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PROYECTO ESTABLECIMIENTO DE UN MTODO ANALTICO POR ICP-MSHPLC PARA LA CUANTIFICACIN DE MERCURIO DIFERENCIANDO LAS FORMAS QUMICAS PRESENTES EN SUELOS Y SEDIMENTOS PARA LA EVALUACIN DE SU TOXICIDAD

Octubre 2008

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1. OBJETIVO Implementar, estandarizar y validar el mtodo analtico para la especiacin de mercurio en suelos y sedimentos por la tcnica de Espectrometra de emisin de plasma inductivamente acoplado con detector de masas y Cromatografa de lquidos de alta resolucin. 2. ANTECEDENTES El Mercurio es un elemento que puede encontrarse de forma natural en el medio ambiente, como metal, como sales de Mercurio o como Mercurio orgnico. El mercurio metlico es usado en una amplia variedad de productos domsticos, como barmetros, termmetros, lmparas fluorescentes, interruptores. El mercurio en estos mecanismos est confinado y usualmente no causa ningn problema de salud. De cualquier manera, si un termmetro se rompe es posible una exposicin significativamente alta a travs de la respiracin, debido a que es muy voltil. La exposicin al mercurio por aire puede causar efectos adversos, como dao a los nervios, al cerebro y riones, irritacin de los pulmones y de los ojos, reacciones en la piel, vmitos y diarreas. El mercurio se presenta de forma natural en los alimentos, pero este puede aparecer por contaminacin, as como ser acumulado por la cadena alimentaria, por ejemplo, las concentraciones de mercurio en los peces usualmente exceden en gran medida los niveles presentes en el agua donde viven. Los efectos del mercurio sobre los humanos pueden clasificarse de forma general en los siguientes:

Dao al sistema nervioso Dao a las funciones del cerebro causar la degradacin de la habilidad para aprender, cambios en la personalidad, temblores, cambios en la visin, sordera incoordinacin de msculos y prdida de la memoria Dao al ADN y cromosomas mongolismo Reacciones alrgicas, irritacin de la piel, cansancio, y dolor de cabeza Efectos negativos en la reproduccin, dao en el esperma, defectos de nacimientos y abortos

El mercurio contenido en los cuerpos receptores de agua tiende a precipitarse y acumularse en los sedimentos. Por lo tanto, las mediciones de mercurio en sedimentos representan buenos indicadores en los ecosistemas (9). La mayora del mercurio presente en el medio ambiente se encuentra inicialmente en su forma elemental voltil (Hg), sin embargo, ste es fcilmente oxidado a su forma orgnica Hg2- y su subsecuente actividad con microorganismos puede llevarlo a su alquilacin y convertirlo en una de las especies

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ms toxicas conocidas: el metil mercurio (MeHg+) (8)(10)(13)(25). El metil mercurio es altamente soluble en lpidos y se acumula rpidamente en peces y fauna marina (10)(13)(25). Efectos ambientales del Mercurio La mayora del Mercurio liberado por las actividades humanas es liberado al aire, a travs de la quema de productos fsiles, minera, fundiciones y combustin de residuos slidos. Algunas formas de actividades humanas liberan Mercurio directamente al suelo o al agua, por ejemplo la aplicacin de fertilizantes en la agricultura y los vertidos de aguas residuales industriales. Todo el Mercurio que es liberado al ambiente eventualmente terminar en suelos o aguas superficiales. Aguas superficiales cidas pueden contener significantes cantidades de Mercurio. Cuando los valores de pH estn entre cinco y siete, las concentraciones de Mercurio en el agua se incrementarn debido a la movilizacin del Mercurio en el suelo. El Mercurio que ha alcanzado las aguas superficiales o suelos los microorganismos pueden convertirlo en metil mercurio, una substancia que puede ser absorbida rpidamente por la mayora de los organismos y es conocido que daa al sistema nervioso. Los peces son organismos que absorben gran cantidad de metil mercurio de agua superficial cada da. Como consecuencia, el metil mercurio puede acumularse en peces y en las cadenas alimenticias de las que forman parte. Los efectos del Mercurio en los animales son dao en los riones, trastornos en el estmago, dao en los intestinos, fallos en la reproduccin y alteracin del ADN. 3. REVISIN BIBLIOGRFICA Previo al desarrollo de la metodologa para la cuantificacin del mercurio en suelos y la evaluacin de las especies del mismo, objeto de este proyecto, se realiz una revisin bibliogrfica con el fin de recopilar informacin sobre las diferentes metodologas empleadas en proyectos o estudios similares para contar con un panorama general del estado del arte en la materia y considerarlo como antecedente tomando como referencia el desempeo de los mtodos y los resultados obtenidos, as como para comparacin con los valores que se obtengan en este estudio. De la revisin bibliogrfica se observa que existen antecedentes en la evaluacin del mercurio desde hace ms de treinta aos, en una diversidad de matrices, siendo el anlisis de Hg en matrices biolgicas y alimentos las realizadas con mas antigedad. En varios casos se tienen referencias incluso de mtodos oficiales para la determinacin de mercurio con mtodos del AOAC, NIOSH y Standard Methods). En el cuadro a continuacin se presenta una comparacin de los mtodos disponibles para el anlisis de mercurio, donde se puede apreciar una amplia variacin en la sensibilidad que va desde ug/L o ng/g hasta ng/l o pg/g, lo que representa una diferencia de mil veces. Cabe destacar que el limite de deteccin como medida de sensibilidad de un mtodo depende de manera muy importante de varios factores como son el instrumento utilizado para la determinacin y su funcionamiento o estado, de la naturaleza de la

