AMPLIACIN EN QUMICA ANALTICA

FORMAS DE SELENIO COMO PREVENCIN

DEL CNCER

David Zamora Rubio

Ampliacin en Qumica Analtica 2 Formas de selenio como prevencin del cncer

1-Introduccion 1.1-Selenoproteinas 1.2-Glutatin peroxidasa (GPx) 1.3-Selenoprotena P 1.4-Selenoprotena W y R 1.5-Tiorredoxina reductasa 1.6-Yodotironina deiodinasa 2-Especiacin de compuestos de selenio por HPLC-ICP-MS 3-Investigacin de compuestos de selenio como prevencin del cncer 4-La actividad anticancerigena del selenio monometilado 5-Conclusiones

Bibliografa: Rizky Abdulah; Kaori Miyazaki; Minato Nakazawa; Hiroshi Koyama. Journal of Trace Elements in Medicine and Biology 19 (2005) 141150 http://www.monografias.com/Quimica/index.shtml

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1-Introduccion
El selenio es un oligoelemento esencial para el cuerpo humano, ya que es una parte muy importante de las enzimas antioxidantes que protegen las clulas contra los efectos de radicales libres producidos en la metabolizacin del oxigeno. Estos antioxidantes pueden daar las clulas y contribuir al desarrollo de enfermedades crnicas. El contenido de selenio de las plantas vara enormemente debido a su concentracin en el suelo, este depende de la regin en que se encuentre, ya que hay zonas con concentraciones muy bajas como Australia, el noreste y centro sur de China, norte de la pennsula de Corea, Nepal y el Tibet, centro frica y en especial la Repblica Democrtica del Congo, poseen deficiencias debido a que la dieta se basa fundamentalmente en alimentos locales. Los habitantes de estas zonas tienen muy bajo consumo de Selenio, ya que siendo la ingesta diaria recomendada de 55 mg, en estas zonas el consumo es de 10-26 mg segn donde se estudie. Esta baja ingesta de Selenio se relaciona con la aparicin de enfermedades como el Keshan (cardiopata congnita), Osteoartropata de Kashin-Beck y el cncer. Este ltimo tiene un crecimiento descontrolado y la diseminacin de las clulas puede afectar a casi cualquier tejido del cuerpo, siendo el cncer de pulmn, colorrectal y estomago en los cinco ms comunes del mundo, tanto para hombres y mujeres. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) prev que ms de 10 millones de personas son diagnosticadas con cncer cada ao. Esa alta tasa provoca que se busquen agentes de origen natural tales como el Selenio que puede inhibir el desarrollo del cncer, convirtindose en un objetivo importante para estudios ecolgicos. La bsqueda de agentes quimiopreventivos prometedores es el objetivo para la prevencin del cncer, ya que el papel protector del selenio es avalado por numerosos estudios epidemiolgicos, as como en investigaciones preclnicas. La primera demostracin se produjo en 1973 cuando JT Rotruck y su equipo de investigacin establecieron la base bioqumica para el papel de selenio en la enzima glutatin peroxidasa, una enzima responsable de la prevencin de daos por estrs oxidativo. Hasta la fecha el uso de selenio se ha estudiado en todo el mundo en ensayos clnicos humano. El primer ensayo fue en China, donde 20.847 habitantes recibieron sal de mesa que contena selenito de sodio, proporcionando as entre 30-50 mg de selenio por da durante 8 aos. La incidencia de cncer primario de hgado se redujo significativamente. Tambin se ha estudiado que la levadura de cerveza selenizada fue capaz de disminuir la mortalidad en casi un 50 %.

