Opciones en la seleccin espermtica: PICSI, Sperm-Slow, MACS?

S. Corts Gallego Clnica Tambre Madrid

Seleccin Espermtica

La seleccin espermtica ocurre en el tracto reproductor femenino, aunque puede simularse en el laboratorio.

Seleccin espermtica y capacitacin in vitro

Seleccin Espermtica: Movilidad

Tcnicas sin centrifugacin Dextrano Tcnicas con centrifugacin Swim-up Gradientes de densidad

Seleccin Espermtica: Movilidad

Seleccin Espermtica: Movilidad

El nivel basal de SDF despus del swim-up es significativamente menor comparado con el semen antes de la recuperacin.. (T Student. p<0,001).

ESHRE 2009

Seleccin Espermtica: Movilidad

Ability of various sperm wash techniques to eliminate sperms with DNA damage

Sperm processing by swim-up and density gradient is effective in elimination of sperm with DNA damage.
Javaraman V et al. J Assist Reprod Genet. 2012 June;29(6):557-563.

Seleccin Espermtica: Movilidad

Seleccin Espermtica: Morfologa

1000X M. Fijada M. teida

400X Spz mviles

IMSI: Intracytoplasmatic morphologically selected sperm injection

Seleccin Espermtica: Morfologa

Andrologia. 2013 Jun;45(3):163-70.

Selection of normal spermatozoa with a vacuole-free head (x6300) improves selection of spermatozoa with intactDNA in patients with high sperm DNA fragmentation rates.
Hammoud I, Boitrelle F, Ferfouri F, Vialard F, Bergere M, Wainer B, Bailly M, Albert M, Selva J.

IMSI: Aumento significativo del probabilidad de seleccin de spz sin dao en su ADN
Andrologia. 2013 Nov;1(6):838-44.

Specific sperm defects are differentially correlated with DNA fragmentation in both normozoospermic and teratozoospermic subjects.
Mangiarini A, Paffoni A, Restelli L, Ferrari S, Guarneri C, Ragni G, Somigliana E.

Mayor incidencia de ADN fragmentado en spz con cabeza vacuolada pequea Spz piriformes muestran una fragmentacin similar a los spz normales.

Seleccin Espermtica: Morfologa

Reprod Biomed Online 2011 Feb 15.

Seleccin Espermtica: Morfologa

Factores masculinos severos el IMSI aumenta la Tasa de implantacin (29,6% vs 15,2%, p=0,01)

Seleccin Espermtica: Morfologa

Fertil Steril. 2013 Apr;99(5):1290-3.

1er ciclo: No diferencias IMSI vs ICSI Tasa de Embarazo (46% vs 46%) Recin Nacido (30% vs 23%) 2 ciclo tras ICSI: Diferencias IMSI vs ICSI Tasa de Embarazo (56% vs 38%) Recin Nacido (28% vs 18%)

Seleccin Espermtica: Carga elctrica

Epididimo: Carga negativa 1. Potencial Zeta (carga elctrica de la mb

espermtica). Bajo coste, recuperacin de pocos espz, incremento de spz morfonormales, con ADN integro y condensado

2. Electroforesis (mismo principio). Paso de los

spz por una mb de 5m. Recuperacin spz mviles de buena morfologa y ADN.

Seleccin Espermtica: Carga elctrica

1. Incremento de ambas tcnicas del % de espz con morfologa normal, descenso de la fragmentacin del AND y deficiencia de protaminas. 2. MACS: mejores resultados en el porcentaje de espz con acrosoma normal y contenido en protaminas.

Seleccin Espermtica: Carga elctrica

1.ES resultados similares al Percoll en vitalidad 2.ES induce menor estres oxidativo.

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Receptores Moleculares: 1. Anexina V: Protena que se une a la PS (cara

interna de la mb plasmtica de las clulas viables). Seal temprana de apoptosis: MACS (Magneticactivated cell sorting).

2. Citometra de Flujo: Deteccin de apostosis

mediante distintos tintes: FACS (fluorescenceactivated cell sorting)

3. Acido Hialurnico : Receptores presentes en la

mb espermtica para el HA: PICSI, Sperm-Slow.

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Columnas de anexina

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

- Aumento de la tasa de embarazo de las MACS vs GD/SP - No diferencias en la tasa de Implantacin y aborto

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Seleccin Espermtica: Citometra de flujo

Utilizacin de YO-PRO como marcador de la viabilidad espermtica (permeabilidad de membrana como marcador apoptotico) Descenso de porcentaje de espz apoptoticos FACS vs SP

Seleccin Espermtica: Citometra de flujo

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

PICSI

Sperm-slow

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

No se observan diferencias entres PICSI vs Sperm-Slow en tasa de fecundacin, embriones de buena calidad, embarazo implantacin

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Fragmentacin del ADN

Normalidad del ncleo espermtico

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Seleccin Espermtica: Receptores Moleculares

Reduccin: >90% de fragmentacin ADN

>88% de aneuploidias

Alpha, 2012

Evaluation of sperm selection procedure based on hyaluronic acid binding ability on the IVF success of donated oocytes following ICSI.
Corts S, Ortega L., Gago M., Mooz C, Guijarro A, Caballero P, Nez R.

No se observan diferencias significativas en la tasa de fecundacin, divisin, calidad embrionaria ni tasa de embarazo (HA efecto positivo sobre la TE).

CON QU..

TECNOLOGAS DE SELECCIN ESPERMTICA

IMSI (intracytoplasmic morphologically selected sperm injection).

Ventajas Inconvenientes Seleccin de espermatozoides No hay clara asociacin con aumento de morfolgicamente normales la tasa de gestacin Demasiado tiempo para la bsqueda espermtica que puede ser lesivo para los espermatozoides en PVP y/o para los ovocitos. Muy caro Falta de subjetividad en la seleccin Necesita personal especializado

Columnas de Anexina V

Ventajas

Inconvenientes

Seleccin de muestras de semen Prdida del nmero de espermatozoides con alto IF por sucesivos lavados: no se puede utilizar en muestras con OATz severa

Fcil manejo

Posibilidad de presencia de microbeads en la muestra No est confirmada la accin del campo magntico en los espermatozoides

+/- Barato

Seleccin mediante HA: seleccin de espermatozoides maduros (PICSI y Sperm-slow)

Ventajas Seleccin de espermatozoides maduros

Inconvenientes No hay suficientes evidencias cientficas que apoyen la mejora de resultados Se necesita personal especializado

Mtodo fcil y barato

 Qu tcnica es ms apropiada?

Tcnica
MACS

Indicacin
Alto ndice de fragmentacin en muestras normozoosprmicas u OAT leves 100% morfoanomalas espermticas Seleccin de espermatozoides para ICSI en casos de pacientes con alto IF y OATz

IMSI HA

 Como disminuir el ndice de fragmentacin el da del ICSI?

En varones normozooprmicos que van a realizar ICSI, se les puede indicar que no tengan abstinencia sexual previa. Procesar las muestras de semen del modo habitual (swim-up, gradientes), minimizando el tiempo de incubacin. Si la muestra de semen tiene un alto ndice de fragmentacin y es normozoosprmica u OAT moderada, utilizar MACS. Posteriormente, se puede combinar con el uso de Sperm-slow para seleccionar los espermatozoides a microinyectar.

CONCLUSIONES
No existe actualmente una nica tcnica que seleccione el mejor espermatozoide para ICSI

Individualizar los pacientes y sus eyaculados en funcin de su patologa y la indicacin de TRA, combinando varias tcnicas.

Lo difcil ya esta hecho, lo imposible ya se har