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matriz, de la presencia de interferencias en la misma, de los mtodos de procesamiento previo al anlisis, de la calidad de reactivos y estndares, entre otros.

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Mtodos empleados para el anlisis de mercurio y sus especies en matrices ambientales

Desempeo del mtodo Mtodo
CVAAS GC/AAS CVAFS GC/CVAFS Aire Aire Aire Aire

Matriz

Especies
Elemental metilmercurio elemental metilmercurio

Lmite de deteccin

CVAAS CVAAS Espectrofotomet ra a 492 nm CVAAS GFAAS AAS sin flama CVAAS GC/AAS NAA ASV ICP/IDMS DIN-ICP/MS HPLC/ECD

Aire Agua Agua Agua Agua Agua y agua residual Agua (total) Agua y nieve Agua consumo Agua Agua superficial Agua consumo Agua de

total

3 ug/m3 0,1 ng/m3metilHg < 1 ng/m3 0,3 pg(dimetilHg y Hg) 0,4 pg (dietilHg); 2 pg (cloruro de metil mercurio) 0,08 ng < 1 ug/L 2ug/L

Exactitud/% recuperacin 100 (4,6% RSD No disponible 105-111 91-105

Referencia
NIOSH 1994 (mtodo 6009) Paudyn and Van loon 1986 Temmerman et al. 1990 Bloom and Fitzgerald 1988

97-101 79-92 (9-23% RSD 95 a 250ug/L 99 94-102 No disponible 101-112 No disponible 95-107 100-105 86-98 No disponible 77-104

Hg inorgnico Hg inorgnico

0,1 ng/L < 2 ng/L No disponible 0,1 mg/L 4 ng(dimetilHg); 5 ng(etilHg) 45 ug/L

Hg total

Friese et al. 1990 Eaton et al. 1995 (Standard Method 3112B/3500B) Eaton et al. 1995 (standard Method 3500 C) Lee et al. 1989 Baxter and French 1989 AOAC 1984 (mtodos 32.095 to 33.099 Beckert et al. 1990; EPA 1994f (mtodo 7470a) Paudyn and Van Loon 1986 Itawi et al. Liu et al. 1990 Haraldsson et al. 1989 Powell et al. 1992 Evans and Mckee 1988

Hg total

No disponible ng/L 30-40 ng/L

de de

1,8 ug/L

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Termometra cintica ICP/AES Espectrofotome tra Espectrofotome tra XRF CVAAS CVAAS GC/AED

consumo y subterrnea Agua de consumo agua mar Agua residual Agua residual Efluente industrial Suelo Suelo Suelo sedimento lodo Suelo, sedimento Sedimento mussel Sedimento Muestras solidas pescado

2ug/L
Hg total 1,15 ug/L 50 ug/L No disponible Hg total Hg total Hg total Metil y fenil Hg 10 ug/g No disponible 0,1 mg/l 2,5 ng/ml extracto 0,1 ng/l en

