Introduccin terica -Extraccin del ADN La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas - En primer lugar tienen

que romperse la membrana plasmtica de la clula eucariota para poder acceder al ncleo de la clula. En el caso de los vegetales tambin habr que romper la pared celular. - A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. -Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. Como el ADN se encuentra en todas las clulas de los seres vivos, incluyendo por supuesto los vegetales, intentaremos extraer esta importante molcula a partir de cualquier fruta. El proceso de extraccin de ADN desde una clula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnologa. Los cientficos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las clulas, evitando que el ADN se desnaturalice (que se rompa). El material que se necesita para ello es fcil de encontrar y el procedimiento es sencillo. Cada uno de los ingredientes tiene su propia funcin, la solucin de sal y jabn sirve para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. El lquido de lentillas elimina las protenas que degradan el ADN. El alcohol etlico sirve para precipitar el ADN. -EL ADN El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En l estn escritas las instrucciones que deben seguir las clulas para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las clulas que forman un individuo contienen una copia idntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay clulas con diferentes formas y funciones. Esta formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez estn formados por un azcar - D desoxirribosa y un ion fosfato. La proporcin y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los polinucletidos. -Procedimiento En primer lugar cortamos la cebolla en trozos pequeos para poder batirla con facilidad. Despus pesamos con la balanza 3 gramos de NaCl y 5 gramos de bicarbonato sdico. Depositamos todo esto con 10 ml de lavavajillas en un vaso de precipitados de 500 ml., le

aadimos la cebolla y los 100 ml de agua mineral y lo batimos todo. Cuando ya la disolucin est bien batida lo ponemos a calentar al bao mara durante 15 minutos. Para ello necesitaremos el soporte, la placa de amianto y otro vaso de precipitados lleno de agua del grifo. Cuando ya est calentado tenemos que filtrarlo. Para ello cogemos papel secante para hacer el filtro. Con la medida de un embudo grande hacemos un crculo y lo plegamos progresivamente, como si fuera un acorden. Ponemos el filtro dentro de nuestro embudo y pasamos la disolucin de cebolla por el filtro. El liquido verde-amarillo sin espuma que nos quede (20 ml) lo ponemos en un tubo de ensayo. Ms tarde le ponemos un poco de liquido de lentillas .Adems tenemos que poner 20 ml de alcohol etilico pero muy fro ,que medimos en una probeta, y lo metemos en un tubo de ensayo. Luego pasamos el alcohol etlico de ese tubo de ensayo al otro pero de manera que el alcohol pase solo por las paredes del tubo de ensayo con un ngulo de 45 y vertemos muy despacio. Cuando ya hayamos acabado con todo ese proceso cogemos un gancho y sacamos el ADN de la cebolla.

Cebolla: la usamos porque ella tiene bajo contenido de almidn, as permite que el ADN sea visto con claridad. Detergente (detergente lquido Vel): provoca la rotura de la membrana celular y emulsifica los lpidos y protenas de la clula impidiendo las interacciones polares que mantienen la integridad de la membrana. El detergente forma complejos con estos lpidos y protenas causndoles precipitacin. NaCl: prepara a la molcula de ADN para que se precipite en la solucin de alcohol porque forma un escudo alrededor de los extremos fosfato, los cuales presentan carga negativa. Los iones de sodio de la sal son atrados por las cargas negativas del ADN, neutralizndolas. Tratamiento con calor por 15 minutos (a 60 C): Suaviza los fosfolpidos de la membrana celular.

Desnaturaliza la enzima (protena) DNAsa (desoxirribonucleasa). Al inactivar esta enzima se impide que ella corte (degrade) el ADN en fragmentos pequeos (recuerde que queremos rebobinar el ADN en la pipeta Pasteur). No puede realizarse por ms de 15 minutos porque provoca que la molcula de ADN se corte en fragmentos pequeos.

Hielo: disminuye la tasa de degradacin del ADN.

Mezcla en la licuadora por un minuto a baja velocidad: rompe las paredes celulares, membranas celulares y cubiertas nucleares, permitiendo la separacin del ADN. Rompe las clulas y expone las paredes celulares y membranas a la accin del detergente. Papel Filtro de caf: permite separar la mayor parte de los fragmentos vegetales que quedan despus del "licuado". Etanol (70-99%) bien fro: permite separar y reconocer el ADN ya que ste no es soluble en etanol fro. Todos los componentes de la mezcla quedan en solucin, excepto el ADN que al no ser soluble en etanol fro se separa (el ADN se ver como una "baba" o masa viscosa (como un moco blancuzco).
. Solucin de ablandador de carne o jugo natural de pia: Ella contiene una enzima proteoltica (llamada papana u otra enzima parecida, en el caso del ablandador de carne y bromelina, en el caso de la pia) que ayudar a separar el ADN de las protenas.

http://www.geocities.com/bio135a/Extrac_ADN.htm Extraccin

de ADN en Eucariotas. Universidad de Panam. Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Tecnologa. 20 de Marzo de 2007. Dr. Carmelo Ciniglio, Prof. Ovidio Durn y Prof. Fidel Jaramillo