1

BIO bios
BIOLOGIA:
Ciencia que estudia la vida
TECNOLOGIA:
Estudia las tcnicas,
herramientas
y materiales en un
proceso
BIOTECNOLOGIA
+
BIOTECNOLOGIA
Uso integrado de la microbiologa, bioqumica y la ingeniera para obtener
aplicaciones tecnolgicas de los microorganismos, clulas animales, clulas
vegetales y de las fracciones derivadas.
Consiste en la explotacin industrial de microorganismos, clulas animales,
clulas vegetales y de las fracciones sub-celulares.
La utilizacin de molculas obtenidas biolgicamente, estructuras celulares,
clulas u organismos para llevar a cabo procesos especficos
B I O T E C N O L O G I A
NUMEROSAS APLICACIONES NUMEROSAS APLICACIONES
Industria de fermentacin
Industria agroalimentaria
Industria qumica y farmacutica
Tratamiento y valorizacin de sub-productos
agroindustriales y de efluentes
Produccin de alcohol
Produccin de biogas
ALGUNAS DEFINICIONES ALGUNAS DEFINICIONES
2
Qumica
Ingeniera enzimtica
Ingeniera gentica
Ingeniera
matemticas
Informtica
Automatizacin
Economa
SE CARACTERIZA POR SU CARCTER INTERDISCIPLINARIO
ADEMAS:
M
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G
I
A
INGENIERIA
B
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BIOLOGIA
MOLECULAR
BIOTECNOLOGIA
ALGUNOS ACONTECIMIENTOS IMPORTANTES EN EL
DESARROLLO HISTORICO DE LA BIOTECNOLOGIA
AO ACONTECIMIENTO
AC Cerveza, pan, vino, lcteos fermentados, pescado fermentado, koji
S XVII Produccin de vinagre y cido actico(inmovilizacinde clulas)
1857 Fermentacin lctica (L. Pasteur)
1908 Enzimas inmovilizadas sobre carbn
1916 -D-fructofuranosidasainmovilizada sobre almina
1917 Karl Ereki acua el trmino biotecnologa
1928 Primer transplante de nucleoen clulas embrionarias de salamandra
1935 Cultivo in vitrode tejidos vegetales
1940 Se crea la escuela de ingeniera biolgica en el MIT
1943 Produccin industrial de penicilina
1952 Clonacin de sapos mediante transplante de ncleos
1953 Se determina la estructura del DNA (Watsony Crick)
1958 Regeneracin de plantas a partir del cultivo de tejidos
1961 Publicacin de Biotechnology and Bioengineering
1961-6 Se descifra el cdigo gentico
.....
3
AO ACONTECIMIENTO
1963 J .B.S. Haldaneacuo el trmino CLON
1964 Transformacin de esteroides por clulas inmovilizadas
1967 Uso industrial de glucosa isomerasainmovilizada
1967 Se asla la DNA ligasa
1969 J ames Shapieroy J ohnathanBeckwithaislaron el primer gen
1970 HowardReminy David Baltimore, aislaron la primera enzima de restriccin
(transcriptas inversa)
1972 Khoranay col. Sintetizan un gen de RNAt
1972 Paul Bergcrea la primera molcula de DNA recombinante
1973 Stanley y Cohen y Herbert Boyer crean el primer organismo
recombinante (E. Coli)
1975 Kholer y Milnsteindescriben la produccin de anticuerpos monoclonales
1976 Se desarrollan tcnicas para secuenciar el DNA
1978 Genentechproduce insulina humana en E. coli
1979 Sciences de la vie et socit (Gros, Jacob & Royer)
1980 Se presenta el informe Spink
1980 La corte suprema de EE. UU. Acepta patentar microorganismos manipulados
genticamente
.....
A A O O ACONTECIMIENTO ACONTECIMIENTO
1981 La federacin europea de biotecnologa da la definicin de trmino
Biotecnologa)
1982 Se aprueba en Europa el uso de la primera vacuna recombinante para
animales
1983 Transformacin en plantas con plasmidioTi recombinado
1984 KaryB. Mulisdesarrollla reaccin en cadena de la polimerasa: PCR
1985 S. Willadsenclona una oveja mediante transplante de ncleo
1986 S. Willadsenclona una vaca
S. Willadsenclona una vaca usando clulas embrionarias diferenciadas
1988 Se patenta en EE.UU. un ratn recombinado susceptible a cncer.// Se
publica el mtodo PCR
1990 Se aprueba una terapia gnica en humanos
1996 Ian Wilmut y Keith Cambell clonan a Dolly usando clulas mamarias
1997 Se clona Polly, una oveja, usando clulas de piel
4
GRANDES ETAPAS EN EL DESARROLLO DE LA BIOTECNOLOGIA GRANDES ETAPAS EN EL DESARROLLO DE LA BIOTECNOLOGIA
BI OTECNOLOGIA DE SEGUNDA Y TERCERA GENERACI ON: AISLAMIENTO Y
USO DE ALGUNOS MICROORGANISMOS,
EXTRACCION Y PURIFICACI ON DE ALGUNAS ENZIMAS Y LA ERA DE LOS
ANTIBIOTICOS
BI OTECNOLOGIA DE CUARTA GENERACI ON: UTILI ZACION OPTIMA DE
MICROORGANISMOS Y ENZI MAS, CULTIVO DE TEJ IDOS Y ANTICUERPOS
MONOCLONALES, MEJ ORAMIENTO DE CELULAS, TECNOLOGIA DEL ADN
RECOMBINANTE
BI OTECNOLOGIA DE PRI MERA GENERACI ON: USO EMPIRICO DE
MICROORGANISMOS Y ENZI MAS PARA PRODUCI R BEBIDAS ALCOHOLICAS,
LACTEOS, VINAGRE, FERMENTADOS TRADICI ONALES
BIOTECNOLOGIA ALIMENTARIA BIOTECNOLOGIA ALIMENTARIA
SE USA TECNICAS BIOLGICAS PARA LA PRODUCCIN,
TRANSFORMACIN Y/O PRESERVACIN DE ALIMENTOS:
Produccin de bebidas alcoholicas, productos fermentados (yogourt, queso, embutidos)
protena unicelular, fermentacin de cacao, caf y t.
PRODUCCION DE MATERIAS PRIMAS, ADITIVOS Y COADYUVANTES
EMPLEADOS EN LA INDUSTRIA ALIMENATRIA:
Produccin de aminocidos, vitaminas, enzimas, cidos orgnicos biopolmeros,
colorantes, potenciadosres de sabor, etc.
ES UTILIZADA EN ASPECTOS ANALTICOS Y DE CONTROL DE CALIDAD:
Enzimas empleadas en la determinacin de componentes especficos, micoorga-nismos
empleados en evaluacin nutricional (vitaminas, aminocidos, coles-terol, etc.) y
biosensores enzimticos.
5
LA BIOTECNOLOGIA TIENE VENTAJAS COMPARATIVAS, LA BIOTECNOLOGIA TIENE VENTAJAS COMPARATIVAS,
RESPECTO A LA QUIMICA TRADICIONAL: RESPECTO A LA QUIMICA TRADICIONAL:
Se aprovecha las propiedades funcionales de los
microorganismos.
Los microorganismos se multiplican rpidamente y tienen un
metabolismo extremadamente activo.
Bajo ciertas condiciones producen grandes cantidades de
sustancias (metabolitos), en relacin a su tamao.
Las bioconversiones son altamente especificas. Ejem.
Transformacin de lactosa.
Las bioconversiones se realizan en un medio poco desnaturante,
a temperaturas biolgicas, emplean agua como solvente y no
tiene necesidad de catalizadores poluentes.
ALGUNOS APORTES IMPORTANTES DE LA BIOTECNOLOGIA
EN DIFERENTES SECTORES
S SE EC CT TO OR R E EJ JE EM MP PL LO OS S
AGRICULTURA
Seleccin de variedades, plantas y animales obtenidos por
diversas tcnicas incluyendo clonacin
ENERGETICO Produccin de biogas, produccin de etanol
MEDIO AMBIENTE
Desarrollo de mtodos y procedimientos de monitoreo
Desarrollo de tcnicas de tratamiento de desechos industriales
ALIMENTARIO
Nuevos mtodos de tratamiento y preservacin de alimentos
Produccin de aditivos
Enzimas utilizadas en el procesamiento de alimentos
Produccin de protena unicelular
MEDICO
Desarrollo de mtodos de diagnstico utilizando enzimas,
sensores enzimticos
Uso de microorganismos y enzimas en la elaboracin de drogas
complejas (ejemplo esteroides)
Nuevos antibiticos
Uso de enzimas en terapias
MINERIA Extraccin de minerales (lixiviacin microbiana)
QUIMICO Produccin de cidos orgnicos (ctrico, actico)
6
ETAPA QUESO CERVEZA
Primera
generacin
Uso emprico debacterias lcticas
Uso emprico dequimosina
Uso emprico delevaduras
Proceso emprico demalteado
Segunda
generacin
Aislamiento yuso debacterias lcticas
Extraccin, purificacin ycaracterizacin dequimosina
Uso decultivos puros delevaduras
Esclarecimiento delanaturalezaenzimticadel malteado
Uso depapanaparalaclarificacin en fro
Tercera
generacin
Propagacin masivadebacterias lcticas
Seleccin decultivos lcticos mejorados
Sustitucin de quimosina por proteasa microbiana
producidaen gran escala
Mejor control delafermentacin
Fermentacin continuaparalaproduccin decerveza
Produccin yuso deamilasas y-glucanasas
Uso deenzimas paralaproduccin decervezas ligeras
Cuarta
generacin
Tecnologa del ADN recombinante para la produccin de
quimosinaymejoramiento debacterias lcticas
Utilizacin optima de enzimas y microorganismos para la
maduracin aceleradaygeneracin desabores
Ingenieragenticaparalaobtencin delevaduras amilolticas
Cultivo de tejidos e ingeniera gentica para el mejoramiento de
cebada
Procesos conmicroorganismos yenzimas inmovilizadas
IMPACTO DEL DESARROLLO DE LA BIOTECNOLOGIA
EN LA PRODUCCION DE QUESO Y DE CERVEZA
ESQUEMA DE LA PRODUCCION E INTEGRACION
DE LAS TECNICAS BIOTECNOLOGICAS

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Cultivo declulas animales
Clulas vegetales
Microorganismos, etc...
Optimizacin delos fenmenos de
transferencia
Automatizacin
Desarrollo denuevos sensores
TECNICAS DE ANALISIS
Cromatografa:HPLC, CPG
Sondas
Anticuerpos
Electroforsis
Microfiltracin
tangencial
Ultrafiltracin
Cromatografa
liquida preparativa,
HPLC.
PRODUCTOS
Alimentarios
Farmacuticos
Energa
Qumicos

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CELULAS
PRE-CULTIVO
BIO-REACTOR
EXTRACCION Y
PURIFICACION
FERMENTADOR

