UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE CIENCIAS E.A..P.

BIOLOGIA EN ACUICULTURA

PRCTICA N 03

OBSERVACIN DE VULOS Y ESPERMATOZOIDES DE PECES

Alumno:
Jorge Vergaray Capristano

I.

INTRODUCCIN: En el estudio de la Biologa Reproductiva de los peces es sumamente importante el conocimiento del desarrollo gonadal de stos. Para ello se recurren a diferentes mtodos y tcnicas para determinar las escalas de madurez sexual. eneralmente se realizan escalas de madurez sexual empricas! "asadas en la o"servaci#n del color! tama$o y textura de las g#nadas tanto de %em"ras como de mac%os. &in em"argo! cuando existen evidencias de cierta falta de consistencia de una escala de madurez sexual emprica! es necesario recurrir a los estudios %istol#gicos con la finalidad de definir los estados de madurez sexual y conocer detalladamente el ciclo reproductivo de los peces. En "ase a las o"servaciones %istol#gicas! se puede o"tener una serie de elementos 'ue nos permiten descartar incluso la m(s leve aproximaci#n entre uno y otro estado de madurez! con lo 'ue se o"tendra un conocimiento preciso de lo 'ue sucede con el desarrollo gonadal de determinada especie. Para realizar escalas de madurez sexual "asadas en cortes %istol#gicos se de"en o"servar las caractersticas de los #vulos y espermatozoides a fin de poder determinar si nos encontramos ante organismos inmaduros! maduros o desovados. )"servaciones en fresco de los gametos! permite visualizar la vitalidad de estos El espermatozoide cuenta con tres partes "ien diferenciadas* ca"eza! cuello y cola envueltas por una mem"rana ondulada. + diferencia de los espermatozoides de mamferos! los espermatozoides de los peces no cuentan con acrosoma. ,os #vulos generalmente son esfricos! y provistos de un cori#n externo muy denso! con un pe'ue$o agu-ero en el polo animal denominado micro i!o. &e puede o"servar en su interior gr(nulos de vitelo! pe'ue$os o grandes dependiendo del estado de madurez en 'ue se encuentre el #vulo.

II.

O"#$%i&o':

)"servar las caractersticas de #vulos y espermatozoides en peces.

Realizar escalas de madurez %istol#gicas en "ase a las o"servaciones realizadas.

III.

R$'(!%)*o':

)rgano prue"a* se utilizo . g#nadas %em"ras! de las especies Anisotremus scapularis /C%ita0! Sarda orientalis /Bonito0 ! Cheilodactylus variegatus /Pintadilla0 y una gonada de mac%o de la especie Sarda orientalis /Bonito0 los cuales fueron pesados! medidos y enumerados posteriormente.
1 2 3

1. +o,)*) -$m"r) *$ Isacia conceptionis /Ca"inza0 2. +o,)*) .$m"r) *$ Cheilodactylus variegatus /Pintadilla0 3. +o,)*) -$m"r) *$ Anisotremus scapularis /C%ita0

1. +o,)*) M)c-o *$ Sarda orientalis /Bonito0 Posteriormente se realizo un frotis gonadal de cada una de las muestras y se procedio a o"servarlas en microscopio para su an(lisis. a2 /ro%i' +o,)*)! -$m"r) *$ Anisotremus scapularis /C%ita0 3145 Resoluci#n2.

1 2

0. Co, &$r*$ '$ i,*ic) !) r$'$,ci) *$ 1r2,(!o' *$ &i%$!o )1r( )*o' $, !) )r%$ c$,%r)! *$! o&oci%o. Co, )3(! '$ i,*ic) $! corio, ,o m(4 *$5i,i*o. 6. Co, )3(! '$ i,*ic) !) &$'7c(!) *$ &i%$!o $, $! o&oci%o.
b) /ro%i' 1o,)*)! -$m"r) *$ Isacia conceptionis /Ca"inza0 314x Resoluci#n2

