UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN

CAMPUS DE CIENCIAS DE LA SALUD

FACULTAD DE QUMICA

LABORATORIO DE MTODOS INSTRUMENTALES

PRCTICA 7

EXTRACCIN EN FASE SLIDA COMO UNA ALTERNATIVA

PARA EL
PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA EN LA DETERMINACIN DE
HIDROCARBUROS AROMTICOS POLICCLICOS POR
CROMATOGRAFA
DE GASES (EFS-CG-EM)

EQUIPO 2
Oxte Rodrguez Zuriely
Zapata Cruz Gabriel Eduardo

MRIDA, YUCATN A 18 DE OCTUBRE DE 2012

NDICE
I. ANTECEDENTES ........................................................................................3
II. OBJETIVOS ................................................................................................5
III. METODOLOGA ........................................................................................6
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES ............................................................8
V. CONCLUSIONES .................................................................................... 12
VI. REFERENCIAS .......................................................................................13

ANTECEDENTES

Los hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) se componen de dos o

ms anillos de benceno adyacentes que comparten dos tomos de carbono.
Los HAP se encuentran con frecuencia en el medio ambiente y se han
detectado ocasionalmente en agua potable. 1 Se generan como productos al
quemar combustibles fsiles y material orgnico. Las principales fuentes
incluyen emisiones de la quema de carbn y madera, emisiones de
automviles, plantas generadoras de energa y quema de desperdicios. 2
A nivel mundial hay estudios que revelan la presencia de estos compuestos en
aire, agua, suelos, alimentos y cosmticos. Los HAPs se encuentran en la lista
de contaminantes prioritarios debido a sus propiedades carcinognicas y
mutagnicas en general, aunque su propiedad carcinognica vara de un
compuesto a otro. Por ejemplo, el benzo(a)pireno se considera un potente
carcingeno, el criseno se considera menos carcingeno y el naftaleno es no
carcingeno. 2
El anlisis de contaminantes orgnicos en agua, como los HAP, a niveles de
trazas requiere el empleo de instrumentacin analtica avanzada. 3 stos
analitos se puedan aislar por extraccin en fase slida, la cual consiste en
pasar una disolucin que contiene analitos sobre una fase slida (FE) que lo
adsorbe especficamente. Los analitos se desorben con un disolvente el cual
separa grupos de molculas con propiedades qumicas similares. Los
materiales absorbentes ms usados son, octadodecil (C-18) y la fase
polimrica basada en poliestireno-divinilbenceno (PS-DVB). 4
Algunas de las ventajas de la EFS son el aislamiento y preconcentracin de
analtos de inters que hay en una muestra, la eliminacin gran parte de la
matriz de la muestra simplificando el anlisis y pueden reducir el consumo del
disolvente.

Las etapas del proceso se muestran en la Figura 1.5

3

Figura 1. Esquema de preparacin de la muestra mediante EFS

Cromatografa de gases acoplado a espectrometra de masas (CG/EM).
Es una de las poderosas herramientas para el anlisis de mezclas orgnicas y
bioqumicas complejas. Los espectros se recolectan a medida que los analitos
eluyen de la columna. Esta tcnica cromatogrfica es utilizada para la
separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos voltiles y trmicamente
estables. En sta se mide la relacin masa/carga (m/z) de los iones producidos
de la muestra obteniendo datos cualitativos como su estructura, composicin
elemental y masa molecular. 4

OBJETIVOS
Realizar una extraccin en fase slida (EFS) en cartuchos de C18 para la
obtencin de hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) a partir de una
4

muestra de agua.
Analizar la fraccin obtenida para la identificacin de HAP por medio de CGEM.

METODOLOGA
Preconcentracin de los HAP mediante EFS
5

Acondicionamiento o activacin de la fase slida

Se coloc un cartucho para extraccin en fase slida (EFS) empacada con C18
En un Visiprep de la marca Supelco modelo Cat No. S-7030, conectado a una
bomba de vaco marca Brinkman modelo B-169. Posteriormente se adicion
5mL de metanol y se aplic vaco, seguidamente se adicion 5 mL de agua
desionizada, evitando que la fase se secara.
Adicin de la muestra
Se adicion 50 mL de muestra de agua contaminada con HAP a la columna de
EFS, cuidando que el flujo no excediera los 5 mL/min. Se desech la fase
acuosa, se lav el cartucho con 5 mL de agua desionizada y luego se dej
secar aproximadamente 5 minutos.
Elucin de los compuestos a analizar
Se adicion 1.5 mL de una mezcla de diclorometano-hexano y ciclohexano
1:1:1 a la columna de EFS, se aplic vaco y recolect la fase orgnica en un
vial cromatogrfico.
Limpieza del cartucho
Se adicion 20 mL de acetona. Se aplic vaco y se recolect la fase orgnica.
Posteriormente se adicion 10 mL de metanol y finalmente se dej secar el
cartucho por 5 minutos.

Anlisis del extracto de HAP por CG/EM

Los HAP extrados se recolectaron en un vial cromatogrfico y se analizaron en
6

un cromatgrafo de gases de la marca Agilent Technologies modelo 6890N

Networks GC System, acoplado a un detector de masas de la misma marca,
modelo 5973 Network Mass Selective, utilizando un inyector modelo 7683B
Series Injector.