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7
ESQUEMA OPTIMO DE UNA PRODUCCION BIOTECNOLOGICA
Y DE LA UTILIZACION DE ENZIMAS
MANIPULACION
GENETICA
CELULAS
PRE-CULTIVO
BIO-REACTOR
EXTRA / INTRA
CELULAR
CELULAS
(Biomasa)
INMOVILIZACION
METABOLITO
Acido orgnico
Aminocido
Antibitico
ENZIMA ENZIMA
REACTOR
PRODUCTO
FINAL
EXTRACCION Y/O
PURIFICACION
REACTOR INMOVILIZACION
INMOVILIZACION
EJEMPLOS DE PRODUCCION Y APLICACIONES DE BIOMASA
S. Cerevisiae
S. Carlsbergensis
Chorela sp.
Spirulina sp.
Pseudomonas sp.
Methalomonas sp.
Candida sp.
Aspergillus sp.
Trichoderma sp.
Lactobacillus sp.
Pediococcus sp.
Leuconostoc sp
Lactobacillus sp.
Bifidobacterias sp
Streptococcus sp.
Bacillus sp.
Bacillus turingensis
Bcillus sphearicus
Seudomonas fluorescens
Bacillus subtilis
Trichoderma sp
Levadura de panificacin
Levadura de cevecera
Algas
Bacterias
Levaduras
Hongos
Fermentos lcticos
Probiticos
Activadores de degradacin
Insecticidas
Fungicidas
Panadera y cervecera
Protena unicelular (SCP)
Starters
Biopesticidas
MICROORGANISMO EJEMPLOS APLICACIONES
8
EJEMPLOS DE PRODUCCION DE METABOLLITOS POR EJEMPLOS DE PRODUCCION DE METABOLLITOS POR
FERMENTACION FERMENTACION
TIPO DE METABOLITO PRODUCTOS MICROORGANISMO
Aminocidos
- Acido glutmico
- Leucina
- Lisina
- Triptofano
- Brevibacterium sp.
- Corinebacterium sp.
- Corinebacterium sp.
- Corinebacterium sp.
Antibiticos
- Bacitracina
- Cefalosporina
- Cloranfenicol
- Gramicidina
- Mitomicina
- Monensina
- Neomicinas
- Penicilinas
- Polimixina
- Streptomicina
- Virginiamicina
- Bacillus subtilis
- Cefaslosporium sp.
- Streptomices venezuelae
- Bacillus brvis
- Streptomices caespitosus
- Streptomices cinnamonensis
- Streptomices fradiae
- Penicilium crisogenum
- Bacillus polimixa
- Streptomices griseus
- Streptomices virginiae
Alcoholes - Etanol
- Butanodiol/acetoina
- Sacharomices cerevisiae
- Zymomonas movilis
- Leuconostoc sp
- Aerobacter aerogenes
- Bacillus subtilis
- Serratia marcenscens
Enzimas - Alfa-amilasa
- Celulasas
- Pectinasas
- Beta-galactosidasa
- Proteasas
- Lipasas
- Bacillus licheniformis
- Aspergillus oryzae
- Aspergillus niger
- Trichoderma viride
- Aspergillus niger
- Aspergillus foetidus
- Aspergillus niger
- Kluyveromices marxianus
- Bacillus subtilis
- Bacillus licheniformis
- Mucor miehi
- Aspergillus niger,
- Rhizopus oryzae
Acidos orgnicos - Acido actico
- Acido ctrico
- Acido lctico
- Acido mlico
- Acido pirvico
- Acido succnico
- Acetobacter sp.
- Aspergillus niger
- Candida lipolitica
- Lactobacillus sp..
- Lactobacillus brevis
- Pseudomonas aeruginosa
- Bacilluis sp
Polisacaridos - Dextrana
- Alginato
- Xantana
- Acetobacter sp.
- Leuconostoc mesenteroides
- Pseudomonas, sp
- Xantomonas sp.
Vitaminas - Caroteno (pro vita. A)
-
B
6
- B
12
- Choanefora sp.
- Rhodotora sp.
- Aspergillus sp.
- Propionibacterium sp.
9
MERCADO MUNDIAL DE PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS
INDUSTRIA
ALIMENTARIA (48 %)
AGRICULTURA
(2%)
QUIMICA Y
ENERGIA (8 %)
F
A
R
M
A
C
I
A

(
4
2

%
)
Otros (6 %)
Vitaminas (3%)
Hormonas (9%)
Vacunas
Reactivos
de diagntico (30%)
Antibiticos (52%)
10
MERCADO MUNDIAL DE PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS MERCADO MUNDIAL DE PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS
EN 1995 EN 1995
1500
3100
900
800
700
1000
3000
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
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S
ORGANISMOS UNICELULARES, CENOCITICOS O ORGANISMOS UNICELULARES, CENOCITICOS O
MULTICELULARES SIN DIFERENCIACION MULTICELULARES SIN DIFERENCIACION
BACTERIAS
PROCARIOTAS
ALGAS AZUL-VERDE
MOHOS, LEVADURAS
EUCARIOTAS
PROTOZOARIOS, ALGAS
11
PROCARIOTA EUCARIOTA
Estructuras genticas:
nmero de cromosomas
membrana nuclear
DNA nuclear unido a histonas
DNA en organelos
Estructura citoplasmica:
naturaleza de los ribosomas citoplsmicos
naturaleza de los ribosomas de los organelos
mitocondrias
cloroplastos
Cantidades relativas de DNA
1
-
-
-
70s*
ninguna
-
-
-5 x 10
-15
g(1)
>1
+
+
+
80s
70s
+
+o -
3 x 10
-12
0.5 x 10
-12
*S=UNIDADES SVEDBERG
DIFERENCIAS ENTRE CELULAS EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS
COMPARACI ON DE LAS CARACTERI STI CAS DE CELULAS ECUCARI OTAS Y
PROCARI OTAS
(1) Indica el tamao del RIBOSOMA, medido por la velocidad de sedimentacion en ultracentrifugacion.
S = Valor Svedberg
(2) La reproduccin parasexual incluye conjugacin, transduccin y transformacin.
1
2
12
EUCARIOTAS:
Protistas superiores
PROCARIOTAS:
Protistas inferiores
N
U
C
L
E
O
- Membrananuclear
- Constituido deADN asociado aprotenas (Histonas)
- Organizado en muchos cromo-somas, visibles al microscopio
al momento deladivisin
- Laformay nmero decromosomas son caractersticos dela
especie
- Sin membrananuclear
- Nucleo difuso en el citoplas-ma
- Constituido deADN Casi latotalidad
del ADN celular
- Cromosomanico
C
I
T
O
P
L
A
S
M
A
- Estructuracompleja: retculo endoplasmtico
- Movimiento continuo
- Numerosos ribosomas, libres o sobrelos sitemas membranarios
- Sin retculo endoplsmatico
- Sin movimiento
- Numerosos ribosomas, lugar de
sntesis deprotenas
P
A
R
E
D
- No estpresenteen todos los protistas superiores
- Rol deproteccin
- Compuestade unared macromolecular queasegurasu rigidez
y resistencia
- No contienemucopptidos parietales: en Algas Celulosa;
Hongos quitina.
- Constanteen todos los protistas
inferiores
- Rol deproteccin
- Red macromolecular
- Mucopptidos o glicopep-tidos
parietales
CARACTER STI CAS DI FERENCI ALES ENTRE LAS CELULAS
EUCARI OTAS Y PROCARI OTAS
R
E
S
P
I
R
A
C
I

N
- Organosespecializados: Mitocondrias - No tienenmitocondrias
- Lasenzimasnecesariasestnlocalizadasanivel dela
membranacitoplsmicaydelosmesosomas
R
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O
D
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C
I
O
N
- Divisinbinariadelaclula
- Divisinnuclear: mitosis
- Posiblereproduccinsexual por fusindedos
clulas, con:
- Fusinnuclear, formacindeunzigote
- Divisinnuclear: meiosi
- Divisinbinariadelaclula
- Divisinnuclear: amitosis
- Fenmenossexualesrarosydiferentes:
- Conjugacinsinfusincelular
- Transferenciadematerial gentico deunaclulaaotra
- No haydivisinnuclear
F
O
T
O
S
I
N
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S
I
S
- Algaseucariotas
- Transformanlaenergasolar enenergaqumica, en
loscloroplastos
- Algasazul-verde
- Bacteriasfotosintticas
- Sincloroplastos
- Cromatoforos
M
O
V
I
M
I
E
N
T
O
- Ameboidesobreunsoportergido paraeucariotassin
pared
- Contraccindeflagelosen el medio lquido
(protozoaris-algas)
- No tienenmovimiento ameboide(Paredrgida)
- Posiblemovimiento por contraccindeflagelos(estructura
diferencial ysimple)
13
GRUPO TIPO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Bacterias fotosintticas
Bacterias deslizantes
Bacterias con revestimiento
Bacterias con yemas o apndices
E spiroquetas
Bacterias espirales o curvadas
Bacilos y cocos Gram-negativos aerobios
Bacilos Gram-negativos anaerobios facultativos
Bacilos Gram-negativos anaerobios
Cocos y cocobacilos Gram-negativos
Cocos Gram-negativos anaerobios
Bacterias Gram-negativas quimiolitotrofas
Bacterias productoras de metano
Cocos Gram-positivos
Cocos y bacilos formadores de esporas
Bacterias de morfologa bacilar Gram-positivas no formadoras de esporas
Actinomicetos y organismos relacionados
Riquetsias
Micoplasmas
FAMILIAS DE BACTERIAS IMPORTANTES EN LOS PROCESOS
BIOTECNOLOGICOS
Fuente: Adaptado de Bergey,s Manual of Systeniatic Bacteriology, Vol 3. J .T. Staley, Ed. Baltimore: Williams &
Wilkins, (1989)
GRUPO Y FAMI LI A GENERO PROCESO
7. Cocos y bacilos Gram-negativos aerobios
Pseudomonaceae Pseudomonas Protena de origen unicelular (SCP) a partir de
metanol, oxidacin de esteroides / hidrocarburos,
polisacridos (alginatos), oxidacin dealcoholes
Mythilomonadaceae Methilomonas
Methylococcus
SCP apartir demetanol
Oxidacin del metano
Azotobacteriaceae Azotobacter Fijacin no simbiticadel nitrgeno
8. Bacilos Gram-negativos anaerobios facultativos
Enterobacteriaceae Escherichia Muchos procesos diferentes, produccin de
aminocidos (lisina)
Aerobacter Nucletidos, cido 2-cetoglutrico, pululanasa, cido
6-aminopenicilnico, quimosinarecombinante
12. Bacterias Gram-negativas quimiolitotrofas
Thiobacillus Lavado de cobre, cinc, hierro, manganeso, otros
sulfuros
13. Bacterias metangenas
Methanenobacteriaceae
Nocardiaceae
Methanobacterium
Methanococcus
Nocardia
Metano apartir deafluentes
Oxidacin dehidrocarburos, esteroides
ALGUNAS BACTERIAS DE IMPORTANCIA BIOTECNOLOGICA DE
ENTRE LOS 19 GRUPOS BACTERIANOS
14
14. Cocos Gram-positivos
Micrococcaceae Micrococcus Oxidacin de hidrocarburos, cultivos iniciadores para
productos crnicos
Streptococcaceae Streptococcus
(Lactococcus)
Produccin de cido lctico, diacetilo; cultivos
iniciadores de quesos y otros productos lcteos
fermentados
Pediococcaceae Pediococcus
Leuconostoc
Cultivos iniciadores para productos crnicos
Produccin de dextrano; cultivos iniciadores para
quesos y vino (heterofermentacin)
15. Bacilos y cocos formadores de esporas
Bacillaceae Bacillus Antibiticos, enzimas, aminocidos y vitaminas (B
2
,
B
12
)
Clostridium Butanol, acetona, cido butrico, toxina botulnica
16. Bacterias de morfologa bacilar Gram-positivas no formadoras de esporas
Lactobacillaceae Lactobacillus
Bifidobacterium
cido lctico, productos lcteos fermentados,
embutidos y productos vegetales fermentados;
ensilado, alteracin de alimentos
Bifidoyogur, bifidotabletas
17. Actinomicetos y organismos relacionados
Grupo Corineforme Corynebacterium
Arthrobacter
Cellulomonas
Oxidacin de hidrocarburos, aminocidos
Transformacin de esteroides
Fermentacin de la celulosa
Propionibacteriaceae Propionibacteria Vitamina B
12
; cido propinico, fermentacin del
queso
Mycobacteriaceae Mycobacterium Oxidacin de hidrocarburos y esteroides
GENERO PRODUCTOS
Mucor
Rhizopus
Blakeslea
Choanephora
Ashbya
Cryptococcus
Candida
Rhodotorula
Saccharomyces
Saccharomycopsis
Torulopsis
Aspergillus
Cephalosporium
Penicillium
Fusarium
Gibberella
Acidos orgnicos, enzimas
Acidos orgnicos, enzimas
-Caroteno
-Caroteno
Riboflavina
Riboflavina
cido ctrico
Lpidos
Etanol, vino, cerveza
Protenas
cido ctrico
Enzimas, antibiticos, cidos orgnicos
Antibiticos
Antibiticos, cidos orgnicos, enzimas
Protena, grasa
Sustancias semejantes a hormonas, giberelinas
ALGUNOS HONGOS DE I MPORTANCI A BI OTECNOLOGI CA
15
Cultivo puro, libre de otros microorganismos y de fagos
Capaz de producir fcilmente clulas vegetativas y esporas u otras unidades
de propagacin
Que crezca vigorosamente en el medio, una vez inoculado en los
fermentadores
Que permita obtener el producto de inters en corto tiempo
Que permita obtener el producto deseado, preferiblemente slo, libre de
contaminantes txicos o no, y que sea de sea de fcil purificacin
En lo posible que se proteja de la contaminacin, por ejemplo creciendo a pH
cido o a alta temperatura o que produzca inhibidores de otros
microorganismos
Capaz de ser modificado con agentes mutagnicos, pero estables en
ausencia de estos
Fciles de conservar durante largos periodos de tiempo
CARACTERI STI CAS ESENCI ALES DE LOS CARACTERI STI CAS ESENCI ALES DE LOS
MI CROORGANI SMOS DE USO I NDUSTRI AL MI CROORGANI SMOS DE USO I NDUSTRI AL
Representa la evolucin de la poblacin celular durante el cultivo.
Permite caracterizar la actividad de la poblacin celular.
La velocidad de divisin de las celular.
Los cambios en estado fisiolgico.
Considerando un cultivo de microorganismo realizado en
condiciones ideales:
EL cultivo es de tipo discontinuo (Batch).
El fermentador es infinitamente mezclado, lo que permite
obtener un sistema homogneo.
Las condiciones de cultivo (pH, Temperatura, aireacin,...) son
constantes y favorables al desarrollo del microorganismo.
En estas condiciones se obtiene las curvas de crecimiento
siguientes:
CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO
16
N = Nmero de clulas por unidad de volumen. t= Tiempo.
ESQUEMA DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DE UN MICROORGANISMO EN
FERMENTACION BATCH
La curva de crecimiento puede ser dividida en seis perodos, cuatro de los cuales (I,
III, V, VI) constituyen fases en las que el microorganismo se encuentra en un estado
fisiolgico particular. Los estados II y IV constituyen transiciones entre dos fase
diferentes.
I II III IV V VI
t
L
o
g

