ESTUDIO CINTICO DE LA INHIBICIN DE LA ALCOHOL DESHIDROGENASA HUMANA CON PIRAZOL Y ETANOL, EN LA OXIDACION DE METANOL, ETILENGLICOL E ISOPROPANOL

FABIO BARRIOS PADILLA

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS DEPARTAMENTO DE QUMICA PROGRAMA QUMICA MONTERA 2013
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ESTUDIO CINTICO DE LA INHIBICIN DEL ALCOHOL DESHIDROGENASA HUMANA CON PIRAZOL

FABIO BARRIOS PADILLA

Tesis con requisito para optar el ttulo de: Qumico Puro

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS DEPARTAMENTO DE QUMICA PROGRAMA QUMICA MONTERA 2014
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CONTENIDO

Pg.

1. OBJETIVO GENERAL 1.1 OBJETIVO ESPECIFICO

2. PROBLEMTICA

3. JUSTIFICACIN

4. METODOLOGA

OBJETIVO GENERAL

Determinar la cantidad de pirazol para la suministracin a personas que consumieron alcohol adulterado o que ingirieron alcohol industrial

OBJETIVOS ESPECFICOS

Evaluar la accin del pirazol como antitxico en los diferentes grupos tnicos comparndolo con etanol que es el ms usado en estos casos

Determinar la velocidad y la afinidad metano, isopropanol y etilenglicol

ante la intoxicacin con

PROBLEMTICA

La alcohol deshidrogenasas humanas (ADHS) incluyen mltiples isoenzimas con amplia especificidad de sustrato y aloenzimas de diferentes tnias. La ADH cataliza la etapa limitante de la velocidad en el metabolismo de varios alcoholes alifticos primarios y secundarios. La oxidacin de alcoholes comunes txicos, es decir, metanol, etilenglicol, isopropanol por las ADHs humana sigue siendo poco conocida se evaluara la accin del compuesto pirazol en la inhibicin competitiva de la alcohol deshidrogenasa humana perteneciente a diferentes grupos tnicos con el metanol, etilenglicol e isopropanol. La intoxicacin por metanol, etilenglicol e isopropanol puede causar alteraciones del equilibrio cido-base, trastornos oculares, problemas renales y disfuncin neurolgica que pueden llevar a la muerte o a generar secuelas graves. El tratamiento especfico consiste en la aplicacin de antdotos que impidan que la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) metabolice alguno de estos alcoholes; Por eso se estudia la utilizacin del pirazol frente al alcohol etlico para conocer cul es el ms rpido, eficiente y sin el menor nmero de secuelas en el organismo. Se realizaran estudios cinticos, con el fin de utilizar a el pirazol como agente desintoxicante para personas que ingirieron estos alcoholes, y con esto conocer la cantidad necesaria que se le puede suministrar a una persona con el fin de reducir rpidamente los efectos de estos alcoholes alifticos en el cuerpo donde la gravedad de estas intoxicaciones est causada por los cidos generados en la metabolizacin

JUSTIFICACIN

Debido a que la mayora de las intoxicaciones con alcohol de bebida e industrial son debidas a los alcoholes isopropanol, etilenglicol y metanol, y son tratadas con el etanol, el antdoto ms barato que se encuentra en el mercado y ms ampliamente utilizado, por lo tanto se requiere la implementacin de nuevos agentes farmacolgicos que realicen el proceso de desintoxicacin sin dejar efectos segundarios en el organismo, debido a que estos alcoholes son utilizados como solventes y se encuentran en las bebidas es fcil su ingesta oral , queremos comprobar si el uso de pirazol puede remplazar al etanol como desintoxicante principal esto se har evaluando su accin en las distintas clases de ADH que se encuentran en los diferentes grupos tnicos Debido a que estos alcoholes se asocia a una gran variedad de procesos inflamatorios y/o degenerativos que afectan a una amplia variedad de rganos y sistemas del organismo, entre los que se destacan el sistema digestivo que incluye el hgado, el tracto gastrointestinal y el pncreas, el sistema vascular y el sistema nervioso central y perifrico , debido a que el hgado es el rgano que ms padece la toxicidad por el consumo de alcohol con la utilizacin del pirazol pretendemos disminuir las lesiones hepticas y aumentar as la utilizacin de este compuesto como principal agente en la atencin de personas intoxicadas. Estos estudios se simularan utilizando programas por ordenador con las ecuaciones correspondientes de la inhibicin competitiva y no competitiva. Los hallazgos proporcionaran una base enzimatologica para el tratamiento clnico de metanol y etilenglicol con pirazol o etanol con perspectivas de farmacogentica.

METODOLOGA

Se realizaran estudios cinticos en fosfato de sodio 0,1 M a pH 7,5 y 25 C, que contiene 0,5 mM de NAD+ variadas concentraciones de sustrato en la ausencia o presencia del inhibidor. La actividad de la enzima se determinara mediante el control de la produccin de NADH a 340 nm utilizando un coeficiente de absorcin de 6,22 mM -1 cm -1 o a 460 nm para la emisin de la fluorescencia. Unidades de actividad enzimtica (U) se expresa en micromoles de NADH formado por minuto. Datos cinticos en estado estacionario se analizaran por regresin no lineal de mnimos cuadrados usando los programas Cleland de HYPER, COMP, NONCOMP y UNCOMP. Datos de velocidad iniciales se ajustan con el programa HYPER a la ecuacin de Michaelis-Menten. Ecuacin (1)

Los datos de los estudios de inhibicin del punto muerto se encajan con una de las siguientes ecuaciones lineales de inhibicin, es decir, el programa de COMP para la inhibicin competitiva, el programa NONCOMP para la inhibicin no competitiva, o el programa UNCOMP para la inhibicin no competitiva, respectivamente. Ecuacin (2):

Ecuacin (3):

Ecuacin (4)

Donde V mx.es la velocidad mxima, S es la concentracin de sustrato, K M es la constante de Michaelis, que es la concentracin de inhibidor, y Kis y KII son la inhibicin de la pendiente y la intercepcin de las constantes de inhibicin,
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respectivamente. Para la evaluacin de la inhibicin competitiva de la oxidacin de alcoholes txicos por el etanol y Pirazol, se emple la siguiente ecuacin para enzimas que cataliza dos reacciones simultneamente. Ecuacin (5)

Donde V a es la velocidad mxima de alcohol txico, Sa y SB son las concentraciones de alcohol txico y etanol o Pirazol, respectivamente, y K a y K b son las constantes de Michaelis para el alcohol txico y etanol o pirazol, respectivamente. Suponiendo que el alcohol sea txico y etanol estn presentes en la misma concentracin, la relacin de actividad para el alcohol txico y el etanol con ADH isoenzimas / alozimas ser segn la ecuacin (6)

Donde Va y Vb son las velocidades mximas y Ka y Kb son las constantes de Michaelis para el alcohol txico y etanol y se compara con los de pirazol.