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1.1-Selenoproteinas
Las selenoprotenas contienen selenocistena (Sec), este es un aminocido muy similar a la cistena, pero incorpora selenio en lugar de azufre. Las Sec son aminocidos codificados por el codn UGA, que en las protenas normales corresponde a un codn STOP pero en la formacin de selenoprotenas la Sec se introduce sin finalizar la traduccin. El rol dual del codn UGA en las selenoprotenas las hace indetectables para los programas de prediccin de genes, y en consecuencia, los genes que codifican para selenoprotenas estn en general incorrectamente anotados en los genomas de organismos eucariotas. La pregunta ahora es Cmo se hace la discriminacin entre UGA stop y UGA SeCys, cuando el codn UGA lleva a nivel del ribosoma? para eso hay un mecanismo especializado que identifica este codn como Sec y no como un codn STOP: la secuencia de insercin de selenocistenas (SECIS)

La estructura SECIS, est caracterizada por: - Encontrarse en el extremo 3'UTR del gen. - Tiene una estructura stem-loop - Permite insertar una selenocistena en el momento de la traduccin - Sin elemento SECIS, el codn UGA atura la traduccin. - Esta estructura se deriva del apareamiento de bases del RNA, que normalmente presenta un apareamiento de bases no cannicas A-G, crticos para la funcin de ste. - Normalmente presenta dos hlices, un loop interno y un loop apical.

Fig.2.Estructura SECIS

El selenocysteil-tRNA (transfer RNA con Sec en amarillo) se muestra en un complejo con EFsec, SBP2 y el elemento SECIS. El complejo est listo para la donacin de selenocysteil-tRNA al sitio A del ribosoma para ser decodificado por UGA (mostrado en el mRNA en negro). Una vez la SectRNA [Ser] Sec es donada al sitio A, se transfiere al sitio peptdico y la Sec es incorporada al selenopptido o selenoprotena que se est formando (mostrada como bolas en amarillo y naranja), as la traduccin de la protena contina hasta el siguiente codn stop.

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Fig. 3 La estructura SECIS recluta la SBP2 (SECIS protena de unin), que une eEFsec (un factor de elongacin eucaritico especfico de selenoprotenas).

La sntesis de selenoprotenas, gracias al SectRNA [Ser] Sec resulta de la metabolizacin del selenocysteil-tRNA.

1.2-Glutatin peroxidasa (GPx)

En esta selenoproteina la selenocisteina se encuentra en la porcin N-terminal de un dominio de funcin relativamente corto. Su papel fisiolgico es mantener adecuadamente bajos niveles de perxidos de hidrogeno dentro de la clula, disminuyendo as los posibles daos de los radicales libres. Se proporciona una segunda lnea de defensa contra perxidos de hidrgeno, que pueden daar las membranas y otras estructuras de las clulas. Se han descubierto al menos seis GPx en mamferos. GPx1 es un antioxidante en el citosol de la clula y se piensa que es una de las principales protenas antioxidantes en los mamferos. GPx2 y GPx3 son antioxidantes que se encuentran en el tracto gastrointestinal y el plasma. GPx4 tambin se conoce como un fosfolpido hidroperxido glutatin peroxidasa (PHGPx), ya que reduce especficamente hidroperxidos de cidos grasos de fosfolipidos. GPx5 y GPx6 se detectan fcilmente en el epiddimo del ratn y en el epitelio olfatorio respectivamente.

1.3-Selenoprotena P
La selenoprotena P (Se-P) es la principal selenoproteina del plasma, se une a las clulas y se expresa en diversos tejidos, tales como las clulas endoteliales arteriales y clulas endoteliales sinusoidales hepticas, tambin acta con transportador de selenio y antioxidante del endotelio.

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1.4-Selenoprotena W y R
La selenoprotena W es de bajo peso molecular y contiene un residuo de selenocisteina y existe en cuatro formas. Una isoforma tiene glutatin unido a un residuo de cistena especfica, lo que indica que esta selenoproteina puede tener funciones redox. La selenoprotena R contiene selenocisteina en la porcin carbono terminal y su funcin es desconocida.

1.5-Tiorredoxina reductasa
Es una protena redox ampliamente distribuida que regula varios procesos redox dependiente intracelulares y estimula proliferacin de clulas normales como tumorales. Este grupo se caracteriza por la presencia de selenocistena en la secuencia del carbono terminal. Es un donante de hidrgeno para la ribonucletido reductasa. Tambin regula la transcripcin y factores de enzima y es una de las protenas implicadas en los mecanismos esenciales de reparacin en sntesis de ADN.