N
A
I II III IV V VI
t
N
B
I. FASE DE LATENCIA
Ocurre inmediatamente despus de la inoculacin y constituye
un periodo de adaptacin de las clulas al sustrato presente en
el medio.
No hay divisin celular.
La duracin del perodo de latencia depende de varios factores,
naturaleza del medio, tamao del inoculo.
Si el cultivo que se va a utilizar como inoculo se encuentra
en fase logartmica, puede no existir un perodo de
latencia, sin embargo si el inoculo se toma de un cultivo
que se ha detenido por limitacin de un sustrato el perodo
de latencia puede ser grande
II. FASE DE ACELERACION
Cuando la fase de adptacin se termina, se inicia el crecimiento
y aumenta la velocidad especfica de divisin.
17
III. FASE LOGARITMICA
La fase de crecimiento logartmica o exponencial es el perodo durante el
cual la velocidad especfica (o tasa) de crecimiento exponencial alcanza
un mximo y permanece constante.
La concentracin de las clulas aumenta exponencialmente.
La composicin y fisiologa de las clulas permanecen invariables.
Desde un punto de vista industrial es importante, ya que esta fase est
asociada a la produccin de protenas celulares, enzimas que intervienen
en la hidrlisis de macromolculas (proteasas, celulasas, amilasa,
pectinasas, .....) y otros productos asociados al metabolismo primario
IV. FASE DESACELERACIN
Hay disminucin de la divisin celular por agotamiento del medio de
cultivo. En efecto desaparecen una serie de compuestos necesarios para
el crecimiento y eventualmente hay acumulacin de inhibidores
resultantes del metabolismo microbiano (alcohol, antibiticos, ....)
V. FASE ESTACIONARIA
La concentracin de las clulas alcanza su nivel mximo
El crecimiento celular se detiene pero conserva buena actividad metablica
Se dan cambios fisiolgicos importantes y modificaciones en la estructura
bioqumica de las clulas.
El desequilibrio en la composicin del medio, conduce a la acumulacin de
productos del metabolismo (metabolitos primarios).
Tambin hay produccin de metabolitos secundarios (cidos orgnicos,
antibiticos,....).
Las condiciones de cultivo durante esta fase son propicias para la
diferenciacin celular, es decir la formacin de clulas con estructuras
particulares (espora, conidias, .....); esta diferenciacin puede tener gran
inters en bio-industrias en la produccin de clulas resistentes (Bacillus,
Clostridium, Streptomyces, hongos,....).
VI. FASE DE MORTALIDAD
Esta fase resulta de una autlisis de las clulas vegetativas por accin de
las propias enzimas de la clula.
Siempre existe una divisin celular por consumo de la materia orgnica
liberada por las propias clulas, sin embargo la velocidad de crecimiento es
inferior a la de mortalidad.
18
t
Log N
P
S
S
N
P
REPRESENTACION ESQUEMATICA DE LA CURVA DE
CRECIMIENTO (N), CONSUMO DE SUSTRATO (S) Y
FORMACION DE PRODUCTO (P)
Considerando un cultivo discontinuo (batch) en un reactor infinitamente
mezclado, durante la fase de crecimiento exponencial se tiene:
X =Cantidad de biomasa en g de materia seca /L
N =Nmero de clulas / mL
=Velocidad especfica de crecimiento (h
-1
)
T =Tiempo (h)
Con la ecuaciones anteriores se define la velocidad o tasa de crecimiento
()
d X

X
X
d N

N
N
d T
d T
=
=
X

X
1
dT
dX
=
19
De la ecuaciones anteriores se deduce que:
Integrando esta ecuacin entre el tiempo T
0
y T, se tiene:
La velocidad especfica de crecimiento se puede calcular grficamente a travs de
la pendiente de la recta ( /2.303) o tambin usando las ecuaciones:
La tasa de crecimiento, determinada en fase exponencial donde ningn elemento
nutritivo es limitante, nos da la tasa de crecimiento mxima: =
max.
dX

X
dT
=
L nX - L n X
0
= ( T - T
0
)

L ogX - L og X
0
( T - T
0
)

2.303
X = X
0
e
(T - T
0
)
=
2 . 3 0 3
(L ogX - L og X
0
)
T

(L nX - L n X
0
)
T
=
=
La tasa de crecimiento depende del tipo de microorganismo
Depende adems de las condiciones de cultivo
Naturaleza y concentracin de sustrato.
Las condiciones aireacin (microorganismos aerobios).
Temperatura y pH (en ciertos casos el potencial redox y la fuerza
inica).
Las condiciones de mezcla, cuando la transferencia de materia es un
factor limitante.
La presencia de inhibidores.
El tiempo de generacin, que representa el tiempo necesario para que
la poblacin microbiana se duplique (ejem. de X a 2X), est dado por:
(Ln2X - Ln X)
= g T =

0.693

=
20
Microorganismo
max
(h
-1
) g (h)
Bacilus subtilis
Pseudomonas putida
Escherichia coli
Nitrosomonas sp
Candida tropicalis
Sacaromices cerevisiae
Aspergillus sp.
1.70
1.00
2.30
0.07
0.70
0.35
0.53
0.4
0.70
0.30
10.0
1.00
2.00
1.30
TASAS DE CRECIMIENTO Y TIEMPO DE TASAS DE CRECIMIENTO Y TIEMPO DE
GENERACI GENERACI N DE ALGUNOS MICROORGANISMOS N DE ALGUNOS MICROORGANISMOS
Por analoga a la ecuacin de MICHAELIS MENTEN, se estableci la
ecuacin de MONOD en 1949.
Suponiendo que todos los elementos nutritivos son adicionados al
medio en exceso, salvo el sustrato (S) considerado factor limitante, se
tiene:

max
S
KS +S
=Tasa o velocidad especfica de crecimiento (h
-1
).

max
=Tasa de crecimiento mxima (h
-1
).
S =Concentracin de sustrato limitante (g/L).
Ks =Constante de saturacin (g/L). Concentracin de sustrato necesaria para obtener
de la tasa de crecimiento mxima
CINETICA MICROBIANA
21
S
max
max/2
Ks depende del
microorganismo y
de la naturaleza del
sustrato limitante
Un valor alto de Ks
indica poca afinidad
por el sustrato
Un valor bajo de Ks
indica alta afinidad
por el sustrato
A una concentracin
determinada de sus-
trato: a medida que Ks
aumenta, disminuye la
tasa de crecimiento
S
max
max/2
Los valores de Ks son pequeos para los compuestos normalmente usados en medios de cultivo.
Estos valores son del orden de 10
-5
-10
-6
M en el caso de azcares (como glucosa) e inferiores a 10
-6
M para los aminocidos y vitaminas.
VALORES DE Ks PARA DIFERENTES MICROORGANISMOS
Microorganismo Sustrato limitante Ks (M)
Echerichia sp.
Aspergillus sp.
Candida sp.
Sacharomices sp.
Pseudomonas sp.
Aspergillus sp.
Glucosa
glucosa
glicerol
glucosa
metanol
arginina
2.2 . 10
-5
2.8 . 10
-5
4.9 . 10
-5
14.0 . 10
-5
2.0 . 10
-5
2.9 . 10
-6
De manera general los valores de Ks explican porque los microorganismos son capaces de
purificar rpidamente los medios en un determinado compuesto. por ejemplo alcanzando
concentraciones tan bajas, del orden de 10
-5
M la velocidad de crecimiento (y por tanto la
velocidad de consumo de este) disminuyen a la mitad con respectoa las condiciones de sustrato no
limitantes (generalmente del orden de 0.05 men sustrato). Las aplicaciones en el campo de la
contaminacin se basan en esta propiedad de asimilacin de los microorganismos.
22
Combinando las ecuaciones de la velocidad de produccin de
clulas y la cintica de crecimiento
dX
X
dT
= rX =
Reemplazando por la ecuacin de MONOD:
rX
=

max S
K S + S
X
En el caso microorganismos aerobios, el oxigeno es un
elemento esencial que es considerado como sustrato, por tanto
se aplica la ley de Monod.

max
[O2]
K +[O2] [O2]
[O
2
] = Concentracin de oxgeno disuelto en el medio.
K
[O2]
= Constante de afinidad por el oxigeno.
r
X
= Velocidad de produccin de clulas (g/Lh)
CINETICA DE MONOD EN SISTEMAS
PARTICULARES
Inhibicin del crecimiento por el sustrato
Inhibicin del crecimiento por productos del
metabolismo
Transferencia de masa limitante
23
La ecuacin de Monod considera que
la tasa de crecimiento es mxima ( =

max
) cuando el sustrato S se aporta al
medio de cultivo en exceso.
Sin embargo si se aporta sustrato a
altas concentraciones, principalmente
azcares, molculas orgnicas
(alcoholes, cidos....) y sales, puede
disminuir o detenerse la divisin
celular.
S
r
x
1 / Ki C re ci e n te
CASO DE INHIBICION DEL CRECIMIENTO POR EL SUSTRATO
La siguiente ecuacin es una variante de
la ecuacin de Monod que tiene en
cuenta el efecto inhibidor de ciertos
sustratos.
= max
S
K S + S + S
n+1
K
i
n
Ki = Constante de inhibicin del sustrato (g/L).
n, en la mayora de casos es igual a 1.
Ki es menor cuando el efecto inhibidor del sustrato es alto
Cuando se utilizan sustratos con un alto efecto inhibidor como
etanol, cidos orgnicos ....., es necesario realizar procesos
particulares como el cultivo fed batch..
El efecto inhibidor es importante en procesos de desconta-
minacin microbiolgica como en:
Degradacin bacteriana de hidrocarburos que contaminan
aguas y suelos.
Destruccin de sustancias txicas presentes en zonas
contaminadas.
Tratamiento de aguas de granjas pisccolas, reduccin del
contenido de amoniaco y nitrito
24
La divisin celular es acompaada de la sntesis de metabolitos
que son excretados y acumulados en el medio de cultivo. Algunos
de estos metabolitos que se acumulan en el medio pueden tener
un efecto inhibidor y reducir la tasa de crecimiento, este es el caso
del etanol, los cidos orgnicos, los antibiticos......
La variante de la ecuacin de Monod en este caso es:
INHIBICION DEL CRECIMIENTO POR PRODUCTOS DEL
METABOLISMO

=
S
K S + S
=

max f (P)
Donde
Segn el caso de inhibicin, la funcin f, puede ser:
Lineal
Exponencial
Hiperblica
=

max (1 - K
i
P)
=

max e
( -Ki P)
=

max
1
1 +
P
K
i
=

max
K
i
+ P
K
i

P = Concentracin del producto
responsable de la inhibicin
(g/L)
Ki = Constante de inhibicin asociada
al producto
El caso de las fermentaciones lcticas y
alcohlicas, son dos casos tpicos de
inhibicin por los productos formados
(cido lctico y etanol). En estos casos
se da un tipo de inhibicin hiperblica:

=
S
K S + S

max
K
i
+ P
K
i

( ( ) )
25
La transferencia de materia puede constituir un factor limitante para el
crecimiento y desarrollo de un microorganismo, principalmente cuando
las condiciones de mezcla en el fermentador son poco eficaces (alta
viscosidad, fermentadores grandes..)
En condiciones de transferencia ineficiente la velocidad especfica de
crecimiento () depende de:

t
, relacionado con la transferencia del sustrato hacia la clula.

max
, relacionado con el metabolismo del sustrato en la clula.
TRANSFERENCI A DE MASA LI MI TANTE TRANSFERENCI A DE MASA LI MI TANTE
La ecuacin general de transferencia de masa estdada por:

S
= Flujo de sustrato por unidad de superficie (Kg/m
2
s)
S = Concentracin de sustrato en el medio (Kg/m
3
)
S
C
= Concentracin de sustrato alrededor de la clula (Kg/m
3
)
h
S
= Coeficiente de transferencia de masa entre el medio de cultivo y la superficie
de la clula (m/s)