No disponible

Mateo et al. 1988

96-98 No disponible 99-119 No disponible 90-110 84-101 106 (metil 6.3% RSD); 59 (fenilHg 12% RSD) 111 (sedimento); 60 (mussel) 96 84-108 (2.9-4% RSD) 89-111

Mahanti 1990 Yan et al. 1989 Raman and Shinde 1990 Grupp et al. 1989 Van Delft and Vos 1988 Beckert et al. 1990 EPA 1994 g (mtodo 7471a) Liu et al. 1994

CVAAS ICP/MS CVAFS GC/ECD

Hg total Hg total Hg total metilHg

Lee et al. 1989 Haraldsson et al. 1989 Morales-rubio et al. 1995 Ahmed et al. 1988

2ng/g
0,09 ng/g 50 ng/g (metil Hg)

Espectrometra IDSSMS GC/ECD CVAAS AAS (sin flama) CVAAS

Pescado Pescado plantas Pescado Pescado Pescado (musculo) Ostiones

y Metil Hg Hg total Hg total Hg total

No disponible 0,1 ug/g No disponible 0,195 ng/ml No disponible 0,84 ng/g

99-119 95 No disponible >95 No disponible 93-111

Raman and Shinde 1990 Moody and Paulsen 1988 AOAC 1984 (mtodos 25.146-25.157) Navarro et al. 1992 AOAC 1984 (mtodos 25.134-25137) Vermeir et al. 1989

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CVAAS

AFS AAS (sin flama) Colorimtrico (ditizona) AAS (sin flama) Espectrofotome tra Espectrofotome tra

(tejido), leche en polvo, harina de trigo Harina de trigo, hojas de ctricos, agujas de pino Leche en polvo, tejido de ostin Alimento Alimento Vino Farmacuticos Farmacuticos

Hg total

6 ng/g

91-108

Landi et al. 1990

Hg total Hg total Hg total Hg total

0,9 ng/L No disponible No disponible 6 ug/L No disponible 2 ug/L

94-102 No disponible No disponible 95-107 No disponible 95-111

Vermeir et al. 1991a, 1991b AOAC 1984 (mtodos 25.131-25.133 AOAC 1984 (mtodos 25.138-25.145 Cacho and Castells 1989 Agrawal and Desai Marquez et al. 1988

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3.1 Toma y Tratamiento de Muestras. La especiacin del mercurio presente en las muestras ambientales requiere de procedimientos analticos rigurosos en cada etapa: recoleccin de muestras, tratamiento y medicin (10). Los mejores materiales para el almacenamiento y procesado de muestras son Pyrex y Tefln (PTFE o FEP), tratados con un riguroso procedimiento de limpieza que debe realizarse primeramente lavando los recipientes con extrn o detergente especial para laboratorios, remojo de aproximadamente 24 horas en cido ntrico al 10% (10). Para la especiacin de mercurio se requiere asegurar la preservacin de todas las especies de inters, ya que puede ocurrir la prdida o contaminacin durante las diferentes etapas del proceso (toma de muestra, almacenamiento, pre-tratamiento y anlisis). Estos procesos se pueden determinar con dilucin isotpica de las especies especficas (15). El tratamiento de muestra es generalmente el paso mas critico, ya que existe una alta probabilidad de perdida del analito debido a que se encuentra a nivel de trazas. Adems, de que debe asegurarse que este procedimiento sea reproducibles y confiable, para lograrlo se requiere del uso de materiales y reactivos de alta calidad as como una manipulacin extremadamente cuidadosa. En todo momento debe asegurarse la integridad tanto de la forma qumica como de la concentracin de la especie buscada (10)(22)(28) . De esta manera debe establecerse metodologas de muestreo, manejo y preservacin sistemticas para garantizar que no se ha alterado la naturaleza e integridad de las muestras que se procesan y analizan. Las fuentes de error o factores que pueden ocasionar el deterioro de las especies de inters pueden ser reacciones qumicas entre especies o con el material del recipiente, la accin microbiana, la temperatura, el pH, o la luz, entre otros, motivo por lo que frecuentemente es recomendable el uso de conservadores (22)(28). 3.2 Mtodos y Procedimientos de Extraccin. Para el anlisis de sustancias qumicas, compuestos o elementos en una muestra es necesario extraerlos o hacerlos disponibles para su determinacin. En este caso el mercurio y sus especies deben extraerse de la matriz en la que se encuentren mediante procedimientos probados, adecuados y confiables, ya que deben asegurar una buena recuperacin de los analitos y evitar perdida o deterioro de los mismos. Los diferentes procedimientos de extraccin son: Extraccin con cidos o digestin. Es ampliamente utilizada y consiste en que la muestra se extrae en un medio cido adicionando generalmente cidos fuertes como HNO3, HCl, u otro En este caso concretamente se puede emplear la adicin de cloruro de sodio para liberar el metilmercurio, pero no de la especie Hg (II) de la matriz, el mercurio orgnico posteriormente puede extraerse con una fase orgnica. Es posible la utilizacin de una variedad de equipos auxiliares como son placa caliente, horno de microondas o autoclave, teniendo cada uno sus propias ventajas y desventajas como pueden ser costo, tiempo y requerimientos de entrenamiento del operador. Es importante establecer las condiciones ptimas como el tipo y concentracin de cido, cantidad de muestra, temperatura de

