UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

"Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria"

UNIVERSIDAD NACIONA DE !IURA

"ACU #AD DE $EDICINA %U$ANA ESCUE A !RO"ESIONA DE EN"ER$ERIA

CURSO&

Bioqumica

#E$A&

Practica N 1

DOCEN#E&

DR Vio!"ta Mor# DR Car!o$ O!%u# Carri&o

IN#E'RAN#ES& Atau'" C(r&o)a A#a *a+ri"!a

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INTRODUCCIN

E # "$t" ,r"$"#t" tra+a'o &ar"mo$ a co#oc"r - "! o+'"ti)o &"! !a+oratorio r"co#oc"r u#a &" !a$ t.c#ica$ "!"m"#ta!"$ $o+r" !a $o!uci(# +u//"r qu" r"qui"r" &" u# co#tro! "$tricto &"! ,H - ci"rto$ !mit"$ &" aci&"0 o a!ca!i#i&a& Tam+i.# )"r"mo$ como "! a%ua aci&a cam+ia &" co!or "# !a cua! &i$mi#u-" $u ,H a co!or ro'o - "! a%ua #"utra &" co!or )"r&" $" ,o#" u# ,oquito amari!!a - )"r"mo$ !o$ ,a$o$ &" ,H ,ara 1ac"r !a $o!uci(#

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PRACTICA 1 SOLUCIONES BUFFER

El objetivo de esta prctica es sealar al estudiante una de las tcnicas elementales utilizadas en el laboratorio bioqumico y clnico , para determinacin del metabolismo hdrico y minerales . P !"E # a$ %olucin tampn o bu&&er El buen &uncionamiento de los sistemas biol'icos requiere de un control estricto del ph que rodea a estos sistemas ya que los procesos metablicos son inactivos &uera de ciertos limites de acidez o alcalinidad. El saber preparar un bu&&er es importante debido a que su propiedad de mantener casi invariables el ph de una solucin los hace imprescindible en el estudio de reacciones enzimticas (in vitro). %e presume que la teoruia es conocida por el estudiante habiendo sido revisada en el curso de &sica o qumica. En 'eneral hasta la ecuacin de *enderson *asselbach'.

P* + p,a - lo' sal .cido

Esta ecuacin permite calcular la relacin molar entre la sal /aceptor de protones$ y el cido /donador de protones$ para el ph y p, determinados.

I. 1.-

EJERCICIOS DE PRCTICA

$Preparar 01 ml . 2e una solucin 1.13m de bu&&er &os&ato ph 4.0 a partir de5 6na solucin 1.78 de 9a3*P:;/&os&ato disdico$ 6na solucin de 1.108 de 9a3*P:;/&os&ato monosdico$

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a$8edir p* b$ adir 7ml. *<l/1.109$, medir el p* nuevamente. c$ 8edir el ph de 01 ml. 2e *31 destilada. d$ adir 7ml. *<l/1.109$ e$ 8edir el ph nuevamente.

a$ =as relaciones involucradas en cada e>perimento

%olucin 1.78.de 9a3P:; %olucin de 1.108. de 9a*3*P:;

b$ =os clculos e&ectuados para la determinacin de las cantidades de las di&erentes soluciones a emplearse en cada caso. continuacin hallaremos la cantidad de volumen que se necesitan para preparar el bu&&er &os&ato 1.138 a p* 4.0.Para esto utilizaremos al'unos clculos matemticos y qumicos. *3P: - :* p*+ P,a-Pb AsalB AcidoB 4,0+lo' a 1,13? a +1.17C4mol9a3P:; =ue'o calculamos el volumen que necesitamos de 9a3P:; 1.7 mol de 9a3P:; 7111ml
*P:?3;

- *@:-

D,@0 > 71?;mol de E + D,@0 ml de 9a3P:;

9a3P:;

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<alculamos la cantidad de volumen de 9a*3P:; que necesitamos