+
=

1
+

1
=

1
t max
max t
t
max
)
S
- (S
h
=
c s S

La velocidad de consumo de sustrato (r

s
= -(dS/dT)), es funcin del flujo de
transferencia de masa (
S
) y la superficie de transferencia entre las clulas y el medio
(A
C
m
2
/m
3
):
C S S
A r = (Kg/m
3
s)
Reemplazando
S
en la ecuacin anterior, se tiene la ecuacin global de
transferencia de sustrato entre el medio y la clula:
) S S ( h A r
C S C S
=
La superficie celular por unidad de volumen de clulas se determina de la
siguiente manera:
- Para los microorganismos esfricos (cocos y levadura....): 6/d
c
- Para los microorganismos bastonados (Bacillus y Clostridium....): 1/0.22d
c
- Para los microorganismos miceliares (hongos y Streptomyces....): 1/0.25d
c
Donde d
C
es el dimetro medio de las clulas
En el primer caso A
C
est dado por:
C C
C
X
d
6
A

=
Donde:
Ac= Superficie celular por unidad de volumen de cultivo (m
2
/m
3
)
X = Concentracin de clulas en el medio (Kg/m
3
)

c
= Densidad de las clulas (Kg/m
3
)
26
Reemplazando Ac en la ecuacin de transferencia de masa se obtiene el
consumo de sustrato:
) S S ( X
d
h 6
A r
C
C C
S
C S S
= =
=
r
X
Y
S
X / S
r
X
=
r
r
=
Y
S S
X
x/s

)
S
- (S Y
d
h
6
=
C /S X
C
C
S
T

La tasa de crecimiento puede representarse tambin por:

Donde Y
X/S
, es el coeficiente de transformacin de sustrato (S) en
biomasa (X) (Kg de clulas formadas/Kg de sustrato consumido).
Reemplazando r
s
en la ecuacin anterior se tiene el componente

t
:
)
S
- (S ]
Y
d
h
6
[ +
)
S
- (S ]
Y
d
h
6
[
=
C /S X
C
C
S
max
C /S X
C
C
S
max

Reemplazando
t
en la ecuacin
global de la tasa de crecimiento
se tiene:

+
=

1
+

1
=

1
t max
max t
t
max
Si se supone que Sc<<<S, entonces (S - Sc) S, y reemplazando
en la ecuacin anterior se encuentra el modelo de Monod:
S +
K
S
=
S
max
Y
d
h
6
=
K
/S X
C C
S
max
S

Donde:
Es una expresin que permite
un clculo aproximado de Ks
27
La temperatura ejerce una influencia determinante sobre el metabolismo
celular.
El crecimiento microbiano , al igual que las reacciones enzimticas, se bloquea
a baja temperatura y se acelera por el aumento de este parmetro, a
temperaturas altas se perturba dicho crecimiento por la alteracin de ciertos
componentes (enzimas, cidos nucleicos) o estructuras celulares (membrana
citoplsmica).
La tasa de crecimiento es optima en un rango estrecho de temperatura, segn
esta se distingue tres categoras de microorganismos:
Sicrfilos: Tiene una temperatura optima de crecimiento prxima a los
5 C. No crecen a temperaturas mayores a los 25 C.
Mesfilos: Temperatura optima de crecimiento prxima a los 30 C. No
crece a temperaturas < a 15 C y > a 45 C.
Termfilos: Se desarrollan favorablemente a temperatura prximas a los
55 C no crecen a temperaturas < a 37 C y >65 C.
INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO SOBRE EL INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO SOBRE EL
CRECIMIENTO CRECIMIENTO
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL CRECI MI ENTO EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL CRECI MI ENTO
DE DI VERSOS MI CROORGANI SMOS DE DI VERSOS MI CROORGANI SMOS
TEMPERATURA (C)
MICROORGANISMO
Mnima Optima Mxima
Bacillus subtilis
Escherichia coli
Lactobacillus casei
L. termfilus
Nitrobacter sp.
Pseudomonas aeruginosa
Streptococus pirogenes
Streptomices termofilus
Candida parapsilosis
Sacaromices cerevisiae
Aspergillus niger
Btritis cinera
Rizopus sp.
15
10
10
30
-
0
15
20
0
0-5
-
0
7
30-37
30-37
28-30
50-63
25-28
37
37
40-45
20-25
28-36
37
20-25
25-30
55
45
40
65
-
42
40
50
30
40-42
<60
30
35
28

max
=A exp
H
1
*
E
R
( )
LA ECUACI LA ECUACI N DE ARRHENIUS N DE ARRHENIUS
El crecimiento microbiano es debido a un conjunto de reacciones enzimticas,
donde una de ellas limita al complejo. Esta reaccin limitante determina la tasa de
crecimiento mxima. La dependencia de la tasa de crecimiento de la temperatura se
establece por analoga a la cintica enzimtica a travs de la relacin de
ARRHENIUS:
E = Fraccin msica de la enzima especfica referida a la biomasa
H
1
* = Entalpa de activacin de la reaccin limitante (Kj / mol)
A = Constante (h
-1
)
R = Constante universal de los gases ( 0.00831 Kj K / mol)
T = Temperatura absoluta (K)
Esta expresin es valida en una rango estrecho de temperatura, prximo a la
temperatura optima de crecimiento.
Diferentes modelos se han propuesto para evaluar la influencia d Diferentes modelos se han propuesto para evaluar la influencia de e
la temperatura sobre el crecimiento de las c la temperatura sobre el crecimiento de las c lulas. A continuaci lulas. A continuaci n n
dos de ellos dos de ellos
K exp
H
2
R
( )

I
=

A
=
1 +

K exp
H
2

R
( )
1

max
= A exp H
1
*
E
R
( )

max =
A exp H
1
*
E
R
( )
1 +

K exp
H
2

R
( )
La ecuacin de Arrhniusse puede modificar, de manera que se pueda aplicar a un rango muy
grande de temperatura. Para esto se supone que la enzima que limita el crecimiento puede existir
sobre dos configuraciones distintas: una forma activa y otra inactiva. El equilibrio de estas dos
formas depende de la temperatura y puede ser formulado como sigue:

I
=Fraccin de la enzima inactiva

A
=Fraccin de la enzima activa
K =Constante
H
2
=Entalpa de inactivacin(Kj / mol)
Por definicin:
A +

I
=1, considerando esto en
la ecuacin anterior queda:
Considerando la fraccin de enzima activa en
la ecuacin de Arrhnius, se tiene:
Reemplazando
A
en la ecuacin precedente se
tiene la expresin general de tasa de crecimiento
mxima:
GENERALIZACION DE LA ECUACION DE ARRHENIUS
29
Esta ltima relacin se representa en la siguiente figura:
EFECTO DE LA TEMPERATURA DE INCUBACION SOBRE LA TASA DE
CRECIMIENTO MAXIMA DE UN MICROORGANISMO MESOFILO
10 20 30 40 50

max
Curva de activacin
Curva de inactivacin
T (C)
T
1
R
* H
) AE ( Ln Ln
1
max

A
=
1 +K exp
H
2
R
( )
1

max =
A exp
H
1
*
E
R
( )
1 + K exp
H
2
R
( )

=
1
* H
H
. K Ln . R
H
) optima ( T
1
2
2
Linearizando la ecuacin de Arrhenius,
se tiene:
Donde -H
1
*/ R representa la pendiente de la recta semilogartmica.
Los valores de H
1
* encontrados en la literatura estn
comprendidos entre 45 y 130 Kj/mol.
Los valores de H
2
se pueden
calcular a partir de la ecuacin:
Los valores de H
2
reportados en la
literatura, se encuentran entre 188 y
388 Kj/mol
Encontrados los valores de cambio
en las entalpas se puede encontrar
la temperatura optima de crecimiento
de la siguiente manera:
(d
max
/dT) = 0, se obtiene
30
La tasa de crecimiento de un microorganismo dado, en ciertas condiciones
toma un valor mximo para un pH o una zona de pH optima.
Las bacterias son generalmente neutrfilas, es decir crecen mejor a pH
prximo a 7. Algunas de ellas que tienen metabolismo acidgeno (produccin
de cidos orgnicos por vas metablicas: cido lctico, actico,...) crecen
bien a pH 3. Algunas de ellas que oxidan los compuestos azufrados en
sulfatos (thiobacillus) bajan el pH a 1.
Las levaduras y hongos se desarrollan bien en una amplia zona de pH
comprendida entre 3 y 8
La constante Ks no es afectada significativamente por el pH ni la
temperatura.
INFLUENCIA DEL pH DEL MEDIO DE CULTIVO SOBRE EL CRECIMIENTO INFLUENCIA DEL pH DEL MEDIO DE CULTIVO SOBRE EL CRECIMIENTO
MICROBIANO MICROBIANO
EVOLUCION DE LA TASA DE CRECIMIENTO EN FUNCION DEL pH PARA LA MAYORA DE
BACTERIAS
4 7 1 0 p H

m a x
En la literatura se reportan diversas ecuaciones que relacionan la tasa de
crecimiento con el pH. La ms utilizada es la ecuacin polinomial siguiente:

max
= a (pH)
2
+ b (pH) + c
.
En la figura se representa dicha ecuacin
Donde a, b y c son constantes
Las constantes a, b y c se encuentran con medidas experimentales.
El pH optimo se encuentra igualando la primera derivada de la ecuacin
anterior a 0:
d(
max
/pH) = 0 pH (optimo) = -b / 2a
31
dT
dP
r
P
=
En muchos procesos de fermentacin nos interesa la produccin de
un metabolito determinado.
El seguimiento de estos procesos se hace a travs de la evolucin de
la concentracin del producto formado.
En paralelo a la determinacin de la curva de crecimiento celular se
traza la curva del producto formado (P, en g/L).
La velocidad de produccin se determina, en cualquier momento a
partir dicha curva:
r
p
= Velocidad de produccin (g/L de medio . h)
P = Producto formado (g/L)
T = Tiempo (h)
CINETICA DE PRODUCCION DE METABOLITOS
dT
dP
X
1
X
r
.......... X
dT
dP
r
p
P
= = = =
Ttotal
P
= DAD PRODUCTIVI
f
De la misma manera que la velocidad especfica de crecimiento (), se define la
velocidad especfica de produccin del metabolito como:
= Velocidad especfica de produccin del metabolito (g/g de biomasa . h)
En industria de fermentacin se utiliza la nocin de productividad o
rendimiento horario, que se define como la relacin entre la cantidad de
producto obtenido y la duracin total del ciclo de produccin.
Donde:
P
f
= Concentracin de producto final (g/L de medio)
Ttotal = Duracin total del proceso (h).
En un proceso batch la duracin total (Ttotal) se determina como:
T
total
= T
N
+ T
R
+ T
S
+T
C
+T
V
T
N
= tiempo de lavado del fermentador
T
R
= tiempo de llenado de fermentador
T
S
= tiempo de esterilizacin
T
C
= tiempo de cultivo
T
V
= tiempo de vaciado del fermentador
32
La productividad permite evaluar el proceso de fermentacin:
sirve para estudiar la rentabilidad y dimensionamiento de la
instalacin.
La tendencia de la curva de produccin de metabolitos depende
de la curva de crecimiento. La relacin existente entre las dos
curvas vara de un metabolito a otro segn:
Su naturaleza
Su lugar en la actividad bioqumica celular
Los mecanismos de las reacciones metablicas que lo
originan.
La clasificacin de Gaden de 1955 distingue tres tipos de
metabolitos
Metabolitos de primer tipo
Metabolitos de segundo tipo
metabolitos de tercer tipo
t
Log X
X
P
P
S
S
t
Log X
X
P
P
S
S
t
Log X
X
P
P
S
S
Metabolitos de primer tipo: la sntesis
est ligada directamente al crecimiento
de las clulas y por lo tanto al
metabolismo del sustrato principal (S).
Metabolitos de segundo tipo: tambin
estn ligados al crecimiento celular, pero
son diferentes en el tiempo con respecto a
la degradacin del sustrato.
Metabolitos de tercer tipo: No estn
ligados al crecimiento ni al catabolismo
del sustrato principal.
33
dT
dX
Y
dT
dP

