Instituto del Profesorado en Enfermera Padre Luis Tezza (A-691) Carrera de Tcnico en Laboratorio Prcticas I de Laboratorio.

Tcnicas Hematolgicas

Trabajo Prctico N:

Fecha: / / RECUENTO DE LEUCOCITOS EN CMARA

Alumno:

Objetivos: Adquirir habilidad para realizar el recuento de leucocitos en cmara. Detectar las probables causas de error en el procedimiento. Expresar los resultados. Preparar el material necesario para la operacin. Materiales:
cido actico glacial. Agua destilada. Micropipeta de 20 ul (manual o automtica). Pipetas serolgicas de 1 ml, 2 ml, 5 ml y 10 ml. Matraz aforado de 100 cc. Solucin acuosa de violeta de genciana al 1%. Cmara de Neubauer. Cubre cmara. Tubo de hemlisis. Tubo de Khan. Anticoagulante EDTA. Tapones de goma. Materiales para extraccin de sangre (algodn, alcohol, jeringa y agujas). Microscopio

Procedimientos: 1.- Preparacin del lquido diluyente El alumno preparar 100 ml de solucin acuosa de cido actico al 2% conforme al siguiente esquema:
cido actico glacial Solucin acuosa de violeta de genciana al 1% Agua destilada c.s.p 2 ml 1 ml 100 ml

Esta solucin le permitir lisar los eritrocitos para que no interfieran en el recuento y le permitir diluir la muestra para obtener un nmero de elementos en cmara adecuado para su lectura. 2.- Preparacin de la muestra El alumno obtendr por venopuntura una muestra de sangre venosa de 5 cc y la traspasar a un tubo de hemlisis con anticoagulante E.D.T.A. cuidando de hacerlo por las paredes en forma suave sin aguja y evitando la formacin de espuma. Luego tapar el tubo y lo mezclar por inversin de inmediato en forma suave para que la sangre tome contacto con el anticoagulante. A continuacin realizar una dilucin 1:20 de sangre en solucin diluyente de cido actico preparada en el tem 1.Para ello deber medir exactamente:
Solucin acuosa de cido actico al 2 % Sangre (micropipeta de 20 ul) 0.38 ml 0.02 ml

Mezclar y dejar en reposo durante unos 3 minutos para permitir la lisis de los eritrocitos y la expansin de los leucocitos facilitando el posterior recuento. 3.- Preparacin de la Cmara de Neubauer y carga con la muestra diluida Antes de proceder a la carga de la Cmara el alumno verificara el estado de limpieza de la misma y proceder a unir el cubre cmara a la cmara propiamente. Para ello humedecer ligeramente los bordes salientes de la cmara (si no los reconoce recurra a su instructor para que lo ayude) y deslizar con ambos pulgares el cubre hasta que este por efecto de tensin superficial no se mueva ms. Proceda con sumo cuidado, porque tanto la cmara como el cubre son elementos frgiles.

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Una vez concluida la operacin anterior proceda a cargar la cmara en forma homognea evitando la formacin de burbujas de aire. Deseche siempre las primeras gotas de la solucin y seque la punta de la pipeta antes de proceder al cargado de la cmara. 4.- Recuento de elementos Coloque la cmara de Neubauer sobre la platina del microscopio con sumo cuidado de acuerdo con los procedimientos indicados en el trabajo prctico de MICROSCOPA. Utilice el objetivo de 10 x para efectuar el recuento. Recuerde: el diafragma deber estar parcialmente cerrado para poder contemplar con claridad los leucocitos. El condensador debe encontrarse en el tope inferior de su recorrido. Antes de efectuar el recuento observe si todos los cuadrantes de la cmara se encuentran con una distribucin uniforme en los cuatro cuadrantes de la esquina. Si ello no ocurre retire la cmara y reitere el procedimiento previa limpieza de sta. Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuatro cuadrantes grandes de las esquinas, cada uno de los cuales esta dividido para mayor comodidad en 16 cuadrados mas pequeos. Recuerde que no debe contar dos veces el mismo elemento, en consecuencia para los leucocitos que se encuentren sobre las lneas de marcacin se contara el borde superior y el derecho o el inferior y el izquierdo. 5.- Clculos Para determinar la cantidad de leucocitos por mm3 se tendr en cuenta el ttulo de la dilucin efectuada y el volumen de la cmara utilizada. Recordar que la superficie de cada cuadrante es 1 mm2. Frmula: n x 20 x 10 ----------------------- = N de cuadrantes leucocitos por mm3

donde : n : cantidad de leucocitos contados en los cuatro cuadrantes. 20: titulo de la dilucin efectuada con el diluyente. Si emplea otra dilucin deber modificar este dato. 10: factor de correccin de profundidad de la cmara para expresar el volumen en mm3. N de cuadrantes contados: 4 (cuatro). Importante si se observa un recuento inferior a 2.500 elementos por mm3 deber efectuar una nueva dilucin con un titulo 1/10. Si est en presencia de una leucocitosis deber efectuar diluciones mayores 1:100 o incluso 1:200, recuerde que siempre debe obtener una distribucin uniforme de elementos y una cantidad que le resulte posible contar sin mayor esfuerzo. 6.- Valores de Referencia: (Fuente Bibliogrfica: Hoschoian Juan Carlos, Rodrguez Mara Paz. Valores de Referencia en el Laboratorio de Anlisis Clnicos. Unidades tradicionales. Unidades SI. Ed. Yanina. Argentina. 1984) Sexo-Edad Lactante hasta 6 meses Nio 6 meses / 8 aos Adultos Valor 9.000 - 15.000 / mm3 6.000 - 12.000 / mm3 4.000 10.000 / mm3

7.- Documento de Informe de resultados (Protocolo de resultados):

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El alumno confeccionar el documento: Informe de Resultados (Protocolo de Resultados), registrando los valores determinados durante la prctica. Este documento contendr la siguiente informacin:
Id de la muestra (identificacin de la muestra) Tipo de muestra Sexo del paciente Edad del paciente Titulo utilizado: Superficie de la Cmara Volumen de la Cmara N de elementos contados Valor del recuento de leucocitos obtenido Valor referencial para sexo y edad Conclusin (se registrar la probable interpretacin entre el dato obtenido y los valores de referencia)

8.- Actividad complementaria: prediccin de la incidencia de diferentes errores Complete la siguiente tabla de datos: Situacin Resultado que esperara obtener Errores debidos a la naturaleza de la muestra Coagulacin parcial de la muestra Obtencin de una muestra capilar de una piel ciantica, plida, o fra Obtencin de una muestra capilar de una piel excesivamente frotada. Aplicacin prolongada de torniquete Homogeneizado ineficaz de la muestra Velocidad de sedimentacin acelerada Presencia de levaduras en el diluyente utilizado Presencia de espuma en la muestra Errores del operador Empleo de una pipeta sucia Empleo de una pipeta hmeda Cubrecmara sobre-elevado o cubrecmara mvil Desborde de la suspensin en el foso Carga de la cmara soplando Cmara hmeda

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