REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE UNIVERSITE ABOU BEKR BELKAID - TLEMCEN

Facult des Sciences - Dpartement de Chimie Laboratoire de Chimie Organique, Substances naturelles et Analyses (COSNA)

En vue de lobtention du MAGISTERE EN CHIMIE Option : Chimie Organique Applique

Sambucus Nigra L., une plante de la pharmacope traditionnelle Nord africaine

Prsent par : DJABOU Nassim

Soutenu le 20/09/06 devant la commission du jury compose de : J. KAJIMA MULENGI B. TABTI N. BENABADJI H. ALLALI Professeur Professeur Professeur Matre de Confrences Prsident Examinateur Examinateur Encadreur

Anne Universitaire 2005/2006

- DEDICACES

Ddicaces

Je ddie ce mmoire : A mes trs chers parents pour leurs dvouements, leurs amours, leurs sacrifices et leurs encouragements. Que ce travail soit, pour eux, un faible tmoignage de ma profonde affection et tendresse. A mes frres : Houari et sa femme Nawel, Kamel et Anes. A ma sur Samia, son mari et ses deux enfants yasser et farihane. A toute ma famille et tous mes chers amis : Chakib, Djallel, Nassim Slimani (vive el Bara et el WAT ma thchi), Amine (wakhar), Ftita, Djelloul, Nassim Chelbi, Faycel (msettah), 8, Abdelkrim, Dorso, le Coiffeur et El az. A tous mes amis et camarades au laboratoire de COSNA.

- REMERCIEMENTS

Remerciements
Ce travail a t ralis au Laboratoire de Chimie Organique, Substances Naturelles et Analyses (COSNA) de la Facult des Sciences, Dpartement de Chimie, de lUniversit de Tlemcen sous la direction de Monsieur H. ALLALI, qui je lui adresse ma profonde gratitude pour les conseils clairs et les encouragements quil na cess de me prodiguer tout au long de ce travail. Jexprime ma profonde reconnaissance Monsieur J. KAJIMA MULENGI, Professeur luniversit de Tlemcen et directeur du laboratoire COSNA, qui ma fait lhonneur de prsider le jury. Mes chaleureux remerciements vont galement Monsieur B. TABTI, Professeur luniversit de Tlemcen et Doyen de la facult des sciences pour toute laide qui ma apporter durant mes tudes universitaires et pour mavoir fait lhonneur de juger ce travail. Jexprime ma reconnaissance Monsieur N. BENABADJI, Professeur luniversit de Tlemcen, qui ma fait lhonneur dexaminer ce travail tout au long de sa prparation. Mes vifs remerciements vont aussi Monsieur S. BARKA, charg de cours luniversit de Tlemcen et ses deux tudiantes pour leur aide prcieuse dans la ralisation des tests dactivit antibactrienne. Mes remerciements aussi pour les membres du laboratoire LSO de luniversit du Maine France pour avoir ralis les diffrentes analyses. Mes remerciements vont tous les enseignants et tudiants en post-graduation COSNA pour leur encouragement et leur amiti, et tous ceux qui ont contribu de prs ou de loin la ralisation de ce mmoire.

- SOMMAIRE

Sommaire

Avant-propos Introduction gnralep.1 Chapitre I : Historique des plantes p.6 Chapitre II : Vertus thrapeutiques des plantes p.12 Chapitre III : Etude botanique de Sambucus nigra L.. p.30 Chapitre IV : Chimie et proprits thrapeutiques de Sambucus nigra L p.44 Chapitre V : Essais dextraction et de purification des principes actifs.. p.69 Chapitre VI : Activit antibactrienne.. p.100 Conclusion gnrale...p.120 Glossaire. p.121

- AVANT-PROPOS ...

Avant-propos
Comme est applique bien avant davoir t tudie, la thrapeutique par les plantes est, sans doute, aussi ancienne que lest la maladie. Ddaigner les vertus de cette mdecine de tradition immmoriale, transmise en tous lieux de gnration en gnration, serait aussi ridicule que de contester les bienfaits indniables de la mdecine moderne. Le triomphe de la chimiothrapie a, certes, port un coup redoutable la mdecine purement vgtale, mais pass les premiers enthousiasmes, la mdecine actuelle remet de plus en plus en honneur les simples plantes mdicinales, aprs avoir tabli de faon scientifique les notions de jadis, purement empiriques et partant dune observation plus ou moins rigoureuse. La plupart des espces vgtales qui poussent dans le monde entier possdent des vertus thrapeutiques, car elles contiennent des principes qui agissent directement sur lorganisme. On les utilise aussi bien en mdecine classique quen phytothrapie : elles prsentent en effet des avantages dont les mdicaments sont souvent dpourvus. Pour ce qui nous concerne et dans le cadre de la valorisation de plantes mdicinales, nous nous sommes intresss ltude du Sambucus nigra L., une plante trs utilise dans la mdecine traditionnelle comme anti-inflammatoire. Notre tude a t mene grce la contribution des laboratoires suivants : - Laboratoire de Chimie Organique, Substances Naturelles et Analyses (COSNA), Dpartement de Chimie - Facult des Sciences - Universit Aboubekr Belkad, Tlemcen. - Laboratoire de microbiologie, Dpartement de Biologie - Facult des Sciences Universit Aboubekr Belkad, Tlemcen. - Laboratoire de Synthse Organique et Chimie Fine (LSO) Universit du Maine, Le Mans France.

- INTRODUCTION GENERALE ...

Introduction gnrale
Depuis la nuit des temps, les humains apprcient les vertus apaisantes et analgsiques des plantes. A travers les sicles, les traditions humaines ont su dvelopper la connaissance et lutilisation des plantes mdicinales. Si certaines pratiques mdicales paraissent tranges et relvent de la magie, dautre au contraire semble plus fonde, plus efficaces. Pourtant, toutes ont pour objectif de vaincre la souffrance et d'amliorer la sant des humains [1,2]. Dans les cas extrmes, l'action de la mdecine moderne soulage les patients de manire indniable et sauve de nombreuses vies. Les mdicaments chimiques peuvent enrayer les infections bien plus efficacement que bien d'autres traitements. De mme, les techniques chirurgicales modernes (chirurgie plastique, microchirurgie, ranimation, etc.) augmentent les chances de vaincre ou de soigner des maladies et des blessures graves. Toutefois, malgr les normes progrs raliss par la mdecine moderne, la phytothrapie offre de multiples avantages. Noublions pas que de tout temps, l'exception de ces dernires annes, les hommes n'ont eu que les plantes pour se soigner, qu'il sagisse de maladies bnignes, rhume ou toux, ou plus srieuses, telles que la tuberculose ou la malaria. Aujourd'hui, les traitements base de plantes reviennent au premier plan, car l'efficacit des mdicaments tels que les antibiotiques (considrs comme la solution quasi universelle aux infections graves) dcrot. Les bactries et les virus se sont peu peu adapts aux mdicaments et leurs rsistent de plus en plus. C'est pourquoi on utilise nouveau l'absinthe chinoise (Artemisia annua) et surtout son principe actif pour soigner la malaria lorsque les protozoaires responsables de la maladie rsistent aux mdicaments [1]. La phytothrapie, qui propose des remdes naturels, est bien accepte par lorganisme et souvent associe aux traitements classiques. Elle connat de nos jours un renouveau exceptionnel en occident, spcialement dans le traitement des maladies chroniques, comme lasthme ou larthrite. De plus, les effets secondaires induits par les mdicaments inquitent les utilisateurs, qui se tournent vers des soins moins agressifs pour lorganisme. On estime que 10 20% des hospitalisations sont dues aux effets secondaires des mdicaments chimiques [2,3]. En dpit des rsultats spectaculaires obtenus par l'allopathie, la mdecine classique connat aussi des checs, l'affaire de la thalidomide en est un exemple dramatique. En 1962, en Allemagne et en Grande-Bretagne, 3000 enfants, dont les mres avaient pris des sdatifs

- INTRODUCTION GENERALE ... durant leur grossesse, naissent avec des difformits [1]. En effet, on se rend compte, brusquement, qu'un traitement base de mdicaments sophistiques peut engendrer des effets secondaires catastrophiques [1,2,3]. Ceci s'applique aussi aux plantes, car si ces dernires sont faciles utiliser, certaines dentre elles provoquent galement des effets secondaires. Comme tous les mdicaments, les plantes mdicinales doivent tre employes avec prcaution. Il est recommand de n'utiliser une plante que sur les conseils d'un spcialiste : mal dose, l'phdra (Ephedra sinica) est trs toxique et la consoude (Symphytum officinale), une plante qui a connu, jadis, son heure de gloire, peut avoir des effets fatals dans certaines circonstances. Toutefois, lorsqu'un traitement base de plantes est suivi correctement, les risques deffets secondaires sont fort limits. Dans les annes 1960, la Chine inaugure le programme dit des mdecins aux pieds nus aprs une priode d'instruction mdicale de base, associant la phytothrapie, l'acupuncture et les pratiques accidentels. Ces mdecins sont envoys dans les zones rurales pour soigner les millions de chinois trop loigns des villes. A la fin des annes 1960, l'OMS adopte le modle des mdecins aux pieds nus et dcide de faire participer les herboristes traditionnels aux programmes chargs de rpondre aux besoins de soins du tiers-monde [1]. L'action de la phytothrapie sur l'organisme dpend de la composition des plantes. Depuis le XVIIIe sicle, au cours duquel des savants ont commenc extraire et isoler les substances chimiques des plantes, on considre les plantes et leurs effets en fonction de leurs principes actifs. La recherche des principes actifs extraits des plantes est d'une importance capitale car elle a permis la mise au point de mdicaments essentiels. La tubocurarine, le relaxant musculaire le plus puissant, est drive du curare (Chondrodendron tomentosum) et la morphine, l'analgsique le plus puissant, est tire du pavot opium (Papaver somniferum). D'autres anesthsiants proviennent de plantes : la cocane, par exemple, est tire du coca (Erythroxylum coca). Aujourd'hui, les plantes sont de plus en plus utilises par l'industrie pharmaceutique. Il est difficile dimaginer le monde sans la quinine (drive du genre Cinchona), qui est employe contre la malaria, sans la digoxine (du genre Digitalis), qui soigne le cur, ou encore l'phdrine (du genre Ephedra), que l'on retrouve dans de nombreuses prescriptions contre les rhumes. Ces trois plantes ainsi que beaucoup d'autres sont largement utilises par la mdecine classique. [3,4] S'il est capital de matriser l'action des diffrents principes actifs pris isolment, la phytothrapie, la diffrence de la mdecine classique, recommande d'utiliser la plante entire, appele aussi totum plutt que des extraits obtenus en laboratoire. Etudier les pices dune montre et russir en identifier les parties essentielles ne permet pas de 2

- INTRODUCTION GENERALE ... comprendre comment elle fonctionne, de mme que dissquer une plante mdicinale pour isoler ses principes actifs ne suffit pas pour expliquer comment elle agit. Une plante entire est plus efficace que la somme de ses composants. Ainsi, des chercheurs ont dmontr que les principes actifs de nombreux vgtaux, tels ceux du ginkgo (Ginkgo biloba), agissent de manire complexe et combine pour produire un effet thrapeutique global. Les plantes contiennent des centaines, voire des milliers de substances chimiques actives. Souvent, dterminer en dtail laction dune plante est trs difficile, sinon impossible, mme si son effet mdicinal est, en revanche, bien connu. L'tude pharmacologique des plantes entires indique qu'elles fonctionnent comme un puzzle incomplet. En outre, bien qu'il soit utile de connatre les principes actifs d'une plante, cette information peut tre trompeuse : ainsi, la rhubarbe de Chine (Rheum palmatum), dont l'action irritante des drivs anthracniques sur la paroi intestinale stimule les selles, est frquemment employe comme purgatif. Mais elle n'est efficace qu' hautes doses. A petites doses, d'autres de ses constituants comme les tanins ont un effet plutt astringent sur les muqueuses intestinales. La rhubarbe de Chine produit donc des effets contradictoires selon la quantit absorbe : elle est laxative des doses modres ou importantes, anti-diarrhique de faibles doses. Cet exemple dmontre que l'exprience du praticien combine celle du patient est souvent le guide le plus sr pour connatre l'effet thrapeutique des plantes entires ; ensuite, que la valeur dune plante mdicinale ne peut tre limite la liste de ses principes actifs [2,3,4]. Si une socit pharmaceutique trouvait une plante comme le millepertuis [5], qui se rvlait plus efficace et plus saine qu'un mdicament, elle prfrait crer des mdicaments synthtiques plutt qu'une prparation naturelle. C'est le terme de synergie qui est le plus appropri pour distinguer la phytothrapie de la mdecine conventionnelle. Lorsqu'on utilise la plante entire plutt que ses principes actifs isols, ses diffrentes parties agissant ensemble sont plus efficaces qu'un dosage quivalent du principe actif extrait de la plate utilise par la mdecine conventionnelle. Le muguet (Convallaria majalis) [5] reprsente un exemple de choix pour illustrer l'effet synergique des produits naturels. En effet, il donne lieu des usages inattendus grce la combinaison naturelle des principes actifs contenus dans la plante entire. Un ou mme plusieurs principes actifs isols ne permettent pas d'obtenir le mme rsultat [1]. La phytothrapie continuera-t-elle tre apprcie sa juste valeur, c'est comme un large ventail de traitements quilibrs, sains, conomiques et cologiques, ou ne sera-t-elle q'une nouvelle activit conomique devant imprativement gnrer des bnfices immdiats ?

- INTRODUCTION GENERALE ... Au dbut des annes 1990, une tude a montr l'effet de certaines plantes chinoises sur des patients souffrant d'eczma. Ainsi, l'ayant d'une seule plante chinoise aux dits autres contenus dans une prparation a provoqu une amlioration de l'tat de sant d'un patient jusqu'alors insensible au traitement. Des progrs de cette nature ont t obtenus en adaptant les soins aux besoins des patients et en traitant les causes des maladies [1]. En associant savoir traditionnel et acquis de la science, l'exemple chinois aidant, on peut envisager le moment o un patient choisira le traitement qui lui est appropri [4]. Le but de notre tude est d'apporter des lments de connaissances chimiques et biologiques relatifs une plante trs utilise en phytothrapie, il s'agit du Sambucus nigra L. [1,5,6,7]. La mthode du travail, que nous avons adopte, est base sur une action pluridisciplinaire, visant la valorisation de la matire vgtale. Cette mthode permet de relier les lments d'information apports par les ethnobotanistes au travail des chimistes et des biologistes.

- INTRODUCTION GENERALE ...

Bibliographie
1. Larousse, 2001, Encyclopdie des plantes mdicinales : Identification, prparations, soins, p. 28-31 2. Verdrager, J., 1978, Ces mdicaments qui nous viennent des plantes, Ed. Maloine S.A., p. 12-15. 3. Fernandez, M., 2003, De Quelques plantes dites mdicinales et de leurs fonctions, Editions Aenigma, p.09. 4. Bruneton, J., 1999, Pharmacognosie, Phytochimie Plantes mdicinales Techniques et documentations, 3me Edition, Lavoisier. 5. Quezel, P.; Santa, S., 1963, Nouvelle flore dAlgrie et des rgions dsertiques mridionales, p.8-11. 6. Baba Aissa, F., 1999, Encyclopdie des plantes utiles Flore d'Algrie et du Maghreb, Ed. Librairie Moderne Rouiba, p. 20. 7. Debuigue, G., 1984, la rousse des plantes qui gurissent.

- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ...................................................

Histoire des plantes

I. Introduction : Les fleurs tranges et merveilleuses, rapparaissant avec le cycle immuable des saisons, ont certainement frapp limagination de lhomme ds son apparition sur terre. La lutte pour la survie la oblig de slectionner les plantes comestibles et, comme las animaux, dviter celles qui le rendaient malade. Mais trs tt, en observant les effets provoqus par ces dernires, il a d essayer de les utiliser galement pour soulager ses souffrances [1]. Les tmoignages retrouvs et l sur des parois rocheuses, des bas-reliefs de son environnement, des poteries en terre cuite, sont la preuve que lhomme sest toujours intress aux plantes, qui ont constitu pour lui une source de nourriture (plantes comestibles ou poisons pour la chasse), voire un moyen de gurir ses maladies (plantes mdicinales). II. Histoire des plantes : Les traces de lutilisation des plantes mdicinales existent dans des textes chinois datant de plus de 5000 ans avant J.C. Les inscriptions cuniformes, prsentes sur des tablettes sumriennes de Msopotamie, prouvent que le pavot tait dj recherch il y a plus de 2000 ans avant J.C. Le papyrus mdical dEBERS (environ 1500 ans avant J.C.) est le premier recueil consacr aux plantes mdicinales, proposant un inventaire de 12 plantes accompagnes de leur mode dutilisation (myrrhe, ricin, ail etc.). Les Egyptiens possdaient dj des notions de pharmacope et plus de 200 plantes diffrentes, ramenes de Syrie par le pharaon Thoutmsis III, apparaissent sur le bas-relief du temple de Karnak (1450 ans avant J.C.). En Inde, les veda , livres sacrs contenant toute la sagesse divine, rdigs ver 1500 ans avant J.C., tmoignent eux aussi de la connaissance des plantes. Le Khella et la Centella furent dj dcrits dans le trait mdical dnomm Charaka Samhita vers 700 ans avant J.C. [1,2]. Des gravures de plantes antrieures la culture hellnique ont t retrouves en Crte. La dcouverte du nom grec dune pice Koriannon a particip, pense-t-on, au dchiffrement de lcriture mycnienne de Crte (XVIIe XVe sicle avant J.C.). Plus tard, la Grce antique sest distingue avec les premiers thrapeutes du monde occidental. Hippocrate (460-377 avant J.C) dispensa son enseignement prcieux sur lle de Cos. Il considrait la maladie comme un phnomne normal et prfrait laisser agir la nature. Il fut le premier mentionner des observations cliniques avec plus de 230 plantes mdicinales. Chef de la 6

- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ................................................... confrrie des asclpiades - Askelpios, et plus tard, Esculape, furent les dieux des remdes , il devient le symbole de la mdecine. A cette poque un dbut de classement selon la toxicit des plantes fut labor par des savants clbres (SRAPION, PLINE etc.) mais surtout THOPHRASTE (372-287 avant J.C.), qui fut certainement le botaniste le plus marquant de toute lantiquit. Il nomma quelque 500 espces de plantes et se livra des exprimentations sur certaines dentre elles ( Historia plantarum , De causis plantarum , Peri phytoon historias etc.). De son ct, ARISTOTE (384-322 avant J.C.), clbre disciple de PLATON et naturaliste, crivait : Le tous est plus que la somme des parties constitutives. Chaque partie ou chaque organe dun tre vivant nest pas seulement quune partie ou quun organe, mais cest aussi un lment essentiel et indispensable de lorganisme, dun tout . Ceci constitue lun des principes fondamentaux de la mdecine par les plantes. Plus tard, DIOSCORIDE, herboriste grec (100 ans avant J.C.), crivit un recueil de cinq livres consacr plus de 500 espces de plantes mdicinales, regroupant dj les Labies, les Papilionaces, les Apiaces, les Astraces. Cet ouvrage connu sous le nom de Materia Medica , fut publi pour la premire fois en 1478 par limprimeur de Venise Ald Manuce. Il constitua la rfrence principale en Europe jusquau XVIIIe sicle, en rassemblant environ 600 plantes (genvrier, orme, pivoine, bardane etc.). Une illustration est fournie avec le Juliania Anicia Codex , qui prsente des descriptions brves de plantes, mais surtout des donnes concernant lutilisation pratique de vgtaux, le type dindications et les mdications. GALIEN (130-201 avant J.C.), dorigine grecque et mdecin personnel de lempereur romain Marc AURLE, labora sa thorie des quatre humeurs et sintressa surtout lanatomie. Son influence se poursuivra durant prs de 15 sicles. Il crivit seulement trois livres et se limita aux plantes quil apprciait personnellement. Il est considr comme le pre de la pharmacie [1,2]. Au IIe sicle, le commerce entre lEurope, le Moyen-Orient, lInde et lAsie commence se dvelopper, et les routes commerciales livrent dj les premires pices (clou de girofle originaire des Moluques) [2]. Bien entendu, toutes les grandes civilisations ont eu leurs traditions phytothrapiques. Au Ier sicle, le Shennong Bencaojing chinois proposait dj 252 remdes base de plantes (tussilage, rglisse etc.) et les civilisations prcolombiennes (Maya, Aztque, Inca) utilisaient la salsepareille, le tabac et le poivre, et produisaient mme la pnicilline sur des peaux de banane verte [1].

- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ................................................... Au Moyen-ge, de nombreuses coles de mdecine furent fondes, comme la clbre cole de Salerne en Italie, qui utilisait dj la sauge (la plante qui sauve), tandis que les gurisseurs usaient du pavot et mme du cannabis comme analgsique. HILDEGARDE von Bingen (1098-1179), mystique bndictine renomme, employait le galanga comme pice de vie . De son ct, lpanouissement de la culture arabe (VIIe XVe sicles) fournissait dexcellents mdecins et pharmaciens, qui furent lorigine de dcouvertes importantes (prparation des essences par distillation) et qui ont compt de clbres praticiens (AVICENNE 980-1037). Le dveloppement des explorations est incarn par les grands navigateurs, dont Christophe COLOMB, qui rapporta de nombreuses plantes des Antilles, comme le bois de gaac. En 1533, les Espagnols dcouvrirent la coca du Prou. Cest aussi lpoque o le cardinal jsuite Juan de LUGO ramena la clbre poudre de Jsuites, compose de lcorce de quinquinas, de la Cordillre des Andes, qui, un peu plus tard, fut le fbrifuge apprci de certains rois de France [1,2]. La route des pices vers lOrient tait aussi ouverte : la sauge et les plantes des monastres taient changes contre le gingembre, la cardamome, la noix muscade, le curcuma, le safran des Indes, le sn PARACELSE (1493-1541), alchimiste et professeur de mdecine Ble, considr comme le pre de la chimie, critiqua les thories de GALIEN et dAVICENNE. Il rdigea une uvre en dix volumes, au sein de laquelle les plantes avaient une place toute particulire. Sa clbre thorie de la signature tait mentionne ainsi : La nature munit chaque plante de signes extrieurs, afin dindiquer son utilit. En consquence, celui qui veut apprendre ce que la nature veut signifier, doit interprter ses marques, pour savoir quelles bonnes vertus se cachent de dedans. La signature du poivre deau indique que la plante va gurir les plaies : ceci est attest par la forme de la feuille et les gouttes de sang rouge au milieu de la feuilles. Cette thorie eut ses adeptes et fut utile pour mmoriser certains usages [1,2]. Ds le XVIIe sicle, dminents botanistes ont labor les fondements dune classification, qui, modifie au cours des annes, fait actuellement autorit. N. CULPEPER (1616-1654) dveloppa les herbiers imprims, ce qui permit aux proprits thrapeutiques des plantes dtre mieux connues. Paralllement, la consommation de thriaques, composes de dizaines de drogues hroques (mandragone) tait son comble. Une histoire de la flore universelle, Historia plantarum , traitant de plus de 18000 espces, fut entreprise par J.

- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ................................................... RAY (1628-1705). Les uvres de C. LINN (1707-1778), naturalistes sudois, sont immenses et ne peuvent videmment tre cites ici. Ce Pre de la systmatique comprit limportance des espces et leurs noms et publia de nombreux ouvrages : Genera Plantarum (8000 plantes), Species Plantarum (5900 plantes), Systema Naturae etc. Tous les cinq membres de la famille de Jussieu, mdecins et botanistes (1686-1853), furent passionns de systmatique et constiturent une rfrence, sans parler du naturaliste BUFFON (17071788) et de sa clbre Histoire Naturelle . En 1692, paraissait la premire Pharmacope Royale Galnique et Chimique rdige par M. CHARAS, vritable recueil de prparations mdicamenteuses. En 1778, le premier diplme dherboriste tait dcern par la Facult de Mdecine de Paris. Le premier codex franais parut en 1818 et les ditions se sont succdes jusqu la parution de la dernire dition de la pharmacope europenne (addendum 1999) [2]. Au XIXe sicle, la dcouverte des molcules originales, qui font la valeur thrapeutique des drogues hroques, a t impressionnante. Pour ne prendre que quelques exemples trs ponctuels, Meissner proposa en 1819 le nom dalcalode (driv des termes al Kali = cendre et eidos = forme), ayant observ le premier que ces substances azotes, prsentes dans certaines plantes, possdaient des proprits basiques. Ces molcules htrocycliques, drivant dacides amins, sont biosynthtises la fois par les plantes et par certains animaux. Elles prsentent une forte affinit pour les rcepteurs humains, do des effets pharmacologiques et thrapeutiques marqus, ce qui implique aussi leur toxicit dose plus leve [1]. Des progrs immenses ont t raliss cette poque par des pharmaciens et des chimistes qui ont tudi nombre de plantes exotiques et de notre environnement. Les secrets des remdes dautrefois commenaient tre dcouverts. Cest ainsi que pour ne prendre que lexemple du pavot, la morphine fut isole par SERTRNER en 1817, la codine par P. ROBIQUET en 1832 (il isola aussi lasparagine de lasperge), et la papavrine par MERCK en 1848. Bien entendu, les structures chimiques compltes de ces structures furent lucides bien plu tard. Cest aussi lpoque de lisolement de linuline partir de laune (1804), de lacide salicylique de lcorce de saule (1838) et le commencement dune longue srie. P.J. PELLETIER (1788-1842) et J. CAVENTOU (1795-1877) isolrent en 1820, et pour la premire fois, des substances naturelles pures qui devaient faire lorgueil de notre pharmacie, comme la quinine, la strychnine et la colchicine. Cest aussi lpoque de la dcouverte de toute une srie dalcalodes (atropine, srine, cocane etc.).

- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ................................................... Des tudes effectues sur les curares des Indiens de lAmazonie et de Colombie, ramens par lexpdition de la Condamine, permirent vers 1850 au physiologiste C. BERNARD (1813-1878) de jeter les bases dune nouvelle discipline, la pharmacologie exprimentale [1]. Rendons aussi hommage W. WITHERING (1741-1799), mdecin anglais qui dcouvrit le premier les effets bnfiques de la digitale dans lhydropisie. Mais aussi NATIVELLE, pharmacien franais, qui isola en 1868 les htrosides cardiotoniques partir de la digitale pourpre, mdicaments qui ont sauv des gnrations dinsuffisants cardiaques. Plus rcemment, de nombreuses drogues utilises sous forme dextraits commencrent tre de plus en plus utilises, comme laubpine, le ginkgo etc. Dautres continuent apparatre sans cesse sur le devant de la scne, dans des axes thrapeutiques novateurs (millepertuis, pilobe, echinacea etc.). Ainsi partant des feuilles ou des fleurs sches de la phytothrapie empirique, passant par ltape de la phytothrapie extractive, on arrive progressivement la phytothrapie moderne o les principes actifs des plantes sont prsents ltat pur sous forme de molcules chimiques. Actuellement se manifeste un certain dsir de retour vers la nature, un besoin dvasion vers la montagne, la fort, la mer et les pays lointains. Les mouvements cologiques se multiplient. Ce dsir de retour la nature se manifeste galement par un regain dintrt pour les traitements par les plantes que la publicit exploite largement. Les vitrines des pharmacies se couvrent de petits paquets de feuilles sches dont les vertus sont explicites par de magnifiques gravures [1,2]. Enfin, voquons dun mot les milliers de travaux de pharmaco-toxico-chimie sur les produits naturels qui se sont succds surtout depuis 1950, et qui ont permis des milliers de malades de retrouver lespoir [2].

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- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES ...................................................

Bibliographie
1. Verdrager, J., 1978, Ces mdicaments qui nous viennent des plantes, Ed. Maloine S.A. p.913. 2. Wichtl, M., Anton, R., 1999, Plantes thrapeutiques, Ed. Tec et Doc. p.4-14.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ...