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extraccin y temperatura de irradiacin, ya que de esto depender la encontrando que eficiencia de extraccin y la estabilidad de las especies del mercurio. Extraccin alcalina o en medo bsico fuerte (KOH) o dbil (hidrxido de tetrametilamonio, TMAH), este mtodo es de forma general mas complicada que la cida y algunos autores consideran que la digestin a temperaturas superiores a la ambiente en medio bsico, puede inducir tambin a la formacin artificial de metilmercurio a partil del mercurio inorgnico presente en la muestra. Destilacin. Es menos versatil generalmente se emplea solo agua, KCl o NaCl y algn tipo de antiemulsionante. La temperatura de trabajo suele situarse entre los 140 y 180 C. Extraccin-preconcentracin de especies de mercurio. Frecuentemente es recomendable hacer una concentracin del mercurio o metales debido a que se encuentran en niveles muy bajos como en muestras biolgicas y ambientales, para que sea factible su deteccin y cuantificacin confiable con los mtodos analticos disponibles. Las tcnicas de preconcentracin pueden ser xtraccin lquido-lquido, en fase slida y una variante de stas son la microextraccin en fase slida (SPME) y atrapamiento criognico. La SPME es compatible tanto con la cromatografa de gases como con la de lquidos (22)(27).

3.3 Anlisis Se consideran cuatro pasos principales involucrados en la especiacin del mercurio, que deben observarse de manera individual. a). La extraccin de las especies de Mercurio de la muestra asegurando su integridad procurando que las especies permanezcan en ella. b) Preconcentracin de las especies de mercurio para llevarlos a un nivel de deteccin accesible, preservando la identidad de las especies. c). Separacin del mercurio inorgnico y del metilmercurio sin alterar sus niveles de concentracin relativos originales. d). Deteccin de cada una de las especies previamente separadas.

3.4 Separacin de Especies Las formas qumicas ms importante son para las muestras ambientales son Mercurio elemental (Hg), Mercurio inorgnico (Hg2+), Monometilmercurio (MMHg, CH3Hg+) Dimetilmercurio (DMHg, CH3HgCH3).

