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Formacin de hidrocarburos aromticos policiclicos y del 3,4-

benzopireno en aceites comestibles alterados por


recalentamiento. De La Cruz Rodrguez, Eduard Ruber; Huaman
Gutierrez, Juan Orlando
Elaboracin y diseo en formato PDF, por la Oficina General del Sistema de Bibliotecas y Biblioteca
Central UNMSM
II MATERIAL Y MTODOS
2.1 MATERIAL
Las muestras estn constituidas por aceites comestibles tanto alteradas como
e inalteradas por recalentamiento provenientes de los diferentes
establecimientos de venta de alimentos fritos.
2.1.1 Metodologa
a) Determinacin del Nmero de Muestras.
El tamao de muestra se estableci en base a la variable del aceite
comestible alterado por recalentamiento, representado en la proporcin de
establecimientos que expenden frituras segn la calidad ptima del
mencionado alimento para su consumo. Estadsticamente se determin que la
proporcin aceptable representada por (p) es de 0,90 y la diferencia de su
proporcin rechazada est representada por (q) y es del 0,10.
Para la determinacin del tamao de muestra se utiliz la frmula del cuantil
de la distribucin normal , concluyndose que el nmero representativo es de
41; esta cifra se encuentra sustentada en fundamentos estadsticos. Se tiene
las siguientes caractersticas:
* Se desconoce el nmero exacto de la poblacin a muestrear representado
por dichos establecimientos.
* Errores Estndar, cuyo valor es del 5%.
* Error de estimacin cuyo valor representa el 9%. Este valor permite
obtener un mejor aprovechamiento de los recursos para el desarrollo del
presente trabajo de investigacin; y determina el tamao de muestra.
Clculo del tamao de muestra.
Proporcin de establecimientos segn la variable de la calidad ptima del
aceite comestible alterado por recalentamiento para su consumo:
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P = Aceite recalentado ptimo para el consumo humano.
Q = Aceite recalentado no apto para el consumo humano.
Por lo tanto:
P = 0,90 Q = 1 p = 0,10
= 0,05 z

= 1.96
E = 0,09
Entonces:
Reemplazando:
Por lo tanto:
Los criterios de muestreo utilizados fueron los siguientes:
1. La cantidad de muestra a recolectar se determin en base a la cantidad
necesaria para poder realizar en su totalidad los anlisis por duplicado.
2. La fecha y hora del muestreo se estableci en base al cronograma de
trabajo de la Municipalidad. Estos dos factores no influyen en los
2

z
E
D
0022 , 0
96 , 1
09 , 0
2
=

= D
D
q p
n

=
. 41 90 , 40
0022 , 0
10 , 0 90 , 0
= = =
x
n
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resultados debido a que en estos establecimientos el recalentamiento del
aceite en la fritura se realiza continuamente todo el da.
b) Distribucin de los Establecimientos Inspeccionados
La inspeccin a los establecimientos mencionados se realiz de manera
aleatoria, dentro de los cuales se visit polleras, chifas y chicharroneras;
siendo su distribucin la siguiente:
- Polleras: 32 establecimientos ( 78,05 %).
- Chifas: 08 establecimientos ( 19,51 %).
- Chicharroneras: 01 establecimiento ( 2,44 %).
c) Toma de Muestra
En los establecimientos inspeccionados, como polleras, chifas y
chicharroneras,. se recolect 2 muestras de aceites comestibles: ante
mencionado en forma aleatoria. . Para este fin se utiliz frascos de vidrio de
color mbar, boca ancha, seco con tapa hermtica, y de capacidad de 150
mL; estas caractersticas del envase son importantes para evitar la
degradacin del 3,4-benzopireno que es sensible a la luz solar y a su vez
impedir la oxidacin con el aire del ambiente. Las muestras fueron
previamente coladas para separar las partculas extraas que pudiera
contener. Adicionalmente para las conservacin de las muestras durante el
tiempo del anlisis se les inyect nitrgeno y se las almacen en un
ambiente fro.
El trabajo de muestreo se realiz en coordinacin con la Municipalidad
Metropolitana de Lima, en especial con el Apoyo del personal profesional de
la Direccin de Salud y la Divisin del Laboratorio de Bromatologa de la
Municipalidad; entre los meses de Julio y Agosto del 2001.
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2.1.2 Equipos, materiales y reactivos:
Equipos:
Balanza analtica (OHAUS AP2105).