Vertus thrapeutiques des plantes

I. Introduction Aprs des checs thrapeutiques rpts, face des pathologies atypiques, ou prouv par lagressivit de certaines mdications efficaces, telles que la chimiothrapie, le malade recherchera des mdecines douces. Adopte par une clientle de plus en plus nombreuse sensibilise par les campagnes de presse, les missions de radio et de tlvision, la phytothrapie a connu un renouveau ces dernires annes. Mais pour tre efficace, elle devra tre de qualit et pour cela tre soumise des contrles codifis dans la pharmacope franaise pour la plupart. Les plantes mdicinales font appel des formes galniques diverses : plantes en nature, poudres, glules de poudre, nbulisats, alcoolats, extraits, teintures, huiles essentielles [1]. Sil nest plus jug ncessaire lheure actuelle, daccompagner la cueillette des plantes dincantations et de rites magiques comme le croyaient les ramasseurs de plantes du temps jadis les anciens rhizotomistes , il nen est pas moins indispensable de se plier certaines rgles que lexprience a dmontr tre, impratives afin que les plantes se conservent bien et que leurs principes actifs demeurent efficaces. Beaucoup damateurs prennent got reconnatre et cultiver les plantes qui gurissent et prfrent les rcolter eux-mmes plutt que dutiliser les plantes toutes prtes que leur offre le commerce de dtail. Certaines prcautions sont alors ncessaires pour la russite de lopration [2]. II. La cueillette II.1. A quel moment cueillir les plantes ? : [2] Il est toujours prfrable de procder la rcolte par un temps sec et chaud : les plantes mouilles de pluie ou de rose saltrent, moisissent, fermentent et perdent, de toute faon, toute valeur thrapeutique. Le matin est le moment le plus favorable, mais on peut toutefois cueillir aussi le soir, avant la fracheur. II.2. Comment procder la cueillette ? : [2] Il vaut mieux cueillir les plantes sauvages, dans la mesure du possible, dans un lieu peu frquent : les plantes destines tre sches ne doivent en aucun cas tre laves, et il faut donc viter de cueillir les plantes poussireuses des bords des chemins frquents ou

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... celles, situes en bordure de champs cultivs, qui ont pu tre souilles par les engrais chimiques frachement rpandus. Il faut choisir uniquement des plantes saines et liminer impitoyablement les plantes fltries, taches, dcolores, manges par les insectes ou poussant proximit des champignons. Tout en effectuant la cueillette, il est trs simple dliminer les dbris divers (mousses, feuilles, brindilles), afin de ne conserver que la plante qui intresse : le tri serait plus difficile effectuer par la suite. On vrifie avec soin que dautres plantes ne soient pas mles celles quon dsire cueillir (la prsence dune plante dangereuse peut avoir des consquences graves). En rgle gnrale, il ne faut dailleurs pas mlanger les plantes de diffrentes espces pendant la cueillette. Pendant tout le temps que dure la cueillette, il est ncessaire de prendre garde ne pas craser ni comprimer les plantes : entasses sans soin, celles-ci risquent de se faner ou de subir un dbut de fermentation. Lidal reste le grand panier de vannerie lgre. Les racines sont les seules parties de la plante qui non seulement peuvent, mais doivent tre laves. Les passer leau claire courante trs mticuleusement, afin dliminer toute trace de terre. III. Comment scher les plantes ? : [2] En dehors des plantes qui sutilisent fraches, il est ncessaire de faire scher trs soigneusement celles quon dsire conserver. Il est trs important que ce schage se fasse rapidement, afin dviter laltration des plantes, leur fermentation et la perte de leurs principes actifs. Les plantes seront mises scher sur des claies (en treillis de Nylon mailles fines, par exemples) de faon que lair circule librement. On peut encore les suspendre en guirlandes, laide dun fil, mais le travail de prparation est assez long. Lidal serait de faire scher les plantes lombre par temps chaud, dans un endroit vaste et bien ventil. Dans les rgions pluvieuses, on peut commencer le schage four trs doux, puis laisser les plantes achever leur dessiccation complte sur les claies dans un grenier sec et bien ar. De mme, les organes charnus dune plante seront, de prfrence, schs par ce procd : bien vrifier que la temprature du four ne dpasse pas 20 40C, afin de ne pas les altrer ou mme les cuire. Lopration du schage a pour but denlever aux plantes leau quelles renferment : il est vident que le mode de dessiccation sera variable selon les parties de la plante conserver, leau ntant pas rpartie de la mme faon, ni dans les mmes proportions, dans les divers organes de la plante. 13

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Les racines et les rhizomes, dbarrasss de leurs parties abmes, lavs avec un soin mticuleux, seront pongs, puis coups en tranches, en lanires ou fendus suivant leurs dimensions. Ils seront mis scher au soleil ou au four. Les tiges, les corces et le bois scheront au soleil, lair libre et sec, ou encore au four doux. Les feuilles et les plantes entires seront disposes sur des claies, lombre, dans un endroit chaud et bien ventil. Les feuilles doivent tre mondes : cette opration peut seffectuer avant ou aprs le schage. Les fleurs et les sommits fleuries sont assez difficiles traiter (il en est de mme de certaines feuilles : Verveine ou Menthe, par exemple). Il est important de conserver leur couleur, ce qui est assez dlicat. Le mieux est de les dposer lombre sur des claies, 2025C, et en prenant la prcaution de les recouvrir de papier gris, afin de prserver leur couleur. Les fruits charnus (Airelles, baies de Genvrier) seront schs au soleil ou au four doux. IV. Comment garder les plantes sches ? : [2] Les vieilles prescriptions dune des uvres anonymes de lcole de Salerne, lAntidataire, sont toujours valables : les plantes sches, lorsquil ne reste plus aucune trace dhumidit, se rangent soigneusement et sparment dans des rcipients portant le nom de la plante et la date. Il faut choisir des botes ou des bocaux propres, nayant pas contenu prcdemment un produit dons ils auraient gard lodeur, et fermant hermtiquement. Les plantes achetes an vrac chez lherboriste, ou dont le conditionnement est un simple carton, doivent tre ranges de la mme faon dans des rcipients hermtiques. V. Prparation : [2] Les trois prparations lmentaires sont linfusion, la dcoction et la macration. V.1. Infusion : Elle consiste verser de leau bouillante sur les plantes (ou encore jeter le plantes dans le rcipient contenant leau bouillante) au moment prcis o leau entre en bullition. On couvre le rcipient et on laisse infuser le temps ncessaire. Le temps dinfusion est variable suivant la nature de la plante : de dix minutes une heure ; il va de soi que celle des plantes tissus plus pais (racines, tiges). Cest par linfusion que sont traites les plantes mdicinales les plus couramment utilises : Camomille, Menthe, Th, Tilleul, Verveine etc. V.2. Dcoction : Cette prparation sopre en faisant bouillir les plantes, le plus souvent dans de leau, parfois dans du vin (alcool). Elle convient surtout aux corces, aux racines, tiges et fruits.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... On laisse bouillir pendant un temps plus ou moins long selon les espces, en gnral de 10 30 minutes. Pour extraire le plus possible de principes actifs, il faut avoir soin de couper les plantes en menus morceaux, puis de passer la tisane en exprimant. Par exemple, cest par la dcoction que sont traits les racines de Patience et de Chicore, les feuilles et les fruits dEpine-vinette, lcorce de Bouleau, la tige de Douceamre. V.3. Macration : Trs simple, cette prparation sobtient en mettant les plantes en contact, froid, avec un liquide quelconque. Ce liquide peut tre du vin (vin de Gentiane), de lalcool (alcoolature dAil, teinture de Boldo), de lhuile (huile de Serpolet). Le temps de contact est parfois trs long. Les macrations leau, plus rarement employes, car elles ont linconvnient de fermenter facilement, ne doivent pas, de toute manire, excder une dizaine dheures. VI. Des plantes dites reminralisantes : Lactivit thrapeutique des plantes mdicinales provient non seulement de la prsence de substances organiques actives, tels que, les alcalodes, les flavones, les Saponines, etc. mais aussi de bon nombre de Vitamines et de minraux, rel potentiel thrapeutique : potassium, magnsium, manganse, fer, cuivre, silice, zinc, fluore, phosphore, iode, ncessaires un organisme sain et plus forte raison un organisme malade. Ces oligo-lments sont une concentration infrieure 0.01% du poids corporel total. Ils sont la fois rgulateurs et protecteurs de la cellule en tant que constituants mais galement constructifs (squelette, dents, sang). Bon nombre de plantes sont susceptibles de contribuer leur apport [1]. VII. Chimiothrapie et Phytothrapie : [2] Lintroduction de la chimie en thrapeutique fut lorigine dincontestables succs, quil faut honntement reconnatre : les produits de synthse moderne, ceux dorigine animale ou minrale, ont leur actif de spectaculaires gurisons. Mais, comme bien souvent, lenthousiasme soulev par les nouveaux procds engendra la ngation des mthodes ancienne. Si les remdes vgtaux ne furent pas absolument ddaigns par la mdecine nouvelle, ils neurent plus, toutefois, droit de cit que sous leur forme trs purifie dalcalodes ou de glucosides. Tout en ne discutant pas, dans certains cas, la supriorit de ces alcalodes ou de ces glucosides sur la simple plante, on saperut, nanmoins, quils agissaient dune faon la fois brutale et brve, toujours indsirable, et quils ntaient pas, bien souvent, dnus de toxicit. On se rendit compte que toutes les substances qui entourent le principe actif de la 15

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... plante (substances que lon pensait tre inutiles ou accessoires), loin dtre superflues, jouent un prcieux rle complmentaire. Cest pourquoi la pharmacie remplaa assez souvent la forme extrait de plante (qui ne comporte que la partie de la plante reconnue active) par la forme intrait, qui reprsente toutes les substances de la plante entire, stabilises et extraites pour un usage plus commode. On conoit, ds lors, que la plante mdicinale, qui prsente le principe actif dans son milieu naturel, ralise la plupart du temps un ensemble et un quilibre souhaitables. VIII. Le Docteur LECLERC, pre de la nouvelle mdecine par les plantes : En toute objectivit, on peut affirmer que la phytothrapie contemporaine est devenue une vritable science. Pour la dgager des brumes de lempirisme, les phytothrapeutes modernes ont procd un gigantesque travail, sous limpulsion, il y a une cinquantaine dannes, du docteur H. LECLERC et de son cole. Avant tout, un travail de rvision des connaissances, entrepris avec un remarquable esprit critique, permit dliminer des plantes jouissant pourtant dune grande rputation, mai inefficaces en fait. Ce travail limita aussi les indications de certaines plantes, en circonscrivant leurs proprits relles ; pour dautres, au contraire, de nouvelles indications furent dcouvertes ; les proprits de certaines plantes dlaisses ou mconnues furent mises en lumire et elles furent introduites dans la pharmacope ; des mthodes rationnelles de culture, de rcolte et de conservation des plantes mdicinales furent aussi dfinies et appliques [2]. Grce ces pharmacologues, ces mdecins, ces botanistes de lcole moderne de phytothrapie, une nouvelle mdecine par les plantes et ne, dgage des illusions et de la magie du pass, et dun esprit si rigoureusement scientifique quelle ne peut que satisfaire les plus sceptiques. Lexploration de la flore du globe tant loin dtre complte et d nouvelles dcouvertes tant faites chaque jour sur les proprits de certaines plantes, ltude des vertu mdicinales des plantes connues ou inconnues nous rserve encore, assurment, beaucoup de surprises [2]. On peut affirmer que non seulement la mdecine par les plantes est une mdecine daujourdhui, mais quelle connat mme un regain dactualit grce aux progrs de la science, condition de lenvisager dune faon saine et raliste, en se gardant bien des exagrations partisanes, dans un sens comme dans lautre. La tendance actuelle depuis quelques dcennies est de simplifier le mdicament le plus possible, cest pourquoi un bon nombre dentre eux sont constitus par une seule molcule chimique [1].

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Ltude de laction dune molcule sur un rcepteur cellulaire permet la connaissance des principes actifs thrapeutiques et leur utilisation. Les donnes pharmacocintiques permettent de diminuer les effets secondaires des mdicaments ; le rle de la pharmacovigilance est dtudier ce problme. Cette ultra spcialisation lourde et quelque peu stressante a provoqu un certain retour la nature. LO.M.S. qui depuis 1970 a fait un inventaire des plantes mdicinales connues dans 90 pays, en a dnombr environ 20000. Cela veut dire que chaque plant a une rputation pharmaceutique et quelle fait lobjet dune tude spciale. Actuellement, la voie de recherche passe par lisolement des principes actifs, la dtermination de leur structure et la prparation par synthse ou hmisynthse. Pour cela, deux sciences entrent en jeu : [1] a. Ethnopharmacognosie : Cest--dire la recherche des plantes action thrapeutique [3]. Cette enqute empirique a permis dinventorier un trs grand nombre de vgtaux dont la rputation est tablie, qui avaient dj t utiliss par la mdecine populaire [4]. Aprs ce premier recensement, il sera ncessaire dtablir leurs qualits thrapeutiques selon les habitudes des pays concerns. Ainsi, la mdecine chinoise, qui uvre depuis plu de 4000 ans, a mi lhonneur le Ginseng : celui-ci jouit dune action bnfique polyvalente sur lorganisme. Or, les donnes pharmacologiques rcentes rejoignent la renomme populaire trs ancienne. Les saponosides quil renferme agissent comme des anabolisants gnraux et donnent au consommateur une plus grande rsistance la fatigue, des rflexes augments tout en rgnrant les tissus. Ceci a t prouv par des tudes exprimentales in vitro et in vivo. A lorigine, une certaine croyance populaire tait fonde sur la ressemblance dune partie de la plante avec un organe. Ainsi, les racines de Ficaire et celles de Marron dInde avaient une certaine ressemblance avec les hmorrodes prcdentes. On a isol de ces plantes des saponosides dont laction anti-inflammatoire justifiait lemploi. Les observations cliniques et les exprimentations pharmacologiques dpassent souvent encore la connaissance chimique de la plante [5]. Lorsque ce travail de dfrichage est fait, une autre science entre en jeu. b. Chimiotaxonomie : Cest--dire la classification des espces en fonction de la structure de leurs constituants chimiques [6]. Elle sappuie sur des techniques physico-chimiques rcentes, analysant les composants et leurs mtabolites qui peuvent tre spcifiques dune famille, dun genre, dune espce vgtale. 17

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Le chimiste pourra reproduire par synthse ou par hmisynthse des spcimens naturels ; on les modifiera pour lobtention dun meilleur mdicament. LErgot de Seigle a une composition chimique trs complexe. Actuellement, de nouveaux alcalodes sont dcouverts. Mais si, pour la thrapeutique, les alcalodes polypeptidiques du groupe de lergotamine et de lergotoxine sont encore prpars partir de la poudre dErgot de Seigle (environ 4 tonnes annuellement), les drivs alcalodiques non polypeptidiques de lergobasine qui rsultent de la combinaison dacide lysergique et damino-2-propanol sont obtenus par extraction partir des cultures saprophytes de certaines races de champignons parasites des Paspalum. Les jus de fermentation servent prparer 12 tonnes dacide lysergique ncessaire lhmisynthse. Certains mdicaments tels que la bromocryptine seront synthtiss en partant de cette molcule de base [1]. Certaines molcules naturelles connues depuis un sicle restent encore la base dune mdecine efficace soit telles, soit transformes par hmisynthse. IX. Efficacit des plantes entires : Sil est capital de matriser laction des diffrents principes actifs pris isolment, la phytothrapie, la diffrence de la mdecine classique, recommande dutiliser la plante entire, appele aussi totum plutt que des extraits obtenus en laboratoire [7]. X. Des plantes nutritives et curatives : En gnral, le corps humain est bien mieux adapt un traitement base de plantes qu une thrapeutique exclusivement chimique. Lhomme et les plantes vivent cte cte depuis des dizaines de milliers dannes. Il est habitu consommer et digrer diffrentes espces de plantes, qui sont bien souvent apprcies pour leurs qualits aussi bien mdicales que nutritives [7]. La ligne de dmarcation entre les proprits nutritives et les proprits curatives nest pas toujours trs nette. Le citron, la papaye, loignon et lavoine sont-ils des aliments ou des mdicaments ? En ralit, ils sont les deux la fois. Le citron (Citrus limon) prvient les infections ; la papaye (Carica papaya) est parfois utilise comme vermifuge ; loignon (Allium cepa) prvient les affections des bronches ; lavoine (Avena sativa) augmente lnergie. De fait, la phytothrapie prend tout son sens lorsque la frontire entre aliments et mdicaments disparat [7]. XI. Des traitements base de plantes : Si les stratgies adoptes par les phytothrapeutes pour prvenir les maladies ou pour gurir les malades sont diffrentes selon les nombreuses traditions en usage, les effets sur le corps des traitements base de plantes sont eux identiques. 18

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Plusieurs milliers de plantes sont utilises de par le monde. Leur champ daction est vaste et leur puissance varie. La plupart ont des effets spcifiques sur certaines parties lorganisme et sont reconnues pour pouvoir traiter divers cas [7]. XI.1. Digestion, Respiration et Circulation : La premire mesure prendre pour se maintenir en bonne sant ou pour gurir, consiste le plus souvent amliorer son alimentation. Ladage bien connu vous tes ce que vous mangez est trs juste, mme si les phytothrapeutes prfrent dire ce que vous absorbez des aliments vous rvle . Les traitements base de plantes apportent des lments nutritifs et sont plus vite et plus facilement assimil par lorganisme. Le fonctionnement des poumons et de lappareil respiratoire peut aussi tre amlior par des plantes qui relaxent les bronches et stimulent la respiration. Une fois absorb par lorganisme, les lments nutritifs se rpartissent dans une centaine d milliers de cellules. Lappareil circulatoire possde une remarquable facult dadaptation pour rpondre aux besoins permanents du corps. Le flux sanguin se dirige principalement vers le cur ; toutefois, les muscles des membres ont des besoins plus importants lorsquils sont en activit. Plusieurs plantes ont une action spcifique sur le systme circulatoire : certaines encouragent le sang circuler vers les membres et la peau, dautres stimulent le rythme cardiaque ou amliorent son effet de pompe ; dautres encore relaxent les artres, abaissant la pression artrielle [7]. XI.2. Evacuer les Toxines et Apaiser la peau : Une fois les lments nutritifs rpartis dans les cellules, le corps doit vacuer les dchets. Ceux-ci prsentent, du fait de la dgradation de lenvironnement, une toxicit leve qui, souvent, induit un tat de sant gnral mdiocre. Les phytothrapeutes prescrivent toute une varit de plantes purificatrices pour aider le corps vacuer ses toxines. Le meilleur exemple est sans conteste la bardane (Arctium lappa), largement utilise dans les mdecines chinoise et occidentale. Ds que les plantes ont rduit la charge toxique, le corps dispose de plus dnergie pour rparer et renforcer les tissus endommags, ainsi que les organes affaiblis. La peau joue galement un rle trs important dans a prservation de la sant. Des plantes antiseptiques combattent linfection, alors que dautres, apaisantes, telle la consoude (Symphytum officinale), favorisent la coagulation du sang et acclrent la gurison des plaies [7].

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XI.3. Systmes nerveux, endocrinien et immunitaire : Une bonne sant dpend dun systme nerveux quilibr. Pour le maintenir en bon tat, il est important dviter lanxit, les soucis ou la dpression, de se reposer suffisamment et de faire des exercices physiques. Des recherches trs rcentes ont montr que le systme nerveux ne travaille pas isolment. Il est assist par le systme endocrinien, qui contrle laction des hormones, y compris les hormones sexuelles ; celles-ci assurent la fertilit et affectent souvent lhumeur et la vitalit. Le systme nerveux est galement li au systme immunitaire, qui contrle la capacit du corps rsister aux infections et recouvrer la sant. Cet ensemble complexe (en partie mcanique, chimique et lectrique), doit fonctionner en harmonie pour que lindividu reste en bonne sant. Le corps possde une capacit presque infinie sadapter aux pressions extrieures grces se systmes de contrle. Le terme dhomostasie dsigne sa facult maintenir des constantes physiologiques internes, quelles que soient les variations du milieu extrieur. De nombreuses plantes agissent sur les systmes immunitaires, nerveux et endocrinien ; elles aident le corps sadapter plus facilement aux tensions de toutes sortes (physique, mentale ou psychologique). Leur efficacit rside dans leur interaction avec le milieu interne [7]. Certaines plantes aident sadapter au milieu extrieur, soit en diminuant la tension nerveuse, soit en agissant directement sur les processus physiologiques. Cest le cas du ginseng (Panax ginseng), qui constitue un remde efficace en priode de tension mentale ou de pression physique ; dans certaines situations, il peut avoir un effet calmant, pour soulager une migraine ou pour sendormir. XI.4. Traitements Naturels Complexes : Comme nous lavons vu plus haut, une plante nest pas une recette magique dote dune action unique, mais un ensemble complexe pourvu de principes actifs qui ont une influence sur les diffrents systmes de rgulation du corps. En associant la recherche scientifique sur les constituants actifs, lobservation clinique et la connaissance traditionnelle des plantes, il est possible de dresser un inventaire de leurs usages thrapeutiques [7]. XII. Plantes et systmes de rgulation : La technique la plus ancienne utilise pour rpertorier les plantes mdicinales a consist identifier la nature et le degr defficacit de leurs actions, selon quelles ont des proprits sdatives, antiseptiques ou encore diurtiques. Souvent, les plantes ont une action plus efficace sur une certaine partie du corps que sur une autre. Ci-dessous, quelques exemples illustrent la manire selon laquelle les plantes agissent sur lorganisme [7]. 20

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XII.1. Peau : [7] Les antiseptiques, tels que le melaleuca (Melaleuca alternifolia), dsinfectent la peau. Les mollients, ou adoucissants, tels que le souci (Calendula officinalis) calment les dmangeaisons. Les astringents, comme lhamamlis (Hamamelis virginiana), tendent la peau. Les dpuratifs, tels que la bardane (Arctium lappa) facilitent lvacuation des dchets. Les plantes curatives et vulnraires, comme la brunelle vulgaire (Prunella vulgaris) ou la consoude (Symphytum officinale), favorisent la gurison des corchures. XII.2. Systme immunitaire : [7] Les immunostimulants, comme lchinace (genre Echinacea) ou le lapacho (genre Tabebuia), aident le systme immunitaire prvoir les infections. XII.3. Systme respiratoire : [7] Les antibiotiques, tels que lail (Allium sativum), amliorent la capacit de rsistance des poumons. Les expectorants, comme laune officinale (Inula helenium), stimulent lvacuation des mucosits. Les mollients, comme la guimauve (Althaea officinalis), soulagent les muqueuses. Les spasmolytiques, telle la khella (Ammi visnaga) relaxent les bronches.

XII.4. Glandes endocrines : [7] Les adaptognes, tels que le ginseng (Panax ginseng), jouent un rle de fortifiant. Les plantes comme le gattilier (Vitex agnus-castus) stimulent la production hormonale, en particulier l'hormone sexuelle. Dautres comme lacte grappes (Cimicifuga racemosa), rgularisent les rgles.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XII.5. Systme urinaire : [7] Les antiseptiques, tels que le buchu (Barosma betulina), dsinfectent les conduits urinaires. Les astringents, comme la prle (Equisetum arvense), les tendent et les protgent. Les diurtiques, comme le mas (Zea mays), stimulent la production durine.

XII.6. Systme musculaire et squelette : [7] Les analgsiques, tels que le jasmin sauvage (Gelsemium sempervirens), soulagent la douleur aux articulations. De mme, les anti-inflammatoires, comme le saule blanc (Salix alba), rduisent les gonflements. Les antispasmodiques, tels que la quinquina (genre Cinchona), relchent la tension musculaire. XII.7. Systme nerveux : [7] Les nervins, comme le romarin (Rosmarinus officinalis), renforcent le systme nerveux. Les relaxants, tels que la mlisse (Melissa officinalis), le reposent. Les sdatifs, comme le gui (Viscum album), modrent lactivit nerveuse. Les stimulants, comme le kola (Cola acuminata), laugmentent. Les toniques, comme lavoine (Avena sativa), contribuent au bon fonctionnement du systme nerveux et augmente le tonus. XII.8. Circulation et Cur : [7] Les cardiotoniques, comme la sauge (Salvia miltiorrhiza), ont des actions variables. Certains ralentissent le rythme du cur, alors que dautres lacclrent. Les stimulants circulatoires, tels que le piment de Cayenne (Capsicum frutescens), amliorent la circulation du sang. Les diaphortiques, comme le chrysanthme (Chrysanthemum morifolium), provoquent la transpiration et abaissent la tension artrielle. Les antispasmodiques, comme la viorne obier (Viburnum opulus), rduisent la pression artrielle. XII.9. Organes digestifs : [7] Les antiseptiques, tels que le gingembre (Zingiber officinalis) prviennent les infections. 22

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Les astringents, bistorte en tte (Polygonum bistorta), renforcent la paroi des intestins. Les amers, linstar de labsinthe (Artemisia absinthium), stimulent les scrtions intestinales. Les carminatifs, comme lacore vrai (Acorus calamus), soulagent des douleurs lancinantes. Les cholagogues, comme larbre de neige (Chionantus virginicu), amliorent le flux de la bile. Les cholrtiques, tels que lartichaut (Cynara scolymus), stimulent la scrtion de la bile. Les mollients, tels que le plantain (genre Plantago), protgent le systme digestif des attaques acides et des irritations. Les hpatiques, comme le buplvre (Bupleurum chineuse), protgent le foie. Les laxatifs, comme le sn (Cassia senna), stimulent le transit intestinal. Les stomachiques, comme la cardamome (Elettaria cardamomun), stimulent lestomac. XIII. Elments actifs des plantes : Les effets curatifs de certaines plantes sont bien connus. La camomille allemande par exemple, est utilise depuis des milliers dannes contre les troubles digestifs. Lalos tait dj connu du temps de Cloptre, o il servait adoucir la peau. Or, ce nest que rcemment que les lments actifs lorigine des actions thrapeutiques des plantes ont t isols et tudis. Il est indispensable de connatre la composition des plantes pour comprendre comment elles agissent sur lorganisme [7]. XIII.1. Phnols : [7,8] Il existe une trs grande varit de phnols, de composs simples comme lacide salicylique, molcule donnant par synthse laspirine, des substances plus complexes comme les composs phnoliques auxquels sont rattachs les glucosides. Les phnols sont anti-inflammatoires et antiseptiques. On suppose que les plantes, en les produisant, cherchent se prmunir contre les infections et les insectes phytophages. Les acides phnoliques, comme lacide rosmarinique, sont fortement antioxydants et anti-inflammatoires et peuvent avoir des proprits antivirales. La gaulthrie (Gaultheria procumbens) et le saule blanc (Salix alba) contiennent des acides glucosides phnoliques qui donnent, par distillation, des drivs de salicylique et de salicylate de mthyle.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XIII.2. Huiles essentielles : [7,8,9] Les huiles essentielles extraites des plantes par distillation comptent parmi les plus importants principes actifs des plantes. Elles sont largement employes en parfumerie. Les huiles essentielles contenues telles quelles dans les plantes sont des composs oxygns, parfois dorigine terpnode et possdant un noyau aromatique. Les huiles essentielles ont de multiples proprits. Larbre th (Melaleuca alternifolia), par exemple, est fortement antiseptique. Les huiles essentielles sont diffrencier des huiles fixes ou des huiles obtenues par lhydrolyse des glucosides, comme la chamazulne de la carmomille allemande (Chamomilla recutita), formes lors de la distillation mais absente de la plante lorigine. Les rsines, substances huileuses collantes qui suintent des plantes, notamment de lcorce de pin sylvestre (Pinus sylvestris), sont souvent lies aux huiles essentielles (olorsines) et aux gommes comme les polysaccharides. XIII.3. Flavonodes : [7,8] Les flavonodes, prsents dans la plupart des plantes, sont des pigments polyphnoliques qui contribuent, entre autres, colorer les fleurs et les fruits en jaune ou en blanc. Ils ont un important champ daction et possdent de nombreuses vertus mdicinales. Antioxydants, ils sont particulirement actifs dans le maintien dune bonne circulation. Certains flavonodes ont aussi des proprits anti-inflammatoires et antivirales, et des effets protecteurs sur le foie. Des flavonodes comme lhespridine et la rutine, prsentes dans plusieurs plantes, dont le sarrasin (Fagopyrum esculentum) et le citronnier (Citrus limon), renforcent les parois des capillaires et prviennent linfiltration dans les tissus voisins. Les isoflavones, que lon trouve par exemple dans le trfle rouge (Trifolium pratense), effets oestrogniques, sont efficaces dans le traitement des troubles lis la mnopause. XIII.4. Tanins : [7,8] Toutes les plantes contiennent des tanins un degr plus ou moins lev. Ceux-ci donnent un got amer lcorce ou aux feuilles et les rendent impropres la consommation pour les insectes ou le btail. Les tanins sont des composants polyphnoliques qui contractent les tissus en liant les protines et en les prcipitant, do leur emploi pour tanner les peaux. Ils permettent de stopper les hmorragies et de lutter contre les infections. Les plantes riches en tannins sont utilises pour rendre les tissus souples, comme dans le cas des veines variqueuses, pour drainer les scrtions excessives, comme dans la diarrhe, et pour rparer les tissus endommags par un eczma ou une brlure. Les corces de chne (Quercus robur) et dacacia (Acacia catechu) sont riches en tannins.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XIII.5. Anthocyanes : [7,8] Les anthocyanes sont issus de lhydrolyse des anthocyanidines (flavonodes proches des flavones), qui donnent aux fleurs et aux fruits leurs teintes bleues, rouge ou pourpre. Ces puissants antioxydants nettoient lorganisme des radicaux libres. Ils maintiennent une bonne circulation, notamment dans les rgions du cur, des mains, des pieds et des yeux. La mre sauvage (Rubus fruticosus), la vigne rouge (Vitis vinifera) et laubpine (Crataegus oxyacantha) en contiennent toutes des quantits apprciables. XIII.6. Coumarines : [7,8] Les coumarines, de diffrents types, se trouvent dans de nombreuses espces vgtales et possdent des proprits trs diverses. Les coumarines du mlilot (Melilotus officinalis) et du marronnier dInde (Aesculus hippocastanum) contribuent fluidifier le sang alors que les furanocoumarines comme le bergaptne, contenu dans le cleri (Apium graveolens), soignent les affections cutanes et que la khelline de la khella (Ammi visnaga) est un puissant vasodilatateur coronarien. XIII.7. Saponines : [7,8] Principaux constituants de nombreuses plantes mdicinales, les saponines doivent leur nom au fait que, comme le savon, elles produisent de la mousse quand on les plonge dans leau. Les saponines existent sous deux formes, les strodes et les triterpnodes. La structure chimique des strodes est similaire celle de nombreuses hormones humaines (strogne, cortisone), et de nombreuses plantes qui en contiennent ont un effet sur lactivit hormonale. Ligname sauvage (Dioscorea villosa) contient des saponines strodes partir desquels on synthtisa la pilule contraceptive. Les saponines triterpnodes, contenues dans la rglisse (Glycyrrhiza glabra) et la primevre (Primula veris), ont une activit hormonale moindre. Elles sont souvent expectorantes et facilitent labsorption des aliments. XIII.8. Anthraquinones : [7,8] Ce sont les principaux constituants de plantes comme le sn (Cassia senna) et la rhubarbe de Chine (Rheum palmatum), qui, toutes deux, agissent sur la constipation. Elles ont un effet irritant et laxatif sur le gros intestin, provoquent des contractions des parois intestinales et stimulent les vacuations environ dix heurs aprs la prise. Elles rendent les selles plus liquides, facilitant ainsi le transit intestinal. XIII.9. Glucosides cardiaques : [7,8] Prsents dans de nombreuses plantes mdicinales, telles que les digitales laineuse et pourpre (Digitalis lanata et D. purpurea, cultives en Europe) et le muguet (Convallaria majalis), les glucosides cardiaques comme la digitoxine, la digoxine et la convallotoxine ont 25

