N-Diethyl-m-toluamid sind in einer durch Flssig-Flssig-Extraktion aufgearbeiteten Honigprobe mittels GC/MS zu bestimmen.

2. Gerte und Parameter

2.1. Gaschromatograph

Agilent 6890 Sule: Restek Rxi-5ms (30 m x 0,25 mm x 0,25 m) Trgergas: Helium Injektionsvolumen: 1,5 L; splitless Injektionstemperatur: 275 C Temperaturprogramm:

Tabelle 1: Temperaturprogramm der Analyse Rate / C min-1 Temperatur / C 50 15 40 4 110 240 280 Haltezeit / min 1,0 0,0 0,0 3,0

2.2. Detektor

Agilent 5973Network MSD Ionisation: EI, +70 eV Solvent delay: 4,00 min Modus: SIM
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SIM-Programm:

Tabelle 2: SIM-Programm der Analyse Analyt Startzeit / min Thymol 6,70 91, 135, 150 N,N-Diethyl-m-toluamid 7,50 91, 119, 190 2,3,4,5,6-Pentabromethylbenzol (ISTD) Brompropylat 12,40 11,00 180, 487, 500 157, 183, 341 Tetradifon 13,05 159, 229, 356 Amitraz 13,50 132, 162, 293 m/z

3. Chemikalien

Mischstandard, (Analyt) = (ISTD) 10 g/mL (genaue Konzentration wird bekannt gegeben)

ISTD, (ISTD) 10 g/mL (genaue Konzentration wird bekannt gegeben) Natriumcarbonat, p.a. n-Hexan, HiPerSolv CHROMANORM fr die HPLC

4. Durchfhrung

4.1. Kalibrierung

Circa 500 L des Mischstandards werden in ein GC-Vial berfhrt und mit den Parametern aus Punkt 2 analysiert.

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4.2. Analyse einer Realprobe

Circa 2 g Honig werden genau in ein 15 mL Kunststoff-Zentrifugenrhrchen eingewogen und in 6 mL Natriumcarbonatlsung ( c = 0,5 mol/L) durch Schtteln und Ultraschallbehandlung gelst. Nach Zugabe von 100 L ISTD und 4 mL n-Hexan wird 5 min geschttelt und anschlieend fr 5 min bei 4000 U/min zentrifugiert. Circa 500 L der klaren Hexanphase werden in ein GC-Vial berfhrt und mit den Parametern aus Punkt 2 analysiert.

5. Auswertung

Der Mischstandard sowie die Probe werden je dreimal injiziert.

Die Quantifizierung der Analyten erfolgt ber den aus der Kalibrierung ermittelten Responsefaktor.

6. Protokoll

Im Protokoll sollen folgende Punkte enthalten sein:

Eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten Alle Messwerte (auch Ausreisser) Die Mittelwerte und die relativen Standardabweichungen Der Gehalt an detektierter Substanz in der Probe in in ppm (mg kg-1).

Die Protokolle mssen binnen 2 Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03

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6 7 8 9

1,94 1,89 1,86 1,83

2,45 2,36 2,31 2,26

3,14 3,00 2,90 2,82

3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung von Wirkstoffen in Arzneimitteln mittels HPLC

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel HLPC:

LC System, Aufbau; LC Stationre Phasen; welche sind fr welche Analytklassen geeignet; LC Parameter aus Chromatogramm (Retentionsindex, Bodenzahl..); LC Detektoren; Funktionsprinzip; welcher ist fr welche Analytklassen geeignet;

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Bestimmung von Wirkstoffen in Arzneimitteln mittels HPLC

1. Aufgabenstellung Es sollen die Inhaltsstoffe von Medikamenten mittels HPLC getrennt und der Gehalt an Paracetamol, Coffein und Acetylsalicylsure durch externe Kalibrierung bestimmt werden. 2. Herstellung der Kalibrier- und Probelsungen Fr die Quantifizierung von Paracetamol, Coffein und Acetylsalicylsure wird ein Summenstandard mit je 500 mg L-1 der Substanzen hergestellt, wozu die entsprechenden Mengen in Methanol gelst werden (250 mL Messkolben