Bomba de vaco (MILLIPORE-CAT-NoXX60000000)
Campana extractora (HUNGARY SG - 05B3)
Campana desecadora
Cocinas elctricas
Estufa (LABOR MUSZERIPARI MUVEK LP 303)
Espectrofotmetro ultravioleta (DIODEARAY-8452-A HP).
Equipo Completo de Cromatografa en capa fina DESAGA
(HILDELBERG-GERMANY).
Manmetro (Capacidad Mxima: 300 Kp/cm2-GERMANY)
Potencimetro (HANNA - MODELO H1 400)
Refrigeradora
Rota vapor (BUCHI-461-WATER BATH)
Sistema de reflujo.
Termmetro
Materiales:
Agitador Mecnico.
Aros metlicos graduados
Baguetas de vidrio.
Baln de vidrio de 100 mL.
Bombilla de jebe.
Capilares de vidrio, para cromatografa en capa fina.
Columna de vidrio para cromatografa en columna de 3,5cm. de
dimetro por 30 cm de altura.
Columna de vidrio para cromatografa en columna de 2,0 cm. de
dimetro por 15 cm de altura.
Cuenta gotas de vidrio.
Embudo de separacin, de 100 mL., 250 mL. y 500 mL.
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Embudo de vidrio de 50 mL., 100 mL. y 250 mL.
Escobillas de tubos de ensayo.
Erlenmeyer de vidrio, de 250 mL. y 500 mL.
Fiolas aforadas de vidrio, de 10 mL., 25 mL, 100 mL. y 250 mL.
Frasco lavador de plstico.
Frascos de vidrios de color mbar de 150 mL.
Lana de vidrio.
Luna de reloj
Placas de vidrio, para cromatografa en capa fina de 20 X 20 cm.
Pinza variable.
Pinza de madera.
Pinza de tornillo.
Pipetas de vidrio, de 1 mL., 2 mL., 5 mL. y 10 mL.
Probetas de vidrio, de 25 mL., 50 mL., 100 mL. y 1000 mL
Tapones de goma.
Tela metlica.
Tubos de ensayo de vidrio de 20 cm p.a.
Tubo refrigerante de vidrio de bolas.
Soporte universal.
Vasos de vidrio, de 50 mL., 100 mL.,y 250 mL.
Reactivos :
Acetona (p.a). (- MERCK)
Acido orto fosfrico (85%-p.a) (MERCK)
Acido sulfrico QP (- MERCK)
Agua destilada.
Alcohol etlico al 95%, libre de carbonilos. (BACKER)
Alcohol neutralizado. (BACKER)
Alcohol octlico (1-octanol extrapure) (SIGMA)
Arena de mar calcinada (SIGMA)
Benceno. (p.a) (- MERCK)
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Benzo(a)pyrene-Estndar al 97% (HPLC)-SIGMA de 250 Mg.
Celulosa (For Thin Layer Chromatography-8078-1) (-SIGMA)
Clorhidrato de hidroxilamina (p.a) (-SIGMA)
Dicromato de potasio (p.a) (-SIGMA)
Dimetil formamida. (p.a) (-SIGMA)
Dimetil sulfxido (DMSO-para sntesis) (MERCK)
Eter de petrleo (p.a) (MERCK)
Eter dietico (p.a) (MERCK)
Fenolftalena. al 1% (MERCK)
Florisil. (para cromatografa en columna: Korngrobe:
0,150-0,250 mm/ 60-100 mesh ASTM) (MERCK)
Hidrxido de sodio al 8% y de normalidad 0.01. (MERCK)
Isooctano. (p.a) (MERCK)
Metanol (p.a) (FISHER)
Nitrgeno , al 99.98% (p.a) (MESSER)
Tetracloruro de carbono (p.a) (SIGMA)
Tiosulfato de sodio, de 0,1 M (SIGMA)
Tolueno. (p.a) (MERCK)
Silica- gel-60, granulado. para cromatografa en columna. (Korngrobe: 0,2-
0,5 mm/ 35-70 mesh ASTM). (MERCK)
Sulfato de sodio anhidro(p.a). (MERCK)
Piridina.(p.a). (MERCK)
Yoduro de potasio(p.a). (SIGMA)
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2.2 MTODO OPERATORIO:
Las muestras de aceite comestibles alterados e inalterados por
recalentamiento se sometieron a los siguientes anlisis:
2.2.1 Anlisis Organolptico: (28)
* Olor: (28)
a) Se adicion 30 mL de la muestra en un beaker de 100 mL de
capacidad.
b) Se evalu el olor de la muestra, segn la clasificacin de los olores de
las muestras, basado en dos aspectos: lo caracterstico y lo rancio.