dT
dX
dT
dP
S / P
= =
Los productos del primer y segundo tipo provienen del metabolismo primario,
estn constituidos por compuestos esenciales al metabolismo de sntesis de
los constituyentes de la clula:
Ejemplos: Primer tipo produccin de etanol (Fermentacin alcohlica)
Segundo tipo produccin de cido lctico (fermentacin lctica)
Primer o segundo tipo, excrecin de enzimas
Primer tipo produccin de aminocidos
Los productos del tercer tipo provienen del metabolismo secundario y no son
esenciales para el crecimiento celular.
El estudio de la cintica de produccin de metabolitos consiste en establecer
las relaciones matemticas (modelos) que caracterizan la curva de produccin.
La velocidad produccin de metabolitos de primer tipo ligada al crecimiento
microbiano:
Y
P/x
= Cantidad de metabolito producido por unidad de biomasa
(g de producto / g de clulas).
X +
dT
dX
dT
dP
=
P - X +
dT
dX
dT
dP
n
=
La velocidad de produccin de metabolitos
de segundo tipo, parcialmente ligado
al crecimiento , se representa por:
Cuando hay inhibicin como conse-
cuencia del aumento de metabolitos
en el medio se utiliza:
, y son parmetros que dependen de las condiciones de cultivo
es decir:
Son parmetros que dependen de las condiciones de cultivo:
=
1
(pH, T, [O
2
],......)
=
2
(pH, T, [O
2
],......)
=
3
(pH, T, [O
2
],......)
En lo que concierne a los metabolitos del tercer tipo (metabolitos
secundarios), las ecuaciones muy complejas y establecidas
empricamente.
34
El aumento de la poblacin microbiana resulta de la reproduccin
de las clulas.
Los organismos unicelulares como las bacterias y levaduras se
reproducen por fisin celular (reproduccin asexual).
Las dos clulas bacterianas resultantes de la fisin son idnticas.
sin embargo algunas levaduras pueden dar lugar a dos clulas
diferentes (clula madre y clula hija), lo que conduce a una
poblacin heterognea.
Los hongos, bacterias y levaduras filamentosas, crecen
alargamiento y ramificacin. de acuerdo a las condiciones del
medio se puede formar micelio difuso o pellet.
El comportamiento de la poblacin microbiana debe considerarse
para seleccionar una tcnica de medicin de la biomasa.
TECNICAS PARA DETERMINAR POBLACION TECNICAS PARA DETERMINAR POBLACION
MICROBIANA MICROBIANA
Existen diversas tcnicas para determinar biomasa, sin embargo ninguna
de ellas es aplicable a todos los casos y los resultados que se obtienen no
son totalmente satisfactorios ya que probablemente estn sujetos a errores
y posibles interferencias.
Los mtodos se clasifican en dos categoras:
DIRECTOS: Determinan la concentracin de clulas presentes en el medio,
se aplican en el caso de levaduras y bacterias no
filamentosas.
INDIRECTOS: Utilizan indicadores bioqumicos relacionados con el aumento
de la biomasa (constituyentes celulares) o propiedades
asociadas al crecimiento (consumo de oxigeno, aumento de la
viscosidad.....).
Se emplean cuando los mtodos directos no son aplicables
(microorg. filamentosos) o cuando se desea simplificar la
determinacin con el objetivo de una automatizacin. Es
necesario establecer una correlacin adecuada entre la
biomasa y el parmetro considerado.
35
Las clulas se cuentan en un microscopio con la ayuda de una clula de numeracin.
Existen diferentes tipos de clulas de numeracin:
La eleccin de un tipo de clula de numeracin depender del tamao de
microorganismo. Entre los tamaos promedio de los diferentes microorganismos se tiene:
Algas unicelulares....................> 20 m.
Levaduras................................. 8 10 m
Bacterias....................................1 4 m
RECUENTO EN MICROSCOPIO RECUENTO EN MICROSCOPIO
Ventajas y desventajas del recuento en Ventajas y desventajas del recuento en microsc microsc pio pio
Ventajas Desventajas
Mtodo simpley rpido
Resultados inmediatos
Difcil deutilizar en caso declulas pequeas
(<1um), como algunas bacterias
Difcil en el caso declulas demucha movilidad
Riesgo deerror duranteel recuento visual en el
microscopio*
Riesgo de error en el caso de medios con slidos
insolubles o suspenciones
Tcnica no aplicablea organismos filamentosos
No utilizablepara microorganismos filamentosos
Es recomendablepara suspensiones quetiene
alrededor de10
6
clulas/mL**
Imposibledistinguir clulas vivas declulas
muertas
36
La suspensin celular se inocula sobre placas Petri que contienen un
medio cuya composicin tiene agar y otros elementos que favorecen
el desarrollo de los microorganismos.
Se incuba a la temperatura optima de crecimiento del microorganismo
y se cuentan las colonias despus de 24 48 horas.
RECUENTO EN AGAR RECUENTO EN AGAR
VENTAJAS DESVENTAJAS
Solo se enumera las clulas
vivas
No hay problema por slidos
solubles en el medio
Puede ser utilizada para toda la
gama de concentraciones
celulares (a condicin de utilizar
diluciones adecuadas)
Requiere de tiempo prolongado y
gran cantidad de material (placas con
agar, tubos de dilucin,...)
Resultados por defecto cuando
existen clulas asociadas
Riesgo de imprecisin por la
preparacin de numerosas diluciones
No utilizable para microorganismos
filamentosos
La biomasa se recupera por centrifugacin o filtracin, se lava con agua
destilada para eliminar los slidos retenidos entre las clulas y se seca a 105
C hasta peso constante.
DETERMINACION DE LA MATERIA SECA DETERMINACION DE LA MATERIA SECA
VENTAJAS DESVENTAJAS
Mtodo riguroso
Tcnica simple y fcil de utilizar
Utilizable para microorganismos
filamentosos
No permite distinguir clulas vivas de
clulas muertas
Poco reproducible a bajas
concentraciones celulares
No utilizable en para medios con
material insoluble
No permite un resultado inmediato
(secado +- 24h)
Resultados por defecto debido a
perdidas durante la separacin y
secado
37
Se basa en la dispersin de un rayo luminosos debido a las partculas
en suspensin.
En este caso se establece una relacin entre la DO y la materia seca
(g/l).
En la zona lineal se puede escribir la siguiente ecuacin:
DO= densidad ptica
= coeficiente de turbidez(l/g cm)
l = ancho de la clula de medicin (cm)
X = concentracin de biomasa (g/l)
El coeficiente de turbidez depende de:
La longitud de onda elegida (generalmente
se trabaja entre 500 y 700 nm).
De la forma y la talla (estado fisiolgico)
del microorganismo.
TURBIDIMETRIA (DETERMINACION OPTICA) TURBIDIMETRIA (DETERMINACION OPTICA)
DO= l X
DO
X(g/L)
CORRELA
LINEAL.
PARA UNA LOGINTUD
DE ONDA DETERMINADA
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA
TURBIDIMETRIA TURBIDIMETRIA
Ventajas Desventajas
Tcnica simple y fcil
de utilizar
Mtodo rpido y de
resultados inmediatos
Posible uso en
automatizacin
Mtodo no destructivo
No permite diferenciar clulas muertas de
clulas vivas
Las medidas son sensibles a los cambios
fisiolgicos del las clulas
Es necesario establecer una curva de
calibracin de materia seca
No utilizable en medios que contienen
material insoluble o emulsiones
Es necesario suspensiones homogneas
No utilizable para microorganismos
filamentosos
38
Dentro y fuera de un tubo, que contiene un orificio calibrado, se encuentran
dos electrodos de platino inmersos en un electrolito.
Se aplica una tensin continua en los bornes de los electrodos.
Las clulas pasan a travs del orificio, gracias a una aspiracin, y desplazan
un volumen de electrolito igual a su propio volumen.
RECUENTO ELECTRONICO RECUENTO ELECTRONICO
Esto genera un impulso elctrico cuya
amplitud es proporcional al volumen de
la clula.
Permite numerar hasta 5000 clulas /s,
adems permite diferenciarlas segn su
volumen. los resultados se presentan en
una curva de distribucin de tamaos
Es importante para las levaduras ya que
adems de numerarlas permite
dimensionarlas
Electrodos
Clulas
Dispositivo
demedida
Electroltos
Vaco
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL RECUENTO VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL RECUENTO
ELECTRONICO ELECTRONICO
Ventaj as Desventaj as
Mtodo rpido
Resultados instant-
neos
Tcnica sofisticada
No permite diferenciar clulas vivas de
clulas muertas
Resultados por defecto cuando hay clulas
asociadas
No aplicable en medios con partculas
insolubles
Riesgos de obstruccin del orificio
calibrado
39
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS METODOS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS METODOS
INDIRECTOS INDIRECTOS
Mtodo Ventajas Desventajas
Determinacin de
protenas
Se utiliza para todos los microorganismos
Tcnica simple y rpida
No permite diferenciar clulas
vivas declulas muertas
Interferencia con las protenas del
medio
Determinacin de
ADN
Se utiliza para todos los microorganismos
Est ausente en el medio de cultivo
Tcnica difcil y costosa
No permite diferenciar clulas
vivas declulas muertas
ATP- Se utiliza para todos los microorganismos
Ningn riesgo deinterferencia con el medio de
cultivo
Mtodo rpido y simple
Se distingue clulas muertas de clulas viva
Tcnica costosa
Resultados influenciados por el
estado fisiolgico delas clulas*
NADH por fluorimetra Se utiliza para todos los microorganismos
Ningn riesgo de interferencia con el medio
de cultivo
Mtodo rpido y simple
Se puede utilizar para medidas en lnea
Se distingue clulas muertas de clulas viva
Tcnica sofisticada
Resultados influenciados por el estado
fisiolgico de las clulas*
Determinacin de una
actividad enzimtica
Se utiliza para todos los microorganismos
Ningn riesgo de interferencia con el medio
de cultivo
Mtodo rpido y simple
Mtodo aproximado y poco
reproducible
Algunas interferencias debido a las
clulas muertas
Resultados influenciados por el estado
fisiolgico*
Consumo de sustrato y
variacin Parmetros
del cultivo
Utilizable para determinaciones en lnea. Mtodo de estimaciones groseras
40
Se puede distinguir , sobre la base de la tcnica de
alimentacin de sustrato, diferentes principios de cultivo en
fermentador.
Cultivo "Batch" (Sistema cerrado): Es la tcnica ms simple
donde la totalidad de elementos nutritivos estn presentes en
el medio de cultivos antes de la inoculacin. Ningn elemento
MODELIZACION DE CULTIVOS EN MODELIZACION DE CULTIVOS EN
FERMENTADOR FERMENTADOR FERMENTADOR FERMENTADOR
esencial es adicionado durante el cultivo.
Las clulas se desarrollan hasta agotar
completamente los sustratos del medio o
sufrir inhibicin por los productos de
reaccin.
El ciclo de produccin en el cultivo discontinuo o "batch" consta de las
siguientes etapas:
Llenado del fermentador con el medio de cultivo completo
Esterilizacin del fermentador y del medio
Inoculacin del fermentador
Perodo de cultivo con agotamiento del medio
Recoleccin de la biomasa y/o del medio conteniendo uno o ms metabolitos
Lavado del fermentador
Cultivo "Feed batch" (Sistema semi-abierto) : Se procede a un aporte
progresivo de sustrato al medio de cultivo, con el objetivo de mantener
constante la concentracin de un sustrato esencial (ejemplo : fuente de carbono)
o fragmentar el aporte de este de manera que se evite riesgos deinhibicin.
Cultivo contnuo (Sistema abierto) : Se aade solucin nutritiva estril
continuamente al bioreactor y se retira una cantidad estril equivalente de
solucin utilizada de los nutrientes con microorganismos. Se mantiene
constante el volumen en el reactor.
41
S K
S
S
max
+
=
X
S K
S
r ......
S K
S
........ X
dT
dX

dT
dX
r
dT Vr = VdX
dT
dX
r
S
max X
S
max X
X X
+
=
+
= = =
=
V, S, X
Hiptesis:
El fermentador es infinitamente mezclado (homogneo)
No hay mortalidad celular.
No hay formacin de producto.
El nico sustrato limitante es la fuente de carbono.
Se aporta oxgeno en exceso.
En estas condiciones se aplica la ecuacin de Monod:
V = Volumen de cultivo (m
3
)
S = Concentracin de sustrato limitante (g/L), con una variacin de S
0
a S
f
X = Concentracin de biomasa (g/L), con una variacin de X
0
a X
f
.
X y S son medidos durante el cultivo; mientras
max
y Ks
son parmetros caractersticos de las cepas. Estos son
constantes si las condiciones no se alteran durante la fermentacin.
MODELO DE CULTIVO EN MODELO DE CULTIVO EN BATCH BATCH
S
X
S / X S
S / X
X
S
r
r
Y ..Siendo, .......... X m
Y
r
dT
dS
r = + = =
El consumo de sustrato se expresa de la siguientes manera:
r
S
= Velocidad de consumo de sustrato (g/L h)
r
X
= Velocidad de produccin de biomasa (g/L h)
Y
X/S
= Coeficiente o rendimiento de conversin de sustrato
en biomasa (g de biomasa/ g de sustrato).
m
S
= Constante de mantenimiento (g de sustrato/g clulas.h)
m
S
=Representa la velocidad de consumo de sustrato que
proporciona la energa indispensable para mantener una
actividad metablica mnima de las clulas cuya divisin se ha
detenido.
m
S
x =Representa el consumo total de sustrato para mantener la
biomasa (g de sustrato/L.)
42
Es un cultivo discontinuo que es alimentado en elementos nutritivos
durante la fermentacin (sistema semi-abierto).
Estos elementos nutritivos pueden ser la fuente de carbono, ciertos
precursores o el medio completo, ..... .
La alimentacin puede ser intermitente o continua y de flujo constante o
variable.
El cultivo fed batch se utiliza en la produccin de biomasa, aminocidos,
cidos orgnicos, alcoholes y algunas enzimas
Es importante en el caso de sustratos
inhibidores, cuando hay represin
catablica o efecto glucosa
MODELO DE CULTIVO MODELO DE CULTIVO FED BATCH FED BATCH
V
P
S X
Q, Sa
Vo
V
F
V=Volumen de cultivo en el
fermentador (L)
Q= Flujo o caudal de alimentacin
(L/h)
Sa=Concentracin de sustrato limi-
tante en la alimentacin (g/L).
EMPLEO DE LA FERMENTACION EMPLEO DE LA FERMENTACION FED BATCH FED BATCH EN LA EN LA
PRODUCCION DE METABOLITOS PRODUCCION DE METABOLITOS
Se utiliza en el caso de metaboltos no asociados al crecimiento de las
clulas (segundo y tercer tipo)
Las condiciones de sntesis del producto no son compatibles con el
crecimiento de las clulas
Sin embargo se requiere alta concertacin de biomasa para lograr la
sntesis de gran cantidad de producto
Una solucin frecuentemente
utilizada consiste en realizar
la fermentacin en dos perodos:
primero un perodo de crecimiento
seguido de un periodo de produccin
del metabolto
PERIODO DE CRECIMIENTO PERIODO DE PRODUCCION
X
P
V
T(h)
X
,