verwenden). Ausgehend von diesem Summenstandard werden Kalibrierlsungen mit je 10 mg L-1, 50 mg L-1 und 100 mg L-1 der drei Analyte durch entsprechende Verdnnung mit 18 M-Wasser im 50 mL Messkolben hergestellt. Die ausgegebene Probe (eine Tablette) wird in 100 mL Methanol gelst. Diese Lsung ist vor der Analyse im 50 mL Messkolben mit 18 M-Wasser zu verdnnen (Verdnnungsverhltnis wird vom Betreuer bekanntgegeben). Vor der Injektion ist die Probe durch einen Spritzenfilter zu filtrieren. 3. Chromatographie Die chromatographische Bestimmung wird mit folgenden Gerten/Parametern durchgefhrt: Agilent HP 1050 Liquid Chromatograph Trennsule: Stationre Phase: Mobile Phase: L = 100 mm, I.D. = 4,6 mm Phenomenex Luna, RP-18 endcapped (3 m) 35 % Methanol / 65 % Wasser (mit 0.2% Eisessig angesuert); isokratisch Fluss: Injektion: Detektion: 0,7 mL min-1 20 L UV ( = 254 nm)

4. Durchfhrung der Messungen Die Kalibrierlsungen werden mit steigender Konzentration vor der Probelsung vermessen. Von der Probe werden drei Messungen durchgefhrt.
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5. Auswertung Die Auswertung erfolgt ber die Berechnung der Ausgleichsgeraden ber die integrierten Peakflchen. Als Ergebnis der Probe ist der Mittelwert und das Vertrauensintervall (95 % Wahrscheinlichkeit) Wirkstoff / Tablette anzugeben (z.B.: 100 3 mg Paracetamol / Tablette (s;P;n))

6. Protokoll Folgende Punkte sind im Protokoll anzugeben:

Eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten Alle Messwerte (auch Ausreier) Graphen der Kalibriergeraden (Peakflche gegen Konzentration, inkl. Ausgleichsgerade und Bestimmtheitsma) Der Gehalt an detektierter Substanz in der Tablette in mg pro Tablette

Die Protokolle mssen binnen zwei Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung von Chlorid, Nitrat, Phosphat und Sulfat mittels IC

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel IC:

IC System, Aufbau; IC Stationre Phasen; IC Detektoren; Funktionsprinzip; Suppressoren;

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Bestimmung von Chlorid, Nitrat, Phosphat und Sulfat mittels IC

1. Allgemeines Die quantitative Bestimmung erfolgt durch externe Kalibrierung. 2. Arbeitsstandards Zuerst wird in einem 100 ml Messkolben ein Summenstandard welcher ca. 200 mg/l jedes Ions enthlt (genaue Konzentration angeben!) aus folgenden Salzen hergestellt: NaCl, NaNO3, Na3PO4, Na2SO4 (genaue stchiometrische Zusammensetzung und Molgewicht siehe Packung). Die Salze werden in 18 M Wasser aufgelst (Ultraschallbad) und bis zur Marke mit mit 18 M Wasser aufgefllt. Aus dieser Lsung werden Standardlsungen mit 100; 25; 10; 1 mg/l je Ion durch Verdnnen hergestellt (in 100 ml Messkolben). 3. Ionenchromatographie Die ionenchromatographische Bestimmung wird mit folgenden Gerten/Parametern durchgefhrt: DIONEX DX-120 Ion Chromatograph. Trennsule: IonPac AS22-5m, 4 x 250 mm Flussrate: ca. 1 ml/min (genaue Flussrate notieren) Mobile Phase: 4,5 mM Na2CO3/1,5 mM NaHCO3 Injektions Volumen: 25L

Die mobile Phase ist aus Na2CO3 und NaHCO3 (genaue stchiometrische Zusammensetzung und Molgewicht siehe Packung) herzustellen. 4. Messung der Lsungen Die Kalibrierlsungen werden mit steigender Konzentration vor der Probelsung vermessen. Von der Probe werden 3 Messungen durchgefhrt.