* Color: (28)
a) Se adicion 30 mL de la muestra en un beaker de 100 mL. de
capacidad.
b) Se ubic el beaker sobre un fondo blanco.
c) Se evalu visualmente, el color de la muestra, segn la clasificacin de
los colores de las muestras que se detallan en amarillo, amarillo
mbar, pardo oscuro, pardo rojizo, pardo rojizo oscuro y pardo
negruzco.
* Aspecto: (28)
a) Se adicion 30 mL de la muestra en un beaker de 100 mL.
b) Se ubic el beaker sobre un fondo blanco.
c) Se evalu visualmente la consistencia de las muestras, segn la
clasificacin de las consistencias de estas como:
- liquida oleosa (aceite).
- siruposa (aceite).
- slida (manteca).
- oleosa slida (aceite manteca)
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2.2.2 Determinacin del Valor de Carbonilo (2)
Mtodo Operatorio:
A) Preparacin del Reactivo de clorhidrato de hidroxilamina:
Se disolvi 35 g de clorhidrato de hidroxilamina en 160 mL de agua
destilada; luego se llev la solucin hasta 1000 mL en etanol al 96%
libre de carbonilos.
B) Se pes 0,5 g de la muestra de aceite , en un matraz con tapa
esmerilada de 100 mL de capacidad.
C) Se adicion 15 mL de la mezcla disolvente (Solucin de piridina en
alcohol n-octlico al 0,5% V/V) y se agit uniformemente.
D) Se adicion 8 mL del Reactivo de clorhidrato de hidroxilamina y se
agit uniformemente por un minuto.
E) Se dej en reposo la mezcla durante 24 horas en la oscuridad.
F) Luego, se trasvas cuantitativamente la mezcla a un beaker de 100
mL, enjuagando el matraz con 3 mL de etanol al 96% libre de
carbonilos.
G) Se desarroll una prueba en blanco en forma simultanea.
H) Se registr el pH de la prueba en blanco.
I) La mezcla de la reaccin conteniendo la muestra de aceite, fu titulada
en un potencimetro en medio no acuoso con una solucin standard
de hidrxido de sodio 0,5N en metanol; agregando el lcali en
porciones de 0,01 mL, agitando bien, luego de cada adicin hasta que
el pH de la solucin sea el mismo que el blanco.
Clculos:
Valor de carbonilos : V x N x 1000
(meq/Kg) m
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Donde:
V: Gasto de la solucin de hidrxido de sodio utilizado en la
Titulacin.
N: Normalidad de la solucin standard de hidrxido de sodio.
m: Peso de la muestra en gramos
2.2.3 Determinacin del ndice de Yodo (mtodo de Wijs) (17)
Mtodo Operatorio:
A) Preparacin del reactivo de Wijs:
Se disolvi 8g de tricloruro de yodo en 200 mL de cido actico glacial.
y 9 g de yodo en 300 mL de tetracloruro de carbono y luego se mezclo
las dos soluciones y se diluy a 1000 mL con cido actico glacial.
B) Se vierte de 0,2 a 0,3g de la muestra de aceite, en un matraz
esmerilado (de aproximadamente 250 mL de capacidad).
C) Se adicion 10 mL de tetracloruro de carbono, al matraz esmerilado y
se agit para disolver la muestra.
D) Se adicion 20 mL del reactivo de Wijs, y se cerr bien el matraz. Se
dejo reposar la mezcla en la oscuridad durante 30 minutos.
E) Luego, se adicion al matraz 15 mL de una solucin de yoduro de
potasio al 10% y 100 mL de agua destilada. Se agit bien la mezcla.
F) Se titul la mezcla con una solucin 0,1M de tiosulfato de sodio,
usando una solucin de almidn al 1% como indicador.
G) Se realiz una prueba en blanco, consecutivamente con la evaluacin
de la muestra problema.
Clculos:
Consideramos lo siguiente:
ndice de yodo = (b a) x 1,269
g de yodo/100 g Peso(g) de muestra
grasa
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a = Gasto de tiosulfato de sodio (en mL), para valorar la muestra
b = Gasto de tiosulfato de sodio (en mL), para valorar en blanco
Nota:
Si (b a), es mayor que b/2, la prueba se debe de repetir utilizando una
cantidad menor de muestra.