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En suelos y sedimentos el porcentaje de MMHg es usualmente muy bajo, resultado del equilibrio entre las reacciones de metilacin y dimetilacin, el valor caracterstico de metilmercurio va del 0.1 al 1% del mercurio total (27), con la salvedad de que puede haber interferencias por compuestos de sulfuro de mercurio (29). Es ms recomendable el anlisis de muestras frescas, sin embargo si se requiere el almacenamiento prolongado deben permanecer en la oscuridad a bajas temperaturas o liofilizadas (10). Tambin se utiliz un sistema HPLC-ICP-MS para separar las especies, inorgnica y metil mercurio en cabello. Se muestra cmo prevenir la posible destruccin de las especies de metilmercurio en un procedimiento de digestin, utilizando cido clorhdrico o agentes quelantes. Las especies son determinadas simultneamente despus de digestin cida, enlazando las especies a la muestra y la estabilidad del metilmercurio bajo las condiciones de digestin (14). Por otra parte, se realiz una especiacin selectiva de las especies alqulicas del mercurio en muestras de suelo, utilizando una solucin de etanol cido (2% de HCl en una solucin de etanol al 10%), demostrando una buena extraccin y separacin (30). 3.5 Columnas y Parmetros Cromatogrficos Las condiciones usadas para la especiacin de mercurio Se utiliz una columna Hypersil GOLD (150 x 4.6 mm, 5m), con un volumen de Inyeccin de 100 L y un flujo de 1,5 mL min-1, con una elucin Isocrtica de 60 mM acetato de amonio, 5% metanol y 0,01% 2mercaptoetanol Se tomaron alcuotas de aproximadamente 200 mg de muestra digerida. La curva de calibracin externa fue generada utilizando un blanco y estndares de calibracin MeHg+ y Hg2+ de 0,1; 0,5; 1; 2 y 5 ng g-1(4). Se utiliza esta referencia como punto de partida para el montaje del mtodo. Tambin se utiliz una columna C18 para separar las especies con una fase mvil de acetato de amonio, acetonitrilo y/o metanol y 2-mercaptoetanol (14). En otro experimento, la separacin de los especies del mercurio fue realizada en una columna de polmero de intercambio catinico con una fase mvil de 50 mmol de piridina, 0,5% de l-cisteina en metanol al 5% a un pH de 2. Se monitorearon la influencia de los parmetros cromatogrficos, pH, concentracin de sales, modificadores orgnicos y el reactivo de iones apareados. Se tuvieron lmites de deteccin de 1,0 y 1,6 pg de mercurio con una inyeccin de 20 microlitros (13). Tambin se utiliz un sistema HPLC-ICP-MS con una columna C18 y un eluyente de fase acuosa (0,08% acetato de amonio y 0,02% lcisteina). El HPLC-ICP-MS fue usado para estudiar la formacin abitica del metilmercurio (CH3Hg+), a partir de mercurio inorgnico as como la desmetilacin de CH3Hg+ a Hg2+ (15). En un mtodo realizado en China, se hace la extraccin cida mediante la centrifugacin de la muestra, utilizando una columna Zorbax Eclipse XDB-C18 de 2,1 mm de DI. *50mm, 5m, con fase mvil de 0.06 mol/L de acetato de amonio, 5% v/v de metanol y 0.1% de 2 mercaptoetanol con un pH =6.8, con un flujo de 0,4 mL/min y un volumen de inyeccin de 100 L , con una serie de estndares de calibracin de 10 ng/L hasta 100 g/L por la dilucin de las especies de mercurio en la solucin de referencia , con un rango lineal de 4 rdenes (28).

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En un mtodo para detectar componentes de metilsulfuro se utiliz una columna RP C18 (Hypersil-ODS, 80 mm * 4,6 mm, con un tamao de partcula de 3 m, con fase mvil de acetonitrilo-agua (65:35) V/V y como agente complejante, ditiocarbonato sdico de pirrolidina (0.5 mmol/L), y con un buffer de acetato de amonio ajustado a un pH de 4.5, a un flujo de mL/min, con una presin de 90-140 x 105 Pa (29). Para el mtodo de extraccin con etanol cido (30), se utiliz una solucin de tuning con una matriz de 30% de metanol para el ICP-MS y para el acoplamiento con HPLC utiliz una columna Supercosil LC-18 con una salva columna Pelliguard LC-18. La fase mvil fue una solucin tampn de 30% de metanol (30). Se utilizaron diferentes combinaciones para la solucin de extraccin, as como para la fase mvil. 3.6 Materiales de Referencia Un mtodo fue validado mediante el uso de dos muestras de suelo superficial preparado especficamente y cuatro materiales de referencia certificados (BCR 580, SRM 2704, SRM 2709 y SRM 1941a). El mtodo fue validado usando el EPA Method 6800 como herramienta de diagnstico para verificar la interconversin de mercurio inorgnico a metilmercurio o viceversa. La conversin result estadsticamente despreciable (21). En otro estudio, la tcnica se compar con estndares de referencia certificados DORM-2 y DOLT-3 (13), con una preparacin de muestra rpida y sencilla utilizando cido clorhdrico. Hay otros estudios en donde se utiliz DORM-2 CRM para validar la metodologa analtica para el metilmercurio (4)(19). Para la validacin de las especies de mercurio en suelos y sedimentos se utilizaron, una muestra adicionada de suelo superficial procesado (Hg < 0,01 ng g-1) con mercurio inorgnico y metilmercurio y SRM 2711 (adicionado con metilmercurio) (21). Se muestra una lista amplia que incluye materiales de referencia certificados (CRM) para muestras biolgicas, recomendando el CRM 580, Total Hg and Methylmercury in sediment, producido por BCR (Comisin Europea) y el IAEA 356, Total Hg and Methylmercury in sediement producido por IAEA (Austria)(10). En otro estudio se utilizaron el IAEA 356, el CRM S19 y el CRM A, todos en Sediment (27). EN la extraccin con etanol cido se utilizaron como materiales de referencia el CRM 580 y el SRM 2709. Condiciones Cromatogrficas para la Especiacin de Mercurio por ICP-MS-HPLC Se tomaron como referencia inicial las condiciones establecidas en la aplicacin 40782 de Thermo The Speciation of Mercury in Biomedical and Enviromental Samplesusing HPLC coupled to the XseriesII ICP-MS (4). Parmetros del HPLC y Condiciones analticas del HPLC-ICP-MS: Columna Hypersil GOLD (150 x 4.6 mm, 5m) Volumen de Inyeccin 100 L Flujo 1,5 mL min-1 Elucin Isocrtica 60 mM acetato de amonio, 5% metanol, 0,01% 2-mercaptoetanol Potencia 1100 W Flujo del Gas Nebulizador 0,9 L min-1 Flujo del Gas Auxiliar 0,9 L min-1