P
,

V
Batch Fed-batch
X
P
43
X m
Y
r
= r r
dT
dS
X
+S K
S
= r r
dT
dX
S
S / X
X
S S
S
max
X X
+ =

=
HIPOTESIS:
No hay mortalidad celular.
Se aporta oxgeno en exceso
La fuente de carbono es el sustrato limitante
Los otros nutrientes se aportan en cantidades suficientes
La mayor parte de las ecuaciones utilizadas para los cultivos
batch, se aplican al periodo fed-batch.
Periodo de crecimiento (batch):
V= cte
Se utiliza las siguientes ecuaciones
Periodo de produccin del
metabolto (fed batch)
0
dT
dV
Constante V >
La poblacin total de clulas en el fermentador permanece constante:
V X = Constante (g)
El incremento en clulas es nulo:
La variacin de la concentracin de biomasa depende de la dilucin por
adicin de sustrato:
Balances de masa en el proceso:
S 0 : Durante el cultivo fed-batch el sustrato es completamente consumido a
medida que se va adicionando.
V
0
(V =V
0
) : Volumen del medio de cultivo al inicio de la produccin
V
F
(V <V
F
) :Volumen al final de la produccin
X
P
: Concentracin de las clulas al inicio del periodo de produccin
o) crecimient hay (no 0 = r con .... 0
dT
) VX ( d
X
=
V
X
dT
dV
dT
dX
=
BALANCE DE BIOMASA:
44
)
V
S
dT
dV
(
)
V
Sa
Q (
V
Sa
Q
V
S
dT
dV
r
dT
dS
S
+ =
La variacin de la concentracin de sustrato en el fermentador depende de:
La velocidad de consumo de sustrato por la clula (r
S
)
La dilucin del medio por la adicin de sustrato:
El aporte de sustrato al fermentador:
Con estas consideraciones la variacin en la concentracin de sustrato est
dada por:
Considerando que la concentracin en sustrato permanece constante y
prxima a 0 (S 0), la ecuacin anterior se reduce a :
BALANCE DE SUSTRATO BALANCE DE SUSTRATO
)
V
P
dT
dV
(
X r con
V
P
dT
dV
r
dT
dP
P P
= =
La variacin en la concentracin del metabolito depende de:
La velocidad de produccin est dada por r
p
La dilucin del producto por la adicin de sustrato, est dada por
BALANCE DE PRODUCTO BALANCE DE PRODUCTO
Constante) = (Q Q
dT
dV
= Adems ,
V
Sa
Q
V
S
dT
dV
r
dT
dS
S
+ =
CONSIDERANDO LA MORTALIDAD CELULAR:
K
d
: Es la tasa de mortalidad celular (h
-1
)
La mortalidad celular tiene un efecto sobre la amplitud de la fase de produccin, pero no afecta
la concentracin final de producto. Por tanto slo la productividad global del proceso es
afectada.
En resumen:
Las ecuaciones del periodo de
produccin de metabolitos de un
cultivo fed batch son:
En el periodo de crecimiento
(correspondiente al cultivo batch),
se tiene:
En el periodo de produccin se tiene:
Y
P/S
: Rendimiento de conversin de sustrato en producto (g de
producto/g de sustrato)
V
X
Q X K r
dT
dX
d X
= =
( ) X rP
V
P
Q r
dt
dP
0
dt
dS
V
Sa
Q r
0
dt
dX
0 r
P
S
X
= =

= =

= =
X m
Y
r
r
S
S / P
P
S
+ =
X m
Y
r
r
S
S / X
X
S
+ =
45
EMPLEO DE LA FERMENTACIN FED BATCH EN LA PRODUCCION DE BIOMASA
Las hiptesis son similares a las mencionadas para la produccin de metabolitos:
Presenta tambin dos perodos:
Perodo de cultivo batch que corresponde a la constitucin celular (pie de cuva)
Perodo de cultivo fed-batch donde se procede al aporte progresivo de sustrato.
Las ecuaciones para el periodo batch se vieron anteriormente y para el periodo fed batch son
las siguientes:
PARA LA BIOMASA
La variacin de la concentracin de clulas depende de lo siguiente:
Velocidad de divisin celular (r
X
)
La dilucin de las clulas en el medio
PARA EL SUSTRTATO
PARA EL VOLUMEN

V
X
dT
dV
X
V
Q
X
V
X
dT
dV
r
dT
dX
X
= =
V
Sa
dT
dV
V
S
dT
dV
r
dT
dS
S
+ = [ ]
S S
r S Sa
V
Q
V
Sa
Q
V
S
Q r
dT
dS
= + =
Q
dT
dV
=
Variacin del volumen de V
0
a V
f
Caudal variable de Qmina Qmax
Caso de un sustrato inhibidor
La alimentacin (Q) se efecta
de tal manera que se mantenga
la concentracin en sustrato (S)
por debajo de un valor crtico.
La instalacin consta de un
sistema de medicin en lnea de
dicho sustrato. El equipo ajusta
continuamente el flujo de
alimentacin (Q) de manera que
la concentracin (S) se
mantenga por debajo del valor
crtico.
[ ]
S K
S
y X
V
Q
X
dt
dX
biomasa la Para
X m
Y
r
r
r S Sa
V
Q
......... 0
dT
dS
....... constante. = S
S
max
S
S / X
X
S
S
+
= =
+ =
= =
INICIO DE LA
ALIMENTACION
S=CONSTANTE
P
I
E

D
E

C
U
V
A
S
T
0 T
0
INICIO DE LA
ALIMENTACION
X
T
0 T
0
P
I
E

D
E

C
U
V
A
46
Caso de una levadura (ejm. Sacharomices cerevisiae)
sensible al efecto glucosa:
En este caso el fermentador es alimentado por una solucin concentrada
de glucosa (Sa) en funcin de un parmetro que caracteriza el estado
fisiolgico de la levadura. El parmetro elegido es el cociente respiratorio
(QR), que se define como la cantidad de CO
2
producido por la levadura y
la cantidad de oxgeno consumido. QR debe estar prximo a 1 para un
buen funcionamiento del fermentador
Si QR > 1... El regulador disminuye la alimentacin de
glucosa
Si QR = 1... El regulador mantiene constante la
alimentacin de glucosa
Si QR < 1... El regulador aumenta la alimentacin de
glucosa
VENTAJAS DEL CULTIVO VENTAJAS DEL CULTIVO FED FED- -BATCH BATCH
Permite la utilizacin de sustratos que a cierta concentracin
inhiben el crecimiento celular. Ejemplo hidrocarburos, etanol,
....
Aumenta la concentracin de biomasa y la productividad,
respecto a la produccin batch.
Favorece un metabolismo en detrimento de otro (fermentacin o
respiracin).
La produccin de metaboltos asociados a la fase estacionaria
gracias a la modulacin del aporte de un sustrato (antibiticos,
hormonas, enzimas).
Un cultivo fed-batch presenta menos riesgos de contaminacin
y mutacin que el cultivo continuo.
Un cultivo fed-batch necesita de un sistema de regulacin y de
control ms costoso que en modo batch y adems es ms
difcil de poner a punto.
47
PRODUCTO TIPO DE ADICION
Levadura
Glicerol
Acetona y butanol
Riboflavina
Penicilina
Proteasas
Novobiocina
Acido glutmico
Griseofulvina
Rifamicina
Giberelina
Vitamina B12
Tetraciclina
Acido ctrico
Lisina
Protena unicelular
Estreptomicina
Melaza, fuente de N, P y Mg
Azcar, carbonato de Na
Mosto
Carbohidratos
Glucosa y amonio
Glucosa e hidrolizado de caseina
Varias fuentes de C y N
Amonio
Carbohidratos
Glucosa, cidos grasos
Glucosa
Glucosa
Glucosa
Carbohidrato y amonio
Etanol y urea; etanol y amonio
Metanol
Glucosa y amonio
PROCESOS EN LOS QUE SE HA UTILIZADO LA PROCESOS EN LOS QUE SE HA UTILIZADO LA
FERMENTACION FERMENTACION FED FED- -BATCH BATCH
Se trata de un sistema abierto donde se aade continuamente solucin
de nutrientes y se retira una cantidad equivalente de suspensin
celular (medio utilizado + clulas). De esta manera el volumen de
medio en el fermentador permanece constante.
Se caracteriza por establecer un estado estacionario (estable)
permaneciendo todas las condiciones constantes (medio en que se
encuentran las clulas, poblacin celular y estado fisiolgico).
CULTIVO CONTINUO CULTIVO CONTINUO
V: Volumen de cultivo en el fermentador (L)
Q: Caudal de alimentacin (L/h)
Sa: Concentracin en sustrato limitante (g/L).
Generalmente (dV/dt)=0
Qa=Qs=Q
V
P
S
X
Qa, Sa
V
Qs, X,
S, P
48
Ejemplo: Ejemplo: si D = 0.5 h
-1
, significa que el caudal de alimentacin es tal
que en una hora se renueva la mitad del volumen del fermentador. En
este caso el tiempo de permanencia es de 2 horas.
La concentracin de biomasa (X), de sustrato (S) y de producto (P)
dependen del caudal de alimentacin (Q) y por tanto de la tasa de
dilucin (D):
BALANCE DE BIOMASA
Cambio neto en la biomasa = Crecimiento - salida
X ) D ( DX X DX r
dT
dX
X
= = =
La tasa de dilucin est dada por:
El tiempo de permanencia del medio en el fermentador est dado
por:
(h)
D
1

Q
V
= =
) (h
V
Q
D
1 -
=
Una fermentacin continua se inicia con un cultivo en batch, el
que continua hasta que las clulas alcancen una concentracin o
estado fisiolgico dado. Luego se empieza la fermentacin
continua propiamente dicha.
El cultivo continuo se diferencia del cultivo batch o fed-batch por
una alimentacin continua de sustrato y retiro de una cantidad
equivalente de suspencin celular, manteniendo constante el
volumen en el fermentador
BALANCE DE SUSTRATO
Cambio neto en la concentracin de sustrato = Entra - Sale - Consumo
BALANCE DE PRODUCTO
S S
r D ) S Sa ( r DS DSa
dT
dS
= =
DP r
dT
dP
P
=
49
D
Dc Dmax
D
X
S
X
g
Sa
0
0
En un cultivo continuo la
evolucin de la biomasa, sustrato y
producto depende de la tasa de
dilucin D.
Dmax: Tasa de dilucin correspondiente
a la productividad mxima.
Dc: Tasa de dilucin crtica. Dc=max
S
X
X 0
S Sa
B ATCH CONT INUA D >DC
S
X
T
Siempre D <Dc.
En efecto si D >Dco D >D max
La concentracin de cae hasta desaparecer y ser
reemplazada por medio fresco. Entonces se
dice que se ha lavado completamente el
cultivo.
( ) 0
dT
dX
........ X D
dT
dX
... max....... > D < =
EFECTO DE LA TASA DE DILUCION SOBRE LA
CONCENTRACION DE BIOMASA EN EQUILIBRIO (X),
DE SUSTRATO (S), EL TIEMPO DE GENERACION (g) Y
LA PRODUCTIVIDAD (DX)
EVOLUCION DE PARAMETROS DE UN CULTIVO
CONTINUO CON LAVADO
En la prctica se elige D tal que: (0 < D Dc) (0 < D max). En
todos los casos de valores posibles de tasa de dilucin los parmetros de
cultivo tienden hacia un estado estacionario aparente, definido por el
establecimiento del equilibrio:
En el periodo de transicin (antes de llegar al equilibrio) la biomasa
aumenta y el contenido de sustrato disminuye debido al consumo
0 ) D ( con X ) D (
dT
dX
max max
>>> =
So)D (Sa r tanto lo Por
Sa So con r So)D (Sa
dT
dS
S
S
>>
=
(dX/dt) >>>0, que significa que la biomasa
aumenta rpidamente
(dS/dt) <<<0, que significa que la sustrato
disminuye debido al consumo
Cuando se establece el equilibrio:
0 D 0
dt
dX
0 X ) D (
dT
dX
= = = =
X y S tienden al equilibrio:
X Xeq y S Seq
50
LnX
T
Xeq
Seq
Batch Quimiostato
Inicio de la
alimentacin
<
max
En el caso del quimiostato la tasa
de crecimiento alcanzada en el
equilibrio eq <
max
, es el resultado
de una concentracin limitante en
sustrato Seq. Es entonces la
concentracin en sustrato limitante
en el equilibrio lo que controla el
cultivo continuo.
El nombre quimiostato se debe a
que el estado estacionario resulta
de la accin limtante de un
elemento qumico
QUIMIOSTATO QUIMIOSTATO
( ) D< max..........
dX
dT
= > D X
dX
dT
........ 0
SE INCREMENTA LA BIOMASA: XXeq; SSeq eq
ESTABLECIMIENTO DEL EQUILIBRIO
EN UN CULTIVO CONTINUO TIPO
QUIMIOSTATO
El Cultivo es controlado por la concentracin en sustrato. En efecto
la estabilidad del sistema se basa en la limitacin de la tasa de
crecimiento por la concentracin en sustrato limitante (C, N, P, S,
O
2
.....).
Al iniciar el quimiostato los parmetros de cultivo varan hasta alcanzar el estado
estacionario (equilibrio).
El estado estacionario resulta de la accin limitante de un elemento qumico del
medio de cultivo (sustrato limitante).
Consideremos un modelo simple con un slo sustrato limitante (fuente de carbono)
el oxgeno se aporta en exceso y la mortalidad celular es despreciable. En estas
condiciones:
X =Xeq(concentracin de biomasa en el equilibrio)
S =Seq(concentracin de sustrato en el equilibrio)
51
En equi l i br i o se apl i c an l as si gui ent es ec uac i ones: En equi l i br i o se apl i c an l as si gui ent es ec uac i ones:
0 DSa DS r
dT
dS
0 DX X
dT
dX
S
= + =
= =