2.2.4 Determinacin del ndice de Acidez (1), (18)
Mtodo Operatorio:
A) Se mezcl 25 mL de ter etlico, con 25 mL de etanol al 96% y 1 mL de
solucin de fenolftalena (1%).
Se neutraliz cuidadosamente con una solucin de hidrxido de sodio
0,01M.
B) Se disolvi 1,5g de la muestra de aceite, en 10 mL de la mezcla
neutralizada de disolventes recientemente preparada. Se agit hasta
solubilizar completamente la muestra.
C) Se titul la mezcla con una solucin de hidrxido de sodio 0,01M,
utilizando como indicador una solucin de fenolftalena (1%). Se agit
constantemente hasta que el color rosa persista por un momento
(aproximadamente 30 segundos).
Clculos:
Donde:
N: Normalidad de la solucin de hidrxido de sodio
V: Nmero de mL gastados de NaOH 0,01M, para
la titulacin.
2.2.5 Determinacin del Porcentaje de Polmeros (26)
Indice de Acidez = (56,1) x N x V
mg NaOH/g m.p. Peso de la muestra
(g)
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Mtodo operatorio:
A) Se adicion 0,5g de la muestra a un baln de vidrio de 100 mL.
B) Se adicion 60 mL de metanol que contena 1 mL de cido sulfrico al
0,05%.
C) Se adicion perlas de vidrio.
D) Luego se someti a reflujo durante 2 horas, posteriormente se enfri a
temperatura ambiente.
E) La fraccin metanlica, fue decantada y la fraccin insoluble se lavo
con 5 mL de metanol fro por tres veces.
F) La fraccin insoluble, se disolvi en 5 mL de ter dietlico y luego se
trasvas a un matraz tarado.
G) Luego se concentr a sequedad en un recipiente metlico.
H) Se llev a la estufa por 30 minutos a 100 C para evaporar el solvente.
I) Se enfri el matraz a un desecador y se pes.
Clculos:
Donde:
P
1
= Peso Inicial del matraz.
P
2
= Peso Final del matraz con la fraccin insoluble en gramos.
W = Peso de la muestra en gramos.
2.2.6 Determinacin del Porcentaje de Compuestos Polares (10), (18)
Mtodo operatorio:
A) Preparacin de la columna:
% Polmeros en g = P
2
P
1
X 100
W
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- Se llen la columna (10 mm de dimetro Interno y 15 cm longitud),
con 5 mL del solvente de elucin N 1 (Mezcla de ter de petrleo /
ter etlico: 9/1), y se introdujo una porcin de lana de vidrio por la
parte superior, con la ayuda de una bagueta, removiendo el aire
que contiene con presiones constantes.
- Se prepar en un beaker una suspensin de 5 g de silica-gel, con
porciones de solvente de elucin N 1 virtindolo luego por la parte
superior de la columna con la ayuda del embudo.
- Se procedi a drenar la solucin de elucin N 1 hasta que el nivel
del solvente ste a 2 cm sobre el nivel de la slicagel.
- Se adicion posteriormente, 1g de arena de mar calcinado.
- Se dren la solucin de elucin N 1, hasta alcanzar el nivel de la
arena de mar.
B) Se pes 1g de la Muestra de aceite en un beaker de 50 mL y se
disolvi en 8 mL del solvente de elucin N 1 (calentar un poco si es
necesario). La solucin se incorpor cuantitativamente a la columna
mediante un embudo. Se dej drenar la solucin hasta alcanzar el nivel
de la arena de mar.
C) Se eluy la fraccin apolar con 50 mL del solvente de elusin N 1,
ajustando el flujo del solvente a aproximadamente 1,5 ml/minuto (se
lav el beaker donde se disolvi la muestra con una porcin del
solvente de elucin N 1 y se adicion a la columna).
D) Se recolect todo el eluato apolar en un matraz tarado.
E) Se eluy posteriormente la fraccin polar con 50 mL del solvente de
elucin N 2 (ter etlico), recolectndose todo el eluato polar en otro
matraz tarado.
F) Se evapor los solventes, mediante un rotavapor a presin reducida
(60 C).
G) Se desec el matraz en una estufa a 50 C por 1 hora.
H) Se coloc el matraz en una campana de desecacin y posteriormente
se pes en una balanza analtica.