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Flujo del Gas de Enfriamiento Data Acquisition Mode Isotopos y dwell times, Canales por UMA Timeslice duration Transient acquisition time Spray chamber Nebulizador Conos X

13,5 L min-1 PlasmaLab Transient Time Resolved Analysis (TRA) ms 200Hg, 202Hg (100 ms) 1 203 ms 600 s Glass impact bead Glass concentric (XS- mode)

4. METODOS DE REFERENCIA 4.1 EPA Method 3200, Mercury Species Fractionation and Quantification by Microwave Assisted Extraction, Selective Solvent Extraction and/or Solid Phase Extraction, Revision 0, Julio 2005. 4.2 EPA Method 6020, Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry, Revision 0, September 1994 4.3 EPA Method 200.8, Determination of Trace Elements in Water and Wastes by Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry. Revision 5.4, EMMC Version, 1994. 4.4 EPA 3051A Microwave Assisted Acid Digestion of Sediments, Sludges, Soils and Oils. Revision 1, January 1998 5. DESARROLLO DEL METODO DE ANLISIS DE MERCURIO 5.1 METODO DE ANLISIS DE MERCURIO EN SUELOS Y SEDIMENTOS POR ICP-MS Para este proyecto y en una etapa inicial se desarrolla en primera instancia la optimizacin y evaluacin del desempeo instrumental del ICP/MS, para posteriormente implantar un mtodo de anlisis para la cuantificacin de mercurio total en suelos y la validacin del mismo para determinar la sensibilidad, precisin y exactitud empleando estndares, materiales de referencia y suelos. 5.1.1 Configuracin del instrumento: ICP-MS Marca Thermo, Modelo Xseries2 Instrument Configuration Instrument serial number X0831 El instrumento fue operado utilizando las siguientes condiciones Parmetro Posicin/valor Embedded PC is on COM 2 Default Calculations Real time calculations Enabled Valley integration Valley integration Enabled Use above (cps) 1000 Integration range around peak +/- (amu) 0.1 Quadrupole parameters Minimum settle t 1500

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(uSecs) Maximum settle time (uSecs) 15000 Safe resting mass (amu) 150 Detector parameters Discriminator 0 Deadtime correction (nSecs) 35 PC Trip integration time (uSecs) 2700 PC Trip count 100 Switch PC off when Analogue is greater than 225 Switch PC on when Analogue is less than 60 Integration window (uSecs) 500 Autostart parameters Maximum wait for w 10 flow (s) Nebuliser purge time (Secs) 60 Nebuliser settle time (Secs) 20 Minimum neb. gas flow during purge (slm) 0.8 Ignition cool gas flow (slm) 13 Ignition auxiliary gas flow (slm) 0.8 Maximum wait for torch move ( secs ) 10 Torch ignition position 150 Ignition Power (W) 900 Post ignition position 150 Post ignition power 1400 Load capacitor ignition position 20 Tune capacitor ignition position 200 Use Load and Tune capacitor positions Disabled Max. expansion pump out (secs) 30 Turbo pump settle delay (secs) 10 Purge gas pulse duration (secs) 4 Turbo current stability 8 Backing Line pressurised current (A) 1.6 Maximum Turbo Current (A) 2.5 Post slide valve open delay (sec) 2 Torch Cooling time (secs) 30 Multiplier protection Counter card PC trip (c 2700 Multiplier trip handling Enabled Mass trip handling Maximum trips at sa 1 mass in a run When the maximum is reached Remove mass from this detector mode Sample run type trip handling Sample run Enabled handling Maximum trips during a sample run type 2 When the maximum is reached Abort run type Experiment trip handling Experiment trip Disabled handling