5. Auswertung Die Auswertung erfolgt ber die Berechnung der Ausgleichsgeraden ber die integrierten Peakflchen. Als Ergebnis der Probe ist der Mittelwert und das Vertrauensintervall (95% Wahrscheinlichkeit) an Ion in mg/l anzugeben (z.B.: 100 3 mg/l (95;3))
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6.Protokoll Im Protokoll sollten folgende Punkte enthalten sein: eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten (Herstellung der Kalibrierlsungen) alle Messwerte (auch Ausreier) Mittelwert und relative Standardabweichung der Graph der Kalibriergerade (gemittelte Absorptionen gegen Konzentration, incl. Ausgleichsgerade und Bestimmtheitsma)

Die Protokolle mssen binnen 2 Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung von Sstoffen in Getrnken und Nahrungsmitteln mittels CZE

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel CE:

CE System, Aufbau; Elektroosmotischer Fluss; Beschreibung mglicher Injektionsmethoden; Beschreibung mglicher Detektionsmethoden; Einfluss von pH und Ionenstrke; Abschtzung der Migrationsreihenfolge;

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Bestimmung von Sstoffen in Getrnken und Nahrungsmitteln mittels CZE

1. Allgemeines Die Bestimmung von Aspartam und Saccharin in diversen Lebensmitteln erfolgt mittels CZE (Capillary Zone Electrophoresis). Es stehen Standardsubstanzen der beiden Analyte zur Verfgung. Daraus werden die Standardlsungen fr die externe Kalibrierung hergestellt. Zustzlich wird eine Standardaddition durchgefhrt. Zur Korrektur von eventuell auftretenden Migrationszeitverschiebungen und Unterschieden im Injektionsvolumen wird ein interner Standard (ISTD) verwendet. Mit Hilfe der erhaltenen Kalibrierkurven kann auf den Gehalt der Analyte in der Probe geschlossen werden.

2. Elektrophorese Folgende Gerte/Parameter werden fr die elektrophoretischen Bestimmungen eingesetzt/angewandt:

Agilent HPCE 3D Kapillarelektrophorese Kapillare: Spannung: Injektion: Detektion: Trgerelektrolyt: Standards: 75 m Innendurchmesser, Lges = 65 cm, Leff = 56,5 cm +30 kV hydrodynamisch, 50 mbar, 5 s UV direkt, 195 nm 20 mM Borsure pH 9,35 Aspartam, Saccharin (je 5 mg/Tablette in Assugrin),

interner Standard: 4-Methylsalicylsure (Sigma Aldrich)

3. Herstellen der Lsungen Der Trgerelektrolyt wird durch Lsen der entsprechenden Menge Borsure (100 mL Becherglas) in 18 M-Wasser, Einstellen des pH auf 9,35 mit wssriger KOHLsung, anschlieendes berfhren in einen 100 mL Messkolben und Auffllen mit 18 M-Wasser hergestellt.

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Fr die Herstellung des internen Standards werden 50 mg 4-Methylsalicylsure in einen 50 mL Messkolben eingewogen, 20 mL Methanol zupipettiert und mit 18 MWasser zur Marke aufgefllt. Dann eventuell kurz ins Ultraschallbad stellen.

Anschlieend folgt die Herstellung der Stammlsung von Saccharin und Aspartam. In einem 100 mL Messkolben wird eine Tablette (Assugrin), die je 5 mg Aspartam und Saccharin enthlt, in 18 M-Wasser gelst, untersttzt durch Behandlung im Ultraschallbad. Fr die Quantifizierung mittels externer Kalibrierung werden Standardlsungen wie folgt hergestellt: Um Konzentrationen von 5 / 10 / 20 / 40 mg/L zu erreichen werden 2,5 / 5 / 10 / 20 mL der Stammlsung in einen 25 mL Messkolben pipettiert und 0,5 mL interner Standard zugegeben. Abschlieend wird mit 18 M-Wasser bis zur Marke aufgefllt.

Im Falle der Proben werden 3 mL des Getrnks (Verdnnung wird vom Betreuer bekannt gegeben) und 200 L interner Standard in einen 10 mL Messkolben pipettiert und ebenso mit 18 M-Wasser bis zur Marke aufgefllt.

Fr die Quantifizierung mittels Standardadditionsverfahren werden 3 mL Probe mit 200 L internem Standard in einen 10 mL Messkolben pipettiert und mit 18 MWasser bis zur Marke aufgefllt; des Weiteren werden je 3 mL Probe mit je 200 L internem Standard sowie je einmal 2 mL der Stammlsung und einmal 4 mL der Stammlsung in einen 10 mL Messkolben pipettiert und ebenso mit 18 M-Wasser bis zur Marke aufgefllt.