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Clculos:
Donde:
Mm = Peso del Matraz, mas la muestra Extrada
Mv = Peso del Matraz vaco
W = Peso de la Muestra de Aceite Inicial
2.2.7 Determinacin de Hidrocarburos Aromticos Policclicos y
del 3,4 benzopireno (14), (15)
Mtodo Operatorio:
I) Fase de Extraccin por Solventes:
A) Se pes 50 g de muestra en un beaker de 100 mL de capacidad.
B) Se adicion 75 mL de isooctano pre-equilibrado con dimetilsulfxido
(DMSO).
C) Se agit y se trasvas a la pera de decantacin de 250 mL de
capacidad.
D) Se adicion 40 mL de cido-orto-fosfrico, se agit por 5 minutos, se
decant y se elimin dicho cido; este proceso se realiza por tres
veces consecutivas.
E) Luego se adicion 40 mL de dimetilsulfxido pre-equilibrado con
isooctano, y 1 mL de cido-orto-fosfrico proporcin (40 mL/1mL), se
agit, se decant y se recuper en un matraz el dimetilsulfxido
(DMSO); este proceso se realiz por tres veces consecutivos.
F) Se trasvas a una pera de decantacin de 500 mL de capacidad.
G) Se adicion 40 mL de isooctano, luego 220 mL de agua destilada; se
agit, se decant y se recuper el agua, regresndolo a dicha pera de
decantacin.
% Compuestos = Mm - Mv x 100
polares W
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H) Se increment 40 mL de isooctano, se agit, se decant y se recuper
nuevamente el agua, regresndolo a dicha pera de decantacin.
I) Finalmente, se adicion 30 mL isooctano, se agit, se decant y se
elimin el agua destilada que a su vez contiene al dimetilsulfxido..
J) Se trasvas el isooctano a una pera de decantacin de 250 mL de
capacidad.
K) Se adicion 40 mL de hidrxido de sodio al 8%, se agit, se decant y
se elimino dicha base; este procedimiento se realiz por dos veces
consecutivas.
L) Se adicion 40 mL de agua destilada a 50 C, se agit, se decant y se
elimino el mencionado liquido; este procedimiento se realiz por tres
veces consecutivas.
LL) Finalmente, el isooctano se trasvas a un envase de vidrio con tapa
hermtica, y se le inyecto nitrgeno.
II. Fase de Purificacin por Cromatografa en columna:
A) Preparacin de la columna :
Se llen la columna (20 mm de dimetro interno y 35 cm de longitud)
con 25 g de florisil purificado (lavado con metanol) y 15 g sulfato de
sodio anhidro granular; luego se humedeci la columna con 50 mL de
isooctano y se dej drenar todo el solvente (eliminacin del isooctano
por drenado).
B) Se adicion el extracto de isooctano a travs de la columna;
recogindose luego todo el solvente filtrado en un matraz (el
benzo(a)pireno y otros hidrocarburos aromticos polcclicos similares
quedan retenidos en la columna).
C) Se eluy todo el benzo(a)pireno y los otros hidrocarburos aromticos
policclicos con dos porciones de 45 mL de benceno, enjuagando
previamente el matraz donde estaban los extractos de isooctano con
10 mL de benceno.
D) Se recogi todo el extracto bencnico filtrado en un matraz limpio.
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E) Se procedi a concentrar los extractos filtrados (de benceno
isooctano) con la ayuda de un rotavapor a presin reducida; hasta
obtener un volumen aproximado de 5 mL de cada solucin.
F) Se llev ambas soluciones a una estufa con ambiente de nitrgeno
hasta obtener un volumen aproximado de 0,5 ml. Estas soluciones se
utilizaron para realizar la cromatografa en capa fina.
III. Fase de Identificacin en Cromatografa en Capa Fina (16) :
A) Se homogeniz 20g de celulosa en 100 mL de agua destilada por unos
cinco minutos, y se prepar ocho placas cromatogrficas de 10x20 cm
mediante un aplicador de cromatografa en capa fina. Se gradu en
espesor del soporte a 0,7 mm de espesor.
B) Se realiz el sembrado en banda, de las soluciones en las placas
cromatogrficas (se recomienda que se realice en un ambiente oscuro
y en el menor tiempo posible).
C) Se invirti y se sumergi la placa cromatogrfica, por unos segundos
en una solucin de dimetil formamida al 20% en ter etlico hasta una
distancia de 0,5 cm de la lnea de sembrado, luego se retir
cuidadosamente la placa y se dej reposar por unos 30 segundos.