Se

utiliz

una

columna

HP-5

MS

(5%

dimetil-95%

difenilpolisiloxano) de dimensiones 30 m x 0.25 mm, 0.25 m de espesor de

pelcula, bajo las siguientes condiciones cromatogrficas:
Temperatura del inyector: 275 C, temperatura del detector: 300 C,
temperatura programada de la columna: de 40 C a 140 C con incrementos de
20 C/min y despus hasta 290 C con incrementos de 10 C/min y flujo del gas
acarreador: 1 mL/min.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Figura 1. Cromatograma de las fracciones aromticas del anlisis de los HAP

por EFS.
En la Figura 1 se observa el cromatograma obtenido por el anlisis por CG-EM
de una muestra de agua contaminada por HAP; se puede apreciar la
abundancia de los compuestos que se encuentran presentes en la muestra; los
picos sealados en la figura, tienen especificado el tiempo de retencin que
corresponden a los
HAP a identificar, estos compuestos fueron detectados por el equipo JMS
GCMS System Joel Agilent Technologies modelo 6990 N Network GC System.
Las dems seales corresponden a otros compuestos contenidos en la
muestra de los cuales no interesa su anlisis. En el anlisis por CG-EM de esta
fraccin se identificaron compuestos como: fluoreno, fenantreno, antraceno y
perileno.
A continuacin se muestran los espectros de masa de los HAP registrados en
el cromatograma.

Figura 2 Espectro de masas del FLUORENO

In molecular m/z: 166
Tiempo de retencin registrado: 8.476 min.
El primer compuesto en ser registrado por el detector de masas fue aquel con
un in molecular de 166. 0745 por lo que dedujo que se trataba del fluoreno,
debido a que su peso molecular es de 166 g/mol siendo el nico de todas las
opciones posibles con el peso molecular ms parecido.

Figura 3: Espectro de masas del Fenantreno

Ion molecular m/z: 178
Tiempo de retencin registrado: 9.979 min.

El segundo compuesto en ser registrado por el detector de masas fue aquel

con un in molecular de 178.0844, pudindose tratar del fenantreno o del
antraceno que poseen el mismo peso molecular, Para diferenciar ambos
compuestos entre s se observ tiempo de retencin, en este caso el
compuesto con el menor valor de tiempo de retencin fue el primero en ser
detectado de entre ambos compuestos, tratndose entonces del fenantreno,
para esto se baso en el punto de ebullicin de estos dos compuestos
aromticos, debido a que el ms voltil es el fenantreno (punto de ebullicin de
339 C) es el primero en evaporarse y pasar por la columna favoreciendo an
ms la disminucin de su tiempo de retencin, con base a esto el fenantreno es
menos polar que el antraceno lo que favorece a este HAP a tener menor
afinidad que el antraceno y otros compuestos ms afines a la fase estacionaria
de la columna cromatogrfica.

Figura 3: espectro de masas del Antraceno

Ion Molecular m/z: 178
Tiempo de Retencin registrado: 10.068 min
El tercer compuesto en ser registrado por el detector de masas fue aquel con
un in molecular de 178, tratndose del antraceno, Para la identificacin de
ste, se explic anteriormente que la diferencias entre los tiempos de retencin
entre el antraceno y el fenantreno adems de las diferencias entre sus puntos
10

de ebullicin y la polaridad favorecieron la disminucin del tiempo de retencin

del fenantreno, provocando que ste sea registrado antes que el antraceno,
cuyo tiempo de retencin es 10 centsimas mayor que el del fenantreno y su
punto de ebullicin es de 340 C.

Figura 4: Espectro de Masas del

Ion molecular m/z: 252
Tiempo de retencin registrado: 16.434 min

El cuarto compuesto en ser registrado por el detector de masas fue aquel con
un in molecular de 252.1354, pudindose tratar del benzo [a] pireno, benzo [b]
fluoranteno o perileno, para la identificacin de este HAP se utiliz como la
base de datos de Referencia Estndar del NIST y PAHs Data Base in
Alphabetical Order en donde se compararon los espectros de masas y los
cromatogramas de estos compuestos con una masa molecular de 252.30928
g/mol.
V. CONCLUSIONES

11

Se realiz la extraccin en fase slida de hidrocarburos aromticos policclicos

con cartuchos de C18 a partir de una muestra de agua. Dichos compuestos
fueron analizados mediante CG-EM y de esta manera se logr discernir su
identidad, a partir de una lista de 12 compuestos probables.
El anlisis por CG-EM para la identificacin de dichos compuestos, es un
mtodo adecuado, que podra complementarse con otro tipo de anlisis, como
resonancia, para tener mayor certeza de la identidad, ya que hay muchos
HAPs ismeros, cuyos espectros de masas son muy parecidos.
La importancia del anlisis de estos compuestos radica en que son
contaminantes presentes en el medio ambiente, y algunos considerados
cancergenos.

VI. REFERENCIAS
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1. Jimnez, B. La contaminacin ambiental en Mxico, 1a ed.; Limusa

Noriega Editores: Mxico, 2001; pp 86.
2. Harvey R.G. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Chemistry and
Carcinogenecity, Cambridge Monographs on Cancer Research;
Cambridge University Press: Gran Bretaa, 1991; pp 11-26.
3. Velazco, J.; Velazco E. Mtodo Analtico Para Detectar Hidrocarburos
Aromticos Policclicos. Agua Potable Ciencia UANL, 2001, 4 (4), 425.
4. Skoog, D.; Holler, J. Principios de Anlisis Instrumental, 6a ed.;
CENGAGE Learning: Mxico, 2008; pp 558.
5. Harris Daniel C.; Anlisis Qumico Cuantitativo; 3a ed.; Reverte: Espaa,
2007; pp 714.

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