Algodn transgnico: MTODOS DE biotransformacin en aplicacin agrcola RESUMEN Algodn transgnico s encuentra Entre Las Plantas transgnicas primera

adoptadas comercialmente en Todo el Mundo. Como era de primera introduccin en la materia en el Medio de 1990, el algodn transgnico ha Sido adoptado rapidamente Por los Productores de algodn en MUCHOS Pases desarrollados y en Desarrollo. El algodn transgnico ha ofrecido muchas importantes ambientales, sociales y econmicas beneficios, incluyendo el uso reducido de plaguicidas, aumento indirecto de rendimiento, reduciendo al mnimo la contaminacin del medio ambiente y la reduccin de mano de obra y el costo. Mtodo de transformacin gentica mediada por Agrobacterium es el mtodo principal para la obtencin de algodn transgnico. Sin embargo, el mtodo de la va mediada tubo polnico tambin se utiliza, sobre todo por los cientficos en China, para criar el algodn transgnico comercial. Aunque las plantas de algodn transgnicas con resistencia a enfermedades, tolerancia al estrs abitico, y la mejora de la calidad de fi bra se han desarrollado en las ltimas dcadas, el algodn resistente a los insectos y tolerante a herbicidas son los dos algodones transgnicos dominantes en el mercado del algodn transgnico. 1. Introduccin El algodn es el cultivo ms importante de fi bra, sino que tambin es el principal recurso de protena vegetal y aceite comestible. Como era fi rst cultiva entre hace 5.000 y 10.000 aos, la produccin de algodn tiene enormemente en fluy desarrollo econmico mundial (1). En la actualidad, el algodn se cultiva comercialmente en ms de 70 pases de todo el mundo, incluidos los EE.UU., China, y muchos pases en desarrollo (2), sino que se est convirtiendo en un importante cultivo comercial y se estima que ms de 180 millones de personas se asocian con el en todo el mundo de algodn fi industria ber, que produce anualmente 20-30000000000 dlares en algodn en rama (3). Por lo tanto, la mejora de algodn ha llamado mucho la atencin de los cientficos y criadores en las ltimas dcadas. Una de las mayores contribuciones es mejorar el rendimiento agronmico de algodn, sobre todo en la resistencia del algodn a los insectos y tolerancia a herbicidas, el uso de tecnologas transgnicas. La primera fi algodn transgnico se obtuvo en 1987 por dos grupos independientes (4, 5), en el que transforman un gen reportero en el genoma de algodn a travs de una transformacin gentica mediada por Agrobacterium. A pesar de que es uno de los cultivos rst fi, incluyendo especies modelo, la obtencin de plantas transgnicas en la fase temprana de tcnicas de plantas transgnicas, se han realizado pocos progresos en la fi RST varios aos mayormente debido al hecho de que la regeneracin de plantas a travs de la embriognesis somtica se mantuvo extremadamente diferentes culto fi para el algodn. Como sabemos, el mtodo ms eficaz para la transformacin de plantas es la transformacin gentica mediada por Agrobacterium, que requiere dos pasos importantes: (1) transferir e integrar los genes extraos en el genoma de la planta y (2) obtener una planta entera de la clula transformada individual . Aunque cualquier clula contiene un conjunto completo de informacin gentica y permite que una clula tiene el potencial de convertirse en una planta entera, la tcnica de cultivo de tejidos no es lo suficientemente maduro para inducir cualquier clula de diferenciarse en embriones somticos o disparar. Por lo tanto, la regeneracin de plantas sigue siendo el cuello de botella para la transformacin de muchas especies de plantas, incluido el algodn. Desde entonces, muchos cientficos de diferentes laboratorios han investigado el efecto de diferentes factores en la embriognesis somtica y regeneracin de plantas de algodn (6-33). Debido a la mejora del cultivo de tejidos de algodn y la regeneracin de plantas, as como el desarrollo de nueva tecnologa de transformacin del algodn, el algodn transgnico ha signi fi progreso no puede, en las ltimas dos dcadas. Tcnicas transgnicas han sido ampliamente utilizados en el algodn, a partir de la investigacin bsica a la aplicacin agrcola. El algodn transgnico es uno de los primeros cultivos transgnicos comerciales y en la actualidad es ampliamente utilizado en todo el mundo. 2. MTODO BIOTRANSFORMACIN Desde Firoozabady (4) y Umbeck (5) obtienen los fi rst plantas de algodn transgnicas utilizando la transformacin gentica mediada por Agrobacterium, muchos mtodos de transformacin han sido desarrolladas y / o adoptado para transferir genes extraos en el genoma de algodn. Entre estos mtodos, la transformacin gentica mediada por Agrobacterium, sistema de suministro de partculas biolstica, y el polen mtodo pathwaymediated tubo son tres mtodos principales para la transformacin de algodn, en la actualidad casi todas las plantas de algodn transgnicas se obtienen a travs de estos tres mtodos. 2.1. La transformacin gentica mediada por Agrobacterium

La transformacin gentica mediada por Agrobacterium es la tcnica de transformacin ms exitoso ms ampliamente utilizado y tambin, en particular para las especies de plantas dicotiledneas. Agrobacterium tumefaciens es una herramienta natural para la transformacin gentica, en la que Agrobacterium tumefaciens que contiene un plsmido, llamado inducida por tumor plsmido (plsmido Ti).