D) Se desarroll el cromatograma en forma normal en una cmara
cromatogrfica utilizando como fase mvil Isooctano (se recomienda
dejar saturar la cmara cromatogrfica con el solvente por un tiempo
de 45 minutos). El cromatograma se debe desarrollar en un ambiente
oscuro.
E) Se realiz el revelado del cromatograma una vez extradas de la
cmara cromatogrfica mediante su exposicin a la luz ultravioleta
confrontando la muestra problema con un standard para obtener el Rf.
real del benzo(a)pireno.
F) Se realiz la identificacin de los dems hidrocarburos aromticos
policclicos segn el Rf y el color de la fluorescencia de las manchas
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resultantes, utilizando siempre como referencia el Rf de la solucin
estndar de benzo(a)pireno.
G) Se deline cada mancha obtenida y se las extrajo del cromatograma
con un suave raspado, luego se extrajo los hidrocarburos aromticos
policclicos de cada porcin con metanol caliente (tres porciones de
5 mL).
H) Las soluciones de hidrocarburos aromticos policclicos as obtenidas,
fueron concentradas en ambiente de nitrgeno y llevadas a un
volumen de 5 mL en una fiola, utilizando metanol como eluyente.
I) Las soluciones que contenan al benzo(a)pireno fueron almacenadas
en ambiente de nitrgeno en tubos de ensayo con tapa hermtica y
protegidos de la luz, para realizar su lectura en el espectro ultravioleta.
IV. Fase de Lectura, por Espectrofotometra Ultravioleta.
A) Se determin la longitud de onda ptima de la solucin metanlica del
benzo(a)pireno, para lo cual se realiz la lectura por barrido de su
espectro ultravioleta entre los 200 y 400 nm a tres concentraciones
standard del benzo(a)pireno de 1, 2 y 3 ug/mL, obtenindose la
longitud de onda ptima a los 264 nm.
B) Se elabor la curva de calibracin de la solucin metanlica del
benzo(a)pireno. Para esta operacin se prepararon 15
concentraciones standard del benzo(a)pireno con una concentracin
de 0,1 g/mL hasta 10 g/mL, partindose de una solucin patrn de
40 ug/mL .
C) Se confirm la presencia del benzo(a)pireno en los extractos que
contenan al benzo(a)pireno resultantes del anlisis cromatogrfico de
las soluciones problema mediante sus picos de absorcin obtenidos de
la lectura por barrido de su espectro ultravioleta entre los 200 y 400
nm.
Formacin de hidrocarburos aromticos policiclicos y del 3,4-
benzopireno en aceites comestibles alterados por
recalentamiento. De La Cruz Rodrguez, Eduard Ruber; Huaman
Gutierrez, Juan Orlando
Elaboracin y diseo en formato PDF, por la Oficina General del Sistema de Bibliotecas y Biblioteca
Central UNMSM
D) Se trasvas cuantitativamente los extractos del benzo(a)pireno y se
llev a un volumen de 5 ml. Se adicion 10 ug del standard de
benzo(a)pireno (standard interno) a cada solucin a cuantificar.
E) Se anot la absorbancia de cada solucin problema, a la longitud de
onda de 264 nm.
Clculos:
- Una vez obtenida la absorbancia a esta longitud de onda, se extrapola
este dato en la curva de calibracin y se obtiene una concentracin
(Cm).
- Luego se aplica la frmula:
Donde:
Cm : Cantidad de benzo(a)pireno hallado en la Curva de calibracin
Co : Cantidad de Standard Interno (10 g)
20 : Factor de conversin a Kg ( Relacin 1000 g/ 50 g).
Concentracin de B(a)p
en el aceite (g/Kg)
= [(Cm x 5) - Co] x 20
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Fig. N 4
CURVA DE CALIBRACIN DEL BENZO(A)PIRENO
CUADRO DE VALORES
CONCENTRACIN ABSORBANCIA
( ug/ mL) Longitud de onda : 264 nm
0.2 0.0404 Solvente : Metanol
0.3 0.0462 Equipo : Espectrofotmetro ultravioleta
0.4 0.0764 DIODEARAY-8452-A HP
0.5 0.0919
0.6 0.1260
0.7 0.1487
0.8 0.1588
0.9 0.1847
1.0 0.2069
2.0 0.4323
4.0 0.8793
6.0 1.3210
8.0 1.7650
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