&e o"serva un ovocito parcialmente vitelogenado! 62 indica la presencia del colema o zona pelucida7 82 citoplasma con gr(nulos de vitelo7 .2 n9cleo

c2 /ro%i' +o,)*)! -$m"r) *$ Isacia conceptionis /Ca"inza0 (40X resolucin) 1

6. Con ro-o se indica la presencia de )vocitos no maduros lo cual indica esta en vitelognesis la g#nada. 8. Con ro-o se indica la posici#n del n9cleo Excntrico y la presencia del corion y epitelio folicular.

d2 /ro%i' +o,)*)! -$m"r) *$ Cheilodactylus variegatus /Pintadilla0 3145 resolucion2

2 1

0. S0. '$ i,*ic) co, &$r*$ !) r$'$,ci) *$ 1r2,(!o' *$ &i%$!o 1r),*$'8 oc( ),*o (, 90 : *$! %o%)! *$! o&oci%o.

C()*ro N 0. E'c)!) *$ m)*(r$' .i'%o!;1ic) )r) !)' $' $ci$' $'%(*i)*)'. /)'$ II E'%)*o )vocito Pre vitelogenado )vocito Parcialmente Vitelogenado D$'cri ci;, presencia de pe'ue$os gr(nulos de vitelo presenta gr(nulos de vitelo distri"uidos espacialmente por todo el citoplasma Presencia de <9cleo Excntrico a la parte externa del )vocito! muy cerca al Corion. )vocito con vitelo =usionado E' $ci$ C%ita

II

Pintadilla

III

)vocito :idratado ;nicial

Ca"inza

)vocito :idratado =inal

C%ita

IV.

Di'c('i;,:

&eg9n =+) 36>?12 sostiene 'ue las determinaciones de los sexos y de las fases de madurez sexual tienen su aplicaci#n primordial en proporcionar conocimientos fundamentales de la "iologa de la reproducci#n de una po"laci#n. + su vez tam"in manifiesta 'ue la informaci#n o"tenida de estos an(lisis puede emplearse para esta"lecer la edad y talla a 'ue los peces alcanzan la madurez sexual! el momento y lugar de la reproducci#n y la duraci#n del ciclo desde el comienzo del desarrollo del ovario %asta la puesta de los %uevos. ,os reproductores parciales son a'uellos en los 'ue la reproducci#n tarda muc%o tiempo y se pueden encontrar simult(neamente en los ovarios %uevos en maduraci#n en fases muy diferentes de desarrollo! antes y durante el desove. 3=+)! 6>?12. @am"in! este mismo autor sostiene 'ue la fi-aci#n de una escala de madurez para los reproductores parciales es m(s difcil por'ue %ay una gama de fases de desarrollo en una g#nada en todo momento y la diferenciaci#n lograda ser( menos precisa. ,a etapa de +lvolos corticales! es el estado 'ue se caracteriza por la aparici#n de vesculas o alveolos en el citoplasma. Con la preparaci#n convencional de :AE estas estructuras se o"servan como esferas %uecas. ,as vesculas aumentan de tama$o y n9mero %asta formar varias filas en la periferia del citoplasma! dando origen a los alveolos corticales. Estas vesculas li"eran su contenido en el espacio perivitelino dentro de las mem"ranas del %uevo durante la fertilizaci#n. <o constituyen vitelo en sentido estricto! ya 'ue su funci#n no ser( la de alimentar al em"ri#n y por tanto el trmino e'uivalente de Bvesculas de viteloC 'ue aparece a veces en la "i"liografa es confuso e incorrecto! de"iendo ser reemplazado por el trmino Balveolos corticalesC. ,a aparici#n de estas estructuras significa 'ue ese ovocito %a comenzado el proceso de maduraci#n y el pez %a entrado en la fase adulta. El corion 3zona radiata! mem"rana vitelina! zona pel9cida2 aparece normalmente en este estado y algunos autores utilizan la presencia de am"as estructuras 3alveolos corticales y c#rion2 para definir este estado. &in em"argo el momento en el 'ue el c#rion aparece vara seg9n las especies. ,a aparici#n de estas estructuras significa 'ue ese ovocito %a comenzado el proceso de maduraci#n y por tanto! en condiciones normales! continuar( el desarrollo dentro de ese ciclo reproductivo 3Dallace y &elman 6>E62 uraya! 6>EF! menciona 'ue para )vocitos previtelognicos la medida del )vocito es de 16 mm promedio! el n9cleo esta en posici#n central! varios nuclolos ad%eridos a la