1,13? 1,17C4 + 1,11@@ moles de 9a*3P:; 1,1@@ moles de E 9a*3P:; 01ml 7111ml

E + 7,C0 > 71?; moles de 9a*3 P:;

1,10 moles de 9a*3P:; 7,C0 > 71?; de 9a*3P:; F + @,@ ml de 9a*3P:;

7111ml Fml

<$ =as lecturas obtenidas en el potencimetro 2ebido a que no contamos con el potencimetro, para medir p* utilizaremos un indicador universal, que nos va a permitir calcular un p* apro>imado pero no e>acto, de acuerdo a la coloracin que toma la muestra. Para esto debemos tener en cuenta la si'uiente tabla.

<olor !ojo naranjado marillo Gerde zul Hndi'o Gioleta ; 0 C 4 D I 71

p*

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Es un vaso de precipitados tendremos el bu&&er &os&ato 1,138 a Ph 4.0 que est &ormado por D,@0 ml de 9a3P:; y @,@ ml de 9a*3P:; a lo cual le aadiremos a'ua destilada hasta completar los 01 ml. En un vaso de precipitados tendremos solo 01 ml de a'ua destilada. =ue'o utilizaremos el indicador universal para calcular el ph de cada uno de las soluciones que se encuentran en los vasos, observaremos que el vaso que est con a'u destilada tiene un color verde, y podemos deducir que se encuentra a ph neutroJ mientras que el aso del bu&&er tambin es de color verde pero un poco ms oscuro, y podemos a&irmar que se enc uentre a un ph apro>imado de 4,;. d$Kcmo reaccionaron las soluciones bu&&er al aadir sales 9a /:*$ o *<lLKc ambi el phL Mu&&er &os&ato 1,138

P*+ 4,0 - 9a/:*$

<uando a're'amos hidr>ilo de sodio al bu&&er podemos notar que la solucin toma un color medio azul por lo que podemos notar que la solucin toma un color medio azul por lo que tiene un ph de 4,4 y la variacin con respeto al estado inicial no ha sido mucho, es decir el bu&&er impide que el ph cambie bruscamente. N6 P* +4 -*<l

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<uando a're'amos *<l el color de la solucin se toma ms oscura, y podemos decir que el ph ha tenido un li'ero cambio.

e$Kcambi el ph del *3: al aadir 9a /:*$ o*<lL

-9a/:*$

<uando a're'amos hidr>ilo de sodio podemos ver que el color verde cambia a violeta, lo que si'ni&ica que hubo un cambio muy 'rande en el ph de 4 a 71 apro>imado. =a solucin se vuelve alcalina.

-*<l

<uando a're'amos cido clorhdrico el color del vaso se torna rosado, lo que si'ni&ica que el ph disminuy a menos de ; y por lo tanto la solucin se volvi cida.

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3.?a$ Preparar 01 ml. 2e una solucin 7O01m de bu&&er &os&ato ph 4,0 a partir de5 6na solucin 1,78. de 9a*3*P:; /&os&ato monosacrido$ 6na solucin 1,79 de 9a /:*$

b$medir el ph c$ adir 7ml. *<l /1.109$, medir el ph nuevamente. d$ 8edir el ph de 01 ml. 2e *3: destilada. e$ adir 7ml. *<l/1.109$ &$ 8edir el ph nuevamente.

@? a$ Preparar 01 ml. 2e una solucin 1.138 de bu&&er &os&ato ph 4.0 a partir de5 6na solucin 1.78 de 9a*3P:; /&os&ato disdico$ 6na solucin 1.109 de *<l b$8edir el ph c$ adir 7ml 9a /:*$, medir el ph nuevamente d$ 8edir el ph de 01 ml. 2e *3: destilada. e$ adir 7ml. 2e 9a /:*$ 1.79 &$ 8edir el ph nuevamente

I CUESTIONARIO
#ndique5

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a) Las relaciones involucra as en ca a e!"eri#en$o En 01 8=. 2E 69 %:=6<#P9 1.13 8. M6QQE! Q:%Q ": P* 4.05

<:9<E9"! <#P9 2E = % =

E + D.@0 E71 R; 8

E+D.@0 ml /cantidad de sal a colocar$

<:9<E9"! <#P9 2E S<#2:

E +7.C0 E 71; 8 D.@0 ml de sal @.@. ml de cido

E+ @.@ ml /cantidad de cido a colocar$

@D.@0 ml de a'ua destilada

%)Los c&lculos e'ec$ua os "ara la e$er#inaci(n e las can$i a es e las i'eren$es soluciones a e#"learse en ca a caso.