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... une action directe et puissante sur le cur. Ils laident maintenir le rythme cardiaque en cas daffaiblissement. Ces glucosides sont galement diurtiques. Ils contribuent transfrer les liquides des tissus et du systme circulatoire vers les conduits urinaires. XIII.10. Glucosides cyanogniques : [7,8] Bien que ces substances soient base de cyanure, un poison trs violent, elles ont, prises petites doses, un effet sdatif et relaxant sur le cur et les muscles. Lcorce du cerisier sauvage (Prumus serotina) et les feuilles du sureau noir (Sambucus nigra), qui en contiennent toutes deux, permettent de supprimer ou de calmer les toux sches et irritantes. De nombreux noyaux de fruits contiennent de fortes quantits de glucosides cyanogniques, par exemple ceux de labricotier (Prunus armeniaca). XIII.11. Polysaccharides : [7,8] Ce sont des units complexes de molcules de sucre lies ensemble que lon trouve dans toutes les plantes. Du point de vue de la phytothrapie, les polysaccharides les plus importants sont les mucilages visqueux et les graines. Le mucilage et la gomme absorbent de grandes quantits deau, produisant une masse glatineuse qui peut tre utilise pour calmer et protger les tissus enflamms, par exemple quand la peau est sche et irrite ou la paroi des intestins enflamme et douloureuse. La meilleure faon de prparer les herbes mucilagineuses comme lorme rouge (Ulmus rubra) et le lin (linum usitatissimum) est de les gorger deau froide (de les faire macrer). Certains polysaccharides, comme les glucomannanes et les pectines, sont utiliss en cosmtologie. XIII.12. Glucosinolates : [7,8] Prsents uniquement dans les espces de la famille des moutardes et des choux, les glucosinolates provoquent un effet irritant sur la peau, causant inflammation et ampoules. Appliqus comme cataplasme sur les articulations douloureuses, ils augmentent le flux sanguin dans la zone irrite, favorisant ainsi lvacuation des toxines. Lorsquon les ingre, les glucosinolates se dsagrgent et produisent un got trs prononc. Le radis (Raphanus sativus) et le cresson de fontaine (Nasturtium officinale) sont des plantes glucosinolates typiques. XIII.13. Substances amres : [7,8] Les substances amres forment un groupe trs diversifi de composants dont le point commun est lamertume de leur got. Cette amertume stimule les scrtions des glandes salivaires et des organes digestifs. Ces scrtions augmentent lapptit et amliorent la digestion. 26

- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... Avec une meilleure digestion, et labsorption des lments nutritifs adapts, le corps est mieux nourri et entretenu. De nombreuses plantes ont des constituants amers, notamment labsinthe (Artemisia absinthium), la chirette (Swertia chirata) et le houblon (Humulus lupulus). XIII.14. Alcalodes : [7,8] Formant un groupe trs large, les alcalodes possdent presque tous une molcule dazote (-N-) qui les rend pharmaceutiquement trs actifs. Certains sont des mdicaments connus qui ont des vertus thrapeutiques avres. Cest le cas dun driv de la pervenche de Madagascar (Vinca rosea syn. Catharanthus roseus) employ pour traiter certains types de cancer. Dautres alcalodes, comme latropine, prsente dans la belladone (Atropa belladonna), ont une action directe sur le corps : activit sdative, effets sur les troubles nerveux (maladie de Parkinson). XIII.15. Vitamines : [7,8] Bien quelles soient souvent ngliges, de nombreuses plantes mdicinales sont particulirement riches n vitamines. Le citronnier notamment (Citrus limon) contient des doses leves de vitamine C et la carotte (Daucus carota) est riche en -carotne (provitamine A). Le cresson de fontaine (Nasturtium officinale), par exemple, contient des doses leves de vitamine B1, B2, C et E et de -carotne tandis que largousier (Hippophae rhamnoides) peut tre considr comme un complment vitaminique et minral en tant que tel. XIII.16. Minraux : [7,8] De nombreuses plantes mdicinales sont trs riches en minraux. Les plantes, notamment celles issues de lagriculture biologique, tirent les minraux du sol et les transforment en une structure aisment assimilable par lorganisme. Dans de nombreux cas, les minraux contenus dans une plante, que celle-ci soit utilise sous forme de salade, comme le chou vert (Brassica oleracea), ou sous forme de complments nutritionnels, comme le fucus (Fucus vesiculosus), participent activement son activit thrapeutique dans lorganisme. Le pissenlit (Taraxacum officinale) est un puissant diurtique, effet d sa concentration en potassium alors que la prle (Equisetum arvensa), grce sa forte teneur en silice, est efficace contre larthrite, contribuant rparer le tissu conjonctif.

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- CHAPITRE II : VERTUS THERAPEUTIQUES DES PLANTES ... XIV. Contrle de qualit : Afin de tirer le meilleur parti des plantes mdicinales, il convient de veiller ce que les herbes et leurs drivs soient dexcellente qualit. Cela exige quelles soient cultives dans de bonnes conditions, correctement sches, bien conserve et que leur date limite de consommation soit respecte. Le recours des plantes de mauvaise qualit est bien souvent une perte de temps et dargent tant donn que vous nen tirerez pas tous les bienfaits. Sagissant de plantes mdicinales, la qualit prime avant tout [7].

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Bibliographie
1. Vigneau, C., 1985, Plantes mdicinales : Thrapeutique - Toxicit, Ed. Masson, p.17-19 & p.222-224. 2. Debuigue, G., 1984, Larousse des plantes qui gurissent, Librairie Larousse, p.5-6. 3. Flet, C., 1984, Les substances naturelles sources de mdicaments nouveaux, Ed. Le Moniteur, p.556. 4. Herisset, A., 1974, Larsenal et lherboristerie (simples et formules) et la phytothrapie, les actualits pharmaceutiques, p.23-26. 5. Mamatas, S., 1984, La pharmacognosie applique, Ed. Phytoscience, le pharmacien de France, p.286. 6. Anton, R., Dupin, M., 1976, Les plantes mdicinales et la pharmacologie moderne, actualits pharmaceutiques, p.17-25. 7. Iserin, P., 2001, Larousse Encyclopdie des plantes mdicinales, Ed. Larousse, p.10-17 & p.132. 8. Bruneton, J., 1999, Pharmacognosie, Phytochimie Plantes mdicinales Techniques et documentations, 3me Edition, Lavoisier, p.3, 111, 159, 197, 205, 336, 385, 623. 9. Belaiche, P., 1979, Trait de phytothrapie et daromathrapie, tomme I, Ed. Maloine S.A., p.136.

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Etude Botanique de Sambucus Nigra L.

I. Classification : Notre espce tait classe comme suit [1,2,3] : Rgne : Plantae, Embranchement : Angiospermes plantes fleurs, Sous-embranchement : Tracheobionta, Classe : Magnoliopsida (dicots, dicotyldones, dicotyledons) Dicotyldones, Sous classe : Asteridae Gamoptales, Ordre : Dipsacales Rubiales, Division : Magnoliophyta (angiospermes phanrogames, plantes fleurs et fruits) [33], Famille : Caprifoliaceae chvrefeuilles, Tribu : Sambuceae (sambuces) Lobes ovariennes 1-ovules [33], Genre : Sambucus (sureaux), Espce : Sambucus nigra L.

II. Description de la famille des Caprifoliaces : [1,2,6,9,16] Les Caprifoliaces se trouvent surtout dans les rgions tempres. Graines albumines, androce isostmone 3 carpelles. Les Caprifoliaces sont des plantes ligneuses arbustives ou grimpantes, rarement herbaces, aux feuilles opposes. Les fleurs 5 parties, hermaphrodites, solitaires, par paires ou portes sont en grappes ou panicules. Le calice est souvent petit. La corolle est rgulire ou 2 lvres ; les lobes sont souds la base en un tube court ou long. En gnral, 5 tamines soudes au tube de la corolle. Lovaire est infre. Type biologique : ligneuses arbustives ou lianes. Phanrophytes. Feuilles : opposes, parfois verticales par 3. Inflorescences : grappes, cymes multipares ressemblent une ombelle. Fruits : baies ou drupes.

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Les inflorescences

Lgende :

fleur pdoncule bracte hampe florale

A : grappe. B : pi. C : corymbe. D : ombelle. E : cyme scorpiode. F : cyme bipare. G : capitule. H : panicule. I : pillet. (1 : fleur ; 2 : axe de l'pi ; 3 : glume suprieure; 4 : glumelle infrieure ; 5 : glumelle suprieure ; 6 : glume infrieure).

La famille des Caprifoliaces est une famille de plantes dicotyldones. Selon la classification classique, elle comprend environ 420 espces rparties en 15 genres :

Abelia, Carlemannia, Diervilla, Dipelta, Heptacodium, Kolkwitzia, Leycesteria, Linnaea, Lonicera, Sambucus, Silvianthus, Symphoricarpos, Triosteum, Viburnum, Weigela.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... II.1. Les dicotyldones : Les dicotyldones prsentent une plantule deux cotyldons, ce qui les diffrencie des monocotyldones qui n'en prsentent qu'un seul. Les feuilles ont en gnral des nervures rticules. Les fleurs partagent avec l'implantation des feuilles une symtrie d'ordre 4 ou 5. La fleur typique prsente 4 verticilles (spales, ptales, tamines et carpelles). Dans la plupart des espces, la racine est de type pivotante [2,10]. C'est chez les dicotyldones que l'on observe, au niveau des tiges, la prsence de cambium permettant la formation de bois secondaire vers l'intrieur et de liber vers l'extrieur. Enfin les grains de pollen ont gnralement 3 pores. Dans ce groupe trs important, on trouve cependant des formes ayant des caractres primitifs partags avec les monocotyldones (grains de pollen un seul pore). Les groupes des Rosides et des Astrides sont des groupes d'apparition rcente ayant volu vers des structures florales parfois complexes comme le capitule des Apiaces. II.2. Subdivisions : Dans la classification classique, les dicotyldones sont divises en 7 sous-classes [12] :

Asteridae ; Caryophyllidae ; Dilleniidae ; Hamamelidae ; Hamamelididae ; Magnoliidae ; Rosidae ; La classification phylogntique a fait clater la famille des Caprifoliaces. Les genres

Sambucus (sureaux) et Viburnum (viornes) font maintenant partie des Adoxaces. Les genres Carlemannia et Silvianthus forment une nouvelle famille, les Carlemanniaces. Abelia, Dipelta, Kolkwitzia et Linnaea constituent la famille des Linnaaces tandis que Diervilla et Weigela forment celle des Diervillaces [12]. Il ne reste donc plus dans cette famille que 220 espces rparties en 5 genres :

Heptacodium, Leycesteria, Lonicera, Symphoricarpos, Triosteum.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... III. Nouvelle classification : Rgne : Plantae, Embranchement : Angiospermes plantes fleurs, Sous-embranchement : Tracheobionta, Classe : Magnoliopsida Dicotyldones, Sous classe : Asteridae Gamoptales, Ordre : Dipsacales Rubiales, Division : Magnoliophyta (angiospermes phanrogames, plantes fleurs et fruits), Famille : Adoxaceae [12], Tribu : Sambuceae (sambuces) Lobes ovariennes 1-ovules, Genre : Sambucus (sureaux), Espce : Sambucus nigra L. IV. Description de la famille des Adoxaces : [12] La famille des Adoxaces est une famille de plantes dicotyldones qui comprend 3 genres : Adoxa, Sinadoxa et Tetradoxa auxquels se sont rcemment ajouts les genres : Sambucus et Viburnum, autrefois placs parmi les Caprifoliaces. Les Adoxaces comptent maintenant environ 200 espces. Ce sont des arbustes ou de petites plantes herbaces rhizomateuses des sous-bois des rgions tempres. Cette famille est reprsente en France par l'adoxe moscatelline les sureaux et les viornes. La classification phylogntique l'a d'abord dplace parmi les familles assignes directement au groupe des euasterids II (1998). Elle est nouveau range dans l'ordre des Dipsacales par la classification APG II (2003) [12,16]. V. Description de l'espce Sambucus nigra L. : V.1. Noms vernaculaires : [4-8a, 8b] Noms algriens : - Arabe : Bilan, Khaman, Khilouan, Senbouqa. - Targui et Berbre : El ouarouirou; Rouaoua, Agueridd, Akhilouane, Arouari, Bourouabes, Ilmichki, Jimermenna. Noms anglais : Elder-tree, Elderberry, Common Elder, Black-berried elder, Bourtree, Elder flowers. Noms franais : Sureau, Grand Sureau, Suseau, Arbre de Judas, Hautbois. Noms allemands : Holunder, Flieder, Schwarzer Holunder. Noms espagnols : Sanco. Noms italiens : Sambuco, Zambuco.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... V.2. Nom botanique : Sambucus nigra L. [4-9,17,24] L'espce Sambucuc nigra L. est aussi appele Sambucus arborescens Gilib., S. medullina Gilib., ou encore, S. vulgaris Lam. Le "sambuk" : dsignait en Grce une harpe triangulaire. Ce nom aurait, par extension t appliqu aux fltes tires du Sureau, puis au sureau lui-mme. Le nom Sambucus pourrait galement driver de celui de son inventeur Sambyx ou bien rapport possible avec ladjectif sandix, "plante qui teinte en rouge" et en effet le sureau est parfois utilis pour la coloration du vin. Le nom de sambucus lui-mme serait d'origine syrienne. Nigra : noire (du latin niger). Quant au franais sureau, il est driv de l'ancien franais "se ou ser" qui est le latin sambucum, lui-mme driv du latin sabucus autre forme de sambucus. V.3. Description : [1,2,7-9,18-20,23] Le sureau noir est un arbuste qui crot dans les bois clairs, les haies, les dcombres et proximit des cours d'eau. Le sureau noir n'a, en somme, qu'une exigence : un peu d'humidit. Pour le reconnatre, ce nest pas trs difficile : cest un arbuste atteignant rarement plus de 8m de haut, possdant de grandes feuilles opposes, accompagnes de petites stipules, composes imparipennes, formes de 5 7 folioles ovales, lancoles et dentes et trs lgrement velues sur les nervures. Les inflorescences sont nombreuses et forment de larges corymbes ombelliformes ou des ombelles de cymes denviron 20cm de diamtre. Leurs fleurs de couleur blanche crme sont petites et leur odeur est dsagrable ltat frais. Leurs corolles comportent 5 lobes arrondis et le tube de la corolle se termine par des anthres jaunes. Les branches possdent une partie mdullaire blanche, volumineuse et poreuse et une corce noirtre, verruqueuse et plus ou moins fendille La prsence de moelle dans ses rameaux, qui est un de ses traits caractristiques, rend son bois cassant. Cette moelle, parfois remplace par du polystyrne, reste utile en biologie vgtale pour effectuer des coupes trs fines d'organes vgtaux (cette moelle sert aux histologistes pour y inclure un organe vgtal, afin de raliser des coupes microscopiques). Les fruits mrs sont noirs, gorgs de jus violet fonc. On reconnat le sureau noir l'odeur cre que dgagent ses grandes feuilles composes pennes.

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Figure 1 : Sureau noir

V.3.a. Fleurs de sureau : [21,22] Sur le march, existent les fleurs, spares par tamisage des inflorescences (cyme, thyrses), mai parfois aussi uniquement les inflorescences prives de leurs plus gros pdicelles, et ce pour des raisons purement techniques. Les petites fleurs blanc jauntre, dun diamtre de 3 5 mm environ, munies de 3 petites bractes et ventuellement dun pdoncule, possdent une corolle soude leur base en un tube, avec 5 ptale largement ovales, 5 tamines filet jaune, un petit calice 5 dents, un style court et un ovaire infre 3 loges surmont dun style court 3 stigmates obtus. Le plus souvent, les tamines adhrant aux corolles de fleurs sont prsentes de faon isole, accompagnes plus rarement de bourgeons. Des pdicelles verts, cannel longitudinalement, apparaissent occasionnellement et sont surtout abondants dans les produits non altrs. Odeur : Lgrement caractristique, Saveur : Mucilagineuse, sucre, Floraison : Juin (juillet aux grandes altitudes).

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Figure 2 : Feuilles et fleurs du sureau noir V.3.b. Baies de sureau : [32,33] Les fruits sont des baies globuleuses, arrondies de 3 6 mm de diamtre. Leur teinte vire successivement du vert au noir-brillant, noir-violac ou noir-pourpre. Elles contiennent un suc rouge-violac et trois graines. Les fruits se groupent en grappes longues, denses et tales. Les drupes violet-noir fonc, lgrement brillantes, sont fortement rides et plus ou moins sphriques. Elles renferment en gnral 3 noyaux allongs (en haut droite) et lintrieur de lendocarpe dur comporte une graine. Quelques pdicelles isoles sont prsents. Saveur : Sucre et acide, arme caractristique.

Figure 3 : Baies de sureau noir 36

- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... V.4. Anatomie : [34] V.4.1. Tige : La tige est constitue : d'un piderme paroi paisse ; suber sous-pidermique ; parenchyme cortical collenchymateux vers lextrieur ; fibres pricycliques paroi paisse et fortement sclrifie, disposes sur un rang. Moelle abondante avec cellules tannin dans la rgion priphrique. Cristaux doxalate de calcium en poudre dans le liber et le parenchyme cortical. V.4.2. Feuilles : Elles ont la surface de lpiderme des poils tecteurs unicellulaires et coniques et des poils glanduleux bicellulaires supports par un pdicelle unicellulaire. Stomates la face infrieure entoure par trois ou quatre cellules sans direction dtermine. Nervure mdiane 3 faisceaux libro-ligneux isols. Oxalate de calcium pulvrulent. VI. Historique : [10-16] Le sureau est lune des rares plantes connues depuis la plus haute Antiquit et encore utilise de nos jours. Les populations nolithiques en consommaient les baies et les anciens Grecs connaissaient les proprits thrapeutiques des fleurs et des fruits. Daprs lhistoire des plantes, le sureau fut utilis par Hippocrate (300ans avant .J.C) et Dioscorides (1er sicle de notre re). On rapporte que lorsquon plante le sureau dans un jardin, il protge la maison contre les esprits et la foudre. Le nom latin Sambucus fait allusion aux fltiaux (sambuca) que les ptres grecs taillaient dans le bois tendre du sureau. Galien (mdecin grec du IIe sicle de notre re) recommandait le sureau contre les catarrhes et les excs de mucus. Il tenait son savoir de ses confrres qui avaient jet les bases de la mdecine moderne au cours de l're prcdente. En effet, quelques sicles auparavant, Pline l'Ancien attribuait au sureau les mmes proprits. Le savoir grec a galement voyag vers l'Asie et le sureau fut intgr la pharmacope de la mdecine ayurvdique (Inde) [27]. En Amrique du Nord, les Amrindiens attribuaient les mmes proprits au sureau blanc (Sambucus canadensis) dont la composition est semblable celle de son cousin europen. Au Qubec, le sureau blanc a longtemps tenu une place de choix dans la mdecine domestique des Canadiens franais [10,11,25,26]. En Italie, en Belgique, en France, en Allemagne et en Angleterre, on lui reconnat des vertus diurtiques, diaphortiques (qui provoque la sudation) et anti-inflammatoires. Au Moyen ge, on a utilis l'eau de sureau (eau dans laquelle on a fait macrer des fleurs) pour claircir le teint et attnuer les taches de rousseur. Les fleurs et fruits ont longtemps servi la 37

- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... fabrication de boissons rafrachissantes. Au printemps, on en buvait de grandes quantits afin de purifier l'organisme des toxines accumules durant l'hiver. On dit mme que certains vins auraient t adultrs avec du sureau [25,28-30]. De nos jours encore, on trouve souvent des sureaux dans les vieux jardins et, on se souvient qu'on tirait des fleurs et des fruits un sirop contre la toux [26]. Si on le trouve, si souvent prs des maisons, c'est qu'autrefois on le plantait pour attirer les bons gnies. Les enfants des campagnes taillent leur sifflet dans son bois cassant et lger. On se sert aussi de ses fleurs pour conserver longtemps les pommes; il faut alors les taler en couches alternes dans des cartons, puis fermer. Ses vertus mdicinales sont nombreuses: les fleurs, les baies, les feuilles et la seconde corche entrent dans de multiples prparations [3235]. VII. Distribution gographique, habitat et origine : [6,7,20,31,32] Commun dans toute l'Europe, lAsie occidentale, lAfrique du nord et lAmrique du nord. Arbuste ou arbrisseau qui pousse dans les bosquets et les terrains incultes, et dans la plupart des rgions tempres, dans les sols frais, lger, demi-ombrags. Le sureau noir et une espce des plaines et de collines, assez exigeante quant la richesse du sol. Il est assez rare en fort (alluvions riches, fonds de vallons, lisires) et se rencontre surtout dans les haies, les dcombres, aux abords des villages et dans tous les endroits ayant t artificiellement enrichis ou fums. Altitude : 0 1600 m. VIII. Rcolte : [21,22,34] On rcolte les inflorescences, prives des plus gros pdoncules ou pdicelles, quand la plupart des fleurs sont panouies. On rcolte lcorce interne lautomne en raclant superficiellement les tiges et en enlevant le lige et le tissu phellodermique sous-jacent, pour ne garder que la zone librienne quon dtache par lambeaux que lon fait scher lair ou ltuve. L'corce devrait tre prise de jeunes branches en premier ressort, avant que les feuilles apparaissent. Les baies sont rcoltes en aot et septembre. Remarque importante : [18,22,33,34] On utilise les fleurs cueillies en dbut de la floraison, les feuilles, les baies bien mres et la seconde corce des branches sche. Ne pas confondre les baies comestibles du sureau noir (Sambucus nigra L.) avec ceux du sureau sauvage (Sambucus ebulus L.) qui sont toxiques. Fruits : Petites drupes noires brillantes, sphriques ou ovodes, toxiques pour l'homme.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

Figure 4 : Sureau sauvage (Sambucus ebulus L.) (Hauteur : 0.5 1.5 m environ) IX. Famille des Sureaux : [11,12,15,16,20,26,33] Ce genre comprend environ 25 espces de vivaces, arbustes et arbres mellifres, caducs ou persistants fruits rouges ou noirs, originaires des zones tempres. Sambucus adnata Wall : Originaire d'Asie (Sechouan, Himalaya). Sambucus australis Cham. & Schltdl., syn. Sambucus pentagynia Larraaga : se rencontre dans l'est du Brsil. Sambucus australasica Fritsch, syn.Sambucus xanthocarpa F. Muell. : Originaire de l'est de l'Australie (Victoria et Queensland), environ 3 m de haut, larges corymbes d'un blanc crme. Fruits translucides d'un blanc ivoire. Zones 9-11. Sambucus canadensis L. ou Sureau du Canada. Sambucus chinensis Lindl.: Originaire d'Asie (Chine). Il est utilis dans la pharmacope chinoise (Lou Ing) pour ses proprits antirhumatismales (corce et feuilles). Sambucus coerulea Raf., synonymes de Sambucus mexicana C. Presl. Ex A. DC., Sambucus coerulea mexicana L. Benson et Sambucus orbiculata Greene : Originaire du Mexique, se rencontre aux tats-Unis (Sierra Nevada, Oregon, est du Texas jusqu'en Californie) et au Guatemala, 2-4 m de haut. Inflorescence blanche jaune crme. Les fruits d'un noir bleut, sont utiliss pour la confection de sirops, sauces, geles, confitures, desserts. La pharmacope sud-amricaine, lui attribue entre autres des proprits : antibactrienne, diurtique, antispasmodique, sudorifique. Zones 5. Sambucus ebulus L. : Yble, Hible ou Petit sureau. Sambucu nigra L. : ou sureau noir.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... Sambucus formosana Nakai: Originaire d'Asie, fleur d'un blanc pur 5 lobes gaux effils. Sambucus foetidissima Nakai in Nakai & Kitagawa: Originaire d'Asie (Manchourie). Sambucus gaudichaudiana DC. : Originaire d'Australie, vivace herbace envahissante de 0,90 1,20m, fruits jaune ple. Sambucus gautschii Wettst. Donn pour synonyme de Sambucus ebulus Clarke : Originaire d'Asie (Himalaya). Sambucus graveolens Willd. Ex Schult. : Originaire d'Amrique du Sud. Sambucus javanica Reinw. ex Blume syn. Sambucus thunbergii G.Don, Sambucus wightiana Wall : Originaire d'Asie du sud-est, en zone tropicale, environ 2-3m, fruits noirs. Zones 5-11. Sambucus japonica Thunb.: Originaire d'Asie (Japon). Sambucus kamtschatica E.Wolf, certain le donne pour synonyme de Sambucus racemosa kamtschatica: Originaire de Sibrie orientale (presqu'le de Kamchatka). Sambucus latipinna Nakai : Originaire d'Asie (Core). Sambucus longipes Nakai : Originaire d'Asie (Japon). Sambucus melanocarpa A. Gray., synonyme Sambucus pubens var. melanocarpa (A.Gray) M.L.Samutina : Originaire d'Amrique du Nord, environ 4m de haut, fruits noirs. Zones 5. Sambucus microsperma Nakai : Originaire du Japon. Sambucus racemosa L. : synonyme Sambucus callicarpa Greene ou Sureau grappes. Sambucus palmensis Link. : Le Saco se rencontre aux les Balares (Parc Nacionale de la caldera de Taburiente - Palma) et aux les Canaries (Tnriffe), espce endmique protge car il est en voie de disparition. Considr comme une sous-espce de Sambucus nigra. L., 10m de haut environ. Il a pendant trs longtemps t utilis dans la pharmacope locale pour soigner les problmes de peau. Sambucus pendula Nakai : Originaire d'Asie (Core). Sambucus potaninii Ja.Vassiliev : Originaire d'Asie (Chine, province du Sechouan). Sambucus pubens : Michaux ou Sureau pubescent, Sureau rouge d'Amrique (American Red berry elder). Sambucus sachalinensis Pojark.: Originaire de Sibrie orientale (le de Sakhaline). Zones 5. Sambucus sibirica Nakai: Originaire de Sibrie orientale, fruits rouges. Zones 5. Sambucus simpsonii Rehd : Originaire des tats-Unis (Floride) se rencontre aussi en Amrique centrale (Guatemala) et en Guyane franaise, 3-5 m environ, trs grands corymbes 15 20 cm, fruits noires comestibles. Dans la pharmacope locale, les fleurs en dcoction sont utilises comme antitussif. Zones 3-11.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ... Sambucus sieboldiana Blume ex Schwerin, Sureau du Japon : Originaire d'Asie (Chine, Japon), 4-6 m environ, fruit orang jaune orang. Zones 6. Sambucus tigranii N.Troitzky.: Serait originaire d'Armnie (Mts Caucase), fruits rouge corail. Zones 5. Sambucus williamsii Hance (synonyme de Sambucus racemosa) : Se rencontre en Asie (Chine du Nord et Core), environ 3 m, fruits rouges.