1.6-Yodotironina deiodinasa
La glndula tiroidea sintetiza dos hormonas importantes la triyodotironina, la principal hormona tiroidea biolgicamente activa que se produce en el hgado, rin y tiroides; y la tiroxina que se produce nicamente en el tiroides y es biolgicamente inactivo.

Triyodotironina

Tiroxina

La mayora de las triyodotironinas son biolgicamente activas en la circulacin y son creadas dentro de las clulas por la eliminacin de un tomo de yodo de la tiroxina en una reaccin catalizada por la yodotironina desyodasa selenodependiente. A travs de sus acciones los tres tipos de yodotironinas deiodinasas selenodependientes pueden activar e inactivar las hormonas tiroideas. Este mecanismo es fundamental para el desarrollo normal del crecimiento y metabolismo con la regulacin de las hormonas tiroideas. Interactan con las protenas celulares de dos maneras distintas. Las selenoproteinas clsicas incorporan selenocisteina en cantidades estequiometricas como un aminocido integral en la estructura de las protenas. Las funciones de selenio como un nutriente esencial se cree que ocurre a travs de estas selenoproteinas, como glutatin peroxidasa, yodotironinas deiodinasas y tiorredoxina reductasa. Se pueden utilizar varios mecanismos para explicar la accin protectora de las selenoproteinas contra el cncer, uno de ellos es que pueden proteger los componentes celulares de los daos causados por los radicales de oxigeno.

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2-Especiacin de compuestos de selenio por HPLC-ICP-MS

Los estudios sobre quimioprevencin se han ampliado a los resultados en poblaciones ms grandes y se intensific la bsqueda para mecanismos de supresin de la tumorignesis por selenio. Hay que sealar que la forma en que se encuentra el selenio en el producto qumico y la dosis son factores determinantes de sus actividades biolgicas como un nutriente esencial, agente preventivo de cncer, o toxico. La existencia de especies de inters como los complejos de coordinacin de metales con protenas grandes por ejemplo; en el suelo, la leche materna, y la de los animales, metalotionenas, as como selenoprotrenas, compuestos de selenio en los alimentos y suplementos nutricionales. Recientemente se ha producido inters en los aductos de selenio en aductos de ADN de cisplatino y tambin para evitar la farmacorresistencia en la terapia con cisplatino. La unin de selenio en los hidratos de carbono es tambin interesante ya que se han encontrado cantidades importantes de compuestos de selenio en la orina. Las tcnicas combinadas basadas en acoplamiento cromatografico de tcnicas de separacin (lquidos de alta eficacia o HPLC) con acoplamiento inductivo y espectrometra de masas (ICPMS) se ha establecido como la herramienta ms potente analtica disponible para la especiacin. Se utiliza la idea de muestreo de iones a partir de plasma a alta temperatura operando a presin atmosfrica mostrada por Gray en 1978 usando arco capilar de plasma. Hoy en da, ICP-MS ha demostrado que es el ms poderoso detector de la presencia de un elemento dado. Los avances muestran que es posible detectar selenio en materiales biolgicos, el agua y los suelos con mayor sensibilidad que con espectrometra de absorcin atmica o con espectrometra de emisin atmica de plasma acoplado por induccin. Para mejorar la especiacin se acopla un sistema ICP-MS a un sistema HPLC. Los sistemas con diferentes mtodos de deteccin atmica como la emisin atmica o la espectrometra de masas junto a un HPLC son muy verstiles para la especiacin de una amplia variedad de muestras, en particular aquellas con matrices complejas. La interferencia de picos nos resueltos que pueden estar presentes en niveles mucho ms altos que el analito objetivo a veces hace imposible cuantificar o incluso identificar el eluato si se utiliza un detector universal. La deteccin atmica selectiva de un elemento puede reducir o incluso eliminar tales interferencias. Quijano desarroll un mtodo para la determinacin de selenocisteina, selenometionina, selenito y selenato en muestras acuosas utilizando una mezcla de columna de fases aminoODS a pH 6 con tampn fosfato. Esta columna rellena con grupos octadecilo unidos a gel de slice (C18, ODS) permiti al aminocido se eluido en el volumen muerto, en contraste con el comportamiento a veces visto para columnas de intercambio anionico. El orden de elucin observado hizo sugerir un mecanismo de intercambio de aniones.