En 01 8=. 2E 69 %:=6<#P9 1.13 8. M6QQE! Q:%Q ": P* 4.05

P* + p, - =o' %al Scido P,a + C.D

4.0 + C.D - =o' sal Scido =o' %al + 1.4 Scido =o' a /sal $ + 1.4

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1.3 Ra/ cido $ a + 0.177D4 a+ 1,17C4

1.13 R a <uanto moles necesito para preparar 01 ml si ten'o solucin sal preparada de 1.78

1.17CCC4 7111ml E E

?????????? 7111ml ?????????? 01 ml

1.78

?????????

D.@0> 71;8 ????????????

E+ D.@0ml de 9a3Po;

<uanto moles necesito para preparar 01 ml si ten'o solucion acida preparada de o.10 8

1.11@@8 TTTTTT. 7111 ml TTTT.. 7111ml E TTTT.. 01 ml E

1.108 7.C0 E 71;8 TTTT..

E +7.C0 E 71; 8 colocar$

E+ @.@ ml /cantidad de acido a

c.)Las lec$uras o%$eni as en el "o$enci(#e$ro

En el a'ua acida 5disminuye el ph a color rojo 'ua neutra 5no cambia de color

<olor !ojo ;

p*

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naranjado marillo Gerde zul Hndi'o Gioleta

0 C 4 D I 71

d$ Kc(#o reaccionaron las soluciones %u''er al a)a *rseles Na+O,) o,Cl-.ca#%i( el "/=as soluciones bu&&er presentaron resistencia y asimilo las sustancias que se le iban a're'ando amorti'uando as el resultado, el p* iba cambiando moderada mente de verde se &ue tornando amarillo

IICUESTIONARIO
1.Se)ale sus$ancias /i roelec$rol*$icas uso cl*nico 0ue se usan co#o sus$ancia

=as principales alteraciones hidroelectrolticas son las si'uientes5

Por alteracin del a'ua 5 deshidratacin e hipervolemia /edema$. Por alteracin del sodio5 hiponatremia e hipernatremia. Por alteracin del potasio5 hipocalemia e hipercalemia. Por alteracin del cloro5 hipocloremia e hipercloremia. Por alteracin del calcio5 hipocalcemia e hipercalcemia. Por alteracin del &s&oro5 hipo&os&atemia e hiper&os&atemia. Por alteracin del ma'nesio5 hipoma'nesemia e hiperma'nesemia. Por alteraciones del equilibrio cido?base5 acidosis y alcalosis.

1..2u3 es una soluci(n $a#"(n o %u''er-.C(#o se re4ula el "/6n tampn, bu&&er, solucin amorti'uadora o solucin re'uladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un cido dbil y su base conju'ada, es decir, sales hidrolticamente activas. "ienen la propiedad de mantener estable el p* de una disolucin &rente a la adicin de cantidades relativamente pequeas de cidos o bases &uertes. Este hecho es de vital importancia, ya que meramente con un leve cambio en la concentracin de

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hidro'eniones en la clula se puede producir un paro en la actividad de las enzimas.. Co#o se re4ula el "/

El p* d ela san're se re'ula por un mecanismo Mu&&er o amorti'uador que impide el cambio de p* enn la san're porque tenemos en san're acido carbonico, <o3 y sales minerales que nos ayudan a mantener el p* d ela san're entre 4.@0 y 4.;0, se re'ula con los pulmones y los riones, cuando hay una acidosis, o alcalosis metabolica uno de estos or'anos lo compenza y el or'anismo no entra en problemas.