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- CHAPITRE III : ETUDE BOTANIQUE DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

Bibliographie
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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

Chimie est proprits thrapeutiques de Sambucus nigra L.

Cette plante a fait lobjet de beaucoup dtudes, on les classe suivant le temps : I. tudes anciennes: [1] Les fleurs contiennent 0.027% du poids sec (0.0037% du poids frais) dune huile essentielle butyreuse [2] avec un terpne C10H16, E = 172 [4,3], et un corps ressemblant une paraffine [4] (le starophne de lhuile est un mlange dacide palmitique et dun carbure dhydrogne, le tricosane C23H48 [5]) ; 1.064% (dorgane frais) de sucres rducteurs, 0.255% de saccharose [6], de linvertine, de lmulsine [7]; un tanin, du mucilage, une rsine [8], 8% de cendres contenant du cuivre [9], du malate de calcium, du sulfate et phosphate de calcium [8], du nitrate de potassium (2.6) [10]; un glucoside flavonique (le rutoside (= eldrine)) [11] donnant par hydrolyse du querctol, du glucose et du rhamnose [12]; des traces dun glucoside cyanhydrique (Sambunigroside) [7,6,10]; de la choline [13, p.705]. Dans les fruits on a dos (en septembre) 79.14 81.87% deau ; 4.66 5.83% de sucres (en sucres intervertis) ; 0.87 1.28% dacide malique ; 0.288 0.339% dacide tannique ; 2.43 2.70% de substances azotes ; 6.25 7.98% de substances de membrane ; 0.53 0.79% de cendres ; 0.116 0.135% de P2O5 [18]. Les cendres ont donn : 45.3 46.53% de K2O ; 2.48 3.52% de Na2O ; 7.11 8.47% de CaO ; 6.0 7.69% de MgO ; 0.37 0.38% de Fe2O3 ; 12.26 14.75% de P2O5 ; 5.41 5.64% de SO3 ; 1.17 1.21% de SiO2 ; 0.52% de Cl ; 12.31 18.7% de CO2 [18]. DANJOU a trouv en % de poids frais 0.528% (30 juillet) 0.600 (5 aot) de sucres rducteurs et des traces (30 juillet) 0.724 (5 aot) de saccharose, et les diastases invertine et mulsine (30 juillet) [7]. On a galement dos dans les fruits, 1.20% de pentosanes [17] ; des lipides (0.88% de la substance frache, 6.1% du poids sec) [19] (localiss dans les graines) ; et on % de poids sec 21.87% de sucres intervertis ; 2.91% de tannins, 3.51% de pectine ; 3.05% dacides libres ; 7.37% de cendres totales ; 18.37% de protine brute [20]. Les fruits contiennent galement des traces dhuile essentielle, une rsine, une cire, une substance colorante rouge, un peu dacide citrique, les acides malique et tartrique [14] (ces deux derniers acides nont pas t retrouvs par KUNZ et ADAM [15]) ; de la tyrosine [16] ; un glucoside cyanhydrique (dans les fruits non mrs) [21] qui manque dans les fruits mrs [22].

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... KARRER et WIDMER ont tudi la substance colorante des baies, la sambucine (sambucoside), dont le chlorure se dcompose en glucose, rhamnose et chlorure de cyanidine [23]. Mai plus rcemment on a trouv quil y avait dans le pricarpe deux substances colorantes : un cyanidine monoglucoside (identique la chrysanthmine) dont le chlorure a pour formule C21H21O11Cl + 13/4 H2O ; et la sambucicyanine C47H50O26Cl2 + 7H2O qui est un compos biomolculaire de la chrysanthmine avec un cyanidine aldopentose-glucoside (pas de rhamnose) [24-26, 27]. Lcorce des rameaux verts la 2e anne contient : de lacide valrique ; des traces dhuile essentielle ; des lipides ; des sucres ; de la pectine ; de lacide tannique ; des malates de potassium et de calcium ; chlorure de potassium ; du sulfate et du phosphate de calcium ; du phosphate de magnsium [28] ; environ 7 de nitrate de potassium [10] ; de la conicine (cicutine, Coniine) [29], conteste par ZELLNER [30] et YARDIN [31] ; de lmulsine [22] ; un tannin ; une rsine purgative, une huile jaune rouge ; un alcalode appel sambucine mais de formule inconnue [32] ; 0.219% de sucres rducteurs ; 1.110% de saccharose (en % de poids dorgane frais) [6,7]. Daprs dautres recherches, lcorce contient une substance de formule C23H40O2, (F =216) ; une autre de formule C27H48O, (F =179) ; probablement de lalcool crylique ; les acides starique et myristique ; une substance de point de fusion (F =245) ; un compos ressemblent lacide platanolique ; un acide rsinique ; un peu de phlobaphne, du sucre interverti, des tannins, de la choline [30] ; YARDIN a caractris la prsence de choline et dautres produits basiques prsentant le ractions gnrales des alcalodes [31]. Lcorce des rameaux a donn 11.7% de cendres dont 13.96% de K2O ; 0.97% de Na2O ; 30.92% de CaO ; 10.73% de MgO ; 8.05% de P2O5 ; .8.2% de SO3 ; 5.46% de SiO2 ; 0.35% de Fe2O3 ; 0.18% de Cl [33]. Les feuilles contiennent un glucoside cyanogntique le sambunigroside

(sambunigrine) [6,7,34] C14H17O6N, cristallisant en aiguilles (F =151, []D= -76.3) (isomre de lamygdalonitrile-glucoside), donnant 8.61% dacide cyanhydrique, 61.26% de glucose et de laldhyde benzoque ; on en trouve 1.1g dans 1Kg de feuilles (VAN ITALLIE a dos 8.3mg dacide cyanhydrique dans 100g de feuilles fraches [36]). On a trouv aussi dans les feuilles : 0.235 0360% de sucres rducteurs et 0.755 1.020% de saccharose en % de poids frais, des enzymes, lmulsine (en petite quantit) [7] et linvertine [6,7], un enzyme formateur de nitrile [37a] ; du nitrate de potassium [7] (7 8) [10], du carotne (0.014% du poids frais) [35]. Dans les feuilles CHARONNAT et BEAUQUESNE ont dos jusqu 84mg de vitamine C pour 100g dorgane frais [37b]. 45

- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... II. tudes rcentes : Constituants [44] : II.1. Fleurs : - Huile essentielle (0.03-0.14%) consistance de beurre, en raison de sa teneur leve en acides gras libres (66%, composs surtout dacide palmitique) et de n-alcanes comportant de 14 31 carbones (7.2%) ; jusqu prsent, quelque 63 composs, surtout des monoterpnes (hotrinol, oxyde de linalyle) ont t identifis [45-48]. - Flavonodes : [49-50] (environ 0.7 3.5%), avec presque exclusivement des flavones et leurs htrosides, et le rutoside comme compos majeur (jusqu 2.5%), ainsi que lisoquercitroside, lhyproside et le quercitroside ; de lastragaline et les 3-O-rutinoside et 3-O-glucoside de lisorhamntol. - Drivs de lacide hydroxycinnamique (environ 5.1%) [49,50,51], avec entre autres les acides chlorognique (environ 2.5 3%), p-coumarique, cafique et frulique, et leurs esters -glucosidiques ; traces de sambunigrine (-glucoside de mandlonitrile) [52]. - Triterpnes : - et -amyrines (env. 1%), surtout prsents sous forme desters dacide gras. - Acides triterpniques : acides ursolique, olanolique et 20--hydroxyursolique (env. 0.85%). - Strols libres, estrifis et glycosyls : (env. 0.11%) [53,54]. - Mucilages & Tanins. Notons la teneur lev en sels calciques (4 9%) [55]. II.2. Baies : - Htrosides flavonodiques : rutine, isoquercitroside et hyproside. - Htrosides anthocyaniques : sambucine (cyanidine-3-rhamnoglucoside ou 3-rutinose), sambucyanine (cyanidine-3-xyloglucoside ou 3-sambubioside), chrysanthmine (cyanidine-3-glucoside) et des dihtrosides anthocyaniques, drivs de la chrysanthmine [56-60]. - Huile essentielle : (env. 0.01%) constitue de quelques 34 composs aromatiques identifis [61-63]. - Htrosides cyanogniques : prunasine, zirine et holocaline [64]. - Sucres : (7.5%) glucose et fructose. - Acides organiques : citrique et malique. - Vitamines : environ 65mg de vitamine B2, 18mg de vitamine C et 17mg dacide folique pour 100g de baies fraches [65]. Prsence aussi de la vitamine P et A. - Pigments. 46

- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... II.3. Feuilles : [66] Les constituants caractristiques principaux : - Triterpnes : environ 1% ( et -amyrine, acide ursolique, acide olanolique). - Strols : environ 1% (-sitostrol, campestrol, stigmastrol et cholestrol). - Acides phnoliques : environ 3% et leurs glycosides correspondants (chlorognique, frulique, caffique et lacides p-coumariques). - Flavonodes (querctine, rutine) & huile essentielle : jusqu' 0.10% [66]. - Acides gras, protine (plastocynine), glycosides cyanogntiques (sambunigrine) et tanin. D'autres mtabolites secondaires principaux incluent : mulsine, invertine, saccharose, salptre, graisse, alcane, vitamine, rsine. II.4. Seconde corce : Elle contient les composs suivants : tanin, rsine laxative, sambunigrine, un alcalode (la sambucine), acide viburnique, huile volatile, acide gras, cire, chlorophylle, acide tannique, gomme, amidon, pectine. III. Les structures chimiques : III.1. Les flavonodes : Tableau 1 : Les flavonodes dans le sureau noir
R' OH HO O

R : H, R : OH Querctine (Q) R : H, R : H Kaempfrol (K)

R : H, R : OMe Isorhamntine (I)

3 OR
OH O
R : Rutinose R : -D-glucose R : Galactose R : Rhamnose R : Glucose

majoritaire
Q-3-O-6-rhamnosylglucoside (Rutine) Q-3-O-glucoside (Isoquercitrine) Q-3-O-galactoside (Hyproside) Q-3-O-rhamnoside (Quercitrine) K-3-O-glucoside (Astragaline)

minoritaire
I-3-O-glucoside I-3-O-6-rhamnosylglucoside (I-3-O-rutinoside) I-3-O-2-rhamnosylglucoside (I-3-O-nohespridoside) I-3-O-2G-rhamnosylrutinoside Q-3-O-2-rhamnosylglucoside (Q-3-O-nohepridoside) Q-3-O-2G-rhamnosylrutinoside R : Glucose R : Rutinose R : Nohespridose R : Rhamnose-rutinose R : Nohespridose R : Rhamnose-rutinose

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

HO O O

HO OH

HO HO

C3
HO

O O

C3

glucose
H3C HO HO

OH

galactose
O O OH

OH
O

C3

HO HO

xylose
rhamnose

OH O

C3
O

6
O O

H3C HO HO

C3

HO HO

OH

OH rutinose (6-O-rhamnosyl-glucose) HO

HO HO H3C O

O O C3

2
O

HO

rhamnosyl-glucose (nohespridose)
HO OH

O H3C HO HO O O

6
O O

C3

HO

2G HO

OH

rhamnose-rutinose

H3C HO HO

OH

Figure5 : Les diffrents groupes R (les htrosides)

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... III.2. Les anthocyanosides : Tableau 2 : Les anthocyanosides dans le sureau noir
R OH HO O

R : H, R1 : H, R2 : H,

Plargonidine (P)

R : OH, R1 : H, R2 : H, Cyanidine (C)

5
OR2

3 OR1
majoritaire R1 Glucose Xylose-glucose rutinose R2 H H H

C-3-glucoside(chrysanthmine) C-3-sambubioside (sambucyanine) C-3-rhamnosylglucose (sambucine) minoritaire C-3-sambubioside-5-glucoside C-3-glucoside-5-glucoside trace P-3-glucoside P-3-sambubioside

Xylose-glucose Glucose

glucose glucose

Glucose Xylose-glucose

H H

O H3C HO HO O

6
O O

HO

C3
HO HO O O

HO HO

OH

C3

OH rutinose (6-O-rhamnosyl-glucose)
HO HO HO O O

glucose

OH

C3

2
O

OH HO HO

Sambubiose (2-O-xylosyl-glucose)

Figure 6 : Les diffrents groupes R1 et R2 (les htrosides)

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... III.3. Drivs de lacide hydroxycinnamique :
CN O H Glucose

CH3O HO
Acide frulique
O OH HO

O OH

Sambunigrine
HO HO

O OH

Acide cafeque
O HO OH O HO OH O

Acide p-coumarique

OH OH

Acide chlorognique

Figure 7 : Les drivs de lacide hydroxycinnamique dans le sureau noir III.4. Les strols :
H

Sitostrol (majoritaire) HO

Stigmastrol HO

Compestrol HO
HO

Cholestrol

Figure 8 : Les strols dans le sureau noir

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... III.5. Les triterpnes :

HO
R : CH3 -amyrine (majoritaire) R : COOH Acide ursolique

HO

R : CH3 -amyrine (majoritaire) R : COOH Acide olanolique

Figure 9 : Les triterpnes dans le sureau noir IV. Vertus thrapeutiques de Sambucus nigra L. :
Ses vertus mdicinales sont nombreuses : les fleurs, les baies, les feuilles et la seconde corce entrent dans de multiples prparations. En effet la pharmacope europenne a utilis les diffrentes parties du sureau depuis la fin du 19me sicle.

IV.1. Parties utilises : [1] IV.1.1. Fleurs : Pharmacop. Fr. 1937 et 1884 ; allem. 1926 ; belge 1930 ; hongr. 1934 ; ital.
1929 ; nerland. 1926 ; Portug. 1935 ; roum. 1926 ; sud. 1946 ; suisse. 1933 ;

IV.1.2. Fruits : Pharmacop. Fr. 1884 ; ital. 1929 ; suisse.1933 ; belg. 1906 ; croate. 1901 ;
espagn.1884 ; hongr. 1888 ; nerland. 1926 ; roum.1893 ;

IV.1.3. Feuilles : Pharmacop. Espagn. 1884. IV.1.4. Ecorce moyenne (interne) blanche et mince qui revt directement le bois :
Pharmacop Fr.1884 ; espagn. 1884 ;

IV.2. Profil :
Appartenant au genre des Adoxaces, le sureau comprend une vingtaine d'espces d'arbustes ou de petits arbres. Le sureau dont le fruit prsente le plus d'intrt est le celui du Sureau noir (Sambucus nigra). La baie de sureau est consomme comme aliment depuis des sicles en Europe et en Amrique du Nord. La culture du sureau s'est intensifie mesure que son fruit est entr dans la production de vins, de jus, de confitures, de geles, de tartes et de colorants non toxiques utiliss pour identifier les coupes de viande.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

Le sureau jouit d'une vaste rputation comme plante curative, occupant depuis toujours une place de choix dans les mdecines folkloriques, ses feuilles, fleurs, fruits et son corce ayant tous t utiliss diverses fins mdicinales. Pour les Amrindiens, la baie de sureau reprsente un remde traditionnel contre la constipation, la colique, la diarrhe, le rhume, la fivre et le rhumatisme. Plus rcemment, la baie de sureau a accroch l'attention de plusieurs chercheurs et industries cause de ses proprits nutritives et mdicinales. On attribue aux fleurs de la varit europenne Sambucus nigra des proprits diurtiques et laxatives, alors que les fruits renferment de l'acide valrique qui facilite la respiration. Les fleurs sont aussi utilises pour traiter la dermatose allergique et l'asthme, et sont rputes pour accrotre la rsistance du corps aux infections virales tels les rhumes et les grippes. D'aprs la Commission Europenne (CE), l'organisme de rglementation allemand, aucun effet secondaire ou interaction mdicamenteuse attribuable aux fleurs n'a t relev. Les tisanes base de baie de sureau auraient des proprits qui soulagent la toux et la congestion des sinus, et aideraient rduire l'enflure associe aux maux de gorge. Elles favorisent l'limination des dchets du corps et sont rputes pour tre de puissants immunostimulants. Le rle de la baie de sureau dborde dsormais le cadre de la mdecine traditionnelle, grce la popularit croissante de ce petit fruit comme ingrdient dans les alicaments. Le fruit renferme en effet d'importantes proprits nutritives dont les vitamines C et B6 et une forte teneur en anthocyanines. Selon des essais cliniques, son jus, riche en antioxydants, offre des possibilits pour la protection de la sant humaine. Les baies fraches ont des proprits diurtiques et laxatives, mais les graines sont toxiques. Une fois cuites, les baies sont mangeables. La plantation du sureau doit se faire trs tt le printemps, comme celle du pommier, pour que les plants tirent parti de la croissance prcoce qui les caractrise. Le sureau peut survivre des variations de tempratures allant de -40 38 oC. Les sureaux ne sont que partiellement autofcondants. Pour assurer une pollinisation adquate, il est recommand qu'une plantation regroupe au moins deux varits. On procde actuellement un essai de pollinisation assiste au Canada pour amliorer le rendement fruitier du sureau indigne. Les producteurs qui cherchent accrotre la taille des fruits et le rendement du sureau cultiv doivent recourir l'irrigation l o la prcipitation annuelle est infrieure 700mm. Les rendements sont fonction de la densit de peuplement et de la teneur d'azote dans le sol. Un hectare de plantes mres peut donner jusqu' 15 tonnes de fruit par anne. Le sureau s'adapte une large gamme de sols, mais prfre les terres fraches, fertiles, sablonneuses, qui 52

- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

sont humides et riches en matires organiques. Bien que le sureau puisse tolrer une teneur pH allant de 5.5 et 7.5, pour une croissance optimale, une teneur entre 5.5 et 6.0 est recommande. L'arbuste crot rapidement dans des endroits ouverts et ensoleills. Il est important d'laguer les arbustes tt dans la saison afin de promouvoir des pousses vigoureuses, d'enlever les tiges endommages par l'hiver et d'amliorer la production fruitire. La lutte contre les mauvaises herbes simpose pendant les premires trois cinq annes. La croissance et la survie des jeunes plants augmentent considrablement lorsqu'ils n'ont pas besoin de rivaliser avec les mauvaises herbes. Par le pass, on slectionnait dans la nature des plantes affichant des qualits suprieures. La slection de cultivars forte teneur en vitamine C devrait permettre d'amliorer la valeur nutritive du jus des baies et d'accrotre la protection qu'il offre contre la dgradation oxydative grce sa teneur en anthocyanines. La mise au point de varits exemptes de virus ou dont les pigments affichent une plus grande stabilit reprsente une piste intressante pour les futures recherches.

IV.3. Commercialisation :
La baie de sureau reprsente une culture de valeur qui promet des retombes conomiques intressantes. Son jus contient une quantit importante de vitamines des groupes A, B et C, de flavonodes, danthocyanosides, de sucre, de tanins, de carotnodes et d'aminoacides. Grce leurs proprits astringentes, les feuilles et les fleurs du sureau Sambucus

nigra sont utilises dans des nettoyants pour la peau, destins amliorer le teint et rduire
l'eczma, l'acn et le psoriasis. L'eau des fleurs est un gargarisant calmant et un excellent bain des yeux. Les feuilles et les fleurs sont couramment utilises comme ingrdients dans des onguents pour les brlures, les enflures, les coupures et les corchures. Le colorant tir du fruit est utilis dans les vins, entre autres, et titre de colorant naturel dans les produits alimentaires. mesure que les chercheurs continuent de mettre au point des varits amliores, et que les connaissances relatives la gestion culturale du sureau s'approfondissent, la production des baies devrait se rvler de plus en plus intressante comme choix de culture. La demande de baies de sureau devrait connatre un essor par suite de l'intrt croissant pour les nutraceutiques et alicaments l'chelle mondiale.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... IV.4. Perspectives :

La sensibilisation du public aux bienfaits mdicaux des petits fruits pourrait constituer un srieux argument de commercialisation et devrait continuer alimenter la demande. Les recherches scientifiques ainsi que les efforts de promotion et d'information devraient continuer permettre au public de mieux connatre les avantages de la consommation des petits fruits.

V. Proprits mdicinales :
De faon gnrale, la drogue issue des fleurs est utilise comme sudorifique (diaphortique) dans les tats de refroidissement accompagns de fivre, sous forme de grandes quantits dinfusion, consommes aussi chaudes que possible, et ce frquemment en mlange avec des fleurs de tilleul. La drogue stimulerait la scrtion des glandes sudoripares, mais les principes actifs responsables ne sont pas connus. Chez lhomme sain, une augmentation de la sudation a t observe comparativement de leau chaude seule ; certains auteurs nattribuent cependant cette drogue que des vertus correctrices de got . La drogue fait dailleurs partie dassociations dans ce but (par exemple avec les laxatifs) [51,67]. Les fleurs de sureau augmentent aussi les scrtions bronchiques [68]. Chez le lapin narcos et trachotomis, ladministration par voie intragastrique dune dose journalire de 6.5ml par Kg de poids corporel dun extrait thanol-eau de fleurs de sureau (0.6g de drogue / 100ml), augmente significativement la quantit des scrtions en 3 jours, respectivement de 43 et de 111%, comparativement de tmoins thanol-eau et eau sale [69]. En mdecine traditionnelle, la drogue est en outre utilise pour la prparation de gargarismes, mais aussi de lotions, de fumigations et de cataplasmes [70]. La drogue issue des baies est rarement utilise comme laxatif, mais aussi comme diurtique et diaphortique contre les refroidissements. Les fruits frais maturit servent pour la prparation de jus. Ce jus est employ forte dose comme purgatif, diurtique et sudorifique [71]. En mdecine traditionnelle, le jus frais press est utilis spcifiquement contre la sciatique et les neuralgies. En raison de leur teneur relativement leve en anthocyanes, les baies de sureau servent de colorant alimentaire [72,73]. L'corce, les feuilles, les fleurs et les fruits ont des proprits sudorifiques, diurtiques, purgatives, vomitives, et, extrieurement dtersives et rsolutives. Les feuilles sont toxiques intrieurement, mais sont employes extrieurement pour l'action antiseptique, anti-inflammatoire et curative (brlures, coups de soleil de mineur, gonflant). 54

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L'corce, surtout l'corce interne, est diurtique, et l'exprimentation animale a montr l'apparition chez la souris et le chat (PETKOV, 1979) d'une inhibition du systme nerveux central avec apathie et somnolence; d'un effet hypotenseur de courte dure; d'une inhibition de l'activit cardiaque et de troubles du rythme. Les baies des autres espces de sureau (hible et rouge) ne sont pas considres comme comestibles. Elles ont les mmes proprits que les baies du sureau noir mais elles entranent gnralement des diarrhes svres [38]. Les fleurs sont mucilagineuses, diaphortiques, antispasmodiques, antigrippal, immunostimulant, anti-inflammatoire et antirhumatismales. Elles sont rputes, en mdecine populaire, comme sudorifiques, diurtiques, mollientes sous forme d'infusion. Elles font partie des espces purgatives. Les fruits (baies) donnent un suc laxatif, analgsique (jus). L'corce interne est efficace dans : [39] Les cirrhoses (mais toxique forte dose), Usage vtrinaire laxatif (fruit, corce), Usage homopathique, L'corce et la racine sont diurtique et laxatif.

V.1. Ecorce interne : (la seconde corce)

Dodeur forte et nauseuse, et un diurtique trs vant (travaux de LECLERC et J. BREL). LECLERC la recommandait contre lhydropisie, MARTIN contre lascite, LEMOINE contre la nphrite aigu avec dme. Elle et aussi laxative [40,41,42,74]. A ltat frais, par voie gastrique, sous forme de macration ou de dcoction aqueuse, elle produit une polyurie abondante chez le cobaye, la dose de 9 10g par Kg danimal (la premire corce ncessite des doses beaucoup plus fortes). On note aussi un abaissement de temprature et un ralentissement du pouls et de la respiration. La dcoction est plus active que la macration et cette dernire a surtout des effets mto-cathartiques : vomissements sans efforts, diarrhe [42]. Des effets diurtiques ont t obtenus avec des petites doses, sans aucun malaise [43]. A doses leves, lcorce peut provoquer des accidents bulbaires.

V.2. Feuilles :
Elles paraissent jouir de proprits analogues celles de lcorce : diurtiques et laxatives. Mais elles sont rarement utilises lintrieur [74]. Elles sont, en outre, renommes comme topique externe contre les hmorrodes et les brlures. On peut les fumer sches, comme le tabac.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... V.3. Fleurs :

Fraches sont laxatives. Sches, elles sont surtout sudorifiques, mais aussi diurtiques. On les emploie chaque fois quil faut provoquer une transpiration cutane abondante et salvatrice : dbut de rhume, fivres ruptives (rougeole, scarlatine), affections catarrhales (bronchite, grippe), crise de rhumatisme. Elles entrent dans la tisane des espces purgatives, encore appele th de sant ou poudre de longue vie. Adoucissantes et rsolutives, elles sont aussi utilises lextrieur contre les fluxions, les engelures, les crises de goutte, les inflammations oculaires [74]. 100 200g par jour produisent des effets diaphortiques comparables et mme suprieurs ceux de la Salsepareille [38].

V.4. Baies : sont sudorifiques et, dose forte, elles deviennent purgatives. On les
recommande contre les rhumatismes et lhydropisie [74].

V.5. Utilisations internes : V.5.1. Dcoction : La dcoction de seconde corce, 45 60g par litre deau. Laisser rduire
de moiti et boire dans la journe comme diurtique [74].

V.5.2. Vin : Verser un litre de vin bouillant sur 150g de seconde corce. Laisser macrer 48h
et prendre 2 verres bordeaux par jour dans le mme dessein [74].

V.5.3. Infusion : 50g de fleurs sches par litre deau bouillante. Laisser infuser 10 minutes et
prendre 4 ou 5 tasses par jour, comme sudorifique et contre les rhumatismes.