Ampliacin en Qumica Analtica 8 Formas de selenio como prevencin del cncer Tambin se ha estudiado utilizar dos columnas de HPLC diferentes en tndem, separando con existo las tres principales protenas que contienen selenio (albmina, GPx y selenoproteina P) presentes en el plasma de la sangre humana. L a primera columna es de afinidad de heparina y la segunda de filtracin en gel conectada a un ICP-MS. Las ventajas de este mtodo es que permite la rpida distribucin y anlisis de selenio en plasma, es adecuado para isotopos estables. Se ha encontrado tambin que en el plasma humano la absorcin de selenio se asocia con la fraccin de masa molecular ms alta y en mercaptoalbmina. Las limitaciones de las tcnicas de HPLC-ICP-MS son que no proporcionan informacin estructural para la identificacin de compuestos desconocidos o inesperados, y como consecuencia, es imposible identificar las especies para las que las normas no estn disponibles. Estos problemas se alivian mediante la especiacin no solo de elementos, sino tambin de las molculas de las que forman parte. Se puede realizar mediante espectrometra de masas por electrospray, asistida por matriz o por ionizacin por laser en desorcin de tiempo de vuelo (MALDITOF) Otra tcnica de separacin, combinada generalmente con ICP-MS, es la electroforesis en gel y electroforesis capilar. Utilizando electroforesis en gel combinado con ICP-MS se analizaron especies de selenio en embriones y ovarios de peces de aguas ricas en selenio. Este experimento se diseo para clasificar el mecanismo de toxicidad de selenio. De las muestras, se revelaron entre cinco y ocho bandas de selenoproteinas, respectivamente, de cuatro bandas (4100, 60, 50 Y 48 kDa) de ambas muestras tenan pesos moleculares comparables. Uno de los hallazgos ms importantes son los azucares con especies de selenio en la orina, encontrados en 2002 dos especies de azucares de selenio en la orina (metil 2 - acetamido - 2 desoxi - 1 - selenio- BD- glucopiransido y metil 2 - acetamido - 2 - desoxi - 1 - selenio- b Dgalactopiranosido). En 2004 utilizando electroforesis capilar y ICP-MS, detectado un nuevo seleno azcar (metil 2 - amino - 2 - desoxi - 1 - seleno - D - glucopiransido) en la orina humana. Con los hallazgos, las especies de azcar con selenio est ahora firmemente establecida como una componente de la natural de la orina y como un metabolito urinario cuando se administra selenio.

3-Investigacin de compuestos de selenio como prevencin del cncer

En las personas selenodependientes, los suplementos de selenio de forma inorgnica no son tan biodisponibles como el unido orgnicamente. Las plantas absorben parte del selenito de sodio aplicado en el suelo o se pulveriza directamente sobre las hojas y se metaboliza el selenio en el enlace orgnico que es ms seguro que el del selenio inorgnico como suplemento diettico.