Figura 1. Diagrama de flujo para la obtencin de algodn transgnico a travs de la transformacin mediada por Agrobacterium. Agrobacterium utiliza un mecanismo complicado para transferir e insertar el ADN de transferencia (ADN-T) en el genoma de la planta (34). Una caracterstica de T-ADN es que T-ADN puede aceptar cualquier gen extrao a travs de tcnica de ADN recombinante (34). A travs de la T-ADN, el gen extrao se transfiere y se integra en un genoma de la planta. La transformacin gentica mediada por Agrobacterium de algodn es un proceso que contiene mltiples pasos complicados, en los que est implicada en cultivo de tejidos vegetales. La transformacin gentica mediada por Agrobacterium se inicia con co-cultivo de Agrobacterium con explantes de algodn heridos (tales como cotiledones e hipocotilos) y luego obtiene las plantas de algodn transgnicas despus de la deteccin de las clulas transgnicas y la embriognesis somtica (fig. 1). Agrobacterium - transformacin mediada es tambin el mtodo de transformacin importante para el algodn. Los fi st plantas de algodn transgnicas se obtuvieron a travs del mtodo mediada por Agrobacterium (35, 36). Desde entonces, la transformacin mediada por Agrobacterium de algodn se ha establecido en muchos grupos de investigacin (37 - 55). Muchos factores en fl uye la tasa de xito de Agrobacterium - transformacin mediada en algodn. Actualmente, varias cepas de Agrobacterium fueron empleados con xito para la obtencin de algodn transgnico. Entre ellas, las cepas ms comnmente utilizados son LBA 4404 y EHA105. Aunque las obras de cada cepa, los estudios muestran que la mancha LBA 4404 es signi fi cativamente mejor que mancha EHA 105 (51) o C58C3 (56). El uso de un modelo de transformacin del algodn de genotipo Coker 312, la transformacin efi ciencia de la cepa LBA4404 era ms de dos veces mayor que la de EHA105 (51). A pesar de co-cultivo se llev a cabo a cualquier temperatura entre 21 y 28 C y las plantas de algodn transgnicas tambin se obtuvieron de los, bajo Temperatura de cocultivo fue mejor que la alta temperatura (51). Diferentes explantes tambin afectaron la tasa de transformacin, en la actualidad los explantes utilizados son los cotiledones y hipoctilos. Adicin de acetosiringona (AS) en el medio de cocultivo o pre-cultivo de Agrobacterium signi fi mejora significativamente Agrobacterium - mediada por la transformacin de algodn (51, 56, 57). AS es un producto natural fenlico, en particular, en relacin a los cambios fisiolgicos y heridas a otra, sino que est bien estudiado que AS funciona como molcula de sealizacin, induce la expresin de genes vir de Agrobacterium, y luego inicia el proceso de transformacin (58 a 61). El genotipo es la principal limitacin para la transformacin mediada por Agrobacterium de algodn debido al hecho de que slo un nmero limitado de genotipos se puede cultivar para obtener la embriognesis somtica y regeneracin de

la planta. Para evitar este problema, varios laboratorios han desarrollado nuevas estrategias para la obtencin de plantas transgnicas de algodn a travs de la transformacin mediada por Agrobacterium, que incluyen la transformacin de algunas clulas o tejidos que tienen un alto potencial para la obtencin de una planta entera; estos tejidos o clulas incluyen un callo embriognico (37, 49 , 56, 57, 62) y el pice (63). 2.2. Biolsticos SISTEMA DE ENTREGA DE PARTCULAS Sistema de suministro de partculas biolstica es una tcnica de transformacin alternativa empleada para la obtencin de algodn transgnico. Hay varios nombres diferentes para el sistema de suministro de partculas biolstica, tales como pistola de genes y bombardeo de partculas, que utiliza un dispositivo para la inyeccin de la clula con la informacin gentica. McCabe y Martinell (1993) emplearon el sistema de suministro de pistola de genes para entregar directamente los genes extraos en el tejido meristemtico de ejes embrionarios extirpados algodn con alta velocidad de perlas de oro recubiertas con el ADN. Sus resultados muestran que los genes extranjeros se integran de forma estable y se transmiten a la progenie en una forma mendeliana (64). Desde entonces, varias otras investigaciones tambin transformaron genes indicadores y genes diana en el genoma de algodn en diferentes explantes transformados (6471). La principal ventaja del sistema de suministro de partculas biolstica es que puede ser utilizado para transformar cualquier tipo de tejido de cualquier cultivares de algodn. Sin embargo, el sistema de suministro de partculas biolstica puede tambin resulta en alta tasa de copias mutantes y mltiples. 