4. Messungen Fr die externe Kalibrierung wird jeder Standard einmal sowie die Probe dreimal gemessen; im Falle der Standardadditionsmethode werden alle 3 Lsungen (Probe / Aufstockung 1 / Aufstockung 2) je einmal gemessen.

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5. Protokoll Im Protokoll sollten folgende Punkte enthalten sein: eine kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten (Herstellung der Kalibrierlsungen) alle Messwerte (auch Ausreier) Mittelwert (in mg/kg fr Feststoffe sowie mg/L fr flssige Proben) und relative Standardabweichung der Graph der Kalibriergerade (gemittelte Absorptionen gegen Konzentration, inkl. Ausgleichsgerade und Bestimmtheitsma) Vergleich externe Kalibrierung / Standardadditionsmethode

Die Protokolle mssen binnen 2 Wochen beim Betreuer abgegeben werden.

Tabelle 1: Studentfaktor t (Freiheitsgrade f; Wahrscheinlichkeit P) f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83 P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82 P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

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Bestimmung des Fluoridgehalts einer Zahnpasta mittels Ionenselektiver Elektrode

Stichwortliste fr die kurze Besprechung vor dem Praktikumsbeispiel Ionenselektive Elektrode:

Aufbau der Fluoridelektrode; Auswertung von Messungen durch Standardaddition; Selektivittskoeffizient; Nikolsky Gleichung

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Bestimmung des Fluoridgehalts einer Zahnpasta mittels Ionenselektiver Elektrode

1. Allgemeines Der Fluoridgehalt einer Zahnpasta (Probennummer im Protokoll angeben) soll mittels ionenselektiver Elektrode (LaF3-Kristallmembranelektrode) bestimmt werden. Die Konzentrationsmessung erfolgt direktpotentiometrisch nach dem Standardadditionsverfahren, wobei die Elektrodensteilheit zuvor extern kalibriert wird. 2. Herstellung der Pufferlsungen Da die Aktivitt der Fluoridionen vom pH-Wert abhngig ist, muss zuerst eine Pufferlsung erstellt werden. Hierzu wird eine 0,16 N Essigsure hergestellt, indem 2,5 ml Eisessig (die Genauigkeit einer Messpipette ist zur Erstellung eines Puffers vllig ausreichend) mit 18 M Wasser auf 250 ml aufgefllt werden. Weiters werden 32,8 g Natriumacetat in einen 2000 ml Messkolben eingewogen, 100 ml der zuvor erstellten 0,16 N Essigsure zugegeben und wiederum mit 18 M Wasser aufgefllt. 3. Herstellung der Standardlsungen Fr die Standardlsungen werden ca. genau (exakte Einwaage genau notieren) 200 mg Natriumfluorid eingewogen und mit Pufferlsung auf 50 ml aufgefllt. Die so erhaltene Standardlsung ist etwa 0,1 M und wird im Folgenden weitere drei Mal je auf ein Zehntel verdnnt (mit Pufferlsung!!!) sodass Standardlsungen mit 10 mM, 1 mM und 0,1 mM resultieren. 4. Probenvorbereitung Pro Teilnehmer werden drei Parallelbestimmungen der Probe durchgefhrt. Hierzu werden jeweils ca. genau 1 g Zahnpasta mittels Kunststoffspritze in einen 100 ml Messkolben berfhrt, wobei darauf zu achten ist dass sich die gesamte Pasta unterhalb der Markierung (vorzugsweise am Boden) des Messkolbens befindet. Danach wird mit Pufferlsung aufgefllt und solange mit Ultraschall behandelt bis eine homogene Suspension erhalten wird (etwa 1 h).

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5. Messung Zuerst erfolgt die Messung der Elektrodensteilheit durch die erstellten FluoridStandardlsungen. Hierzu werden ca. 25 ml Standardlsung in ein 100 ml

Becherglas berfhrt und die ionenselektive Elektrode sowie die Bezugselektrode (Ag/AgCl/KCl) in diese eingetaucht. Die Elektroden werden mit dem mV-Meter E654 Metrohm verbunden. Die Lsung wird mittels Magnetrhrer gerhrt, vor dem Ablesen des EMK-Messwertes wird der Rhrer allerdings ausgeschaltet und der erste konstante EMK-Wert abgelesen. Auf diese Weise kann das oft strende Wechselfeld des Magnetrhrers die Messung nicht beeinflussen. Die Standards werden in Richtung ansteigender Konzentration vermessen.