+
= + = + =
+
=
S
X/S
S
X/S
S
X/S
X
S
X/S
X
S
S
m
Y
D
Xeq
Xeq m
Y
DXeq
Xeq m
Y
r
Seq) D(Sa
Xeq m
Y
r
= r
r Seq) D(Sa
Xeq
Y D
D mY
Sa Seq
X S
S X S
=
+

/
/
( )
D max
D K
Seq ..........
Seq K
Seq
max D
D = ..... equilibrio el ........en
S K
S
max
S
S
S

=
+
=

+
=
La concentracin de sustrato limitante en el equilibrio, depende
nicamente de la tasa de dilucin {Seq = K
S
(D/max-D)}. Es
independiente de la concentracin del sustrato limitante en la
alimentacin (Sa). Como K
S
, es muy pequea, Seq ser muy pequea
cuando D<<Dc (Ver Figura):
D
Dc Dmax
D
X
S
X
g
Sa
0
0
Se observa que cuando la tasa de
dilucin vara entre 0 y Dmax, slo
existe una variacin muy pequea
de S y X en equilibrio.
Si se desprecia la energa de
mantenimiento m
S
:
Xeq Y
X/S
(Sa - Seq)
La concentracin celular en el
equilibrio es funcin de la
concentracin de sustrato limitante
en el equilibrio (Seq
52
Considerando que Seqes muy pequea (Seq<<<Sa), se tiene:
Xeq Y
X/S
Sa
El tiempo de generacin (g) disminuye cuando aumenta la tasa de dilucin:
La productividad vara segn:
La productividad mxima se obtiene al hacer (d Productividad /d Xeq) =0
La productividad es mxima para:
En resumen lo observado en la ecuaciones anteriores para Xeq y Seq con respecto
a la tasa de dilucin (D) permite concluir que los cultivos en quimiostato utilizan
una gama de tasa de dilucin comprendida entre 0 y Dmax (varios valores de
Seq).

+
= =
Sa K
K
1 max Dmax D
S
S
(g/Lh) D ) Seq Sa ( Y D Xeq d oductivida Pr
S / X
= =
D
2 Ln
eq
2 Ln
g = g ... D......... = eq ...... ..........

=
Desde un punto de vista prctico, los quimiostatos pueden constituir una
herramienta valiosa en muchos estudios fundamentales :
Permite proveer de microorganismos en fase de crecimiento exponencial
para una tasa (estandarizacin).
Mantiene las condiciones constantes para un largo perodo, con una gran
cantidad de clulas, facilita el estudio de seleccin de mutantes.
Los quimiostatos pueden trabajar eficientemente con bajos niveles de
nutrientes, lo que permite la simulacin de condiciones naturales en
estudios ecolgicos.
Los quimiostatos son ventajosamente utilizados en la determinacin de
parmetros cinticos Ks y
max
:
Esta determinacin se basa en la grfica: 1/ =(1/S).
En el quimiostato se evala: 1/D =(1/Seq)
En este ltimo caso tres o cuatro determinaciones son suficientes
para establecer los parmetros cinticos.
El cultivo continuo en quimiostato, cuya tasa de dilucin puede variar entre 0 y
Dmax, es interesante para la optimizar de medios de cultivo en fermentacin.
53
La tasa de dilucin se puede elegir de tal manera que se igual a a tasa de crecimiento
mxima : D =
max
. cte Xo X que Puesto 0 X ) D (
dT
dX
max
= = = =
En estas condiciones el sustrato no es un factor limitante y la
concentracin de clulas en el equilibrio puede elegirse
arbitrariamente.
En trminos generales, en el quimiostato la tasa de crecimiento () es
controlada por la tasa de dilucin (D) que mantiene la concentracin
en sustrato limitante constante.
En el turbidostato, la concentracin en biomasa (X) es con frecuencia
controlada a travs de la regulacin de la tasa de dilucin.
TURBIDOSTATO TURBIDOSTATO
Se basa en mantener constante la concentracin celular (turbidez).
Las variaciones en la turbidez indican modificacin de la biomasa y se miden
gracias a un dispositivo ptico alimentado por una bomba..
De esta forma al biomasa requerida se mantiene constante regulando la tasa
de dilucin (D).
El turbidostato contiene en exceso todos los elementos nutritivos y el
microorganismo crece con una tasa prxima a
max
.
El turbidostato es menos empleado que el quimiostato, debido a la dificultad
de medir la turbidez en fermentadores de paredes opacas. Actualmente se
emplean mtodos indirectos como la produccin de CO
2
el consumo de O
2
que responden a los cambios ocurridos en la poblacin microbiana.
54
LnX
T
X
B
a
t
c
h
INICIO DE LA
ALIMENTACION
3

T
U
R
B
I
D
O
S
T
A
T
O
S
D
I
F
E
R
E
N
T
E
S
=
max
1
2
3
Como el cultivo est en fase de crecimiento
exponencial:
La tasa de dilucin se elige de tal manera que
esta sea igual igual a
max
( )
D =
=
0 = D -
x
ma
max

= = 0 X D
dT
dX
TASA DE
DILUCION
TIPO DE CULTIVO
CONTINUO
EVOLUCION DE LOS
PARAMETROS
D > max Lavado
X--0
S--Sa
D < max Quimiostato
X ---- Xeq
S----- Seq
-- eq = D
D = max Turbidostato
X = Cte
= max
EN RESUMEN LOS DIFERENTES MODELOS DE
FERMENTACION CONTINUA SON
55
Contaminacin e inestabilidad gentica
La contaminacin es un serio problema principalmente cuando la fermentacin
se realiza por largos perodos.
La contaminacin y aparicin de mutantes depender de la tasa de crecimiento
de estos (
c
) respecto al microorganismo original (
o
) .Hay tres posibilidades:

o
<
c
: La poblacin de microorganismo mutante o contaminante aumenta
rpidamente y reemplaza progresivamente al microorganismo original. Es un
problema del cultivo continuo de pequea tasa de crecimiento.

o
=
c
: La poblacin de microorganismo mutante o contaminante tiene una tasa
de crecimiento igual a la del microorganismo original. Se puede controlar si la
velocidad de entrada del contaminante o de mutacin son bajas mutante Es un
problema del cultivo continuo de pequea tasa de crecimiento.

o
>
c
: La poblacin de microorganismo mutante o contaminante es baja. No
ocasiona problemas salvo que la velocidad de entrada del mutante o velocidad de
mutacin sean altas.
La contaminacin en el cultivo continuo es un problema difcil de resolver a escala
industrial. Sin embargo ciertos medios o condiciones de cultivo (pH cido o
alcalino, medio mineral, sustratos especficos,....) limitan considerablemente las
infecciones.
Las mutaciones espontneas son muy difciles de controlar.
PROBLEMAS ASOCI ADOS AL CULTI VO CONTI NUO PROBLEMAS ASOCI ADOS AL CULTI VO CONTI NUO
PRODUCCIN DE VINAGRE (FERMENTACIN ACTICA)
Produccin de cido actico a partir de soluciones de etanol y otros
nutrientes.
La presencia de etanol y el pH bajo durante la produccin limitan el
riesgo de infecciones.
TRATAMIENTO BIOLOGICO DE AGUAS RESIDUALES
APLICACIN DEL CULTIVO CONTINUO
REACTOR REACTOR
AEROBIO AEROBIO
DECANTACION DECANTACION
RECIRCULACION DE BIOMASA RECIRCULACION DE BIOMASA
AGUA TRATADA AGUA TRATADA
56
PRODUCCIN DE PROTENA UNICELULAR (SINGLE-CELL PROTEIN)
Sec ado
Cent r i f ugac i n
Rec i c l aj e
Pr epar ac i n
del medi o
Est er i l i zac i n
c ont i nua
Fer ment ac i n
c ont i nua
Met anol
Agua
Na
K
Mg
Si ngl e-c el l pr ot ei n
EL PROCESO BIOTECNOLOGICO EL PROCESO BIOTECNOLOGICO
R
E
C
U
P
E
R
A
C
I
O
N
,

E
X
T
R
A
C
C
I
O
N
P
U
R
I
F
I
C
A
C
I
O
N
PRIMERA ETAPA DE MULTIPLICACION
SOBRE MEDIO LIQUIDO
(15 a 24 h)
SEGUNDA ETAPA DE MULTIPLICACION
EN FERMENTADOR
24 a 36 h
PRODUCCION EN
FERMENTADOR PRINCIPAL
(24 a 150 h)
CONSERVACION AMPOLLA
LIOFILIZADA
(VARIOS MESES)
REGENERACION SOBRE CALDO
NUTRITIVO Y REPIQUE EN AGAR
INCLINADO (24 h-10 DIAS)
57
ESQUEMA DE UNA INSTALACION AUTOMATIZADA DE FERMENTACION ESQUEMA DE UNA INSTALACION AUTOMATIZADA DE FERMENTACION
PREPARACION DEL INOCULO
BIO-REACTOR
ESTERILIZACION
PREPARACION DEL
MEDIO DE CULTIVO
COMPRESOR
FILTRO DE ACEITE
FILTRO
ESTERILIZANTE
GAS
CONTROLES
T
P
pH
Caudal de gas
Espuma
Agitacin,.....
MEDIDAS
CO
2
O
2
T cultivo
T esterilizacin
Velocidad de agitacin
Potencia consumida
pH
Viscosidad
Potencial redox
BASES TECNOLOGICAS Y MICROBIOLOGICAS EN LA CONCEPCION DE BASES TECNOLOGICAS Y MICROBIOLOGICAS EN LA CONCEPCION DE
BIORREACTORES BIORREACTORES
Fen Fen menos de menos de
transferencia transferencia
N, P/V; T N, P/V; T
M M
, K , K
T T
, , Q Q
a a
, , K K
L L
a a
Cin Cin tica tica