V.5.4. Suc des baies presses : 20 30g prendre dans la matine comme purgatif. V.5.5. Rob de Sureau (extrait de suc de baies): Ecraser des baies, quon laisse reposer ainsi
au frais pendant 24h. Le presser ensuite pour en exprimer le suc. Faire vaporer ce suc au bain-marie, de faon obtenir un sirop consistance de miel. Une prise de 4 8g de ce rob a un effet sudorifique ; au-del, il est purgatif [74]. Lextrait mou (rob de sureau) la dose de 20 30g par jour est utilis comme laxatif et contre les nvralgies (LECLERC). En fin, en laissant fermenter quelques jours le suc, pralablement soumis lbullition avec un peu deau, on obtient un sirop qui serait efficace chez lenfant comme bchique [39]. Lextrait de suc de baie est laxatif chez le chien la dose de 6 10g et purgatif la dose de 40 50g. Les feuilles : ne sont pas utilises pour lusage interne.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... V.6. Utilisations Externes : V.6.1. Infusion : Concentre 100g de fleurs par litre. Elle sert imbiber des compresses
contre les fluxions dentaires, les eczmas et les dartres, ou peut tre employe en bains chauds et courts, contre les engelures. Elle est excellente en lotions contre les inflammations des paupires, les conjonctivites et les orgelets [74].

V.6.2. Bain antidouleur : Il se prpare avec une dcoction concentre de fleurs de sureau,
que lon peut mlanger avec de la sauge et du romarin, contre les rhumatismes.

V.6.3. Cataplasme : Les feuilles de sureau, broyes dans lhuile dillette, sont renommes
contre les hmorrodes et les brlures [74].

V.7. Utilisations mdicinales traditionnelles : [1] V.7.1. Usage interne : de faon gnrale.
Bronchites, maladies infectieuses, nphrites, hydropisie, toux, asthme, grippe, mal de gorge, rhume, arthrite, rhumatismes, goutte, inflammations oculaires, affection rnale, allergies, otites, candidose, nvralgies, angines, amygdalite, ulcres buccaux, gerures, verrues, fivre ruptive, constipation, cystites et oedmes (baies, fleurs, feuilles et corces). Le sureau noir pourrait tre utile pour lutter contre les maladies infectieuses (dont la grippe et le rhume) grce son action immunomodulatrice, anti-inflammatoire et sudorifique.

* Fleurs sches : Traitent le rhume et les inflammations des voies respiratoires. Linfusion
des fleurs est un excellent diaphortique, particulirement indiqu lors du refroidissement et dtats fbriles. En gargarismes, linfusion gurit la pharyngite, langine et la stomatite. Le sureau est un adjuvant des tisanes laxatives.

** Fleurs et baies : Traitent la bronchite, la sinusite, le mal de gorge et le rhume, combattre

les infections virales, dont la grippe, trait les infections des voies urinaires et soulager les douleurs rhumatismales.

*** Les fleurs : sont recommandes pour : augmenter le pouvoir dfensif de l'organisme et
sont galactognes, par contre, les baies sont recommandes pour les cas d'ischialgie, de nvralgie faciale et autres, de rhumatismes et de goutte ainsi que certaine thrapie du cancer (action de l'anthocyane). En infusion pour les fleurs raison de 40g par litre et pour l'corce et la racine ; en dcoction raison de 50g par litre [75].

VI. Utilisations alimentaires :

Les fleurs parfument dlicieusement le vinaigre et les boissons o on les met macrer. Il est possible de les ajouter crues, dtaches de leur corymbe, aux salades ou aux desserts. Les fleurs de sureau sont classiques en beignets, et on en fait de dlicieuses tartes. Les pommes conserves sur un lit de fleurs sches prennent un got d'ananas. 57

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Les fruits donnent des confitures et des geles un peu fades, qui sont meilleures lorsqu'on y ajoute d'autres fruits la saveur plus marque. On en prpare aussi du jus, du sirop, du vinaigre et un "rob" sorte de confiture sans sucre obtenue par vaporation du jus [76].

VII. Autres utilisations : [75]

La moelle est utilise pour faire des coupes histologiques en biologie. Le bois du sureau noir, jaune clair, assez dur, sche difficilement, en dformant et en se fendillant. Compltement sec, il peut pourtant servir la fabrication de petits objets de tournerie.

VIII. Recherches
En 1986, la C.E. approuvait l'usage mdicinal des fleurs de sureau pour le traitement du rhume. En 1999, l'Organisation mondiale de la sant reconnaissait les usages traditionnels des fleurs de sureau comme diaphortique (qui provoque la sudation) et expectorants. Ces deux organismes rapportaient que des essais in vitro et sur des animaux permettaient d'tablir que les fleurs avaient une action anti-inflammatoire, diurtique et sudorifique. */ Les rsultats d'un essai double insu avec placebo men dans un kibboutz isralien au cours d'une pidmie de grippe ont dmontr qu'un extrait de baies de sureau (Sambucol) tait nettement suprieur au placebo pour le soulagement des symptmes de la grippe. Au bout de deux jours, 93,3 % des sujets traits au sureau voyaient dj un soulagement significatif de leurs symptmes, tandis qu'il a fallu attendre six jours pour que 91,7 % des personnes du groupe placebo montrent une amlioration similaire. Antrieurement, on avait russi, grce cette prparation, inhiber, in vitro, le dveloppement du virus de l'Influenza pour de nombreuses souches de types A et B [77]. Deux tudes in vitro aussi menes en Isral indiquent que cet extrait a un effet immunostimulant [78,79]. Il semblerait que les baies de sureau noir puissent tre d'une aide prcieuse pour lutter contre certaines maladies infectieuses, en particulier la grippe. D'aprs les chercheurs israliens, elles agiraient deux niveaux : tout d'abord, en inhibrent directement le dveloppement de certains virus, mais elles auraient aussi une action stimulante sur le systme immunitaire. Ainsi, en utilisant le sureau, une amlioration trois fois plus rapide qu'avec un placebo aurait t observe. Les fleurs de sureau pourraient galement tre intressantes pour diminuer l'inflammation et favoriser l'vacuation des toxines par la sueur et l'urine, ce qui justifierait l'usage qu'on en fait contre le rhume (et les autres inflammations des voies respiratoires). Les trs rares effets indsirables rapports sont bnins, principalement, des troubles digestifs.

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**/ Une prparation fabrique en Allemagne et comprenant des fleurs de sureau, de la gentiane, de la verveine, de la primevre et de l'oseille (Sinupret) aurait donn de bons rsultats dans des essais mens sur des sujets souffrant de sinusite chronique et aigu [80], mais les rsultats de ces tudes, menes principalement en Allemagne, ne sont pas rpertoris dans la banque de donnes Medline. ***/ Le 26 octobre 2004, un sirop base d'extrait de sureau noir (Sambucus nigra), le Sambucol, serait efficace pour traiter la grippe, selon une tude norvgienne finance par le fabricant du produit. En effet, le sureau noir semble pouvoir rduire la dure et la svrit des symptmes de la grippe. Ainsi, pour le bnfice de l'tude, on a donn, de faon alatoire, soit une prparation standardise (38 %) de sirop de sureau noir, soit un placebo 54 adultes souffrant du virus de l'influenza de type A et 6 autres atteints du type B. Les patients devaient prendre 15 ml (3 c. th) de l'une ou l'autre des prparations, quatre fois par jour, pendant cinq jours. L'volution des symptmes tels que la douleur, la fivre, la toux, l'excrtion de mucus et la congestion nasale tait value par les patients sur une chelle de 0 10 (10 tant l'amlioration la plus prononce). Les participants du groupe ayant reu l'extrait de sureau noir ont accord en moyenne une note de 9 comparativement 1 pour les individus du groupe placebo. partir de la troisime journe de traitement, les patients du groupe prenant le sureau noir ont prouv une amlioration significative de leur tat comparativement au groupe placebo qui a vu ses symptmes dcliner seulement aprs sept jours. Aucun effet indsirable n'a t not dans les deux groupes. Les ingrdients actifs du sureau noir ne sont pas clairement identifis dans l'tude, mais les effets obtenus seraient attribuables aux anthocyanines qu'il contient. On croit que l'extrait de sureau pourrait avoir une action immunomodulatrice.

Remarque : Le sureau noir est un arbuste qui pousse en Europe et en Amrique du Nord et
dans la plupart des rgions tempres. Bien qu'il en existe plusieurs espces, seuls le sureau noir et le sureau blanc ont fait partie d'une vritable tradition mdicinale.

IX. Prcautions
En cas de grossesse, des auteurs recommandent la prudence sur la foi d'un essai toxicologique au cours duquel on aurait inject de fortes doses de sureau des souris enceintes, ce qui aurait provoqu des avortements spontans . D'autres sources font remarquer qu'il est peu probable qu'une telle chose se produise chez des humains, les dosages recommands tant beaucoup plus bas et la plante n'tant pas administre par injection. 59

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Les rsultats d'une tude de pharmacovigilance ayant port sur 762 femmes enceintes qui avaient pris durant leur grossesse une prparation renfermant, entre autres plantes, des fleurs de sureau (Sinupret) et qui ont donn naissance 786 enfants n'ont pas rvl d'effet tratogne ou embryotoxique [81]. Pour le Sambucol : Aucune information disponible sur des prcautions gnrales ou des prcautions au sujet des interactions de drogue ; interactions de drogue et d'essai en laboratoire; carcinogense, mutagense, affaiblissement de fertilit ; effets tratogniques et non-tratogniques en grossesse ; mres de soins ;ou utilisation pdiatrique. Par consquent, le sureau noir ne devrait pas tre administr pendant la grossesse ou la lactation ou ainsi quaux enfants sans surveillance mdicale.

X. Indications thrapeutiques : X.1. Utilisations dcrites dans les pharmacopes et dans les systmes traditionnels de la mdecine : [66]
En tant que diaphortique pour le traitement de la fivre et des froids, Expectorant pour le traitement de l'inflammation douce de la rgion respiratoire suprieure. En outre pour le traitement symptomatique du froid commun.

X.2. Utilisations dcrites dans la mdecine folklorique, non soutenue par des donnes exprimentales ou cliniques :
- Traitement de la conjonctivite, de la constipation, du diabte, de la diarrhe, de la peau sche, des maux de tte et du rhumatisme [66].

X.3. Contre-indications :

Aucune connue.

X.4. Effets indsirables :

Rarement, lgers troubles gastro-intestinaux passagers.

X.5. Interactions : a. Avec des plantes ou des supplments :

Aucune connue.

b. Avec des mdicaments :

Thoriquement, le sureau pourrait contrer les effets des immunodpresseurs.

X.6. Sur les tablettes :

Le sureau est souvent utilis en combinaison avec d'autres plantes dans des produits destins soulager le rhume, la grippe et la fivre qui les accompagne.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... XI. Pharmacologie : XI.1. Pharmacologie exprimentale : XI.1.1. Activit anti-inflammatoire
Un extrait d'thanol 80% de sureau noir a eu une activit anti-inflammatoire modre sur les rats. Il a empch l'oedme carraghnane-induit de patte, de 27%. L'extrait a t administr par voie intra-gastrique (poids corporel de 100 mg/kg) pendant 1h avant l'administration du carraghnane. La drogue commande, loedme carraghnane-induit en lempchant de patte l'indomtacine (poids corporel 5mg/kg) de 45%. L'administration intrapritonale d'une fraction non saponifiable des fleurs aux souris a modrment augment la phagocytose une dose de 0.5 ml/animal. Un extrait 100% de mthanol des fleurs a empch la biosynthse des cytokines inflammatoires interleukin-1a, interleukin-1b et facteur de ncrose de tumeur une concentration de 30 mg/ml en cellules mononuclaires priphriques humaines in-vitro [66].

XI.1.2. Activit diurtique :

L'administration intra-gastrique d'une infusion des fleurs (poids corporel de 20 ml/kg) ou d'un extrait de potassium et de flavonodes des fleurs a eu un effet diurtique dans les rats. Leffet observ tait plus grand que celui observ avec de la thophylline (poids

corporel 5mg/kg) [66]. L'abrg de fines herbes britannique a rapport des actions diaphortiques et diurtiques (BRADLEY, 1992).Le mcanisme de l'action n'est pas entirement compris.Ses flavonodes et acides phnoliques peuvent contribuer l'effet diaphortique (BRADLEY, 1992), a dmontr des actions anti-inflammatoires, antivirales, et diurtiques dans des tudes in-vitro. Les flavonodes et les triterpnes semblent tre les constituants biologiquement actifs de force (NEWALL, 1996) [66].

XI.2. Pharmacologie clinique : XI.2.1. Activit diaphortique :

Le sureau noir augmente la rponse des glandes de sueur aux stimuli de la chaleur, il augmente aussi les diaphorses dans les sujets en bonne sant [66].

XII. Etude phytochimique du Sambucus nigra L. : XII.1. Introduction :

La phytochimie se charge d'tudier les substances actives d'origine vgtale, leurs structures, leurs distributions dans les plantes, leurs modifications et les processus de transformation qui se produisent au cours de la vie des plantes. Elle est en liaison troite avec la pharmacologie. Cette dernire permet l'tude des effets sur l'organisme humain des substances mdicales, du mcanisme et de la vitesse de leur action, de leur absorption, de leur 61

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limination, enfin de leur emploi contre telle ou telle maladie. La pharmacologie, son tour, est en collaboration troite avec la mdecine clinique. Les substances chimiques qui constituent les plantes et qui interviennent dans leur mtabolisme appartiennent deux catgories. La premire catgorie comprend les molcules relativement simples, qui sont des substances minrales (eau, mtallodes, mtaux). La seconde catgorie comporte des substances organiques constitues de molcules complexes. Dans cette dernire catgorie, trois familles sont particulirement importantes, ce sont les glucides (sucres), les lipides (graisses) et les protides (acides amins, peptides, protines). Toute une srie de mthodes modernes permettent de mettre en vidence la prsence dans les vgtaux de telle ou telle substance. C'est d'abord l'tude microscopique, fonde sur la structure anatomique et morphologique du corps vgtal, puis ce sont des mthodes physiques, comme la microsublimation qui consiste faire chauffer une petite quantit de drogue, fixer sur un verre les manations qui sont ensuite analyses par des mthodes chimiques. Certaines substances peuvent tre mises en vidence par leur fluorescence la lumire ultra violette. Les techniques particulires de la chimie qualitative et quantitative permettent aussi de dpister la prsence de telle ou telle substance.

XII.2. Etude physico-chimique

Ltude physico-chimique permet didentifier Sambucus nigra L., par la mise en vidence de certains principes, actifs ou non, mais caractristiques de la plante. Cette mise en vidence seffectue par des tests physiques ou chimiques raliss sur la plante elle-mme ou sur un extrait rapidement prpar : - examen en lumire ultraviolette, - essais de solubilit, notamment dans leau et dans lalcool, - ractions de coloration et de prcipitation.

XII.2.1. Elments actifs des plantes

Ce nest que rcemment que les lments actifs lorigine des actions thrapeutiques des plantes ont t isols et tudis. Il est indispensable de connatre la composition des plantes pour comprendre comment elles agissent sur lorganisme. [82] De faon gnrale, on trouve dans les plantes : -Les glycosides ; - Les phnols ; - Les pigments ; - Les flavonodes ; 62

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- Les carotnodes ; - Les anthocyanes ; - Les anthraquinones anthracnosides emodols ; - Les tanins ; - Les huiles essentielles ; - Les polysaccharides ; - Les vitamines ; - Les minraux ; - Les alcalodes ; - Les coumarines ; - Les saponosides ; - Les strodes et strols ; - Les terpnes.

XII.3. Etude phytochimique de Sambucus nigra L. XII.3.1. Identification

Lidentification botanique est faite par le Professeur Bennabadji (Facult des Sciences, Dpartement de Biologie, Tlemcen).

XII.3.2. Le choix de la plante

Le choix de notre plante est bas sur : - Une observation de la pharmacope traditionnelle algrienne. - Une recherche bibliographique avance.

XII.3.3. Origine gographique et priode de rcolte

Le matriel vgtal est constitu de feuilles et de baies de Sambucus nigra L. Cette dernire est rcolte au mois de septembre 2005 louest de la ville de Tlemcen (El Ebbad). Les caractristiques gographiques et bioclimatiques de Tlemcen sont rsumes dans le tableau si dessous.

Tableau 3 : Caractristiques gographiques et bioclimatiques de Tlemcen. Station Etage bioclimatique Altitude en (m) Latitude nord Longitude ouest Pluviomtrie (mm)
Tlemcen Semi-aride 800 34 52 121 570

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... XII.3.4. Prparation et conservation du matriel vgtal
Aprs la rcolte, le matriel vgtal est dbarrass des dbris. Pour sassurer de la bonne conservation de notre plante, un lavage leau distille suivi d'un schage lair libre et lobscurit pendant une dizaine de jours ont t raliss. Elle est, ensuite, conserve dans des flacons l'abri de la lumire. Toutes ces oprations permettent de pallier la dgradation de certains constituants et contribuent l'inhibition de toutes activits enzymatiques responsables de leur dnaturation.

XII.3.5. Examen phytochimique XII.3.5.1. Introduction

Les deux parties de Sambucus nigra L. (Baies (B) et Feuilles (F)) ont t soumises aux tests phytochimiques. Au cours de ces derniers, trois solvants d'extraction de polarits diffrents (eau, ther dithylique et lthanol) sont employs. La mthode dextraction consiste porter lchantillon de la plante au reflux de lun des solvants cits ci-dessus pendant 1h. Cette technique permet dextraire toutes les familles de composs chimiques prsentes dans la plante tudie.

XII.3.5.2. Rsultats
Les rsultats de l'examen phytochimique, ralis sur les Baies et les Feuilles de

Sambucus nigra L. puises par l'eau, l'thanol et l'ther dithylique, sont reprsents
respectivement dans le tableau si dessous :

Tableau 4 : Examen phytochimique : Baies (B) et Feuilles (F) de Sambucus nigra L. Famille de composs Flavonodes Tanins Strols et strodes Alcalodes Anthocyanosides Composs rducteurs Huiles volatiles Feuilles (F)
+ + + + +

Baies (B)
+ + + + + + +

+ : test positif ; : test ngatif

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ... XII.3.5.3. Interprtation des rsultats
Les tests phytochimiques consistent dtecter les diffrentes familles de composs existantes dans la partie tudie de la plante par des ractions de prcipitation ou de coloration en utilisant des ractifs spcifiques chaque famille de composs. Les rsultats sont rsums ci-dessous : - Une raction positive en prsence d'une solution de chlorure ferrique confirme par une coloration verte fonce caractristique des tanins catchiques. - Les composs rducteurs sont dtects par un test en prsence de la liqueur de Fehling conduisant un prcipit rouge-brique. - En prsence de la tournure de magnsium et de quelques gouttes dacide chlorhydrique concentr, l'extrait de plante se colore en rose-rouge, couleur caractrisant la prsence des flavonodes.

XIII. Conclusion
Le criblage phytochimique base sur des tests spcifiques a permis de caractriser les quelques familles de composs chimiques existantes dans la plante de Sambucus nigra L. Les anthocyanosides, Les flavonodes, les tanins, les composs rducteurs, sont prsents dans les deux parties de la plante tudie, en quantits trs variables. Ainsi, les tests phytochimiques ont confirm les rsultats de la bibliographie. Il est clair, d'aprs ces rsultats, qu'un ou plusieurs de ces composs peuvent tre lorigine des proprits thrapeutiques de Sambucus nigra L. connues et rvles par l'tude thnobotanique, notamment son emploi pour leffets anti-inflammatoires. Enfin, cette tude aura pour finalit l'isolement, la dtermination de structure de substances naturelles d'intrt biologique, qui reprsenteront des modles pour la conception de nouveaux agents thrapeutiques.

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- CHAPITRE IV : CHIMIE ET PROPRIETES THERAPEUTIQUES DE SAMBUCUS NIGRA L. ...

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ...

Essais d'extraction et de purification des principes actifs

I. Introduction Aprs la mise en vidence des diffrentes familles de composs, dans les parties tudies de la plante (baies (B) et feuilles (F)), nous avons cibl les familles qui sont prpondrantes dans cette dernire. La deuxime tape de notre travail consiste extraire les quelques familles de composs selon des mthodes dextractions slectives. Cette opration est suivie d'une purification des extraits par diffrentes mthodes chromatographiques. II. Mthodes d'extractions des produits actifs II.1. Introduction L'extraction est un procd chimique qui permet de sparer un compos d'un mlange ou d'une solution. Le meilleur solvant a utilis est celui dans lequel le compos extraire est trs soluble. Une succession d'oprations peut tre ncessaire avant que le compos ne puisse tre isol par distillation ou par vaporation du solvant. Une autre mthode consiste effectuer une raction chimique entre le compos extraire et un ractif dont le produit est facilement sparable du reste de la solution. Dans ce cas, il faut disposer dun ractif hautement slectif. En effet, ce dernier ne doit pas ragir avec dautres composs prsents dans la solution. Les ractions mises en jeu sont essentiellement des ractions de complexation, des ractions doxydorduction ou des ractions acidobasiques. Il sagit de choisir judicieusement la raction, de manire que le produit ne soit plus soluble dans le solvant considr. Il se forme alors un prcipit que lon rcupre par filtration. Le compos recherch est restitu par la raction inverse de la raction qui a servi former le prcipit [1,2]. II.2. Rappels thoriques Lisolement dune substance naturelle ou synthtique ncessite souvent une extraction avec un solvant organique ou minral. Il y a en gnral deux types dextraction : - Lextraction liquide-liquide continue et discontinue. - Lextraction solide-liquide continue et discontinue. a. Lextraction solide-liquide continue Lextraction continue est un procd beaucoup plus long que lextraction discontinue, mais elle a lavantage dtre plus complte. Les mthodes habituellement mettent en jeu la percolation, la macration et lentranement la vapeur. La percolation consiste faire passer

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... lentement un solvant travers une couche de substance pulvrise, habituellement contenue dans une cartouche de papier pais et poreux ou une pochette de papier filtre. Lextraction solide-liquide peut aussi tre ralise par un appareil spcial, extracteur de soxhlet. Lavantage de ce type d'extraction est que le solvant condens, saccumule dans un rservoir siphon, ce qui augmente la dure du contact entre le solvant et le produit extraire. Quand le solvant atteint un certain niveau, il amorce le siphon et retourne dans le ballon en entranant la substance dissoute [3]. b. Lextraction solide-liquide discontinue La macration est un procd discontinu qui consiste laisser tremper le solide dans un solvant chaud ou lbullition, pour en extraire les constituants solubles. Aprs filtration, le rsidu peut tre remis dans le rcipient dextraction avec une nouvelle portion de solvant. Au besoin, le processus est rpt plusieurs fois. Cette mthode prsente lavantage dtre rapide, surtout avec les solvants bullition, mais le processus dextraction nest pas toujours trs efficace [3]. c. Extraction liquide- liquide L'extraction liquide-liquide est la plus simple des mthodes de sparation. Elle consiste faire passer un produit dissous dans une phase liquide, appel le solut, dans une seconde phase liquide non miscible avec la premire. En pratique, les soluts sont souvent dans une phase aqueuse. Un solvant organique (ther dithylique, actate dthyle, chloroforme etc.) est utilis pour les extraire. La quantit de solut A extraite est estime par la constante de distribution ou par le coefficient de rattrapage exprim par : [C]org : Concentration de solut A dans la phase organique. Korg/aq = [C]org / [C]aq [C]aq : Concentration de A qui reste dans la phase aqueuse lquilibre.

Il est noter que plus le coefficient K est grand, plus le volume de solvant organique ncessaire une bonne extraction est petit [2,4]. III. Mthodes Chromatographiques III.1. Introduction En 1906, un botaniste russe Mikhail Semenovich TSWETT purifie des pigments vgtaux, comme la chlorophylle, sur une colonne de craie. Il donne alors ce phnomne de sparation le nom de chromatographie (du grec khrma, couleur et graphein, crire) qu'il dfinit comme l'enregistrement graphique des couleurs [5]. 70

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... III.2. Principe La chromatographie est une technique analytique qui permet la sparation des constituants d'un mlange en phase homogne liquide ou gazeuse. Le principe repose sur l'quilibre de concentrations des composs prsents entre deux phases en contact, l'une stationnaire et l'autre mobile. La sparation est base sur l'entranement diffrentiel des constituants prsents dans la colonne. Ces derniers la parcourent avec des temps proportionnels leurs proprits intrinsques (taille, structure etc.) ou leur affinit avec la phase stationnaire (polarit). A leur arrive en bout de colonne, le dtecteur mesure en continu la quantit de chacun des constituants du mlange [5]. III.3. Classification Les mthodes chromatographiques peuvent tre classes en fonction de la nature physique des phases (mobile et stationnaire), ainsi on trouve : [5]

Tableau 5 : Chromatographie en phase gazeuse

Chromatographie en phase gazeuse type gaz/solide adsorption phase stationnaire solide poreux dans les colonnes remplis, solide poreux gaz/liquide partage inerte enrob de liquide

(partition) dans les colonnes capillaires, paroi interne de la colonne qui sert de support

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Tableau 6 : Chromatographie en phase liquide

Chromatographie en phase liquide type adsorption phase stationnaire solide poreux solide la surface duquel se trouve des sites ioniques change d'ions liquide/solide dexclusion (filtration sur gel, permable au gel) partage phase normale liquide/liquide partage phase inverse solide poreux sur lequel sont greffes des chanes hydrocarbones non polaires solide poreux inerte enrob de liquide (de moins en moins utilise) solide dont la dimension des pores permet la sparation des espces selon leur taille qui permettent l'aide d'un solvant appropri l'change d'ions prsents dans la phase mobile

Tableau 7 : Chromatographie en phase supercritique

Chromatographie en phase supercritique gaz supercritique/solide gaz supercritique/liquide

La chromatographie en phase gazeuse possde une efficacit trs grande comme moyen de sparation. Des tentatives d'tendre cette mthode, la prparation de quantits apprciables de substances, ont t testes. Malheureusement, tous les essais ont but sur les

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... limites daccroissement de dimensions des colonnes qui se font aux dpens de la qualit. Actuellement, des appareils capables de fournir, gnralement par rptition de cycles identiques, quelques grammes de produits purs sont disponibles. La chromatographie prparative en phase gazeuse est devenue courante au laboratoire sur des colonnes de lordre du centimtre de diamtre. Les colonnes industrielles perdent en efficacit. Toutefois, avec quelque mille plateaux thoriques au mtre, elles sont encore trs suprieures aux colonnes de distillation et moins coteuses en nergie [6,7]. IV. Extraction et Purification : IV.1. Principe : Notre tude parte du fait que les feuilles sont utilises en pharmacope traditionnelle Algrienne pour le traitement de la fivre typhodique, ainsi, une application des feuilles sur la tte diminue la temprature en seulement deux jours. Notre but est dexpliquer ce phnomne et dterminer le principe actif responsable de cet effet. En cours de notre recherche bibliographique, on a trouv que le sureau noir tait utilis pour des vertus anti-inflammatoires comme le traitement de la grippe, et que ctait les baies qui taient responsables de cet effet, ainsi, on a essay de dterminer le principe actif responsable ce cet effet. Aprs la mise en vidence des diffrentes familles de composs, dans les parties tudies de la plante (baies (B) et feuilles (F)), nous avons cibl les familles qui sont prpondrantes dans cette dernire. La deuxime tape de notre travail consiste extraire ces diffrentes familles selon des mthodes dextractions slectives. Cette opration est suivie d'une purification des extraits par diffrentes mthodes chromatographiques. Les rsultats de la recherche bibliographique ont montr la prsence de plusieurs familles de composs parmi lesquelles : les composs volatiles, les flavonodes, les anthocyanosides et les sucres. Ces familles de composs ont attir plus spcialement notre attention. Leur prsence en quantit plus ou moins importante dans les deux parties tudies de la plante et leurs ventuelles activits antimicrobiennes et antivirales prsumes, nous a incit les soumettre notre investigation. IV.2. Prparation et conservation du matriel vgtal : Aprs la rcolte, le matriel vgtal est dbarrass des dbris. Pour sassurer de la bonne conservation de notre plante, un lavage leau distille suivi d'un schage lair libre et lobscurit pendant une dizaine de jours ont t raliss. Elle est, ensuite, conserve dans des flacons l'abri de la lumire. Toutes ces oprations permettent de pallier la dgradation de

