MICROBIOLOGA

RECUENTO DE MESFILOS

CEY/2014

MICROBIOLOGA

RECUENTO DE MESFILOS AEROBIOS

ANDRS F. MONDRAGN A. JONNATHAN F. CARDONA G. NICOLS OSORIO M. DANIEL E. GEZ P. ALEXIS F. SNCHEZ LPEZ

OBJETIVOS

Conocer la tcnica para hacer recuento de mesfilos aerobios Estudiar la importancia de este recuento como indicador de la contaminacin de los alimento Practicar diluciones, siembras y recuento de microorganismos

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ASPECTOS GENERALES
Para investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento, la tcnica utilizada es la cuenta en placa. La variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxgeno disponible, etc., hacen que el nmero de colonias contadas constituyan una estimacin de la cifra de microorganismos presentes y refleja si el manejo sanitario del producto es el adecuado.

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ASPECTOS GENERALES
Es de utilidad para productos: Fresco-enfriados Congelados Precocidos o alimentos preparados. Se cuantifican tipos de bacterias que pueden crecer a 30-35 C en condiciones aerobias ya sean provenientes de la piel de las heces, manos, equipos, suelo, agua, etc.

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PROCEDIMIENTO
Dilucin en tubos.

BROCK, 10 a ed. 2009

PROCEDIMIENTO
Siembra por duplicado Adicin del PCA

EVIDENCIAS

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EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

N= C X D UFC/ml = (cantidad de colonias) * 1/dilucin
Para fines de esta norma se entiende por: Unidades Formadoras de Colonias (UFC), trmino que debe utilizarse para reportar la cuenta de colonias en placa, las cuales pueden surgir de una clula o de un cmulo de clulas.

BROC
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EJEMPLO
N- De colonias entre 30 y 300 Dilucin= 10-3 , factor de dilucin= 1000 Recuento de colonias: muestra A= 75 colonias y muestra B= 85 colonias Media= 80 colonias Resultado
N= C X D 3

8x10 U.F.C/mL

N= 80 x 1000= 8000 U.F.C/g mL

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INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Unidades formadoras de colonias, UFC/g o ml, de bacterias aerobias en placa en agar para cuenta estndar, incubadas 48 horas a 35 C.

DILUCIN 1x10-1 1x10-2 1x10-3 1x10-4 1x10-5 1x10-6

CANTIDAD DE MESFILOS MUESTRA A Incontables Incontables Incontables Incontables 1.27 x108 UFC/ml 7.6x108 UFC/ml

CANTIDAD DE MESFILOS MUESTRA B Incontables Incontables Incontables Incontables 1.13x108 UFC/ml 8.1x108 UFC/ml

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RAZONES DE PRESENCIA DE MESOFILOS

Excesiva contaminacin de la materia prima Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son Mesfilos La inmediata alteracin del producto.

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NORMAS DE REFERENCIA
placa ISO 7218:2007.

NTC 4092- 2009 12 16

Mtodo para la cuenta de bacterias aerobias en

NTC/ISO 17025 2005-10-26 dos diluciones ISO 17604:2003 conteo de microorganismos en la el proceso de sacrificio. ISO 15214:1998 ISO 21149:2006
Los mtodos ISO (2 placas por dilucin, confirmacin de 5 colonias) suelen utilizarse como mtodos de referencia Los mtodos NF (1 placa por dilucin, confirmacin de 3 colonias) se suelen emplear como mtodos de rutina, siendo los dos mtodos normalizados.

DISPONIBLE: http://service.udes.edu.co/modulos/documentos/karenmartinez/50159704-NTC4092.pdf consultado el 14 de marzo 2014 Pg 44-65

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NORMAS DE REFERENCIA
RANGOS PARA EL RECUENTO

DISPONIBLE: http://service.udes.edu.co/modulos/documentos/karenmartinez/50159704NTC4092.pdf consultado el 21 de marzo 2014 Pg 44-49

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NORMAS DE REFERENCIA
mesfilas LCTICAS - TCNICA DE COLONIAS DE RECUENTO a 30C

IS 16068 : 2013/ ISO 15214 : 1998 Mtodo horizontal para el recuento de bacterias
ISO 7218 : 1996 Microbiologa de los alimentos humano y para animales Reglas generales para los exmenes microbiolgicos ISO 6887-1 Preparacin de muestras de ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para examen microbiolgico

https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.16068.2013.pdf http://www.iso.org/iso/home.htm
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UFC mximas permitidas en jugos sin pasterizar BUENA MESOFILOS/g COLIFORMES TOTALES/g COLIFORMES FECALES/g SULFITO REDUCTOR/g HONGOS/LEVADURAS/g 20000 9 <3 <10 1000 ACEPTABLE 50000 <9 <3 <10 3000