2.3. POLEN DE TUBO DE CAMINO transformacin mediada Durante la fertilizacin de las plantas, el polen se dejan caer en el estigma, y luego germinan, crecen en el estilo, y fi nalmente llegan sacos embrionarios y se fusionan con los huevos. Durante este proceso, se forma una larga distancia de la va del tubo de polen. Es posible que el gen extrao se suministra a travs de esta va a los sacos embrionarios y de transferencia en los huevos fertilizados. Sobre la base de este principio, un grupo de investigacin dirigido por el Dr. Zhou transfiere ADN genmicos extranjeros al algodn americano y observado muchos mutantes de los transformantes (72). Desde entonces, esta tcnica de transformacin se ha empleado con xito para obtener algodn transgnico (7274), sanda (75, 76), soja (77 a 79), el trigo (80 - 83), papaya (84), y maz (75 , 85). Algunos de ellos han sido ampliamente utilizados en el campo. Mtodo de transformacin gentica mediada por la va de tubo de polen es un mtodo de transformacin genotipoindependiente. 3. APLICACIN AGRCOLA Dado que el algodn transgnico Bt resistente a los insectos fue adoptada por los productores de algodn en el medio de 1990, el algodn transgnico ha sido ampliamente adoptado en todo el mundo (86, 87). Actualmente, transgnico resistente a los insectos del algodn Bt y tolerante a herbicidas algodn transgnico son dos grandes tipos de algodn transgnico en el campo. 3.1. DESARROLLO DE VARIEDADES COMERCIALES algodn transgnico Se trata de un largo proceso para obtener un cultivo comercial de algodn transgnico despus de obtener una planta de algodn transgnica. Por lo general, las plantas transgnicas deben ser supervisados por sus caractersticas agronmicas, as los niveles de expresin y la estabilidad de los genes extraos. El retrocruzamiento se toma siempre para transferir el gen extrao en un cultivar comercial con buenas caractersticas agronmicas. Por lo tanto, se puede tomar por lo menos un par de aos antes de una planta de algodn transgnico se puede utilizar en el campo. Recientemente, los cientficos tambin intentan desarrollar algodn transgnico hbrido para su comercializacin, en el que el algodn transgnico se cruza con un no-transgnica cultivar de algodn comercial con caractersticas agronmicas deseables. Esta tecnologa permite uso rpido de la tecnologa transgnica en la fi eld. Sin embargo, a diferencia de otros cultivos, el algodn hbrido se produce normalmente mediante la extraccin manual de la pieza macho y la fertilizacin cruzada. Por lo tanto, es extensa laboratorio. En la actualidad, el algodn transgnico hbrido slo se adopt en China y la India. 3.2. COMERCIALIZACIN Y APROBACIN MUNDIAL DE algodn transgnico Algodn transgnico fue first adoptada por los productores de algodn en 1994 en China. En 1996, el algodn Bt se comenz a crecer en los EE.UU. con cerca de 730.000 hectreas, con adicional en Mxico y Australia, para un total

mundial de alrededor de 0,8 millones de hectreas. Dos aos ms tarde, el rea de algodn Bt se duplic a 1,5 millones de hectreas y luego aument a 5,4 millones de hectreas en 2003 (86). En la actualidad, casi todos los principales pases de algodn plantados han adoptado el algodn transgnico. 