Ampliacin en Qumica Analtica 9 Formas de selenio como prevencin del cncer Se est intentando identificar actividades anticancerigenas en compuestos de selenio a base plantas. La plantas con reciben especial atencin por parte de los investigadores son el ajo, la cebolla y el brcoli. Una de las investigaciones fue en ratas que haban consumido dietas que contenan 3,0 mg de selenio por cada gramo de brcoli, mostrando un menor nmero de tumores de mama que las ratas alimentadas con 0,1 mg de selenio con o sin la adicin de brcoli. En un segundo experimento, las ratas alimentadas con 2,0 mg de selenio por gramo de dieta suministrada mediante brcoli alto en selenio tuvieron significativamente menos tumores de colon que las ratas alimentadas con 0,1 o 2 mg de selenio por gramo de dieta en forma de selenito con o sin la adicin de brcoli bajo en selenio. Estos datos demuestran que el efecto protector contra el cncer del selenio es alto y sobre todo con la administracin del brcoli alto en selenio. Por otro lado la administracin de dieta baja en selenio en ratas tratadas con carcingenos era significativamente ms eficaz en disminuir las lesiones premalignas y la formacin de adenocarcinomas en las glndulas mamarias. Estos hallazgos aumentaron el inters en saber cul era el compuestos que activo contra el cncer, encontrando que la metiselenocisteina es mejor agente quimiopreventivo que cualquier selenito o selenometionina. El cido metilselenico se ha demostrado que suprime de forma significativa el cncer de mama de una manera dependiente del tiempo en concentraciones de 5-10 mmol/L. Para conseguir este efecto con metilselenocisteina se necesita una concentracin de 200 mmol/L. Tambin se ha investigado la sntesis de especies orgnicas de selenio como la 1,4-fenillenbis (metileno) selenocianato (p-XYC). La administracin de esta especie en tumores de rata mamarios mostr que suprime la formacin de aductos de ADN en un nivel de 80 mg/kg. La actividad de este quimiopreventivo puede explicarse en parte por la inhibicin de la formacin de O6-metilguanina y 7-metilguanina en el pulmn, mientras que el selenito en 5 mg/kg no tuvo ningn efecto en el pulmn. En combinacin con un agente quimioteraputico el selenio tambin proporciona proteccin contra la toxicidad de la quimioterapia. Se ha utilizado metilselenocisteina y selenometionina para proteger de la terapia de agentes quimioteraputicos para elevar el mximo de dosis tolerada, hasta un nivel dos o tres veces mayor. La investigacin de selenio para prevenir la resistencia a frmacos y proporcionar proteccin contra la toxicidad en el cncer se muestra como una lnea de investigacin muy importante en la lucha contra la mortalidad del cncer.

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4-La actividad anticancerigena del selenio monometilado

Para la mayora de experimentos de quimioprevencin del cncer con compuestos de selenio se ha utilizado selenometionina o selenito de sodio como reactivo de ensayo ya que est disponible comercialmente. La selenometionina puede proteger contra el cncer mediante la activacin del supresor de la protena p53 de las clulas cancerosas del pulmn humano al transformarla de la forma oxidada a la forma reducida. Sin embargo sobre la base de un gran nmero de experimentos demuestran que en los tumores mamarios inducidos en ratas la selenometionina era menos activa que el selenito en la inhibicin del cncer. La concentracin de selenio en sangre y tejidos, tales como el hgado, el rin y el msculo esqueltico. De todas formas, las ratas tratadas seleniometionina tenan una concentracin que las que tienen selenito de sodio, por lo tanto, las ratas tratadas con selenometionina no proporcionaron una mejor proteccin contra la tumorignesis. Los experimentos que investigan las actividades quimiopreventivas de selenobetaina y metilselenocisteina, que generan monometilado, en comparacin con el selenito de sodio y selenometionina que son metabolizados a H2SE, con el apoyo de esta hiptesis la selenobetaina y metilselenocisteina son ms eficaces que las otras dos formas como compuestos quimiopreventivo en carcinoma mamario en ratas. Como se muestra en el siguiente esquema la selenobetaina tiende a perder un grupo metilo.

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5-Conclusiones
Actualmente, ciento de productos qumicos han sido y son evaluados para actividades contra el cncer en modelos in vivo e in vitro, obteniendo resultados muy exitosos. Aunque es conveniente describir los efectos del selenio en trminos del elemento, es importante saber que la forma qumica de selenio y las dosis son determinantes para sus actividades biolgicas. Es decir por qu el desarrollo de procedimientos para el anlisis directo de selenoaminoacidos y selenoproteinas biolgicamente importantes en los tejidos vegetales, animales y fluidos del cuerpo humano sigue siendo un gran desafo. Ms importante labor en la sntesis de las especies de selenio es necesaria para hacer el anlisis. Ms atencin debe tambin tener en cuenta el hecho de que un compuesto de azucares de selenio en la orina, con el desarrollo de mtodos analticas de especiacin de selenio se puede esperar que estos compuestos pronto sern detectado en el suero y as contribuir a la contribuir a la comprensin del mecanismo de la quimioprevencin la actividad de las especies de selenio. La transformacin bioqumica de selenio es un importante paso en el logro de la prevencin del cncer por un compuesto de selenio. En este estudio, se han estudiado diferentes compuestos de selenio como quimiopreventivos de forma antagnica o sinrgicas en la prevencin del cncer.