5..2u3 sus$ancias e uso cl*nico se usan co#o in ica ores el "/=a &enol&talena de &rmula /<31*7;:;$ es un indicador de p* que en soluciones cidas permanece incoloro, pero en presencia de bases toma un color rosado con un punto de viraje entre p*+D,1 /#ncoloro$ a p*+I,D /8a'enta o rosado$ Es un compuesto qumico or'nico que se obtiene por reaccin del &enol /<C*0:*$ y el anhdrido &tlico /<D*;:@$ en presencia de cido sul&Urico.

6..2u3 ocurre en los "rocesos e alcalosis o aci osis- +7e$a%(licores"ira$orio) V cidosis metablica /p* WJ A*<:@?B WJ P<:3W$

=a ventilacin alveolar tambin se ve a&ectada si el p* baja, puesto que el or'anismo tiende a volverlo a su valor normal, se estimulan los quimiorreceptores centrales y se aumenta el nivel de ventilacin /hiperventilacin$ para hacer descender la P<:3 y llevar al p* a su valor normal, conocindose esta situacin como acidosis metablica compensada.

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lcalosis metablica /p* XJ A*<:@?B XJ P<:3 X$

%i el bicarbonato aumenta, tambin aumenta el p*. El or'anismo trata de compensarse hipoventilando, disminuyendo el nivel de ventilacin y aumentando la P<:3, llevando el p* a un valor normal, en cuyo caso se conoce como alcalosis metablica compensada. =a compensacin respiratoria de los trastornos metablicos se produce de &orma inmediata /en cuestin de minutos u horas$, puede necesitar de 73?3;h. para ser completa. F, a veces, la restauracin Ultima depende de la e>crecin renal del e>ceso de cido y tarda 0?C das en ser completa.

Proceso

",

i(!i o e car%ono

co#"ensaci (n

acidosis metablica

baja sube

respiratoria

acidosis respiratoria

baja sube

renal

alcalosis metablica

sube baja

respiratoria

alcalosis respiratoria

sube baja

renal

8..C(#o in'lu9e la concen$raci(n #olar $o$al e un %u''er 9 la concen$raci(n e ca a una e sus es"ecies6n bu&&er tiene una capacidad amorti'uadora, es un re'ulador que altera la variacin de ph de una disolucin cuando a la misma se le aade un acido o una base &uertes u otros a'entes que tienden a alterar la concentracin de iones hidro'eno.Esta accin re'uladora se mani&iesta en las mezclas de cidos y bases debiles junto con sus sales. =os tampones estn presentes en todos los lquidos corporales y actUan de inmediato /en cuestin de 7 se'.$ si se produce una anomala del p*. %e

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combinan con el e>ceso de cidos o de bases para &ormar sustancias que no a&ecten al p*. %in embar'o, su e&ecto es limitado

:..Cu&les son los %u''er or4&nicos e inor4&nicos en el or4anis#o 9 e 0ue e"en en7. Ta#"ones or4&nicos =as protenas y aminocidos como tampn =os aminocidos y protenas son electrolitos an&teros, es decir, pueden tanto ceder protones /cidos$ como captarlos /bases$ y, a un determinado p* /en su p#$, tener ambos comportamientos al mismo tiempo. =a car'a depende del p* del medio. "ampn hemo'lobina

Es un tampn &isiol'ico muy e&iciente debido tanto al cambio de p, que e>perimenta al pasar de la &orma o>idada a la reducida, como a la 'ran abundancia de esta protena en la san're /70 Y del volumen total san'uneo$. =a o>ihemo'lobina /p,+ 4,7C$ es un cido ms &uerte que la deso>ihemo'lobina /p,+ 4,47$. =os valores de p, son tales que determinan que en la disociacin si'uiente, el valor > sea, apro>imadamente, 1,4. *b*-> - :3Z *b:3 - >*Esta propiedad de la hemo'lobina, de cambiar su valor de p,, demuestra el e&ecto tampn, permite el transporte de una determinada cantidad de <:3 liberada en los tejidos. =a hemo'lobina o>i'enada que lle'a a los tejidos se disocia liberando :3, un proceso que est &avorecido por el estado de los tejidos /baja p:3, menor p* y alta p<:3$. 1,4*- - *b:3[Z *b*-1,4 - :3C Ta#"ones inor4&nicos "ampn carbnicoObicarbonato