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... certains constituants et contribuent l'inhibition de toutes activits enzymatiques responsables de leur dnaturation. Remarque : la dessiccation est dlicate et la conservation doit viter lhumidit, en raison dun ventuel noircissement. IV.3. Extractions slectives : IV.3.1. Extraction de lhuile essentielle des feuilles : IV.3.1.1. Introduction : Le sureau noir a une odeur fleurie et plaisante, forte, dpendant principalement de la matire vgtale [8,9]. Les odeurs des extraits de fleur sont souvent plus prs de l'odeur indigne que cela d'huile essentielle faite partir du sureau noir [10]. Malheureusement, l'odeur caractristique des fleurs peut tre due aux composs volatils qui se produisent rarement en extraits de fleur, en raison des pertes de composs aromatiques volatils pendant la fabrication, le traitement industriel ou la mthode de prlvement utilise pour la quantification des volatiles [10,9]. La boisson du sureau noir de got doux [11] est bien connue dans beaucoup de pays [8,12,13,14,15], les recettes sont fournis par la littrature [16,11]. Des quantits mineures sont faites par des industries en Angleterre, Sude, et Danemark. Le march au U.K. en 1995 pour des boissons de sureau noir tait de 15 millions de litres une valeur de 9.5 millions de livres anglaises [14]. La collection de composs aromatiques des extraits de sureau noir a t faite par la lentranement la vapeur [8,10,17,18], lextraction supercritique [19], la macration et la fermentation simultane [20], lextraction au pentane [10,21], ou la technique de procd d'enfleurage [9]. Au meilleur de notre connaissance, l'utilisation du prlvement dynamique d'espace libre des composs aromatiques mis des extraits de sureau noir n'a pas t dite. La sparation et l'identification des composs volatils du sureau noir ont t effectue par la chromatographie capillaire de gaz combin la spectromtrie de masse (CPG-SM.) et la spectrophotomtrie infrarouge [8,9,10,18,19,20,22]. Plus de 100 composs volatils ont t identifis par diffrents auteurs, mais ils conviennent seulement sur quelques-uns. La raison de cette variation pourrait tre que diffrents buissons sauvages dvelopps dans diffrentes conditions environnementales ont t analyss par technique diffrente d'extraction et de concentration [8,10,18,19,22,23]. Lodeur des fleurs du sureau noir est lie au hotrienol, loxydes roses, l'oxyde de nrol, et du linalol [10,19,20,22], alors que l'odeur des feuilles semble tre associe

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... l'hexanol, (Z)-3-hexenol, et hexanal [20,24]. Le got fruites de baies est lies aux esters des acides carboxyliques et les alcools [19,20,22,25]. Des composs aromatiques mis des jus de baie de sureau traits de sept cultivars ont t rassembls par la technique dynamique d'espace libre et analys par la CPG/SM. Quarante ont t identifis et mesurs, y compris neuf composs qui n'avaient pas t prcdemment dtects en jus de baie de sureau. Des diffrences significatives ont t trouves parmi des cultivars aux niveaux de concentration de 30 composs. Les caractristiques sensorielles des diffrents composs aromatiques en jus de baie de sureau ont t dtermines par une technique de Chromatographie reniflement, et les composs ont t groups selon leur odeur. L'odeur caractristique de baie de sureau est due la dihydrodulane et le damascenone, dont l'ancien se produit dans des concentrations relativement leves dans l'espace libre du jus de baie de sureau. Le groupe fruit s'est compos des alcools, des aldhydes aliphatiques et des esters aromatiques, dont 1-pentanal, 2-methyl-1-propanol, 2 et 3-methyl-1-butanol, 1-octanal, 1-octanol et benzoate d'thyle mthylique [26]. IV.3.1.2. Mode opratoire : On ralise un montage dhydrodistillation suivant la technique de MORITZ. Cette mthode consiste mettre la plante (sche et broye) en contact avec leau distille. Le mlange ainsi prpar est port bullition puis distill. Les vapeurs refroidissant ainsi, sont rcupres dans une ampoule dcanter. Lhuile essentielle surnageante est spare de la phase aqueuse, puis conserve dans un rcipient bien ferm labri de la lumire et basse temprature. En effet, elle soxyde rapidement la lumire et lair et se polymrise, o elle se transforme en rsine en perdant son odeur et son action caractristique. IV.3.1.3. Rsultats : On obtient une huile transparente, trs volatile, peu soluble dans leau. Une fois lhuile rcupre dans lampoule, elle se volatilise. On constate la formation de vapeur sur les parois de lampoule. Lanalyse de lhuile essentielle par CPG montre la prsence dune quarantaine de pics. IV.3.1.4. Note : De faon gnrale, les composs majoritaires de lhuile essentielle trouvs lors des diffrentes tudes ralises sur le sureau noir sont : - Les fleurs : loxydes roses cis et trans, loxyde de linalol cis, l'oxyde de nrol, lhotrienol, le nonanal, le linalol, le -terpineol, le citronelol, le nrol, le graniol, le 4-mthyle3-pent-2-one et le (Z)--ocimne.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... - Les feuilles : l'hexanol, (Z)-3-hexenol, lhexanal, le (E)-2-hexenol, le (E,E)-2,4-heptadienal, le (E)-3-hexenol, le (E)-2-octenal, le heptanol et le octanol. - Les baies : le 1-octen-ol, le 3-hydroxy-2-butanone, le 2-penthylfurane, le 1-octen-3-one, le dimthyle sulfoxyde, le (Z)-3-hexenol, le citronellol le pentanal, le heptanal et le -damascenone. IV.3.2. Dgraissage du matriel vgtal : IV.3.2.1. Mode opratoire : Dans un ballon de 1000 ml surmont dun rfrigrant reflux, mettre 100g de feuilles en prsence de 400 ml dhexane. Porter lensemble reflux pendant 10h. Filtrer, ensuite vaporer le solvant. Le rsidu obtenu sous forme dun extrait huileux, reprsente gnralement la matire grasse. IV.3.2.2. Rsultats : Le spectre IR du rsidu de dgraissage donne les bandes caractristiques suivantes : Lanalyse IR : (bande OH 3300 cm-1, bande C=O 1700 cm-1).

Tableau 8 : Rendements de dgraissage des feuilles et des baies Feuilles (AGF) Rendements 11% Baies (AGB) 0.85%

Vu limportance de la quantit obtenue pour les feuilles, on a dcid danalyser les rsultats du dgraissage. Les analyses par CPG/SM sont en cours, pour AGF et AGB. Remarque : Les chromatogrammes des rsidus AGF et AGB, raliss au Laboratoire COSNA, nont pas donn de bons rsultats, cause de la polarit moyenne de la colonne. Les analyses par CPG/SM donnent les chromatogrammes 1 et 2. IV.3.2.3. Estrification des acides gras : Dans un ballon de 250 ml, surmonte dun rfrigrant reflux, mettre 2g dacide gras en prsence de 20 ml de mthanol. Ajouter, gouttes goutte, laide dune ampoule addition, 1ml dacide sulfurique concentr. Porter lensemble reflux pendant 2h. Faire couler le mlange dans une ampoule dcanter contenant 40ml deau glace. Extraire la phase aqueuse avec du chloroforme. Dcanter et scher la phase organique sur CaSO4 anhydre. Enfin, vaporer le solvant, il reste alors un rsidu desters mthyliques.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... IV.3.2.4. Note : De faon gnrale, les composs trouvs lors des diffrentes tudes ralises sur le sureau noir suite au dgraissage sont : Les alcanes relativement longue chane (C14-C31) et les esters d'acide gras (C16C18) peuvent contribuer une odeur cireuse ou grasse des feuilles [10,17]). De faon gnrale, on trouve : - Les n-alcanes : C14H30 jusqu C31H64, c--d 18 alcanes [27,28]. Les acides gras : Caprocanoque, Oenanthioque, Caprylcoque, Pelargonoque, Capricanoque, Undcanoque, Laurique, Tridcanoque, Myrsitique, Pentadcanoque, Palmitique, Palmitoque, Heptadcanoque, Starique, Olique, linolique et Linolnique [29,30]. IV.3.3. Extraction des anthocyanosides : IV.3.3.1. Introduction : Les anthocyanines sont un groupe d'antioxydants normaux largement distribus en fruits et lgumes. Les anthocyanines ont deux crtes d'absorbance, 270-280 nm et 510-540 nm, respectivement. De diverses activits biologiques et pharmacologiques des anthocyanines ont t rapportes en utilisant les extraits bruts de fruit, qui sont riches en anthocyanines. Cependant, l'absorption des anthocyanines dittiques jamais n'a t montre clairement chez l'homme, bien qu'une substance avec un spectre d'absorbance semblable ceux des anthocyanines ait t rapporte dans le plasma des sujets humains et anthocyanine comme des composs aient t trouvs en urine humaine. Nanmoins, une vidence directe de l'absorption des anthocyanines chez l'homme, qui a t obtenue en combinant un procd en phase solide d'extraction de l'octadecylsilane (ODS) pour la prparation tmoin de plasma et un systme de Chromatographie liquide sous haute pression avec la range de diode pour la sparation et la dtection d'anthocyanine a t rapporte. IV.3.3.2. Mode opratoire : Dans un ballon de 1000 ml, surmont dun rfrigrant, mettre 100g de matire vgtale broye et dgraisse en prsence de 300 ml de mthanol additionn dune faible quantit (20 ml dacide tartrique 1%). Agiter le mlange froid dans un bain deau glace pendant 24h. Filtrer et concentrer la phase organique. Le rsidu restant dans leau est extrait trois fois avec 80 ml dactate dthyle. Scher la phase organique froid sur CaSO4 et ensuite vaporer sec le solvant. Concentrer le rsidu sous atmosphre inerte, froid et labri d la lumire. 77

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... IV.3.3.3. Rsultats et interprtations : Tableau 9 : Rendements des extraits dactate dthyle Feuilles (ANF) Rendements 1.06% Baies (ANB) 0.5%

Tableau 10 : Les CCM de lextrait ANF (Eluant : Actate dthyle/Eau/Acide tartrique (80/10/10)) Rf 0 0.06 visible 0.125 visi 0.34 Verte 0.44 V. 0.52 jaune rouge 0.72 visi 0.78 verte 0.82 V. 0.89 V.

Couleur marron UV 366 UV 254 -

claire pistache rouge rouge -

fonc pistache rouge rouge -

Tableau 11 : Les CCM de lextrait ANB (Eluant : Actate dthyle/Eau/Acide tartrique (80/10/10)) Rf couleur UV 366 UV 254 0.025 marron 0.06<Rf<0.19 marron clair (tran) 0.375 visible 0.47 visible 0.9 visible -

Le test phytochimique des anthocyanosides ralis sur lextrait dactate dthyle est positif pour les baies, par contre, il est ngatif pour les feuilles. Les analyses par CPG/SM donnent de bons rsultats pour ANB (chromatogramme 3). Les chromatogrammes des rsidus ANF et ANB raliss au Laboratoire COSNA nont pas donn de bons rsultats, cause de la polarit moyenne de la colonne. La colonne utilise dans la CPG/SM est plus polaire. IV.3.3.4. Stabilit des anthocyanosides : L'influence du pH sur des transformations structurales des anthocyanines de concentr de baie de sureau et de la prparation d'anthocyanine d'isolement dans des baies de sureau a t tudie. La forme cationique colore rouge et la pseudobase sans couleur se produisent dans l'quilibre dans la gamme 1.0-4.5 de pH. L'intervalle de temps ncessaire pour l'quilibration dpend du pH aussi bien que sur l'environnement de raction. Le pK de

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... constantes d'quilibre = (2.73 0.16) pour le concentr de baie de sureau et le pK = (2.92 0.07) pour la prparation d'anthocyanine ont t calculs partir des valeurs d'absorbance aprs quilibration entre la forme et le pseudobase cationiques. Deux anhydrobases avec diffrentes positions du groupe carbonylique sont forms en solution aux valeurs du pH plus haut que 4.5 correspondant aux maximums d'absorption 430 nm et 530 nm. Ces anhydrobases sont trs instables et sont sujettes encore d'autres transformations structurales. La stabilit des anhydro-bases augmente avec l'augmentation de la valeur du pH et de la temprature dcroissante. Des valeurs de demi-vie de l'anhydrobase et de l'affaiblissement ionis d'anhydrobase dans le concentr de baie de sureau et la prparation d'anthocyanine ont t calcules. La stabilit la chaleur des anthocyanines a t tudie spectrophotomtriquement dans les solutions modles du concentr des baies de sureau noir. La dgradation des anthocyanosides se produit partir de 50C. La dcomposition complte des anthocyanines suit une cintique raisonnable d'exposant-ordre avec un ordre de 1.1 1.7. Dans l'intervalle correspondant au temps partiel de la dcomposition d'anthocyanine, la dgradation a suivi la cintique de premier ordre. L'influence du pH a t significative seulement aux tempratures en dessous de 70C, o la stabilit des anthocyanines a augment avec la diminution de la valeur du pH. Remarque : Une exprience sur le terrain et deux expriences d'oxydation dans le laboratoire ont t effectues. La teneur des anthocyanines, du cyanidin-3-glucoside (Cy-3-G) et du cyanidin-3-sambubioside (Cy-3-Sa), dans les fruits frais des 13 cultivars taient de 361 1266 et de 269 656 mg/100 g, respectivement. Les deux anthocyanines mineures, cyanidin-3-sambu-bioside-5-glucoside (Cy-3-Sa-5-G) et cyanidin-3,5-diglucoside (Cy-3.5dG), se sont produites dans les concentrations entre 5 et 47 mg/100 g. la teneur de l'acide ascorbique et de la querctine dans les fruits frais des cultivars a chang de 6 25, et de 29 60 mg/100 g, respectivement. La purge du jus de baie de sureau avec du N2 et/ou de l'addition de l'acide ascorbique a rduit le taux oxydant de dgradation des deux anthocyanines et querctine principales. L'acide ascorbique a protg les anthocyanines, mais pas la querctine contre la dgradation oxydante. Le mlange des fruits de l'air pendant le traitement et mme une basse teneur de l'oxygne dans le jus avant le tapement doivent tre vits par des tapes appropries pendant le traitement.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... L'amlioration de la valeur nutritive du jus de baie de sureau et de la plus grande protection des anthocyanines contre la dgradation oxydante peut potentiellement tre obtenue par le choix des cultivars avec une teneur leve d'acide ascorbique. IV.3.4. Extraction des flavonosides : IV.3.4.1. Introduction : Il a t rapport que le sureau noir renforce et maintient les systmes immuniss et respiratoires. Prises au premier signe du froid ou de la grippe, les baies de sureau ramneront gnralement le cours de l'infection vers le bas un ou deux jours. Le sureau noir se concentre sur les besoins alimentaires du systme immunitaire offrant au corps des quantits additionnelles de vitamine C, des acides de fruit et des traces d'huiles essentielles et de colorants d'anthocyanine. Le sureau noir limine les stagnations toxiques qui sont typiquement la source des bactries infectieuses. Les proprits antibiotiques, antivirales et antibactriennes trouves dans le sureau noir travaillent galement pour stimuler la peau, les reins et le systme lymphatique. Les flavonodes, comme la quercetine sont censes tre lorigine des effets thrapeutiques des fleurs et des baies de sureau noir. Les flavonodes sont un groupe d'antioxydants, d'absorbance 425 nm, les tudes ralises souponnent que ces flavonodes sont lorigine des proprits anti-inflammatoires. IV.3.4.2. Mode opratoire : Dans un ballon de 1000 ml surmont dun rfrigrant reflux, mettre 100g de matire vgtale dgraisse en prsence de 250 ml deau distille et 120 ml dactone. Porter lensemble reflux pendant 12h. Filtrer et concentrer la solution jusqu ce que le milieu ne contienne plus que de leau. Mettre en uvre une srie dextraction liquide-liquide par des solvants non miscibles leau, par 2x50 ml dther de ptrole qui limine la chlorophylle et les lipides, en suite, par 3x50 ml dther dithylique qui extrait les gnines et les flavonodes libres. En fin, par 3x80 ml dactate dthyle qui entrane la majorit des htrosides flavoniques. Remarques : Le test phytochimique des flavonodes ralis sur lextrait dactate dthyle est ngatif pour les feuilles et positif pour les baies. Le mme test phytochimique ralis sur la phase aqueuse est positif pour les feuilles est les baies.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Ainsi, on suit le protocole suivant : La phase aqueuse : Aprs limination de leau ; un rsidu marron est obtenu. - En premier temps : On extrait ce rsidu par du mthanol froid. Le test phytochimique de lextrait mthanolique indique la prsence dhtrosides flavonoques dans les feuilles et les baies. Dautre part, lemploi de la liqueur de Fehling rvle aussi la prsence des sucres dans les deux parties de la plante soumise notre investigation. - En second temps : Le rsidu est mis en solution dans du mthanol puis le mlange est port reflux pendant 30mn. Un extrait mthanolique est obtenu aprs filtration puis concentration de la solution finale. Le suivi des extractions avec le mthanol est assur par des tests phytochimiques pour la mise en vidence des htrosides flavonoques et des sucres.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Feuilles (100g) Eau - Actone 12h Extrait aqueux Evaporation de lactone Phase aqueuse Extraction par lther de ptrole

Evaporation du solvant

Phase aqueuse Extraction par lther diethylique

Extrait solide (test 1 (-) pour les flavonodes) Phase aqueuse

Evaporation du solvant Extrait solide (test 1 (-))

Extraction par lactate dthyle Evaporation du solvant Phase aqueuse Evaporation de leau ltuve (35) Prcipit (rsidu) Solide (test1 (-)) (ETF)

Extraction par le mthanol froid

Extrait mthanolique (test (1) faiblement positif) (EMF) Rsidu Mthanol chaud (bouillon) Solide insoluble dans le mthanol Phase aqueuse (test 1et 2 faiblement positif) (EML1F) Evaporation du mthanol

Extrait mthanolique port froid Phase caramlise prcipit (sucre) (test 1 et 2 (test 1 ngatif faiblement positif) test 2 positif) (EML1F) (EMP2F)

prcipit (test 1 et 2 ngatif) (EMP1F)

Test 1 (les flavonodes) et test 2 (les sucres). Les analyses par HPLC/SM ne donnent pas de rsultats pour EML1F, EMP2F et EMP1F. Organigramme 1 : Extraction des flavonodes et des sucres des Feuilles.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Baies (100g) Eau - Actone 12h Extrait aqueux Evaporation de lactone Phase aqueuse Extraction par lther de ptrole

Evaporation du solvant

Phase aqueuse Extraction par lther diethylique

Extrait solide (test 1 (-) pour les flavonodes) Phase aqueuse

Evaporation du solvant Extrait solide (test 1(-))

Extraction par lactate dthyle Evaporation du solvant Phase aqueuse Evaporation de leau ltuve (35) Prcipit (rsidu) Solide (test1 faiblement (+)) (ETB)

Extraction par le mthanol froid

Extrait mthanolique (test (1) fortement positif)(EMB) Rsidu Mthanol chaud (bouillon) Solide insoluble dans le mthanol Phase aqueuse (test 1 et 2 positifs)(EML2B) Extrait mthanolique port froid prcipit (sucre) (test 1 ngatif test 2 fortement positif ) (EMP2B) Phase caramlise (test 1 et 2 fortement positif) (EML2B) Evaporation du mthanol

Test 1 (les flavonodes) et test 2 (les sucres). Les analyses par HPLC/SM ne donnent pas de rsultats pour EML2B et EMP2B Organigramme 2 : Extraction des flavonodes et des sucres pour les Baies.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... IV.3.4.3. Rsultats et interprtations : IV.3.4.3.1. Extraits dactate dthyle : Tableau 12 : Rendements des extraits dactate dthyle Feuilles (ETF) Rendements 0.26% Baies (ETB) 0.21%

Tableau 13 : Les CCM de lextrait ETF (Eluant : Actate dthyle/Eau/Acide tartrique (80/10/10)) Rf Couleur UV 366 UV 254 0 Marron fonc 0.05 visible 0.09 marron clair 0.15 visible 0.22 visible 0.36 Verte rouge 0.45 visible 0.85 visible 0.90 visible -

Tableau 14 : Les CCM de lextrait ATB (Eluant : Actate dthyle/Eau/Acide tartrique (80/10/10)) Rf Couleur UV 366 UV 254 0.1<Rf<0.17 Violet intense (tran) visible 0.25<Rf<0.36 marron clair (tran) visible -

Les analyses par CPG/SM donnent de bons rsultats pour ETB (chromatogramme 4) et pour ETF (chromatogramme 5). IV.3.4.3.2. Extraits de mthanol: Tableau 15 : Rendements des extraits de mthanol Feuilles (EMF) Rendements 5.44% Baies (EMB) 2.05%

Tableau 16 : Les CCM de lextrait EMF et EMB (Eluant : Actate dthyle/Mthanol/Eau/Acide tartrique (10/40/5/5)) Feuilles (EMF) Rf couleur 0.1<Rf<0.312 Tran marron intense Baies (EMB) 0<Rf<0.3 Tran violette intense

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Tableau 17 : Les CCM de lextrait EMF (Eluant : Actate dthyle/Mthanol (40/10)) Rf Couleur UV 366 UV 254 0<Rf<0.17 0.26 visible 0.5 visible 0.58 visible 0.66 visible 0.78 rouge 0.9 visible -

tran marron intense -

Tableau 18 : Les CCM de lextrait EMB (Eluant : Actate dthyle/Mthanol (40/10)) Rf Couleur UV 366 UV 254 0<Rf<0.1 Tran violette intense 0.28 visible 0.9 visible -

Les analyses par HPLC/SM ne donnent pas de bons rsultats pour EMF et EMB. Daprs ces rsultats, les rendements des extraits mthanoliques sont plus importants par rapport ceux obtenus par lactate dthyle. Ceci s'explique par la forte polarit du mthanol compare celle de l'actate d'thyle, qui permet d'extraire la totalit des composs prsents dans la plante. D'autre part, les rsultats rvlent aussi que les rendements obtenus partir des feuilles sont plus importants que ceux obtenus avec les baies. Remarque : Pour le cas de la HPLC/SM, nos extraits EMF, EMB, EML1F, EMP1F, EMP2F, EML2B et EMP2B ne sont pas solubles dans CH3CN/H2O, solvant utilis pour les analyses. V. Chromatographie : V.1. Fractionnement de lextrait mthanolique des baies de Sambucus nigra L. Le fractionnement de lextrait mthanolique a t effectu par chromatographie sur colonne de gel de silice. Les fractions sont regroupes en fonction de leurs Rf aprs analyse sur CCM. Lextrait des baies EML2B (2300mg) purifi par chromatographie sur colonne de silice avec un gradient de solvants actate dthyle / mthanol / eau, nous a fourni 4 fractions (FB1A, , FB1D ; F : dsigne Fraction, B : dsigne Baies, 1 : dsigne la premire colonne, AF : dsigne la position de la fraction) (tableau 19).

85

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Tableau 19 : Fractionnement de lextrait du Mthanol des Baies. Eluant 40 : 10 : 00 ; 30 : 20 : 00 20 : 30 : 00 ; 10 : 40 : 00 00 : 50 : 00 ; 00 : 40 : 10 00 : 30 : 20 ; 00 : 20 : 30 Fraction FB1A FB1B FB1C FB1D Masse (mg) 1501.3 315.7 209.5 155.8 Rendement (%) 65.27 14.16 9.10 6.77

Le bilan massique montre que 2182.2 mg ont t rcuprs sur les 2300 mg, soit un rendement de 95%. V.2. Purification de la fraction FB1A V.2.1. Etude : Une deuxime sparation chromatographique sur colonne de silice de la fraction FB1A (1500mg) a t ralise en utilisant comme luant Actate dthyle - Mthanol. Cette purification nous a permis dobtenir 7 fractions (tableau 20).

Tableau 20 : Fractionnement de la fraction FB1A. Eluant 100 : 00 ; 99 : 1 ; 97 : 3 95 : 5 ; 90 : 10 85 : 15 ; 90 :10 80 : 20 ; 70 : 30 60 : 40 ; 50 : 50 40 : 60 ; 30 : 70 20 : 80 ; 10 : 90 Fraction FB2A FB2B FB2C FB2D FB2E FB2F FB2G Masse (mg) 20.1 460.0 88.6 274.5 475.5 65.3 37.7 Rendement (%) 1.34 30.66 5.90 18.30 31.70 4.35 2.51

Le bilan massique montre que 1422.3 mg ont t rcuprs sur les 1500 mg, soit un rendement de 94%. La fraction FB2A (CCM, Eluant : Actate dthyle / Mthanol (97/3), rv. UV, Rf=0.85) se prsente sous la forme dune monotache. V.2.2. Analyses : Lanalyse par la HPLC/SM ne donne pas de rsultat car la fraction FB2A nest pas soluble dans CH3CN/H2O.

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Les rsultats des analyses par IR et RMN-1H sont les suivants : Figure 10 : Analyses IR et RMN-1H de FB2A FB2A

FB2A

16

14

12

10

-2

V.3. Purification de la fraction FB2B V.3.1. Etude : Une troisime sparation chromatographique sur colonne de silice de la fraction FB2B (460mg) en utilisant comme luant : Ether dithylique - Actate dthyle Mthanol. Cette purification nous a fourni 5 fractions (tableau 21). Tableau 21 : Fractionnement de la fraction FB2B. Eluant 40 : 10 : 00 ; 25 : 15 : 00 15 : 35 : 00 ; 05 : 45 : 00 00 : 50 :00 ; 01 : 48 : 01 00 : 45 : 05 ; 00 :40 :10 00 : 35 : 15 ; 00 : 30 : 20 Fraction FB3A FB3AB FB3B FB3BC FB3C Masse (mg) 74.2 21.1 200.2 35.7 83.5 Rendement (%) 16.13 4.58 43.52 7.76 18.15

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- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Le bilan massique montre que 414.7 mg ont t rcuprs sur les 460 mg, soit un rendement de 90%. * La fraction FB3A (CCM, Eluant : Ether dithylique / Actate dthyle/Mthanol (20/25/5), rv. UV, Rf =0.35) se prsente sous la forme dune monotache. * La fraction FB3C (CCM, Eluant : Actate dthyle / Mthanol (40/10), rv. UV, Rf=0.33) se prsente sous la forme dune monotache. * La fraction FB3B (CCM, Eluant : Actate dthyle / Mthanol (45/05), rv. UV, Rf=0.40) se prsente sous la forme dune tache importante. V.3.2. Analyses : Les analyses par la HPLC/SM ne donnent pas de rsultats car les fractions FB3A, FB3B et FB3C ne sont pas solubles dans CH3CN/H2O. Les rsultats des analyses par IR et RMN-1H sont les suivants : Figure 11 : Analyses IR et RMN-1H de FB3A, FB3B et FB3C FB3A OH : (3650 3584) cm-1 CH : 3000 cm-1 CH2 : 2926cm-1 CH3 : 2855 cm-1 C=O : 1728cm-1 C=C: 1655 cm-1 C-O: 1260 cm-1 FB3A (1.1ppm, d),(2.1ppm, s), ( 2.6ppm, d), (2.8ppm, s), (3ppm, s), (3.3ppm, s),

(3.75ppm, m), (3.8ppm, d), (4.3ppm, m), (4.5ppm, m), (4.65ppm, s), (4.8ppm, s), (6.65ppm, d), (7.5ppm, d), (7.9ppm, s)
16 14 12 10 8 6 4 2 0 -2

88

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... FB3B

FB3B

16

14

12

10

-2

FB3C

FB3C

16

14

12

10

-2

89

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... V.4. Interprtation des rsultats : Il nous t difficile de faire les analyses HPLC/SM des chantillons FB2A, FB3A, FB3B et FB3C pour cause de non-compatibilit de la colonne chromatographique, d'o la difficult de proposer des structures chimiques d'chantillons purs obtenus. Pour surmonter cette difficult, un logiciel de simulation de spectre RMN-1H, (Chem Draw) a t utilis. Pour FB3A : il s'agit de la rutine (Querctine-3-O-6-rhamnosylglucoside), (Tableau 1 chapitre III) Le spectre de simulation de la rutine donne les dplacements suivants : Figure 12 : Simulation de la Rutine

90

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ...