CANTIDAD MXIMA DE MESOFILOS PERMITIDA

UFC mximas permitidas en jugos pasterizados BUENA MESOFILOS/g COLIFORMES TOTALES/g COLIFORMES FECALES/g SULFITO REDUCTOR/g HONGOS/LEVADURAS/g 1000 <3 <3 <10 100 ACEPTABLE 3000 200

Estos limites son establecidos por la NTC 4092. Procesamiento y conservacin de frutas, UNAL sede Bogot: http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/agronomia/2006228/teoria/obpulpfru/p2.htm

OBSERVACIONES
Qu fuentes de error podra usted tener en el desarrollo del mtodo?
En proceso de dilucin:
Esto sucede por usar la misma pipeta para pasar muestra de un tubo a otro para la dilucion. Lo ideal es usar una pipeta estril para cada tubo.

Tiempo:
Exceder el tiempo de los 20 min para depositar la muestra y el agar en las cajas. Esto podra generar contaminacin del medio.

Incorporacin del inoculo:

Despus de adicionar el medio se deben efectuar movimientos de rotacin , horizontales y verticales. Si estos no se hacen de manera correcta los microorganismos quedaran cargados en un solo lado.

Temperatura:
Asegurarnos de que la incubadora que ser utilizada este a la temperatura que el microorganismo requiere.
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OBSERVACIONES
En el caso de utilizar una muestra solida, que tratamiento le haria antes de proceder a las diluciones? 1. Pesar una cantidad de 10.0 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plstica estril de tamao adecuado. 2. Adicionar un volumen de 90.0 mL del diluyente, segn sea el caso, llevado a una temperatura similar a la de la muestra. 3. Operar la licuadora o el homogeneizador de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensin completa y homognea, segn se indique en la tcnica correspondiente para cada alimento. An en los equipos ms lentos, el tiempo de homogenizacin debe ser < 2.5 minutos. 4. Permitir que las partculas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada (alcuota), tomando sta de las capas superiores de la suspensin.
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OBSERVACIONES
:

Cuando la dilucin primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar ms diluyente, lo cual debe tomarse en cuenta para los clculos y expresin de
resultados.
Muestras slidas y semislidas congeladas:

1.
2.

Descongelar en refrigeracin de 4 a 8C durante 18 h. y no ms de 24 h. antes de diluir y analizar.

Proseguir como se indica en el inciso 1 para muestras slidas y semislidas no congeladas.

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CUESTIONARIO
MATERIAL LCTEO Leche cruda para la industria lctea Leche cruda de vaca para preparar productos lcteos Leche de vaca transformada utilizada para preparar productos lcteos Leche pasterizada y otras leches tratadas trmicamente Leche cruda de otras especies, elab. (tratamiento trmico) Leche cruda de otras especies, elab. (tratamiento trmico) Aguas de consumo humano y de consumo pblico envasadas Mataderos y salas de despiece: Superficies de trabajo MESFILOS AEROBIOS (UFC/Ml, a 30C)

105 3 x 105 105 105 1,5 x106 5 x105 100

(20cm2 37+1C 24h) Aceptable 0-10/cm2 Inaceptable >10/cm2

UNIQUINDO RECUENTO DE MESFILOS CEY FUENTE : http://bscw.rediris.es/pub/bscw.cgi/d311306-3/*/*/*/normictb.htm

CUESTIONARIO
Si usted va a realizar un recuento de bacterias termfilas. Qu procedimientos utilizara?
.

Un recuento para termfilos se efecta sembrando 1mL de la solucin madre o dilucin decimal en caja de Petri y vertiendo PCA para el recuento. Se incuba 2 das a 55C.

CUESTIONARIO
Si un alimento presenta un recuento de mesfilos aerobios muy alto, que cree usted que esto indique?. Explique.
.

Recuentos elevados indican: 1- Excesiva contaminacin de la materia prima 2Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin 3-La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos 4- La inmediata alteracin del producto

PREGUNTAS
Si un alimento presenta un recuento de mesfilos aerobios muy alto, Cmo cree usted que afectara el alimento?. Explique.
- Alimentos
- Alteracin del poder nutritivo - Alteracin de las propiedades organolpticas

- Enfermedades
- Infecciones - Intoxicaciones alrgicas

CONCLUSIONES
Se estima la biota total, mas no el tipo de microorganismo El mtodo refleja: -La calidad sanitaria. -Las condiciones higinicas de la materia prima. -La manipulacin durante la elaboracin. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patgenos Permite conocer las condiciones de salubridad de un alimento

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Gracias por su atencin !!!

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