r r
X X
, , r r
S S
, r , r
0 0
P P
P,X P,X
Sustrato Sustrato Reactivos Reactivos
Agitaci Agitaci n n- -aireaci aireaci n n
r r
P P
X X
Medio Medio
pH, pH, T T , , C C
L L
, , , ,
58
BIORREACTOR BIORREACTOR
MANTIENE EN CONTACTO: CELULAS-LIQUIDO (S)-GAS
TRANSFERENCIA
DE MASA:
SUSTRATOS: MEDIO CELULAS
PRODUCTOS: CELULAS MEDIO
REACTIVOS: MEDIO MEDIO
O
2
: GAS MEDIO CELULAS
TRANSFERENCIA DE
CALOR
MEDIO INTERCAMBIADOR
CLULAS MEDIO INTERCAMBIADOR
ASEPTICO
MANTENER LA INTEGRIDAD DE LAS CLULAS
Additi on de Additi on de
base et/ou acide base et/ou acide
Broyeur de mousse Broyeur de mousse
Sortie d Sortie d air air
Pr Pr l l vements vements
Milieu de culture Milieu de culture
Arri v Arri v e d e d air filtr air filtr
Moteur Moteur
Circuit de Circuit de
refroidissement refroidissement
et maintien de et maintien de
temp temp rature rature
Sonde temp Sonde temp rature rature
Sonde O Sonde O
2 2
et/ou pH et/ou pH
Syst Syst me d me d agitation agitation
palettes palettes
Arri v Arri v e de l e de l inoculum inoculum
sch sch ma g ma g n n ral d ral d une une
cuve de fermentation cuve de fermentation
59
Es esencial en el metabolismo aerobio productor de energa: aceptor final de
elctrones y protones producidos por las reacciones de oxidacin.
Ciertas bacterias (Clostridium), no poseen las enzimas necesarias para el
metabolismo aerobio. De otra parte el H
2
O
2
que ciertas ciertas bacterias producen
y no pueden eliminar inhibe su crecimiento.
El oxgeno interviene en mecanismos de regulacin del metabolismo de manera
directa, como inductor o represor de las enzimas respiratorias. Pero tambin de
manera indirecta por su rol en le metabolismo energtico
La demanda de oxgeno es representada por Qo
2
que se define como la cantidad
de oxgeno consumida por unidad de tiempo, volumen y por unidad de biomasa.
Q
O2
X (mmoles de O
2
/L h)
Igualmente la cantidad de Co2 producida durante la fermentacin se
representa por:
Q
CO2
X (mmoles de CO
2
/L h)
TRANSFERENCI A DE OXI GENO
QO
2
X
QO
2
C
L
K
L
aC*
X
EVOLUCION DEL CONSUMO DE OXIGENO DURANTE EL EVOLUCION DEL CONSUMO DE OXIGENO DURANTE EL
CRECIMIENTO MICROBIANO CRECIMIENTO MICROBIANO
2 2 O
2
m
O K
O
+
=
La tasa de crecimiento se puede escribir:
Se puede deducir que si concentracin de O
2
es inferior a la concentracin
crtica (O
2
), la tasa de crecimiento es inferior a la tasa de crecimiento
mxima y proporcional a la concentracin de oxgeno.
60
Etapas en la transferencia de oxgeno
Etapa 1
Pelcula gaseosa
Clula
Etapa 2
Pelcula lquida
Etapa 4
Etapa 5
BURBUJA BURBUJA
GASEOSA GASEOSA
MODALIDADES DE LA TRANSFERENCIA DE OXIGENO MODALIDADES DE LA TRANSFERENCIA DE OXIGENO
Las teorias ms importantes para establecer la ecuacin de
transferencia de oxgeno son:
La teora de las pelculas laminares
La teoria de la difusin continua
Etapa 3
Al interior de la burbuja de
gas se establece un
gradiente de presin parcial
de oxgeno debido a la
presencia de la pelcula
gaseosa
La prsein parcial de
oxgeno en la interfase Pi,
esta en equilibrio con la
concentracin Ci de oxgeno
disuelto
En el lquido se establece un
gradiente de concentracin
de oxgeno disuelto debido a
la pelcula liquida.
TEORIA DE LAS PELICULAS LAMINARES
FASE LIQUIDA
FASE GASEOSA
INTERESA GAS-LIQUIDO
Pelcula
gaseosa
Pelcula
lquida
P
P
i
C
L
C
i
61
Para establecer la ecuacin de transferencia se supone que:
Que el regimen es estacionario (independiente del tiempo) y que equilibrio
entre Pi y Ci se alcanza instantaneamente cuando el gas y el lquido se
ponene en contacto.
La ecuacin de transferencia es:
) C * (C a K P*) (P a K
dt
dC
L
L
G
L
= =
Donde:
dC
L
/dt = Velocidad de transferencia de oxgeno (mmoles de O
2
/L h)
K
G
= Coeficiente global de trnasferencia de masa respecto a la pelcula gaseosa
(Cm/h)
K
L
= Coeficiente global de trnasferencia de masa respecto a la pelcula lquida
(Cm/h)
a = Superficie especfica de transferencia (Cm
2
/Cm
3
)
P* = Presin parcial de oxgeno (atm) en equilibrio con C
L
C* = Concentracin de oxgeno disuelto (mmoles de O
2
/L) en equilibrio con la
presin parcial de oxgeno en la fase gaseosa (P)
e
BURBUJA
DE GAS
LIQUIDO
C*
C
L
La transferencia de oxgeno se da a
travs de una pelcula nica de
pequeo espesor y en regimen
estacionario
TRANSFERENCI A DE OXI GENO SEGUN LA TEORI A DE DI FUSI ON
CONTI NUA
) C * C ( a K
d
dC
L L
t
L
=
Suponiendo un mecanismo de transferencia
unidireccional, la ley de Fick se escribe:
Donde:
dC
L
/dt = Velocidad de transferencia de oxgeno (mmol O
2
/Lh)
K
L
= Coeficiente de transferencia de masa (cm/h)
a = Superficie especfica de transferencia (Cm
2
/Cm
3
)
C
L
= Concentracin de O
2
disuelto en el lquido (mmolO
2
/L)
C* = Concentracin de O
2
disuelto, en equilibrio con la burbuja de gas
(mmolO
2
/L)
En todas las ecuaciones C*, representa la concentracin de
oxgeno disuelto correspondiente a la saturacin.
62
X Qo ) C * (C a K
dt
dC
2 L L
L
=
) C * (C a K
dt
dC
L L
L
=
X Qo
dt
dC
2
L
=
0
dt
dC
L
=
L
2
L
C * C
X Qo
a K

=
Durante la ferementacin:
Donde Qo
2
X representa la cantidad de O
2
consumido por unidad
de volumen (mmoles/Lh)
En ausencia de microorganismos se tiene:
Si la transferencia de O
2
es cero (no hay agitacin
aireacin):
Si no hay variacin en la concentracin de O
2
disuelto
(C
L
, cte):
METODOS PARA DETERMINAR K
L
a
La medicin de K
L
a (h
-1
), denominado tambin coeficiente
volumterico, permite determinar la capacidad de transferencia de
oxgeno del reactor
Los factores sobre los que se puede actuar para influir en la
velocidad de transferencia son: K
L
a y C* -C
L
Reemplazando el air por oxgeno puro se aumenta el
potencial de transferencia C* -C
L
Para aumentar K
L
a es necesario trabajar sobre la agitacin
Mtodo del sufito
Mtodo de la glucosa oxidasa
Mtodo microbiolgico
Mtodos de determinacin con sensores
Mtodo esttico
Mtodo dinmico
63
OXIDACION DEL SULFITO OXIDACION DEL SULFITO
Se basa en la oxidacion del sulfito a sulfato en presencia de un catalizador.
Se aade al medio de fermentacion Na
2
SO
3
(1N) y catalizador (10
-3
M Cu
2+
o Co
2+)
y se
inicia la aireacin en las condicones que se quiere determinar Kla.
La reaccin de oxido reduccin es la siguiente es la siguiente:
SO
3
--
+ H
2
O SO
4
--
+ 2 H
+
+ 2 e
-
1/2 O
2
+ H
2
O + 2 e
-
2 OH
-
La velocidad de la reaccin es limitada por la velocidad de disolucin del oxgeno
A diferentes intervalos de tiempo se toma una muestra y se determina el sulfito residual
por yodometria
SO
3
--
+ n I
2
+ H
2
O SO
4
--
+ 2 I
-
+ 2 H
+
+ (n-1) I
2
El yodo en exceso se determina por :
2 S
2
O
3
--
S
4
O
6
---
+ 2 e
-
I
2
+ 2 e
-
2 I
-
Siempre que se tenga sulfito C
L
es cero (reaccin rpida)
sulfito del oxidacion de Velocidad * C a K
L
=
Pendiente de la recta concen. de sultifo vs tiempo
Es un metodo simple y poco costoso. Es necesario evitar que las muestras tomadas estenexpuesta
al aire
Tiene la desventaja de que la solucin de sulfito no reacciona de la misma manera que el cultivo
X Qo ) C * (C a K
dt
dC
2 L L
L
=
En ausencia microorganismos y en
las condiciones en que se
desarrollar la fermentacin se
determina el K
L
a.
Despus de saturar el medio en
oxgeno disuelto, se detiene la
aireacin y se inyecta N
2
en la
solucin.
La concentracin de O
2
disuelto
tiende a cero
Despus de retomar la aireacin, la
concentracin de O
2
disuelto
aumenta; este aumento depende de
la capacidad de transferencia del
equipo.
METODOS ESTATICOS (EN AUSENCIA DE
MICROORGANISMOS) O DE DESGASIFICACION ESTATICA
t
C
L
0
Detener la
aireacin e
inyectar N
2
Retomar la
aireacin
64
X Qo ) C * (C a K
dt
dC
2 L L
L
=
) C * (C a K
dt
dC
L L
L
=
) C * (C a K
dt
dC
L L
L
=

=

dt a K
C * C
dC
L
L
L
t a K
-C * C
* C
Ln
L
L
=
Mtodo 1:
Considerando que:
Pero Qo
2
X=0
Mtodo 2:
Integrando la ecuacin:
Al momento de retomar la aireacin t
0
y C
L
=
0, para un tiempo t el valor C
L
Luego grficamente se obtiene
De dos maneras se puede determinar K
L
a
dt
dC
L
= K
L
a
)
C*-C
L
L
n

C
*
/

(
C
*
-
C
L
)
t
)
= K
L
a
X Qo - ) C * (C a K 0
dt
dC
2 L L
L
= =
a K
X Qo
* C C
L
2
L
=
X Qo -
dt
dC
2
L
=
* C
1
C
L
+ + = ) X Qo
dt
dC
(
a K
2
L
L
Tiene la gran ventaja de determinar el K
L
a durante el desarrollo de la
fermentacin. Consta de las siguientes etapas:
En primer lugar se debe llegar al
equilibrio entre la transferencia y
consumo de oxgeno (C
L
=cte).
Despejando se obtiene:
En segundo lugar se detiene la
aireacin y por tanto K
L
a = 0; luego
En tercer lugar se reestablece
las condiciones de aireacin y
la ecucin se puede escribir :
METODO DINAMICO (DESGASIFICACION DINAMICA)
t
C
L
0
C
L
Detener la
aireacin
Retomar la
aireacin
(
Qo
2
X
65
Para diferentes intervalos de
tiempo se determina C
L
a
travs del sensor y los clculos
se realizan segn la grfica
siguiente:
C
L
X Qo
dt
dC
2
L
+
1/K
L
a
(
El problema tambin se puede resolver matemticamente
* C
1
C
L
+ + = ) X Qo
dt
dC
(
a K
2
L
L
Es un mtodo interesante ya que permite la determinacin del K
L
a en
linea y su siguimiento durante la fermentacin. Se basa en la ecuacin
global de transferencia de oxgeno.
Puesto que en el equilibrio C
L
es constante, se tiene:
A travs del balance gaseoso, se determina el consumo de oxgeno:
X Qo - ) C * (C a K
dt
dC
2 L L
L
=
L
2
L
C * C
X Qo
a K

=
1
1 1 1
0
0 0 0
5
2
T
Y Q P
T
Y Q P
V
10 . 31 , 7
X Qo
METODO DEL BALANCE GASEOSO
V
C
L
Q
1
(L/min)
P
1
(atm)
T
1
(K)
F
1
(molO
2
)
Qo (L/min)
Po (atm)
To (K)
Fo (molO
2
)
Midiendo a travs de sensores
C
L
y conociendo C*, se puede
determinar K
L
a
66
Cuando se emplea grandes fermentadores, es necesario
tener en cuenta ciertas precauciones. En efecto el aire que
es introducido en la base del tanque, a medida que asciende
se empobrece en oxigeno, por lo qe se aplica la sigiete
ecuacin:
L
L
L L
2
L
C s * C
C e * C
Log
) C - s * (C ) C e * (C
X Qo
a K

=
Donde C*e y C*s, son las
concentraciones de
saturacin en oxgeno
correspondientes a la
entrada y salida
respectivamente.
I NFLUENCI A DE LOS CONSTI TUYENTES DEL MEDI O SOBRE LA
TRANSFERENCI A DE OXI GENO
Influencia de las sales
La presencia de sales modifica la concentracin de oxigeno
disuelto en la fase acuosa y las caractersticas de dispersin:
Disminuye el K
L
y aumenta la superficie especifica (a), el valor
de K
L
a generalmente aumenta.
Se observa la relacin:
Agentes tenso-activos
Disminuye el dimetro de las burbujas de gas (aumenta la
superficie) y de otra parte forma pelculas rgidas alrededor de
las burbujas. Disminuye el coeficiente de transferencia.
Compuestos orgnicos miscibles de bajo peso molecular
Aumenta la superficie de transferencia debido a una
disminucin de la tensin superficial.
10

) agua ( a K
) sal ( a K
L
L