ChemNMR H-1 Estimation
5.0

OH
6.60 5.0 5.95

OH
6.51 6.69

5.0

HO
5.95

OH
5.0

O O

2.0 5.68

OH
3.49 2.0 2.0

O3.71 4.00

OH 2.02.0 OH OH 3.73 5.03 OH O O

3.49 3.85

3.40 3.63;3.38

3.40

OH
1.21 2.0

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

4 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node CH Shift 5.95 Base + Inc. 7.26 -0.53 -0.53 0.19 -0.44 7.26 -0.53 -0.44 0.19 -0.53 5.00 5.00 7.26 0.04 -0.17 -0.44 7.26 -0.05 -0.53 -0.17 7.26 0.04 -0.17 -0.53 5.00 5.00 1.60 1.73 0.08 -0.01 1.60 1.73 0.08 0.08 1.60 1.73 0.08 0.30 3.60 2.00 0.08 3.60 0.08 0.32 2.00 1.37 2.04 0.13 -0.04 2.00 2.00 3.60 1.35 0.08 1.60 1.73 0.32 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 3.60 0.17 0.08 1.60 1.73 0.08 -0.01 0.86 0.25 0.10 2.00 2.00 2.00 Comment (ppm rel. to TMS) 1-benzene 1 -O 1 -O 1 -C=O 1 -O 1-benzene 1 -O 1 -O 1 -C=O 1 -O aromatic C-OH aromatic C-OH 1-benzene 1 -C=C 1 -O 1 -O 1-benzene 1 -C=C 1 -O 1 -O 1-benzene 1 -C=C 1 -O 1 -O aromatic C-OH aromatic C-OH tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O-C=C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O-C=C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methine 1 beta -O-C from methine alcohol methylene 1 alpha -O-C 1 beta -O-C 1 beta -C alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine methyl 1 beta -O-C 1 beta -C-R alcohol alcohol alcohol

CH

5.95

OH OH CH

5.0 5.0 6.69

CH

6.51

CH

6.60

OH OH CH

5.0 5.0 3.40

CH

3.49

CH

3.71

CH CH

5.68 4.00

OH 2.0 CH2 3.63;3.38

OH OH CH CH

2.0 2.0 5.03 3.73

CH

3.49

CH CH

3.85 3.40

CH3 OH OH OH

1.21 2.0 2.0 2.0

91

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Pour FB3B et FB3C il s'agit des sucres car les allures de leurs spectres sont comparables ceux des glucose, galactose et xylose pour FB3B et ceux des rutinose et nohepridose pour FB3C.

Figure 13 : Simulation du galactose

ChemNMR H-1 Estimation
3.93;3.68 2.0 2.0 2.0

HO

OH 2.0 OH OH O H OH
2.0 3.49

2.0 H5.41 OH

H
3.48

3.49

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

3 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node Shift Base + Inc. 1.37 2.20 0.13 0.15 -0.04 2.00 2.00 1.60 1.73 0.08 -0.01 0.08 2.00 2.00 3.60 1.73 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 2.00 2.00 1.60 1.73 0.08 0.08 Comment (ppm rel. to TMS) methylene 1 alpha -O 1 beta -O-C 1 beta -O 1 beta -C alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine 1 beta -O from methine alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine

CH2 3.93;3.68

OH OH H

2.0 2.0 3.48

OH OH H H

2.0 2.0 5.41 3.49

OH OH H

2.0 2.0 3.49

92

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Figure 14 : Simulation du glucose

ChemNMR H-1 Estimation

2.0 HO 3.79;3.54 3.40 2.0 HO 2.0 HO 3.49O 3.76 3.49 5.41 OH 2.0

OH

2.0

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

3 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node CH Shift 3.40 Base + Inc. 1.60 1.73 0.08 -0.01 1.60 1.73 0.08 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 3.60 1.73 0.08 3.60 0.08 0.08 2.00 2.00 1.37 2.20 0.13 -0.04 2.00 2.00 2.00 Comment (ppm rel. to TMS) tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine alcohol alcohol methylene 1 alpha -O 1 beta -O-C 1 beta -C alcohol alcohol alcohol

CH

3.49

CH

3.49

CH CH

5.41 3.76

OH 2.0 OH 2.0 CH2 3.79;3.54

OH OH OH

2.0 2.0 2.0

93

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Figure 15 : Simulation du xylose
ChemNMR H-1 Estimation
3.41 2.0 HO 2.0 HO 3.49O 3.88;3.63 3.49 5.41

OH 2.0 OH
2.0

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

3 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node CH CH Shift 3.41 3.49 Base + Inc. 1.60 1.73 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 3.60 1.73 0.08 3.60 0.15 2.00 2.00 2.00 2.00 Comment (ppm rel. to TMS) tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methylene alcohol alcohol alcohol alcohol

CH

3.49

CH

5.41

CH2 3.88;3.63 OH OH OH OH 2.0 2.0 2.0 2.0

94

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Figure 16 : Simulation du rutinose
ChemNMR H-1 Estimation
3.63;3.38

O 3.40
1.21 2.0 HO 3.85 3.49 3.49O

OH

2.0

5.03 HO

4.00 3.49 5.41 OH 2.0

HO 3.40
2.0

HO 2.0 3.73 2.0 OH

2.0

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

3 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node CH Shift 3.40 Base + Inc. 1.60 1.73 0.08 -0.01 1.60 1.73 0.08 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 3.60 1.73 0.08 3.60 0.08 0.32 2.00 2.00 1.37 2.04 0.13 -0.04 2.00 2.00 3.60 1.35 0.08 1.60 1.73 0.32 0.08 1.60 1.73 0.08 0.08 3.60 0.17 0.08 1.60 1.73 0.08 -0.01 0.86 0.25 0.10 2.00 2.00 2.00 Comment (ppm rel. to TMS) tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methine 1 beta -O-C from methine alcohol alcohol methylene 1 alpha -O-C 1 beta -O-C 1 beta -C alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine methyl 1 beta -O-C 1 beta -C-R alcohol alcohol alcohol

CH

3.49

CH

3.49

CH CH

5.41 4.00

OH 2.0 OH 2.0 CH2 3.63;3.38

OH OH CH CH

2.0 2.0 5.03 3.73

CH

3.49

CH CH

3.85 3.40

CH3 OH OH OH

1.21 2.0 2.0 2.0

95

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... Figure 17 : Simulation du nohepridose
ChemNMR H-1 Estimation
3.79;3.54 2.0 HO 3.40 2.0 HO 2.0 HO 3.73 3.11O 3.76 3.73

OH

2.0

O5.65

3.41

3.88;3.63 2.0 2.0 HO

HO

5.03 OH

2.0

3.49

Estimation Quality: blue = good, magenta = medium, red = rough

3 PPM

Protocol of the H-1 NMR Prediction: Node CH Shift 3.40 Base + Inc. 1.60 1.73 0.08 -0.01 1.60 1.73 0.08 0.32 1.60 1.35 0.08 0.08 3.60 1.73 0.32 3.60 0.08 0.08 2.00 1.37 2.20 0.13 -0.04 2.00 2.00 2.00 3.60 1.35 0.08 1.60 1.73 0.32 0.08 3.60 0.15 1.60 1.73 0.08 0.08 1.60 1.73 0.08 2.00 2.00 2.00 Comment (ppm rel. to TMS) tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O-C from methine tetrahydropyran 1 alpha -O-C from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O-C from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine alcohol methylene 1 alpha -O 1 beta -O-C 1 beta -C alcohol alcohol alcohol tetrahydropyran 1 alpha -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O-C from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 beta -O from methylene tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine 1 beta -O from methine tetrahydropyran 1 alpha -O from methine 1 beta -O from methine alcohol alcohol alcohol

CH

3.73

CH

3.11

CH CH

5.65 3.76

OH 2.0 CH2 3.79;3.54

OH OH OH CH CH

2.0 2.0 2.0 5.03 3.73

CH2 3.88;3.63 CH 3.49

CH OH OH OH

3.41 2.0 2.0 2.0

96

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ... VI. Conclusion : Les rsultats obtenus des diffrents modes dextractions et danalyses ont bien confirm la prsence de composs volatiles, des flavonodes, des anthocyanosides et des sucres. Ainsi, leurs effets souponns seront vrifis par des tests dactivit antimicrobienne.

97

- Chapitre V : ESSAIS D'EXTRACTION ET DE PURIFICATION DES PRINCIPES ACTIFS ...

Bibliographie
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99

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ...

Activit antibactrienne
I. Introduction : Les bactries sont des micro-organismes unicellulaires classs parmi les procaryotes, car ils ne possdent pas de membrane nuclaire. Ce caractre les distingue des autres organismes unicellulaires classs parmi les eucaryotes (champignons, algues, protozoaires). On distingue aussi les bactries proprement dites (Bacteria) des bactries primitives (Archaea). Toutes les bactries rencontres en pathologie appartiennent aux Bacteria. Les bactries ont gnralement un diamtre infrieur 1mm. On peut les voir au microscope optique, ltat frais ou aprs coloration. Leur forme peut tre sphrique (cocci), en btonnet (bacilles), incurve (vibrions) ou spirale (spirochtes). Les dtails de leur structure ne sont visibles quen microscopie lectronique [1]. II. Structure bactrienne : De faon gnrale, une bactrie se compose de : [2] Cytoplasme : le cytoplasme des bactries contient de nombreux ribosomes et un chromosome fait dADN double brin, en gnral unique, circulaire. Membrane Cytoplasmique : elle contrle les changes de la cellule avec lextrieur et contient le systme de transport des lectrons. Paroi : cest une structure rigide, responsable de la forme des bactries, et leur permettant de rsister la lyse osmotique. Elle est prsente chez toutes les bactries, lexception des mycoplasmes. Sa structure varie selon les bactries et conditionne leur aspect aprs la coloration de Gram. Au cours de cette coloration, les bactries sont traites dans un premier temps par du violet de gentiane (et du lugol), puis de lalcool et enfin de la fuchsine. Les bactries dont la paroi rsiste lalcool restent colores par le violet de gentiane et sont dites Gram positif. Les bactries dont la paroi est permable lalcool perdent leur coloration par le violet de gentiane et sont colores en rouge par la fuchsine, ce sont les bactries Gram ngatif. Capsule : certaines bactries possdent une capsule recouvrent la paroi. Cest une structure, souvent paisse, entourant la bactrie. Appendices : certaines bactries peuvent se dplacer dans un milieu liquide grce des flagelles de nature protique. Certaines bactries possdent galement des pili (ou fimbriae). Ce sont des lments rigides plus courts que les flagelles, de nature

100

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... protique. Ils peuvent intervenir dans les interactions avec dautres bactries ou avec des cellules eucaryotes. Spores : certaines bactries Gram positif, en particulier des bactries du sol, sont capables de se diffrencier en spores lorsquelles se trouvent dans des conditions dfavorables. Les spores rsistent la dessiccation et la chaleur. Elles peuvent persister trs longtemps dans lenvironnement. Leur rsistance la chaleur explique les tempratures quil faut atteindre au cours des procdures de strilisation (120C en chaleur humide). Dans des conditions favorables les spores redonnent naissance des formes vgtatives. De faon gnrale, la cellule animale par sa petite taille, par la prsence dune paroi rigide contenant un polymre particulier, le peptidoglycane, par le caractre haplode de son gnome, par labsence de mitochondries. La coloration de Gram permet de sparer les bactries en deux catgories dont la paroi est de structure diffrente. Certaines espces bactriennes peuvent possder une capsule, des flagelles, des pili. Enfin certaines espces peuvent se diffrencier en spores. III. Croissance bactrienne : Les bactries se divisent par scissiparit, un rythme qui peut tre trs rapide lorsque les conditions sont favorables. III.1. Culture des bactries : On utilise habituellement pour cultiver les bactries des milieux complexes base dextraits ou dhydrolysats enzymatiques de viandes. Ces milieux peuvent tre liquides (bouillons) ou solides. La solidification des milieux et obtenue par laddition de glose, un extrait dalgues qui a la proprit de fondre lbullition et se solidifier des tempratures infrieures 40C. En milieu liquide, les bactries se dispersent librement et leur multiplication se traduit par un trouble, le plu souvent homogne. Sur un milieu solide, lorsque la quantit de bactries est faible, chaque bactrie va pouvoir se multiplier sur place jusqu former un amas de bactries visible lil nu, que lon appelle colonie (Si la densit bactrienne est trop leve dans lchantillon ensemenc, les colonies sont confluentes et forment une nappe.). Lemploi de milieux solides permet ainsi le dnombrement des bactries viables dans un chantillon [3].

101

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... III.2. Besoins nutritifs : Ils sont trs variables suivant les bactries, mais certains besoins de base sont communs. 1. Eau ; 2. Ions : principalement K+, Mg2+ et phosphates ; 3. Lazote et le soufre sont apports, selon les cas sous forme minrale ou organique ; 4. Source de C : certaines bactries de lenvironnement peuvent utiliser le CO2 atmosphrique et, partir de ce dernier et dlments minraux, synthtiser tous leurs composants. Ces bactries sont dites autotrophes. Les bactries que lon rencontre en pathologie sont des bactries htrotrophes, cest--dire des bactries ayant besoin dun apport de C sous forme organique, en gnral sous forme de sucre. 5. Oligolments : fer en particulier, mais aussi Co2+, Mn2+, Zn2+ ; 6. Facteurs de croissance : certaines bactries sont capables de raliser toutes leurs synthses avec les lments numrs ci-dessus. Dautres restent incapables de synthtiser certains constituants, un acide amin ou un coenzyme par exemple. Ces constituants doivent alors tre prsents dans le milieu de culture pour permettre la croissance bactrienne. La plupart des bactries peuvent tre cultives sur des milieux artificiels liquides ou solides. Mais les conditions permettant la croissance varient beaucoup selon les bactries. Il nexiste pas une condition de culture standard permettant la croissance de toutes les bactries que lon peut rencontrer en pathologie [4]. IV. Classification et identification des bactries : Une classification des bactries est ncessaire la communication scientifique. Les bactries sont classes selon une nomenclature internationale. Elles sont dsignes par deux mots latins crits en italique : le premier, commenant par une majuscule, dsigne le genre, le second, commenant par une minuscule, caractrise lespce (par exemple Staphylococcus aureus). En pratique, on utilise aussi des termes communs tels que staphylocoque, colibacille, etc. IV.1. Classification : La classification des bactries (taxonomie) a dabord t fond sur ltude de leurs caractres phnotypiques, puis de leurs caractres gnotypiques.

102

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... IV.1.1. Caractres phnotypiques : Morphologie : forme de la bactrie, mobilit ventuelle traduisant la prsence de flagelles, disposition des flagelles, prsence ventuelle de spores, coloration de Gram, aspect des colonies, etc. Proprits biochimiques : relation avec loxygne, utilisation de diffrentes sources de carbone, besoin en facteurs de croissance. Nature des antignes de surface. Sensibilit aux antibiotiques. Plus rarement on utilise : La sensibilit des bactriophages ; Lanalyse des constituants de la paroi ; Lanalyse chromatographique de constituants ou de mtabolites de la bactrie (en phase gazeuse ou en phase liquide). Les bactries ayant un grand nombre de caractres en communs constituent une espce. Au fur et mesure que le nombre de caractres diminue entre les groupes de bactries, on les spare en genres, tribus, familles, etc. Les frontires entre ces diffrentes catgories restent arbitraires et sont donc sujettes des remises en cause [5]. IV.1.2. Caractres gnotypiques : Ils reposent sur ltude du gnome. La composition en bases de lADN (GC %) peut varier selon les espces. La mesure du pourcentage dhomologie de lADN avec une souche de rfrence (dtermin par hybridation) est une mthode qui a t trs utilise en taxonomie. On considre que des souches ayant plus de 70% dhomologie appartiennent la mme espce. Ce critre a conduit modifier des classifications qui avaient t tablies en fonction de caractres phnotypiques. Le squenage du gne de lARN ribosomal 16S, gne qui comporte des rgions conserves et des rgions variables, est galement trs employ pour la classification des bactries [6]. IV.2. Identification : Ltude de caractres phnotypiques est la mthode la plu utilise en routine. Mais dans certains cas, des mthodes gnotypiques peuvent tre utilises dans un but diagnostique pour identifier des bactries provenant de patients.

103

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... En gnral, on utilise ces techniques pour confirmer ou infirmer une infection due une bactrie donne (par exemple Mycobacterium tuberculosis, Chlamydia trachomatis). Elles sont surtout utiles pour des bactries de croissance lente ou difficile [6]. V. Facteurs de pathognicit : [4] On dsigne comme pathognes les bactries capables de provoquer une maladie chez des sujets dont les mcanismes de dfense sont normaux. Toutefois des bactries classes comme pathognes peuvent tre hberges sans produire de maladie. Les sujets qui les hbergent sont appels porteurs sains. Dautres bactries sont prsentes sur le revtement cutano-muqueux sans provoquer habituellement de dommage pour lhte. Il peut sagir de bactries dont la prsence est habituelle (bactries commensales) ou de bactries de lenvironnement dont la prsence nest que transitoire (bactries saprophytes). Certaines de ces bactries peuvent cependant devenir pathognes lorsque les dfenses de lhte sont affaiblies, ce sont des bactries opportunistes. Lorsque lon dispose de modles exprimentaux, on peut apprcier la virulence des bactries, en dterminant par exemple la dose ltale pour 50% des animaux (DL50) ce qui permet de quantifier leur degr de pathognicit. Les bactries pathognes sont capables denvahir lorganisme et de sy multiplier, en gnral dans un site privilgi. Pour cela elles ont besoin darmes offensives leur permettant de franchir les barrires anatomiques (les muqueuses le plus souvent) et ventuellement dagresser lhte par la libration de substances nocives (les toxines). Elles ont aussi besoin darmes dfensives pour chapper aux mcanismes de dfense de lhte (phagocytes, complment). Enfin elles ont besoin de trouver les nutriments ncessaires leur multiplication. Le pouvoir pathogne des bactries dpend donc gnralement de nombreux facteurs. Certains facteurs de pathognicit sont cods par des gnes extrachromosomiques (situs sur des plasmides ou des prophages), do leur caractre inconstant dans lespce. Dans certaines espces bactriennes les gnes chromosomiques codant pour des facteurs de pathognicit peuvent tre regroups dans une rgion que lon appelle lot de pathognicit. Ces segments dADN semblent avoir t acquis au cours de lvolution, par transfert horizontal. On peut parfois trouver en effet des homologies de squence dans des lots de pathognicit appartenant des espces diffrentes. Dans une espce bactrienne donne les facteurs de pathognicit sont loin dtre rpartis de manire gale. Cela explique qu lintrieur dune mme espce, comme Escherichia coli par exemple, le pouvoir pathogne varie de manire importante suivant les souches. 104

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... Lexpression de certains facteurs de pathognicit peut tre rgule par des signaux provenant de lenvironnement de la bactrie tels que la temprature, la concentration en fer, en calcium ou en oxygne, le contact avec une cellule eucaryote. De faon gnrale, les facteurs permettant certaines bactries dexercer un pouvoir pathogne sont multiples. On peut distinguer schmatiquement les facteurs permettant la bactrie de simplanter (facteurs dadhsion et ventuellement dinvasion cellulaire, captation des nutriments), les facteurs permettant dchapper aux dfenses de lhte et enfin les facteurs dagression (toxines). La rpartition des facteurs de pathognicit peut varier lintrieur dune espce, selon les souches. VI. Mcanismes de dfense contre les bactries : Ds la naissance lhomme se trouve en contact avec des bactries qui progressivement coloniser son revtement cutano-muqueux. Pour rsister aux bactries de nombreux moyens sont mis en jeu. On peut schmatiquement en distinguer 3 groupes : les barrires anatomiques (la peau, les muqueuses), les mcanismes de rsistance naturelle (ou inns) et limmunit acquise. Les mcanismes de dfense contre les bactries reposent sur les barrires cutanomuqueuses, puis sur les mcanismes naturels mettant en jeu des rcepteurs solubles (comme le complment) et membranaires, capables de reconnatre un certain nombre de motifs habituellement prsents sur les bactries. Ces mcanismes permettent de recruter et dactiver les cellules phagocytaires. Limmunit acquise se dveloppe plus tardivement et fait intervenir des rcepteurs rpartis de manire clonale sur les lymphocytes. Elle se traduit par la production danticorps (active surtout contre les pathognes extracellulaires) et une rponse cellulaire (active contre les pathognes intracellulaires). Limmunit acquise comporte une mmoire et cette proprit est la base de la vaccination [7, 8]. VII. Epidmiologie des infections bactriennes : Les tudes pidmiologiques, dans le domaine des maladies infectieuses, visent dterminer les mcanismes de transmission des agents infectieux et les facteurs qui favorisent la survenue de maladies chez les sujets contamins. Le rsultat de ces tudes peut permettre de mettre en place des mesures prventives. Les tudes pidmiologiques visent dterminer le mode de transmission des bactries, soit dans la communaut, soit dans les tablissements de sant. Lorsque plusieurs sujets sont infects par une mme espce bactrienne, la preuve dune origine commune peut tre apporte par la dmonstration que les diffrents isolats sont identiques. On sappuie pour

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... cela sur lanalyse de marqueurs pidmiologiques, qui peuvent tre phnotypiques ou gnotypiques [9]. VIII. Actions des antibiotiques sur les bactries : Les antibiotiques antibactriens sont des molcules qui inhibent slectivement certaines voies mtaboliques des bactries, sans exercer habituellement deffets toxiques pour les organismes suprieurs. Cette proprit les distingue des antiseptiques. Les antibiotiques, au sens strict, sont des produits labors par des micro-organismes, mais on inclut gnralement parmi eux les drivs semisynthtiques et les produits entirement synthtiques. Lactivit des antibiotiques in vitro peut tre mesure en dterminant leur capacit dinhiber la croissance bactrienne (concentration minimale inhibitrice ou CMI) ou leur capacit de tuer les bactries (bactricidie). Laction des antibiotiques est influence par de nombreux facteurs : concentration bactrienne, milieu, interaction avec un autre antibiotique, etc. en outre lactivit in vivo est influence par des donnes pharmacologiques, de conditions locales particulires [4]. IX. Principales familles dantibiotiques et leur mode daction : [10,11] La plupart des antibiotiques inhibent des voies mtaboliques de la bactrie. Chaque famille dantibiotique possde son site daction propre. - Les antibiotiques agissant sur la synthse du peptidoglycane comprennent les lactamines, les glycopeptides et la fosfomycine. - Les antibiotiques agissant sur la synthse protique comprennent les aminosides, les ttracycline, les macrolides et apparents et lacide fusidique. - Les antibiotiques agissant sur les acides nucliques comprennent les sulfamides, le trimthoprime, les quinolones, les nitro-imidazoles et les rifamycines. - Les polymyxines agissent au niveau des membranes. X. Mcanismes de rsistances aux antibiotiques : La rsistance aux antibiotiques peut tre naturelle ou acquise ; la rsistance naturelle est prsente chez tous les membres dune mme espce ou dun mme genre bactrien. Elle est lie son patrimoine gntique. La rsistance acquise rsulte dune modification du patrimoine gntique. Il peut sagir dune mutation qui peut entraner, par exemple, une modification de la cible de antibiotique ou bien diminuer sa pntration. Le plus souvent, il sagit de lacquisition de lADN tranger pouvant provenir de la mme espce ou despces bactriennes diffrentes. Lacquisition dADN se fait le plu souvent par conjugaison. Elle se fait alors par lintermdiaire de plasmides ou de transposons conjugatifs qui peuvent porter un ou plusieurs gnes de rsistance. Dans certaines espces, comme le pneumocoque et les 106

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... Neisseria, lacquisition dADN peut se faire par transformation. Le transfert de gnes de rsistance par lintermdiaire dun bactriophage (transduction) est rare. Lacquisition de mcanismes de rsistance aux antibiotiques a une expression phnotypique variable. Dans la majorit des cas, elle est dtectable par les mthodes habituelles de dtermination de la sensibilit des bactries aux antibiotiques. Lorsque le niveau de rsistance est faible, la bactrie peut apparatre sensible par les critres habituels. La lecture interprtative de lantibiogramme permet de corriger la rponse [4]. On peut classer les mcanismes de rsistance en 4 groupes : Linactivation de lantibiotique ; La modification de la cible ; La diminution de la permabilit membranaire ; Lexcrtion de lantibiotique.

XI. Diagnostic biologique des infections bactriennes : Le diagnostic biologique des infections bactriennes repose avant tout sur la mise en vidence de la bactrie responsable. La mthode de rfrence est lisolement de la bactrie par culture, suivie de son identification. Dans certains cas, la bactrie peut tre caractrise par la mise en vidence dantignes spcifiques (par des mthodes immunologiques) ou de squences spcifiques (par des mthodes de biologie molculaire). Des arguments diagnostiques peuvent galement tre apports par ltude de la rponse immunitaire du patient (production danticorps, hypersensibilit retarde). Dans tous les cas, les rsultats, quils soient positifs ou ngatifs, doivent tre interprts en fonction du contexte clinique [12]. XII. Principales bactries en cause dans diffrents syndromes cliniques : XII.1. Infections des voies respiratoires : XII.1.1. Angine : - Angine rythmateuse ou rythmato-pultace : Streptococcus pyogenes ; - Angine fausses membranes : Corynebactetium diphteriae. XII.1.2. Otite moyenne : - Streptococcus pneumoniae ; Haemophilus influenzae ; Moraxella catarrhalis. XII.1.3. Sinusite : - Streptococcus pneumoniae ; Haemophilus influenzae ; Moraxella catarrhalis ;

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... Plus rarement : Streptococcus pyogenes ou streptocoques on hmolytiques, Anarobies de la flore endogne, Traphylococcus aureus, Bacilles Gram ngatif.

XII.1.4. Pneumonie communautaire : - Streptococcus pneumoniae (plus de 50% des cas) ; Haemophilus influenzae ; Mycoplasma pneumoniae ; Legionella pneumophila (2 5% des cas) ; Chlamydia pneumoniae ; Chlamydia psittaci (rare) ; Coxiella burnetii ; Staphylococcus aureus ; Klebsiela pneumoniae. XII.1.5. Surinfection chez un sujet ayant une broncho-pneumopathie chronique : - Streptococcus pneumoniae ; Haemophilus influenzae ; Moraxella catarrhalis ; Pseudomonas aeruginosa ; Staphylococcus aureus (plus rarement). XII.2. Infection urinaire (communautaire) : - Echerichia coli. XII.2.1. Urrite aigu - Neisseria gonorrhoeae ; Chlamydia trachomatis. XII.2.2. Intoxication alimentaire: - Salmonella non typhi ; Staphylococcus aureus ; Closridium perfringens. XII.2.3. Diarrhe aigu (en dehors des intoxications alimentaires collectives) : - Campylobacter ; Salmonella non typhi ; Shigella ; Escherichia coli ; Yersinia ; Clostridium difficile ; Vibrio cholerae. XII.3. Infection cutane : - Folliculite, furoncle, anthrax : Staphylococcus aureus ; - Imptigo : Streptococcus pyogenes ou Staphylococcus aureus ; - Erysiple : Streptococcus pyogenes ; - Panaris : Staphylococcus aureus ; - Syndrome de la peau bouillante : Staphylococcus aureus ; - Syndrome de Ritter : Staphylococcus aureus ; - Circonstances tiologiques particulires : Pasteurella multocida, Erysipelothrix rhusiopathiae, Mycobacterium marinum.

