Fundamento terico de la cromatografa La cromatografa comprende un conjunto de tcnicas que tienen como finalidad la separacin, aislamiento y/o identificacin

de los componentes de una mezcla de dos o ms compuestos qumicos basndose en la diferente capacidad de interaccin de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase m il !una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el disol ente" a tra s de una fase estacionaria fija. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra, de forma que los componentes la atra iesan a diferentes elocidades y se separan en el tiempo. #ada uno de los componentes de la mezcla presenta un tiempo caracterstico de paso por el sistema, denominado tiempo de retencin. #uando el tiempo de retencin del compuesto deseado difiere del de los otros componentes de la mezcla, ste se puede separar mediante la separacin cromatogrfica. La separacin de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en un lquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos a medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia lquida o slida !la fase estacionaria". Las di ersas tcnicas para la separacin de mezclas complejas se fundamentan en la di ersidad de afinidades de las substancias por un medio m il gas o lquido y un medio absorbente estacionario !slido o lquido como el papel, gelatina, al$mina o slice" a tra s del cual circulan.

%n principio fundamental de la cromatografa se basa en las solubilidades o adsorti idades diferentes de las sustancias a separar en relacin a las dos fases entre las cuales se deben particionar. &or esta razn, se distinguen dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso' adsorcin y particin. La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios acti os de la superficie de un slidos !denominado adsorbente" que constituye la fase estacionaria, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases !denominada superficie interfacial". La adsorcin ocurre en la superficie de la partcula de la fase estacionaria y es debida a la atraccin entre el soluto y el adsorbente por la formacin de uniones dipolo( dipolo, puentes de )idrgeno, etc. La particin es un fenmeno que tiene lugar entre una fase lquida adsorbida en un soporte slido y una fase m il, que puede lquida o gaseosa. La fase lquida que recubre la superficie del soporte slido constituye la fase estacionaria y si la particin se realiza entre dos lquidos, el ms polar es el que constituye la fase estacionaria.

La separacin de los componentes de una mezcla se basa en la distribucin selecti a de los solutos entre las fases seg$n sus constantes de particin. #uando un componente * se reparte entre dos fases, se establece un equilibrio e+presado como' *fase m il , *fase estacionaria, con sus respecti as constantes de equilibrio , que se denomina coeficiente de particin. -l coficiente de particin !." se define como el cociente de las concentraciones molares de soluto en las fases estacionaria #e y fase m il #m. Definicin y caractersticas de la cromatografa en papel -sta tcnica utiliza como soporte una tira de papel, que colocado en una atmsfera saturada con apores de agua puede absorber un /0(/12 de agua. -l agua retenida por el papel es la fase estacionaria, que tiene un poder disol ente distinto al agua pura, frente a los solutos. Debido a este )ec)o, es posible una particin entre el agua de la fase estacionaria y otro disol ente inmiscible o no que, inclusi e, puede ser agua pura. La 3f de los distintos componentes de la muestra depende del coeficiente de particin y de las cantidades relati as de las dos fases en contacto. -l disol ente de desarrollo y la naturaleza de los grupos funcionales presentes en los solutos, son las ariables ms importantes que determinan las mo ilidades relati as entre ellos. #omo la fase m il es un disol ente orgnico saturado en agua, la polaridad de dic)a fase ser siempre menor que la de la fase estacionaria, por lo que las sustancias ms polares sern retenidas con mayor fuerza, y las sustancias menos polares se desplazarn ms rpidamente de la zona de siembra. -l e+tremo del papel donde se sembr la muestra es e+puesto al disol ente o mezcla de disol entes apropiados. 4stos penetran, solubilizan y arrastran la muestra, separando seg$n afinidad entre los disol entes y la muestra. Los componentes ms solubles en la fase m il migran a mayor elocidad que los menos solubles, que quedarn retardados en la fase estacionaria. -n principio, los componentes se diferenciarn en solubilidad y en la fuerza de su adsorcin, de forma que unos componentes se desplazarn ms que otros. #uando la fase m il llega a la parte superior de la placa, sta se saca de la cubeta, se seca, y los componentes separados de la mezcla se isualizan. #uando son isibles, se puede determinar para cada una de las manc)as el alor de Rf !factor de retencin", o la distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. #ada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende del disol ente empleado y del tipo de fase estacionaria empleada, pero es independiente del recorrido del disol ente. De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido !preferiblemente cuando se )acen eluir en la mismo tipo de fase estacionaria".

-l cromatograma final puede ser comparado con otros de mezclas conocidas a fin de identificar los componentes de la muestra. La cromatografa en papel de dos dimensiones consiste en desarrollar el cromatograma en un disol ente, girar el papel 506 y desarrollar el cromatograma en un disol ente diferente. -s $til para separar mezclas complejas de compuestos similares. Tipos de pigmentos vegetales presentes en los cloroplastos.

-n las clulas egetales, )ay unos orgnulos llamados cloroplastos que poseen distintos pigmentos fotosintticos con colores diferentes' clorofila(a ! erde intenso", clorofila(b ! erde", carotenos !amarillo claro" y +antofilas !amarillo anaranjado" en diferentes proporciones. -n ocasiones uno de estos pigmentos es tan abundante que enmascara a los dems y estos no se pueden obser ar. &ara separar y obtener estos pigmentos se puede utilizar la cromatografa en papel, tcnica que permite la separacin de los pigmentos seg$n su solubilidad, permitiendo identificarlos perfectamente seg$n su color. *parecern, por tanto, arias bandas de diferentes colores, que poseern diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin.