NIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA BIOQUIMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I Alumna: Grupo: 1402

Barco Bazn Arely Abigail Flores Velzquez Mariel Citania Gonzalez Perez Carolina Itzel Torres Rojas Lynda Lizbeth ANALISIS DE LIPIDOS EN LA YEMA DEL HUEVO Objetivo Analizar las propiedades de los lpidos. Extraer los lpidos de la yema de huevo. Cuantificar fosfatos de lpidos fosforilados y no fosforilados. Analizar la importancia biolgica de los lpidos presentes en la yema de huevo. Introduccin Un lpido se define como una molcula relativamente insoluble en el agua, pero soluble en disolventes de baja polaridad tales como la acetona, cloroformo, ter o benceno. Los lpidos presentes en los seres vivos pueden dividirse en dos grandes grupos, en funcin a sus estructuras qumicas: simples como los terpenos, esteroides y prostaglandinas y en complejos como los acilgliceridos, fosfogliceridos, esfingolipidos y ceras. Tomados en conjunto, los lpidos constituyen el 15% del peso corporal total y aproximadamente el 40% de la materia orgnica del cuerpo humano. Los lpidos no solamente constituyen reserva de alimentos; tambin forman pare de las estructuras celulares.

Resultados Curva Estndar Se tom 1mL de la solucin patrn de y se diluy 10mL 0.4394g 1000mL - 4.394x10-4-1mL 4.394x10-4 10mL Se tomaron diferentes concentraciones de la muestra y se diluyeron diferentes concentraciones a 10mL

Tabla 1
Volumen de solucin Patrn (mL) 0.2 0.6 1.0 2.0 3.0 Concentracin (g/mL) 8.788x10-6 2.6364x10-5 4.394x10-5 8.788x10-5 1.3182x10-4

Se toma el peso molecular del fosforo en el acido fosfrico y de esta manera se puede obtener la concentracin de fosforo en la muestra. PM= H2PO4 136.091g 31g P

Tabla 2
Volumen de solucin patrn Concentracin aadida (ml) 0.2 0.6 1.0 2.0 3.0 (g/ml) 8.788x10-6 2.6364x10-5 4.394x10-5 8.788x10-5 1.3182x10-4 Absorbancia (nm) 0.023 0.076 0.126 0.169 0.203 Concentracin de fosforo (g/ml) 1.994 x10-6 6.005x10-6 1.000x10-5 2.002x10-5 2.990x10-5

Tabla 3
Absorbancia en lpidos Absorbancia No Fosforilados 0.036 (NP) Fosforilados (P) 0.008

Tabla 4
Absorbancia No fosforilado Fosforilado 0.036 0.008 Concentracin fosforo (g/ml) 1.832x10-6 2.352x10-6 4.173x10-7 5.358x10-7 de Masa total (g)

De manera que, multiplicndolo por el factor de dilucin se tiene que la concentracin de fosforo es de: 5.358x10-7 en Lpidos Fosforilados. Si se tiene que el componente mayoritario de lpidos fosforilados es la fosfatidilcolina con un PM= de 788g/mol = 7.88 x10-4 g/mol 7.88 x10-4 g/mol 100% 5.358x10-7 g/mol x X= 0.06799 % de Lpidos Fosforilados Totales.

Cromatografa en capa fina de Lpidos

Bismuto

Tabla 5. Cromatografa de Lpidos Fosforilados y No Fosforilados con revelador de Bismuto. Equipo 6 7 8 9 Estndar LF LNF LF LNF LF LNF LF LNF LT Punto de aplicacin Punto de aplicacin hasta RF hasta la mancha 11.5 11.5 10.5 10.5 10 6 10 10.5 10 el disolvente 11.5 115 11.5 11.5 11.5 11.5 11.5 11.5 11.5 1 1 0.9130 0.9130 0.8695 0.5217 0.8695 0.9130 1 1.15 1.15 1.05 1.05 1 0.6 1 1.05 1 RX

Yodo

Tabla 6. Cromatografa de Lpidos Fosforilados y No Fosforilados con revelador de yodo. Equipo 6 7 8 9 Estndar LF LNF LF LNF LF LNF LF LNF LT Punto de aplicacin Punto de aplicacin hasta RF hasta la mancha 5.5 N/A 6.5 10.4 6.5 11.3 6.5 11.5 4.5 el disolvente 11.3 N/A 11.3 11.7 12.1 12.4 12.7 12.9 11.1 0.4867 N/A 0.55 0.88 0.537 0.911 0.5181 0.891 0.405 1.22 N/A 1.44 2.311 1.44 2.51 1.44 2.55 1 RX

Nihidrina

Tabla 7. Cromatografa de Lpidos Fosforilados y No Fosforilados con revelador de Ninhidrina. Equipo 6 7 8 9 Estndar LF LNF LF LNF LF LNF LF LNF LT Punto de aplicacin Punto de aplicacin hasta RF hasta la mancha 12 0 11.4 0 11.5 0 12 0 11.5 el disolvente 17 17 17 17 17 17 17 17 17 0.7059 0 0.6706 0 0.6765 0 0.7059 0 0.6765 1.0435 0 0.9913 0 1 0 1.0435 0 1 RX