Est constituido por *3<:@ y *<:@ unque su valor de p, /C,7$ est al'o alejado

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del p* &isiol'ico de la san're /4,;$, es un sistema muy e&icaz debido a que5 7$ =a relacin *<:@?O *3<:@ es muy alta /31O7$, lo que le proporciona una alta capacidad tampn &rente a los cidosJ 3$ es un sistema abierto, con lo que el e>ceso de <:3puede ser eliminado por ventilacin pulmonar de manera rpidaJ y @$ adems, el *<:@ puede ser eliminado por los riones mediante un sistema de intercambio con solutos. Este contenido total de <:3 de una muestra de plasma se determina a partir de la medida del volumen de <:3 liberado por acidi&icacin con un cido &uerte. =o que ocurre al aadir cido es que desplazamos el equilibrio de disociacin hacia la izquierda, y al ser el sistema bicarbonato un sistema abierto, el <:3 &ormado se desprende en &orma de 'as. 2ado que el <:3 es un 'as no ideal, 7 mmol ocupa 33,3C ml en condiciones estndar de presin y temperatura /1\< y 4C1 mm *' 717,@@ ]Pa$. =a temperatura en el laboratorio suele ser de 33\< y la presin atmos&rica de 401 mm *' /711 ]Pa$, por lo que corri'iendo para las condiciones estndar tendremos5 "ampn &os&ato

p* &isiol'ico, las especies del &os&ato con capacidad de tamponar son *3P:;?y *P:;3?ya que su valor de p, es de C,D. s pues, para el tampn &os&ato5 p* + C,D - lo' *P:;3? O *3P:;? p* &isiol'ico de 4,;, la concentracin de *P:;3? /un D1Y$ es ; veces superior a la de *3P:;? /un 31Y$. s pues, el tampn &os&ato es un sistema muy e&icaz para amorti'uar cidos. =a concentracin de &os&ato en la san're es baja /3 mEqO=$ por lo que tiene escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con otros tampones /ej el bicarbonato$. En cambio, a nivel intracelular, las concentraciones de &os&ato son elevadas lo que le convierte en un tampn e&iciente. =as 'randes cantidades de &os&ato dentro de las clulas corporales y en el hueso hacen que el &os&ato sea un depsito 'rande y e&icaz para amorti'uar el p*.

;..C(#o se eli#ina a#oniaco a nivel renal 9 "or 0u3 se in$erca#%iaEl metabolismo de los aminocidos y de otros compuestos nitro'enados de bajo peso molecular ori'ina cantidades apreciables de amonaco /9*,$. Este compuesto puede ser reincorporado al metabolismo mediante la sntesis de aminocidos no esenciales y otros procesos, pero como las cantidades de ste que se producen superan =as posibilidades de utilizacin por estas vas, una parte considerable del amonaco se elimina del or'anismo por e>crecin urinaria. El amonaco es una sustancia t>ica cuyo aumento en la san're y los tejidos

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puede causar lesiones, especialmente en el tejido nervioso, de ah la importancia de una eliminacin e&icaz. .El rin es capaz de eliminar amonaco por la orina en &orma de sales de amono. En este r'ano, el amonaco se combina con iones *- &ormando amonio, que se e>creta combinado con di&erentes aniones como la e>crecin urinaria de sales de amonio consume *-, estas reacciones estn en dependencia de los mecanismos renales de re'ulacin del p* san'uneo, lo cual posee un limite a las cantidades de amonaco que pueden ser eliminadas por esta va