superficie interna de la mem"rana nuclear! citoplasma de aspecto granular con una leve reacci#n P+& positiva. En contraste con el autor en Anisotremus scapularis /C%ita0 se pudo o"servar la reciente formaci#n de vitelo! 'ue da"a la apariencia de un n9cleo en el centro del )vocito. Gientras tanto las paredes de este no esta"an muy "ien definidas. Hurante vitelognesis! esta etapa se caracteriza por la aparici#n de esferas o gl#"ulos llenos de vitelo. +l principio los gr(nulos son de pe'ue$o tama$o y se %acen mayores al avanzar este estado. ,as esferas de vitelo pueden mantener su integridad a lo largo de toda la fase de crecimiento del ovocito! fusion(ndose al final formando una masa fluida continua! 'ue le da a los ovocitos su tpico aspecto transparente. ,o normal es 'ue esto no ocurra %asta el final de la fase de crecimiento del ovocito. +un'ue en la mayora de los tele#steos estudiados los alvolos corticales aparecen antes de la fase de acumulaci#n de vitelo! existen excepciones 3e-. Hicentrarc%us la"rax2! en 'ue se forman despus. + menudo este estado se su"divide por conveniencia en fases sucesivas I vitelogensis primaria! secundaria y terciaria! aun'ue esta terminologa no es muy consistente. + medida 'ue se desarrolla! las clulas de la pared folicular se multiplican y se estratifican! distinguindose una capa continua 3la granulosa2 y las distintas capas exteriores de la cu"ierta del folculo 3la teca2. Por tanto los ovocitos vitelognicos est(n rodeados de dos capas de clulas principales* una exterior 3la teca2 y otra interior 3la granulosa2! 'ue est(n separadas por una mem"rana "asal. ,a teca contiene fi"ro"lastos! fi"ras de col(geno! capilares y en algunas especies! clulas especializadas secretoras de esteroides. 3Dallace y &elman 6>E62 uraya! 6>EFJ menciona 'ue para ovocitos en vitelo gnesis el incremento de tama$o citoplasm(tico se da por acumulaci#n de vitelo. El n9cleo se desplaza %acia la periferia de la clula y su contorno se torna irregular! gran cantidad de nucleolos en el "orde interno de la carioteca. Kna activa extrusi#n nucleolar %acia el citoplasma refle-ara el transporte de R<+! para ser usado en la ela"oraci#n del vitelo. Cuando se examino )vocito de Cheilodactylus variegatus /Pintadilla0 se pudo apreciar todo lo 'ue mencio el autor uraya! con excepci#n de la presencia de nuclolos en el "orde de la carioteca. Gaduraci#n. Cuando el ovocito %a completado su desarrollo! la estimulaci#n %ormonal desencadena la maduraci#n del ovocito! tras la cual este ser( li"erado en el l9men del