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Maximum trips during an experiment When the maximum is reached Configuration Editor X Series Default Available Accessories and Devices Model Cetac 500

0 Abort experiment Normal Pump Device Type Autosampler Description serial port 1, baud r 9600 operate at 30%

Peri Pump Peri-pump Timmings Uptake and Washout timings Use Monitored Minimum Delay (s) Maximum Delay Timeout Action (s) Uptake 10 10 Continue Washout 10 10 Continue Acquisition Parameters Survey Sweep 10 Main: Sweep 100 None Internal Standards No Isotope Ratio

5.1.2 Preparacin de Curva de calibracin. Preparacin de la solucin de calibracin: Elaboracin de solucin stock de Mercurio de 1000 ug/L a partir de un estndar de 10 mg/L de Hg La curva de calibracin fue elaborada en un intervalo de 0 a 5,0 ug/L con 5 puntos de concentracin de Hg en HNO3 al 5% con 200 ug/L de oro (a partir de una solucin de 1000 ug/ml) Puntos de curva de calibracin 0,25; 0,5; 1,0; 2,5 y 5,0 ug/L 5.1.3 Evaluacin de Curva de calibracin Se evaluaron tres curvas de calibracin obteniendo los siguientes datos:

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Curva de calibracin 1

Curva de calibracin 2

Curva de calibracin 3

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5.1.4 Validacin del Desempeo instrumental Lmite de deteccin y cuantificacin instrumental mediante el anlisis de 7 blancos de acido ntrico al 5% en agua desionizada. Datos obtenidos: Identificacin Blanco 1 Blanco 2 Blanco 3 Blanco 4 Blanco 5 Blanco 6 Blanco 7 Promedio(x) Desv. Std (S) Hg ug/L 0,010 0,012 0,004 0,003 0,012 0,007 0,006 0,008 0,024

Lmite de Deteccin Instrumental (S*3,14) = 0,024 ug/L Lmite de Cuantificacin Instrumental (LDI*5) = 0,121 ug/L Precisin y Exactitud. La precisin y exactitud del mtodo se determinaron con el anlisis de 10 blancos de 0,2 g de arena purificada adicionados con 1,3 ug/g de Hg y digeridos con 5 ml HNO3 ultrapuro por horno de microondas. 5.1.5 Criterios de aceptacin para construccin de grficos de control. Datos obtenidos: Peso Resultados arena Concentracin obtenidos purificada Adicionada de de Hg en % (g) Hg en ug/g ug/g Recobro 0,2020 1,280 1,273 99,5 0,2000 1,317 1,352 102,7 0,2005 1,156 1,136 98,3 0,2010 1,284 1,288 100,3 0,2015 1,345 1,380 102,6 0,2019 1,339 1.363 101,8 0,2010 1,313 1,332 101,5 0,2026 1,337 1,366 102,2 0,2012 1,328 1,340 100,9 0,2001 1,342 1,356 101,1 Exactitud: Promedio(x): 101,079 %

% DPR 3,2 2,0 0,8 0,7 0,2 -----------------------------

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Desviacin estndar (S): 1.17 % 104.6 103.4 101.1 98.7 97.6

Lmite Superior de Control Lmite Superior de Advertencia Promedio Lmite Inferior de Advertencia Lmite Inferior de Control Para Precisin: Promedio (x): 1,4 Desviacin estndar (S): 1.2 Lmite de Control Lmite de Advertencia

:(x + 3S) :(x + 2S) :(sum x /n) :(x - 2S) :(x - 3S)

:(x + 3S) :(x + 2S)