Anlisis de Resultados

La absorbancia de las muestras fue menor comparada con la de las dems, lo cual se pudo deber a diversos factores principalmente por errores de mtodo al extraer los lpidos, ya que la concentracin de lpidos fosforilados fue muy poco, por lo que se sali de la curva estndar. Debido a que la absorbancia fue muy baja en la muestra de Lpidos Fosforilados, esta no entro dentro de la curva estndar, por lo que los resultados al interpolar por medio de la calculadora fueron negativos, y al interpolar grficamente de igual manera, tomndose el valor absoluto para la concentracin real de Fosforo en Lpidos Fosforilados. Puede deberse a errores instrumentales por falta de calibracin de las balanzas analticas o sistematicos al momento de extraer o pesar las muestras, entre otros factores. Como se puede observar en la tabla 4 se encontr presencia de fosforo en la muestra de lpidos no fosforilados por lo que se puede decir que o bien se realiz una mala extraccin o se contamin con alguna muestra de lpidos fosforilados, debido a esto, los resultados obtenidos no resultaron ser los esperados en la prctica. Se recomienda realizar la extraccin completa del huevo, cuidando los pasos que se siguieron para poder obtener valores reales que nos puedan servir en futuras determinaciones. En cuanto a las cromatoplacas, se lo ms notable se puede remarcar en la tabla 7 correspondiente a la nihidrina, solo eluyeron las muestras de lpidos fosforilados, lo cual nos indica que dichos lpidos contienen grupos amino primarios o secundarios de acuerdo a lo que nos refiere la literatura. En cuanto a los Rx que se obtuvieron, al estar cerca de 1 se puede decir que los componentes de la mezcla tiene la misma polaridad que la muestra de lpidos totales. Con la placa de yodo se puede observar claramente doble mancha en la seccin correspondiente a los lpidos fosforilados, esto puede deberse a que haba dos tipos de lpidos con instauraciones de diferente polaridad uno de estos tipos se puede encontrar en la regin de las muestras de lpidos no fosforilados, esto explica que en la

regin de lpidos fosforilados hay lpidos con instauraciones los cuales se vuelven ms polares por la presencia de fosforo. Para la placa revelada con bismuto, con algunas excepciones, se puede apreciar que los Rx en general tienden a 1, y como se mencion anteriormente, las variaciones pueden deberse a compuestos que afectan la polaridad de las muestras, aunque en este caso se puede afirmar que las muestras son casi las mismas con una sola excepcin, sin embargo, si se compara con lo reportado en la gua, el Rf debi ser mucho menor al registrado, puede explicarse por alguna impureza en el eluyente que hizo que la polaridad aumentara y con esto cambiar el Rf de la muestra. Se recomienda realizar el Eluyente en el momento para evitar la evaporacin de algn componente voltil como el cloroformo, que pudiera cambiar la polaridad de la mezcla.

Conclusion Al final del experimento se realizaron las cromatografas de lpidos, donde se emplearon 3 de los 4 reveladores en los que se pudo apreciar como estos reaccionan: Molibdato: Con el fosforo elemental dio una coloracin azul marino para Lpidos Fosforilados. Yodo: Reacciona con las dobles ligaduras en los lpidos (insaturados), mostrando una coloracin de manchas amarillas. Ninhidrina: Al reaccionar con aminocidos, a pesar de requerir calentamiento para su activacin. Actu de forma especfica en lpidos con la fosfatinglicerina, ya que contiene un grupo amino en su estructura, dando una coloracin rojiza. Bismuto: Este elemento reacciona con la colina (fosfatidincolina), dando un color amarillo. Con este experimento se concluye que de los fosfolpidos el ms abundante en la yema de huevo es la fosfatidincolina, que tiene un peso molecular de 788 g/mol. Durante el experimento se aprendi una metodologa de anlisis qumico tanto cualitativo como cuantitativo, sobre un tipo de biomolculas esenciales (lpidos) para la vida de origen animal.

Bibliografa Chapman D. Lpidos. (1973). Ed. Alhambra. Espaa. Koning A.J. (1974). Analysis of egg Lipids, J. of Chem.Education. 51(1):48-50. White B.J. y C.L. Tipton (1974). Egg Yolk Lecitin.J. of Chem. Education. 51(3):533-534. Anderson, Sh., Cockayne S., Quimica Clinica. Ed. Interamericana McGraw Hill. Mexico. 1993. Pp 532. Burton, Quimica Organica y Bioquimica. Ed Mc Graw hill, 1989. pp 235. Mckee, T y McKee, J. Bioquimica. Ed. Mc Graw Hill Interamericana. 2003. Pp. 332 337, 340 341.