3.3. Algodn resistente a los insectos Las plagas son un problema importante en la produccin de algodn en cualquier rea. Se estima que las plagas signi fi rendimiento significativamente el dao por 15-50% y las plagas que afectan la calidad fi bra. Hasta 1.326 especies de insectos se han reportado en todo el mundo de algodn. La mayora de las plagas que causan daos algodn pertenecen a la especie oruga (Lepidoptera), tales como gusano de la cpsula y gusano de las yemas. Por lo tanto, desde el principio, el desarrollo del algodn transgnico con resistencia a los insectos es la principal prioridad de la mejora de algodn con la tecnologa transgnica. Es bien sabido que el Bt es un pesticida biolgico eficaz, que se ha utilizado en la fi ELD durante muchos aos. Ms importantes, muchas plagas dirigidos por Bt son agronmicamente importantes, como gusano cogollero y (88). En la actualidad, muchos genes Bt han sido identified, clonado y caracterizado, y algunos de ellos han sido trasladados a las plantas, incluido el algodn, la soja, el maz y el tomate. Campo y bioensayo de laboratorio muestran que los tres principales plagas del algodn, gusano bellotero (Helicoverpa zea), la oruga del tabaco (H. virescens), y el gusano rosado del algodonero (Petinophora gossypiella), son susceptibles a Bt y mucho menos plagas podran sobrevivir en plantas transgnicas de algodn Bt ( 89-98). Pruebas presentadas demuestran que el algodn Bt puede reducir el dao del gusano de la cpsula en hasta un 93-100%, y daos a los cultivos por hoja-alimentacin lepidpteros tambin se redujo. La siembra de algodn Bt puede ahorrar ms de un 70% el uso de pesticidas. 3.4. Algodn tolerante a herbicidas El algodn transgnico con tolerancia a los herbicidas es Otra Historia de xito prr Las Plantas transgnicas. Las malas hierbas hijo Otro gran Problema Para El Cultivo de los Cultivos, Como el algodn. Weeds causaron Perdidas significativas en algodn y require Cuidado Gestin campo. Hay mas de 30 Gneros Plantas Crecen en el campo de algodn, incluyendo Varias Especies de malezas Importantes, Como la hierba, juncos y Plantas de hoja ancha (99). La Manera Ms conveniente prr matar las malas hierbas es rociar herbicidas. Sin embargo, Cuando los herbicidas matan las malezas, Sino Que also Dana Las Plantas de algodn. Por lo Tanto, Es Necesario prr insertar genes de Los Resistentes a los herbicidas en el algodn y permitir planta de algodn Que Tiene la Capacidad de Resistir a los herbicidas. Un herbicida ampliamente utilizado es el glifosato, el ingrediente activo en el herbicida Roundup. El glifosato es un herbicida de amplio espectro, no selectivo, que tiende a matar las malezas en la fi ELD incluyendo plantas de algodn. Cuando la planta captaciones el herbicida, el glifosato se dirige a la sintasa de 5-enolpiruvilsiquimato-3-fosfato sintasa (EPSPS) y a continuacin, bloquea la sntesis de aminocidos aromticos (100). El algodn transgnico que codifica una EPSPS tolerantes al glifosato de Agrobacterium sp. CP4 (CP4 EPSPS) proporciona tolerancia al herbicida glifosato (101, 102). Actualmente, varios algodones transgnicos comercializados con tolerancia a los herbicidas se han desarrollado y utilizado en varios pases desarrollados, incluidos los EE.UU. y Australia. Algodn transgnico tolerante a herbicidas proporciona un excelente mtodos de control de malezas para los productores de algodn, que proporcionan signicativas econmico y social beneficios. 3.5. Algodn transgnico CON OTROS RASGOS Excepto el algodn transgnico con resistencia a las plagas y tolerancia a los herbicidas, la tecnologa transgnica tambin se utiliza para modificar la tolerancia al estrs abitico de algodn (103 a 107), as como la biosntesis de celulosa y fi calidad BER (108-111). Sin embargo, estos algodones transgnicos se encuentran todava en la etapa infantil y todava hay un largo camino por recorrer antes de que se comercializar. 4. TRES PRINCIPALES PREOCUPACIONES SOBRE algodn transgnico Algodn transgnico es una nueva cosa creada por la tcnica transgnica. Como el resto de las cosas nuevas, tiene el potencial de causar algunos efectos secundarios. 4.1. IS algodn transgnico Bt SEGURO NUESTROS ANIMALES NO HUMANOS ESPECFICOS Y OTROS? Cuando el algodn Bt es adoptado rpidamente por todo el mundo, estn surgido dos preguntas consecuentemente: Es Bt seguro para nuestros seres humanos y los insectos no objetivo, en particular para los bene fi insectos sociales?