Zur Messung der Probelsungen werden exakt 25 ml der Probensuspension mittels Vollpipette ins 100 ml Becherglas berfhrt (vor dem Pipettieren nochmals gut schtteln und keinen Schaum in die Pipette saugen). Die Messung der EMK erfolgt wie bei den Standardlsungen. Hat man so den ersten Wert der Probelsung bestimmt E0, werden 200 l der hchstkonzentrierten Standardlsung addiert, kurz gerhrt und neuerlich abgelesen EAdd200. Dieses Verfahren wird weitere zwei Mal wiederholt, sodass EMK-Werte fr 200 l, 400 l und 600 l Standardaddition resultieren. Welcher der aufgestockten EMK-Werte fr die Auswertung verwendet werden soll wird am Praktikumstag vom Betreuer bekanntgegeben.

6. Auswertung und Protokoll Zur Bestimmung der Elektrodensteilheit soll im Protokoll eine Tabelle der Konzentrationen der Standardlsungen mit Logarithmen der Konzentrationen und den zugehrigen EMK-Werten angegeben werden:

Konz. Std. [mM] 100 10 1 0,1

Log c 2 1 0 -1

EMK [mV] -148,3 -90,9 -31,7 30,2

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Weiters ist ein Diagramm mit linearem Ausgleich der erhaltenen Werte darzustellen:
Elektrodensteilheit
40 20 0 -20

EMK [mV]

-40 -60 -80 -100 -120 -140 -160 -1.5

y = -59.4700x - 30.4400 R2 = 0.9997

-1

-0.5

0.5

1.5

2.5

log c

Die Elektrodensteilheit wrde in diesem Fall also -59,47 mV betragen.

Die Konzentration der Probensuspension welche in das Becherglas vorgelegt wurde kann mit folgender Formel aus der Elektrodensteilheit, aus E = EAdd - E0 sowie vorgelegtem und addiertem Volumen errechnet werden:

Fluoridkonzentration der Probensuspension Fluoridkonzentration des zugefgten Standards Probevolumen = 25 ml Volumen des zugefgten Standards Potentialdifferenz (EAdd-E0) Elektrodensteilheit

Abschlieend ist aus der Konzentration der Probensuspension und der Einwaage der Fluoridgehalt der Zahnpasta fr jede der Parallelbestimmungen zu berechnen und in einer Tabelle wiederzugeben:

Einwaage [g] [mV] [mV] [mV] [mol/l]

Fluoridgehalt Probe [mg/kg]

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Aus den so erhaltenen Werten sind der Mittelwert, die Standardabweichung und der Vertrauensbereich zu berechnen und das Endergebnis wie folgt anzugeben:

Mittelwert Vertrauensbereich (Konfidenzkoeffizient; Zahl der Messungen; Standardabweichung) z.B.: 850 67,1 ppm (95%; 3; 27,0)

Standardabweichung Streubereich (Studentfaktor ) Vertrauensbereich

Im Protokoll sollen folgende Punkte enthalten sein: kurze Beschreibung der durchgefhrten Arbeiten alle Messwerte (auch Ausreier) die Mittelwerte und die relativen Standardabweichungen die Graphen der Kalibriergeraden der Gehalt an Fluorid in der Zahnpasta in mg/kg

Die Protokolle mssen binnen zwei Wochen beim Betreuer abgegeben werden.
Tabelle 1: Studentfaktor f 1 2 3 4 5 6 7 8 9 (Freiheitsgrade ; Wahrscheinlichkeit P = 0,95 12,70 4,30 3,18 2,78 2,57 2,45 2,36 2,31 2,26 ) P = 0,99 63,70 9,92 5,84 4,60 4,03 3,71 3,50 3,36 3,25

P = 0,90 6,31 2,92 2,35 2,13 2,01 1,94 1,89 1,86 1,83

P = 0,98 31,82 6,97 4,54 3,75 3,37 3,14 3,00 2,90 2,82

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