5,0 3,8

% %

5.2 METODO DE PARA ESPECIACION Y ANLISIS DE MERCURIO EN SUELOS Y SEDIMENTOS POR ICP-MS-HPLC 5.2.1 Configuracin del instrumento: La configuracin del ICP-MS Marca Thermo, Modelo Xseries2 es la mencionada en 5.1 La configuracin del HPLC Finnigan Surveyor es Parmetro Columna Volumen de Inyeccin Flujo Elucin Isocrtica Posicin/valor Hypersil GOLD (150 x 4.6 mm, 5m) 100 L 1,5 mL min-1 60 mM acetato de amonio, 5% metanol, 0,01% 2mercaptoetanol 1100 W 0,9 L min-1 0,9 L min-1 13,5 L min-1 PlasmaLab Transient Time Resolved Analysis (TRA)

Potencia Flujo del Gas Nebulizador Flujo del Gas Auxiliar Flujo del Gas de Enfriamiento Data Acquisition Mode

5.2.2 Preparacin de Curva de calibracin. Preparacin de la solucin de calibracin: Elaboracin de solucin stock de Mercurio y Metil mercurio de 1000 ug/L y 10 000 ug/L.

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La curva de calibracin fue elaborada en un intervalo de 0 a 10,0 ug/L con 5 puntos de concentracin de Hg y metilmercurio en la fase de 60 mM acetato de amonio, 5% metanol, 0,01% 2-mercaptoetanol con 200 ug/L de oro (a partir de una solucin de 1000 ug/ml) 5.2.3. Evaluacin de Curva de calibracin Se evaluaron tres curvas de calibracin obteniendo los siguientes datos:

Curva de calibracin 1

Curva de calibracin 2

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Curva de calibracin 3

5.2.3 Validacin del Desempeo instrumental Lmite de deteccin y cuantificacin instrumental mediante el anlisis de 7 blancos. Lmite de Deteccin Instrumental Hg inorgnico (S*3,14) = Lmite de Cuantificacin Instrumental Hg inorgnico (LDI*5) = 0,03 ug/Kg 0,2 ug/Kg

Lmite de Deteccin Instrumental Metilmercurio (S*3,14) = 0,02 ug/Kg Lmite de Cuantificacin Instrumental de Metilmercurio (LDI*5) = 0,1 ug/Kg Precisin y Exactitud. La precisin y exactitud del mtodo se determinaron con el anlisis de 10 blancos de 0,2 g de arena purificada adicionados con 5 ug/Kg de Hg y metilmercurio. 5.2.4 Criterios de aceptacin para construccin de grficos de control. Datos obtenidos: Exactitud: Mercurio Inorgnico Promedio(x): 95 % Desviacin estndar (S): 5,6 % 112 106.2 95 83.8 78,2

Lmite Superior de Control Lmite Superior de Advertencia Promedio Lmite Inferior de Advertencia Lmite Inferior de Control

:(x + 3S) :(x + 2S) :(sum x /n) :(x - 2S) :(x - 3S)

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Metilmercurio Promedio(x): 90 % Desviacin estndar (S): 3.7 % 101.1 97.4 90 82.6 78.9

Lmite Superior de Control Lmite Superior de Advertencia Promedio Lmite Inferior de Advertencia Lmite Inferior de Control

:(x + 3S) :(x + 2S) :(sum x /n) :(x - 2S) :(x - 3S)

Precisin: Mercurio inorgnico Promedio (x): 4,3 Desviacin estndar (S): 2 Lmite de Control:(x + 3S) Lmite de Advertencia :(x + 2S) 10,3 % 6,3 %

Metilmercurio Promedio (x): 5,4 Desviacin estndar (S): 2,5 Lmite de Control:(x + 3S) Lmite de Advertencia :(x + 2S) 12,9 % 10,4%

6. Procedimiento para anlisis y especiacin de mercurio en suelos y sedimentos Se elaboro un procedimiento conforme lo establece el sistema de gestin de calidad de la DGCENICA en el que se describe de forma detallada las condiciones del mtodo y la metodologa del procesamiento de muestras , para el anlisis de suelos y sedimentos

7. Bibliografa. 1. E. L. Miller, D. E. Dobb, E. M. Heithmar, Speciation of Mercury in soils by sequential extraction, http://www.epa.gov/esd/pdf-ecb/542asd95.pdf. 2. EPA Method 3200, Mercury species fractionation and quantification by microwave assisted extraction, selective solvent extraction and/or solid phase extraction, revisin 0, Julio 2005.

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