Cul es el destino de la protena Bt en la campo y tambin en la GI pista animal? Bt es un pesticida biolgico que se produce por la bacteria del suelo Bacillus thuringiensis, que ha sido adoptado para controlar las plagas de ms de 40 aos (88). Bt es sumamente selectiva contra plagas de lepidpteros (como gusanos de la cpsula) y muy seguro para los seres humanos, los animales domsticos, fauna, agrcolamente bene fi insectos sociales y el medio ambiente (86, 112). Hay dos razones para esto: (1) las protenas Bt no son txicos en absoluto, slo cuando son depredados en la parte txica que se conviertan en txicos, sin embargo, la biodegradacin tiene condicin bsica que slo ocurre en los insectos tracto gastrointestinal; para los mamferos, incluyendo los seres humanos, el tracto gastrointestinal est en condiciones cidas, por lo que, Bt no se puede convertir a los compuestos txicos en los cuerpos humanos. (2) La accin de las protenas Bt requiere la unin a un fi c epitelio del intestino medio receptor especificada, que es especfico para diferentes insectos, pero otros animales no tienen este receptor, por lo que Bt es sumamente selectiva contra ciertas plagas y segura para los dems. 4.2. RESISTENCIA A LAS PLAGAS al algodn Bt Despus de la exposicin a largo plazo para el algodn transgnico Bt, es posible que las plagas desarrollen resistencia a la protena de Bt y el algodn Bt. Esto se ha observado en el laboratorio, as como pruebas de campo (113-115). Para evitar esto, varias estrategias han sido desarrolladas. 1. REFUGIO La estrategia de refugio es la estrategia utilizada para la prevencin de las plagas desarrollen resistencia al Bt de algodn. Gran escala fi eld pruebas muestran que la estrategia de refugio retras resistencia de las plagas al Bt (116118). Utilizando esta estrategia, el algodn no transgnico requiere para ser plantado en o cerca de la algodn Bt, en el que las plagas resistentes se diluirn mediante el aumento del nmero de plagas susceptibles. 2. USO DE GENES BT MLTIPLES para el algodn Bt Modelo terico 2A muestra que el algodn Bt que contiene dos genes Bt diferentes (plantas piramidales) retrasos resistencia a las plagas al Bt de manera significativa. Por lo general, el algodn Bt con un solo gen de Bt puede ser utilizado para 7-10 aos antes de que las plagas desarrollen resistencia a ella; pero para dos genes de Bt, puede ser utilizado para un mximo de 20 aos. Esto ha sido con fi rmado por el algodn Bt que contiene los genes Cry1Ac y Cry1C en el invernadero despus de 24 generaciones de seleccin (119). 3. Otras estrategias Varias otras estrategias tambin se utilizan para retrasar la resistencia a las plagas de algodn Bt. Estos incluyen la rotacin de cultivos, los pesticidas de pulverizacin y el manejo integrado de plagas (MIP). 4.3. FLUJO DE GENES Gene flujo significa Que los transgenes s Mueve de planta transgnica de planta no transgnica o de las Naciones Unidas pisos de planta transgnica de un Otro. Gene flujo es Otra Preocupacin Importante con Liberacin de Plantas transgnicas en el ambiente del medio debido a Que el FLUJO de transgenes Florerias causar sper malas hierbas y la contaminacion de Sedes no transgnicos y Alimentos, Asi Como La Reduccin en las Especies de fitness y la Diversidad gentica (120, 121). Aunque el algodn es sin Cultivo de autopolinizacin y el FLUJO gentico no es Una gran Preocupacin en comparacion con Otros Cultivos, No Se observ FLUJO de transgenes de algodn transgnico en China, Australia y los EE.UU. (122 - 125). Also s observ el gen FLUJO Entre el algodn transgnico y Sus Especies silvestres, Lo Que Puede del Problema sin causar graves en la biodiversidad de algodn (126). Los Insectos hijo el gran Jugador Que causa el FLUJO gentico en algodn (127).