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... XII.4. Infection des parties molles : - Cellulite : Streptococcus pyogenes ; - Gangrne gazeuse avec myosite : Clostridium perfringens. XII.4.1. Ostite (primitive) : XII.4.1.1. Aigu : 1. Enfant : - Staphylococcus aureus ; Parfois : streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes. 2. Adulte : - Staphylococcus aureus ; Parfois : Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus, bacilles Gram ngatif. XII.4.1.2. Subaigu ou chronique : - Mycobacterium tuberculosis ; Brucella. XII.4.2. Arthrite septique (primitive) : XII.4.2.1. Aigu : 1. Enfant : - Staphylococcus aureus ; Haemophilus influenzae ; Streptococcus agalactiae ; pneumoniae ou pyogenes ; Enterobactries (Echerichia coli, Salmonella) ; Kingella kingae. 2. Adulte: - Staphylococcus aureus ; Neisseria gonorrhoeae ; Plus rarement : Streptococcus, bacilles Gram ngatif, Borrelia burgdorferi. XII.4.2.2. Forme chronique : - Mycobacterium tuberculosis ; - Brucella. XII.4.3. Adnite localise : - Staphylococcus aureus ; Streptococcus pyogenes ; Plus rarement : Mycobacterium tuberculosis ou mycobactries atypiques. XII.4.4. Mningite : XII.4.4.1. Priode nonatale : - Streptococcus agalactiae ; Escherichia coli ; Listeria monocytogenes. XII.4.4.2. Enfant et adulte : - Streptococcus pneumoniae ; Neisseria meningitidis ; Haemophilus influenzae ; Plus rarement : Listeria monocytogenes, Mycobacterium tuberculosis, Borrelia burgdorferi, Treponema pallidum. 109

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... XII.4.5. Endocardite: - Streptocoques oraux ; Enterococcus ; Staphylococcus epidermidis ; Staphylococcus aureus ; Rarement : Coxiella burnetti. XII.5. Infections nosocomiales : - Entrobactries (Echerichia coli et surtout autres espces appartenant aux genres Proteus, Providencia, Morganella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter) ; Staphylococcus Acinetobacter ; aureus ; Staphylococcus cepacia ; epidermidis ; Pseudomonas maltophilia ; aeruginosa ; Legionella

Burkhulderia

Stenotrophomonas

pneumophila (pneumopathies). XII.6. Infections bactriennes favorises par un dficit en immunoglobulines ou en complment: - Streptococcus pneunoniae ; Neisseria meningitidis ; Haemophilus influenzae. XII.7. Infections bactriennes favorises par un dficit de limmunit cellulaire : - Mycobacterium tuberculosis ; Mycobactries atypiques ; Salmonella ; Listeria monocytogenes ; Legionella pneumophila ; Plus rarement : Nocardia, Rhodococcus equi. XIII. Etude de lactivit antibactrienne : Notre travail consiste tudier lactivit antibactrienne de nos chantillons, ainsi, les flavonodes (feuilles et baies), les anthocyanosides (baies) et la vitamine C (baies) sont tests sur diffrentes souches bactriennes (des souches de rfrence pour la plus part). XIII.1. Mthode utilise : La mthode utilise est la mthode de VINCENT (JACOBETAL, 1979), ainsi des disques, de papier filtre de 3mm de diamtre, sont imprgns dune faible quantit de nos chantillons, puis dposs la surface dun milieu de MUELLER-HINTON, coul en boite de Ptri pralablement ensemence en surface en nappe laide dune suspension de la bactrie tudie. Aprs incubation, la lecture des rsultats se fait par la mesure du diamtre, en mm, de la zone dinhibition. Pour la prparation des inoculums, on a utilis la mthode dite dantibiogramme (mthode de la SFM Socit Franaise de Microbiologie). La technique dantibiogramme utilise est celle de la diffusion de disques en glose conus par CHABBET en 1973.

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... XIII.1.1. Prparation des inoculums : La mthode de prparation des inoculums est celle prconise par la SFM (communiqu de 2005) qui consiste prparer, partir dune culture de 18-24h de la bactrie tudie sur le milieu glos, une suspension en solution saline (0.9% NaCl) quivalente au standard McFARLAND 0.5 (~ 108 UFC/ml). Cette suspension peut tre obtenue par la mesure de la densit optique (D.O) allant de 0.08 0.1 lue 625nm (standardisation de lantibiogramme selon lOMS, 1999). Par la suite, on prend 1ml de la suspension de linoculum, on ltale par inondation la surface dune boite de Ptri contenant de la glose de MUELLER-HINTON, on dverse lexcs, ce qui correspond une densit de 106 108 UFC/ml et on laisse scher la boite de Ptri dans la zone septique du bec Bunsen. XIII.1.2. Distribution des disques : A laide dun distributeur de disques, les diffrents disques des antibiotiques sont placs sur la glose sche dans des boites Ptri, puis les boites sont laisses durant 20 minutes la temprature ambiante pour permettre la diffusion de lchantillon. Elles sont ensuite mises ltuve 37C pendant 18 25h. La lecture se fait par la mesure du diamtre de la zone dinhibition, puis compare aux tableaux de lecture de la SFM (2005). Les tableaux de lecture de la SFM permettent de dfinir si la souche tudie est rsistante ou sensible aux antibiotiques. XIII.2. Souches de rfrence : Durant notre tude, plusieurs souches bactriennes seront tudies, pour la plus part sont des souches de rfrence c--d, des souches pralablement dtermines, ainsi, pour leurs culture on ne ralise que la coloration de gram pour voir si ces des gram (+) ou (-). Dautre culture par contre, sont issue de souche sauvage dorigine environnementale (du CHU de Tlemcen). Pour ces cultures, une identification de la souche est obligatoire, ainsi les diffrents tests didentification sont raliss : plaque Api 20E, ODC, Mannitol mobilit, Oxydase, Catalase (H2O2), Indol, LDC, ADH, TSI, Coagulase etc., et enfin la coloration de gram. XIII.3. Rsultats : Remarque : pour toutes les cultures, on utilise le milieu de MUELLER-HINTON (Glose), sauf dans le cas des Pseudomonas, ou on utilise le milieu de CHAPMAN.

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... - Milieu de MUELLER-HINTON : (g/l) pH = 7.4

Macration de viande de buf 300ml Hydrolysat Amidon Agar 17.5g 1.5g 10g

- Milieu de CHAPMAN : (g/l) pH = 7.6 7.8 Peptone Extrait de viande NaCl Mannitol Agar Rouge de phnol XIII.3.1. Coloration de gram : Durant notre travail et suite leurs identifications, 14 souches bactriennes seront tudies. Tableau 22 : Identification des bactries Rfrence Bactries Coloration de Gram Souches de rfrence 25923 27853 25922 29213 29619 43300 25913 43866 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) Streptococus pneumoniae Staphylococus aureus Violette Violette Cocci Cocci Gram (+) Gram (+) Staphylococus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Violette Rose Rose Cocci Bacille Bacille Gram (+) Gram (-) Gram (-) Type de Gram 11g 1g 75g 10g 15g 0.025g

Souches sauvages (Prlvement) Sal* P1 S2 S3 S4 S5 Salmonela typhi Pseudomonas aeruginosa Staphylococus aureus Staphylococus aureus Staphylococus aureus Staphylococus aureus Rose Rose Violette Violette Violette Violette Bacille Bacille Cocci Cocci Cocci Cocci Gram (-) Gram (-) Gram (+) Gram (+) Gram (+) Gram (+)

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... XIII.3.2. Etude des antibiogrammes : Les antibiotiques utiliss sont sous forme de disque de 4mm de diamtre : OX (Oxacilline) 5g, E (Erythromycine) 15g, VA (Vancomycine) 30g, RIF (Rifampicine) 30g, OFX (Ofloxacine) 5g, PEF (Pefloxocine) 5g, AN (Amikacine) 30g, NA (Acide nalidixique) 30g, TIC (Ticarcilline) 75g, TOB ou TM (Tobramycine) 10g, GM (Gentamicine) 10g, AMC (Amoxicilline + acide clavulanique) 20g, CZ (Cefazoline) 30g, AMP (Ampicilline) 10g, SXT (Cotrimoxazole) 23g, FT (Nitrofuranes) 300g, C (Chloramphnicol) 30g.

Tableau 23 : Rsultats des antibiogrammes AN 25922 Sal* 29213 29619 43300 25913 16 13 18 24 9 16 OX 25923 43866 S2 S3 S4 S5 P1 27853 24 16 <4 <4 <4 16 E 14 <4 <4 7 <4 18 AMC <4 <4 <4 <4 <4 <4 VA 8 11 12 <4 <4 10 CZ 13 10 26 21 16 24 RIF 19 27 15 7 11 18 AMP 8 8 24 21 <4 22 OFX 18 17 17 21 21 15 16 14 AN 6 14 15 17 15 20 11 13 SXT 14 12 18 19 16 15 NA 16 <4 <4 16 15 <4 FT 12 11 12 16 14 11 PEF 10 9 NA 20 13 9 <4 9 8 TIC <4 <4 TOB 13 15 C 17 GM 10 12

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ...

Figure 18 : Tests dantibiogramme La comparaison des rsultats trouvs avec ceux des tableaux de la SFM permet de conclure que toutes les cultures des souches utilises sont rsistantes aux antibiotiques. Il est bien vident que si on veut savoir si nos extraits ont une activit antibactrienne, il faut les tester sur des souches rsistantes et non pas sensibles. Ainsi, on peut utiliser ces 14 souches lors de notre travail. XIII.3.3. Tests dactivit antibactrienne : Aprs la caractrisation des diffrentes souches bactriennes, on procde ltude de lactivit de nos chantillons. Ainsi, on prpare des concentrations proches de celles des antibiotiques utiliss dans les antibiogrammes afin de pouvoir comparer les diamtres dinhibition de nos chantillons ceux des antibiotiques. Lord de cette tude, les chantillons ETF, ETB, EML2B, EML1F, ANB, ANF et la Vitamine C, seront tests. Les concentrations sont : ETF (40 g/l), ETB (30 g/l), EML2B (35 g/l), EML1F (46 g/l), ANF (1.5 g/l), ANB (5 g/l), Vitamine C (50 g/l). Pour chaque chantillon, on dpose 20l de solution sur un disque en papier filtre de 3mm de diamtre. Les rsultats sont rcapituls dans le tableau suivant :

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... Tableau 24 : Diamtres dinhibitions des souches par les diffrents chantillons ETF 25923 27853 Sal* 43300 25913 29213 49619 25922 43866 P1 S2 S3 S4 S5 8 24 <3 8 5 6 9 <3 <3 4 5 <3 <3 <3 ETB 6 17 5 7 5 6 10 4 <3 <3 5 <3 <3 7 EML2B <3 4 6 <3 5 5 12 5 6 <3 5 <3 5 <3 EML1F <3 5 <3 5 <3 4 7 5 7 <3 6 <3 <3 <3 ANF 7 26 <3 <3 4 <3 <3 <3 7 <3 10 <3 <3 6 ANB 7 20 <3 6 4 4 8 <3 <3 <3 5 <3 <3 <3 Vitamine C 12 9 6 10 12 11 8 8 12 8 18 17 9 10

On remarque la prsence dune activit faible pour la plupart de nos chantillons sur la plus part des souches bactriennes. Ceci nous pousse tudier leffet de synergie entre nos diffrents extraits.

Figure 19 : Test dactivit antibactrienne des diffrents extraits

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... XIII.3.3.1. Etude des diffrents mlanges de produits : Mlange des diffrents extraits et la vitamine C : Pour chaque disque, on dpose 15l de lchantillon + 15l de la vitamine C sur un disque en papier filtre de 3mm de diamtre. Les rsultats sont dans le tableau suivant : Tableau 25 : Diamtres dinhibitions des souches par les mlanges avec la vitamine C ETF+ VC 25923 27853 Sal* 43300 25913 29213 49619 25922 43866 P1 S2 S3 S4 S5 24 08 08 10 10 10 12 08 14 12 14 10 09 13 ETB+ VC 27 12 12 13 12 13 12 10 15 15 18 12 10 16 EML2B+ VC 21 08 06 09 08 07 08 07 09 09 14 08 06 16 EML1F+ VC ANF+ VC 16 10 06 08 09 08 09 06 08 09 10 08 07 13 23 09 07 10 10 11 12 08 11 12 13 09 08 14 ANB+ VC 26 08 06 09 11 11 12 07 11 12 14 10 08 14

Figure 20 : Tests dactivit antibactrienne des mlanges dchantillons

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... Daprs ces rsultats, le mlange de nos chantillons avec la vitamine C donne de meilleurs rsultats que celui des chantillons seuls. On remarque que le mlange (ETB + Vitamine C) a donn les meilleurs rsultats. Pour la plupart des chantillons, on a un effet de synergie avec la vitamine C, sauf dans le cas de la souche 27853, S2 et S3 ou on a un effet inverse des chantillons sur la vitamine C, ou de la vitamine C sur les chantillons (il y a un effet antagoniste). Autres mlanges : On ralise les mlanges suivants : ETF + EML1F + ANF : (10 + 10 + 05) l ETB + EML2B + ANB : (10 + 05 + 10) l ETF + EML1F + ANF + Vitamine C : (10 + 10 + 05 + 10) l ETB + EML2B + ANB + Vitamine C : (10 + 05 + 10 + 10) l.

Tableau 26 : Diamtres dinhibitions par les diffrents mlanges dune mme partie de la plante ETF+EML1F+ANF ETB+EML2B+ANB 25923 27853 Sal* 43300 25913 29213 49619 25922 43866 P1 S2 S3 S4 S5 08 06 05 07 06 07 07 06 09 07 08 07 06 07 08 06 07 07 08 08 07 07 11 07 09 11 06 07 ETF+EML1F +ANF+VC 11 07 07 07 08 08 08 06 11 07 13 14 07 07 ETB+EML2B +ANB+VC 15 09 08 08 09 09 08 07 13 08 17 18 07 08

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ... On remarque que de faon gnrale, il ny a pas deffet de synergie, sauf pour S2 et S3 dans le cas du mlange ETB + EML2B + ANB + Vitamine C. Il y a aussi un faible effet de synergie pour 25923, dans le cas du mme mlange ETB + EML2B + ANB + Vitamine C. XIV. Conclusion : De faon gnrale, la plus part de nos extraits ont une activit antibactrienne qui varie dune souche une autre. Cette activit peut tre importante ou faible suivant la concentration et la quantit de nos chantillons. La mthode de VINCENT est une mthode simple qui donne de bons rsultats, mais il est difficile dutiliser cette mthode avec des quantits importantes dchantillons car le disque est petit, et le papier filtre utilis ne permet par dimprgner une grande quantit au risque de dborder lchantillon tudi (la quantit maximum imprgne est de 25 30l. Pour la souche (Sal*) c--d la Salmonella typhi, lantibiotique utilis en gnral pour son traitement est le Chloramphnicol (30g), ou il donne un diamtre dinhibition de 17mm. Avec le mlange ETB + Vitamine C (30 l), on a obtenu un diamtre de lordre de 12mm, donc un diamtre acceptable. Pour certaines souches comme le cas de 25923 (Staphylococus aureus), le diamtre dinhibition de nos chantillons est suprieur celui des antibiotiques. On remarque que le mlange ETB + Vitamine C est celui qui donne les meilleurs rsultats. Lextrait ETB nest autre que lextrait par lactate dthyle des baies (lextraction de la familles des flavonodes des baies, ou on trouve aussi la vitamine C).

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE ...

Bibliographie
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- CONCLUSION GENERALE ...

Conclusion gnrale
Au cours de ce mmoire, nous avons tudi le Sambucus nigra L. (sureau noir), une plante trs utilise en pharmacope traditionnelle algrienne pour ces vertus thrapeutiques. Le sureau noir a fait l'objet de plusieurs travaux publis dans des revues spcialises. Pour notre part, nous avons tent de contribuer sa valorisation en tablissant une relation en son utilisation en mdecine folklorique contre la typhode et d'autres affections bactriennes et sa composition chimique. Cette tude dbute par une identification botanique dtaille du Sambucus nigra L. par le Laboratoire de Botanique de la Facult des Sciences, suivie d'un examen phytochimique. Ce dernier est indispensable car il nous permet d'avoir une ide claire sur les diffrentes familles de composs existantes dans les diffrentes parties de la plante la priode de la cueillette choisie (septembre) et ce malgr l'tude bibliographique pousse que nous avons ralise sur sa composition chimique. Le criblage phytochimique base sur des tests spcifiques a permis de caractriser les anthocyanosides, les flavonodes, les tanins et les composs rducteurs dans les deux parties de la plante tudie (baies (B) et feuilles (F)). Ce rsultat est en accord avec ce qui est dcrit dans la littrature. Ce criblage chimique est suivi de plusieurs extractions ralises sur les baies et les feuilles en employant des solvants de polarit diffrente comme le mthanol, actate d'thyle et l'ther dithylique. Le choix des parties sujettes notre investigation est le rsultat de l'enqute thnopharmacologique. Les fractions obtenues sont ensuite purifies par les techniques chromatographiques puis analyses par les mthodes spectroscopiques. Malheureusement, la caractrisation des chantillons purs d'anthocyanosides et de flavonodes n'a pu tre ralis par la CPG/SM et/ou la HPLC pour cause de la non-disponibilit de colonne adquate, ou la non-solubilit des chantillons dans les solvants utiliss. Cette difficult a t surmonte par l'utilisation de logiciel de simulation qui nous a permis de faire quelques propositions des structures chimiques (rutine, sucres). Enfin, les tests d'activit antibactrienne des extraits d'anthocyanosides et de flavonodes raliss sur des germes bactriens trs pathognes comme la Salmonella typhi responsable de la typhode, de fivre, de maladie infectieuse aigu, sont trs prometteurs surtout dans le cas ou ils sont accompagns de la vitamine C (effet synergique).

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Rsum : Depuis la nuit des temps, les humains apprcient les vertus apaisantes et analgsiques des plantes. A travers les sicles, les traditions humaines ont su dvelopper la connaissance et lutilisation des plantes mdicinales. Si certaines pratiques mdicales paraissent tranges et relvent de la magie, dautres, au contraire, semblent plus fondes, plus efficaces. Pourtant, toutes ont pour objectif de vaincre la souffrance et d'amliorer la sant des humains. Aujourd'hui, les traitements base de plantes reviennent au premier plan, car l'efficacit des mdicaments dcrot. Les bactries et les virus se sont peu peu adapts aux mdicaments et leurs rsistent de plus en plus. Le but de notre tude est d'apporter des lments de connaissances chimiques et biologiques relatifs une plante utilise dans la mdecine folklorique algrienne, il s'agit du Sambucus nigra L. La mthode du travail, que nous avons adopte, est base sur une action pluridisciplinaire, visant la valorisation de la matire vgtale. Cette mthode permet de relier les lments d'information apports par les ethnobotanistes au travail des chimistes et des biologistes. Mots cls : Adoxaces, Sambucus nigra L., Flavonodes, Anthocyanosides, Activit antibactrienne. Abstract : Since remote times, the mankind has learned to appreciate the soothing and analgesics virtues of plants. Therefore, all over centuries, the human traditions endeavoured to develop the knowledge and the right medicinal plant uses. Even if some folk medicine practices seem to be odd, some others appear to imply a few scientific fundamentals. Nevertheless, all the practices aim to cope with diseases and improve the mankinds health. Today, diseases treatments with natural product are more and more used because the efficiency of synthetic medicines decreases. Bacteria and viruses have learned to develop resistance towards many drugs that have been used over long periods. The goal of our survey is to set forth some scientific elements related to chemical and biologic knowledge of plants used in the Algerian folk medicine, namely those about Sambucus nigra L. Our procedure is based on an pluridisciplinary approach, aiming at the valorisation of the plant material. This method permits boost evidence for a joined work brought about by ethno botanists, chemists and biologists. Key words : Adoxaceous, Sambucus nigra L., Flavonods, Anthocyanosids, antibacterial Activity.

- GLOSSAIRE ..

Glossaire
Termes botaniques : Actinomorphe : se dit dune fleur symtrie radiale. Acumin : le limbe dune feuille est acumin lorsquil se termine brusquement en une pointe effile. Baie : fruit charnu ppins. Bracte : petite feuille (plus ou moins modifie) laisselle de laquelle se diffrencie une fleur ou une inflorescence. Elles peuvent tre nombreuses (entourant le capitule des Asteraceae), dveloppes et enveloppantes (spathe des Raceae), etc. Caduc, Caduque : se dit dun feuillage qui tombe en cours danne. Calice : ensemble des pices externes (les spales) du prianthe. Calicule:pices vertes doublant le calice chez certaines Angiospermes(Malvaceae, Rosaceae). Capitule : inflorescence fleurs sessiles ou sub-sessiles portes par le sommet largi du pdoncule (rceptacle) (ex : marguerite, chardons, etc.). Carpelle : feuille spcialise sur laquelle sont ports les ovules. Les carpelles, uniques ou multiples, clos, plus ou moins souds entre eux, constituent le pistil ou gynce des fleurs dAngiospermes. Connes : se dit de feuilles opposes et soudes par leurs bases (ex : chvrefeuilles). Corolle : partie interne du prianthe, forme des ptales. Cortical : qui se rapporte au cortex ( lcorce). Corymbe : inflorescence indfinie. Les points dinsertion des pdoncules schelonnent sur le rameau et leur longueur ingale permet aux fleurs dtre situes approximativement dans le mme plan. Cyme : inflorescence dfinie portant une fleur (la plus ancienne) lextrmit de son axe principal. Les rameaux latraux peuvent se dvelopper sur un seul ct (cyme unipare) ou, opposs, sur les deux ct de laxe (cyme bipare). La cyme en Drupe : fruit charnu indhiscent renfermant une seule graine enferme dans un noyau dur (endocarpe sclrifi). pi : inflorescence indfinie forme dun axe portant des fleurs ou des groupes de fleurs (pillets) sessiles chelonns sur laxe (le rachis) (Poaceae, Polygonaceae).

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- GLOSSAIRE .. tamine : organe mle de la fleur. Foliole : nom donn chacun des divisions dune feuille compose. Grappe : inflorescence indfinie forme dun pdoncule portant, de faon alterne, des fleurs pdicelles spanouissant de la base au sommet. Gynce : ensemble des organes femelles de la fleur, cest--dire des carpelles. Imparipenne : se dit dune feuille compose penne possdant une foliole terminale, donc un nombre impair de folioles. Indusie : formation membraneuse protgeant, chez les fougres, les sores de sporanges. Inflorescence : ensemble des fleurs regroupes sur le mme axe. Elle peut tre indfinie (lapex est occup par un bourgeon, les fleurs les plus ges se trouvent la base de laxe) ou dfinie (lapex est occup par une fleur, les fleurs spanouissent de lapex vers la base). Inflorescence indfinie : grappe (et pi), corymbe, ombelle, capitule. Inflorescence dfinie : cyme. Limbe : partie plate et largie de la feuille. Ombelle : inflorescence indfinie dont les fleurs, situes dans le mme plan, sont portes par des pdoncules partant du mme point. Lombelle tant axill par une bracte, on observe gnralement un involucre la base de lombelle (et un involucelle la base de lombellule). Pdoncule : axe portant la fleur, puis le fruit. Penne : se dit dune feuille compose dont les folioles sont disposes de part et dautre de Raphide : cristal doxalate de calcium en forme de trs fine aiguille. Rceptacle : extrmit largie du pdoncule floral (plan, concave, convexe, etc.). Rflchi : recourb 180 ( loppos du sens dinsertion). Rhizome : tige souterraine vivace mettant annuellement des tiges ariennes et des racines adventives. Spathe : grande bracte entourant linflorescence des Araceae. Stigmate : partie terminale du gynce, rceptrice du pollen. Stipe : chez les Angiospermes : formation mimant un tronc. Ex : axe cylindrique marqu par les cicatrices des feuilles tombes des palmiers ou des yuques. Stipule : appendices foliacs ou membraneux, parfois pineux, placs au point dinsertion de la feuille sur la tige. Gnralement par 2, les stipules peuvent tre caduques ou persistantes. Style : partie rtrcie place entre lovaire et le stigmate.

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- GLOSSAIRE .. Taxon : unit systmatique de rang quelconque. Les taxons courants sont le genre, le sousgenre, lespce, la sous-espce, la varit. Tubercule : organe gnralement souterrain de nature caulinaire, renfl, au niveau duquel sont stockes des rserves. Verticille : ensemble dorganes (rameaux, feuilles, pices florales) disposs en cercle autour dun axe, au mme niveau. Zygomorphe : se dit dune fleur irrgulire, i.e. symtrie non axiale. La symtrie est souvent bilatrale ; elle est parfois inexistante.

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- TABLE DES MATIERES

Table des matires

Avant-propos Introduction gnrale..p.1 Chapitre I : Historique des plantesp.6
I. Introduction. p.6 II. Histoire des plantes p.6 Bibliographie.. p.11

Chapitre II :Vertus thrapeutiques des plantes...p.12

I. Introduction..p.12 II. La cueillette p.12 II.1. A quel moment cueillir les plantes ?... p.12 II.2. Comment procder la cueillette ?. p.12 III. Comment scher les plantes ?p.13 IV. Comment garder les plantes sches ?.. p.14 V. Prparation..p.14 VI. Des plantes dites reminralisantes p.15 VII. Chimiothrapie et Phytothrapie. p.15 VIII. Le Docteur LECLERC, pre de la nouvelle mdecine par les plantes.. p.16 IX. Efficacit des plantes entires....p.18 X. Des plantes nutritives et curatives...p.18 XI. Des traitements base de plantes..p.19 XII. Plantes et systmes de rgulation.p.20 XIII. Elments actifs des plantes.p.23 XIV. Contrle de qualit..p.28 Bibliographiep.29

Chapitre III : Etude botanique de Sambucus nigra L.p.30

I. Classificationp.30 II. Description de la famille des Caprifoliaces...p.30 III. Nouvelle classification...p.33 IV. Description de la famille des Adoxaces...p.33 V. Description de l'espce Sambucus nigra L. p.33

- TABLE DES MATIERES VI. Historique. p.37 VII. Distribution gographique, habitat et origine.. p.38 VIII. Rcolte.p.38 IX. Famille des sureauxp.39 Bibliographie.p.42

Chapitre IV : Chimie est proprits thrapeutiques de Sambucus nigra L.

I. tudes anciennesp.44 II. tudes rcentes.p.46 III. Les structures chimiques.p.47 IV. Vertus thrapeutiques de Sambucus nigra L...p.51 V. Proprits mdicinales..p.54 VI. Utilisations alimentaires..p.57 VII. Autres utilisations..p.58 VIII. Recherchesp.58 IX. Prcautions..p.59 X. Indications thrapeutiquesp.60 XI. Pharmacologie.p.61 XII. Etude phytochimique du Sambucus nigra L..p.61 XIII. Conclusionp.65 Bibliographie.p.66

Chapitre V :Essais dextraction et de purification des principes actifs..p.69

I. Introductionp.69 II. Mthodes d'extractions des produits actifs...p.69 III. Mthodes Chromatographiques...p.70 IV. Extraction et Purificationp.73 V. Chromatographie..p.85 VI. Conclusion...p.97 Bibliographie.p.98

Chapitre VI : Activit antibactrienne...p.100

I. Introductionp.100 II. Structure bactriennep.100 III. Croissance bactriennep.101 III.1. Culture des bactriesp.101 III.2. Besoins nutritifs..p.102

- TABLE DES MATIERES IV. Classification et identification des bactries. p.102 V. Facteurs de pathognicitp.104 VI. Mcanismes de dfense contre les bactries..p.105 VII. Epidmiologie des infections bactriennes..p.105 VIII. Actions des antibiotiques sur les bactries..p.106 IX. Principales familles dantibiotiques et leur mode dactionp.106 X. Mcanismes de rsistances aux antibiotiques.p.106 XI. Diagnostic biologique des infections bactriennesp.107 XII. Principales bactries en cause dans diffrents syndromes cliniquesp.107 XII.1. Infections des voies respiratoires.. p.107 XII.2. Infection urinaire (communautaire)...p.108 XII.3. Infection cutanep.108 XII.4. Infection des parties mollesp.109 XII.5. Infections nosocomiales.p.110 XII.6. Infections bactriennes favorises par un dficit en immunoglobulines ou en complmentp.110 XII.7. Infections bactriennes favorises par un dficit de limmunit cellulaire.p.110 XIII. Etude de lactivit antibactriennep.110 XIII.1. Mthode utilise.p.110 XIII.1.1. Prparation des inoculums..p.111 XIII.1.2. Distribution des disques..p.111 XIII.2. Souches de rfrence..p.111 XIII.3. Rsultats.p.111 XIII.3.1. Coloration de gram.p.112 XIII.3.2. Etude des antibiogrammes..p.113 XIII.3.3. Tests dactivit antibactrienne. p.114 XIII.3.3.1. Etude des diffrents mlanges de produits..p.116 XIV. Conclusion....p.118 Bibliographie.p.119

Conclusion gnrale...p.120 Glossairep.121