ovario. El inicio de este estado est( marcado por la migraci#n del n9cleo %acia la periferia del citoplasma y la fusi#n de su mem"rana. &e produce entonces la primera divisi#n mei#tica! por la cual una de las clulas %aploides se 'uedara con la pr(ctica totalidad del material citoplasm(tico! mientras 'ue la otra! denominado primer cuerpo polar! degenerar(. ,as fotografas de esta estructura son raras en la "i"liografa so"re peces. ,a li"eraci#n del segundo cuerpo polar! tras la segunda divisi#n mei#tica! ocurre tras la ovulaci#n. En algunas especies durante el proceso de maduraci#n la coalescencia de los gl#"ulos de vitelo ocurre simult(neamente a la migraci#n de n9cleo. En muc%as especies de tele#steos al final de la maduraci#n se produce el fen#meno conocido como %idrataci#n! 'ue consiste en la incorporaci#n r(pida de agua! produciendo un nuevo incremento en el tama$o del )vocito. Este proceso es muy marcado en las especies de peces marinos 'ue producen %uevos flotantes. &irve por un lado para facilitar la expulsi#n de los )vocito por el aumento de la presi#n interna del ovario! y por otro lado para favorecer la flota"ilidad de los %uevos en el agua de mar. El inicio de la %idrataci#n es indicativo de la puesta inminente en un plazo de %oras 3=ulton! 6E>E2. +l final de la maduraci#n se produce la ovulaci#n! sta ocurre con la ruptura del folculo 'ue contena el )vocito! 'ue es li"erado as en el l9men del ovario. ,os folculos post ovulatorios 'ue resultan de este proceso se identifican f(cilmente cuando son recientes! pero degeneran m(s o menos r(pidamente dependiendo de la temperatura 3del orden de %oras a 84 JC al orden de meses a 4JC2. ,os folculos post ovulatorios antiguos no se distinguen f(cilmente de los ovocitos en atresia 3degeneraci#n2. :ay 'ue se$alar 'ue la ovulaci#n y las puestas son dos procesos totalmente separados! controlados por distintos mecanismos. Es por este motivo 'ue en ausencia de o"servaciones directas es muy difcil conocer exactamente el n9mero de %uevos realmente puestos 3fecundidad real2 y generalmente solo podemos llegar a conocer el n9mero de %uevos 'ue van a ser ovulados 3fecundidad potencial2 3Dallace y &elman 6>E62. Esto pudo ser corro"orado mediante la o"servaci#n del frotis gonadal en Isacia conceptionis /Ca"inza0! ya se determino la migraci#n del n9cleo %acia el exterior de el )vocito.

V.

R$5$r$,ci)' Bi"!io1r25ic)':

P):,LBR+<&C:E;H! G. and D. :),@M. 6>>4. Control of spaNning activity in male and female rain"oN trout (Oncorhynchus mykiss) "y repeated fores%ortened seasonal lig%t cycles. +'uaculture! EF* >.L641. E&@+O! =.! <. H;+M y J. GE,,+. 6>>4. Ciclo reproductivo gonadal de una po"laci#n de truc%a arco iris! (Oncorhynchus mykiss) de la zona central de C%ile. Gedio +m"iente! 66362* 6PL8.. M:+< ! :.! .+. +,, and &.&. :K< . 6>>4. Effect of sire diet and NeeQ of spaNning on volume of eggs retained "y artificial;y spaNned rain"oN trout. +'uaculture! E?* 8.L ... uraya! &. 6>EF. @%e cell and molecular "iology of fis% oogenesis. Gonograp%s indevelopmental "iology 6E*6L8... Dallace R.+. A &elman R. 6>E6. Cellular and dinamic aspects of oocyte groNt% in teleosts. American !oologist 86* .8PL.1..

%ttp*SSNNN.fao.orgSdocrepS44.S=4?P8&S=4?P8&4P.:@G

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<C;mo ($*$ *i5$r$,ci)r o&oci%o' *$ (, $3 $, $'%)*o Vir1$, co, !o' o&oci%o' *$ (, $3 $, $'%)*o *$ r$ o'o=

Reposo* @odos los ovocitos presentan crecimiento primario 3Knos pocos %uevos en estado de resorci#n2 y est(n distri"uidos en forma no compacta. El tama$o de la g#nada es pe'ue$a y de color transparente o gris ros(ceo. En cuanto la vasculirazion es mnima y la consistencia es fl(cida

Virgen* <o se o"serva la presencia de ovocitos. El tama$o es pe'ue$o y color gris transparente. O la consistencia de esta es firme.

<A >(? cr$$ U*. S$ *$"$ !) )('$,ci) *$ )cro'om) $, !o' $' $rm)%o3oi*$' *$ !o' $c$'= ,os espermatozoides de los peces no poseen acrosoma! ya 'ue este entra a travs de un orificio de la ova del llamado micr#pilo.