Instituto "Padre Luis Tezza" Qumica Biolgica

Material Temtico de Tericos METABOLISMO INTERMEDIARIO

Resumen de los contenidos trabajados en clase: Los organismos pueden clasificarse segn sus necesidades de carbono exgeno. Los auttrofos precisan solamente de dixido de carbono, mientras que los hetertrofos requieren que el carbono se halle en una forma reducida ms compleja, tal como la glucosa. Los organismos pueden clasificarse tambin basndose en su fuente de energa: los fottrofos obtienen su energa de la luz, mientras que los quimitrofos la obtienen de las reacciones de oxidacin reduccin. Las clulas que emplean reductores inorgnicos como dadores de electrones se llaman littrofos, mientras que las que utilizan molculas orgnicas son los organtrofos. Los auttrofos fotosintticos y los quimiorgantrofos, se alimentan mutuamente: las clulas fotosintticas emplean dixido de carbono atmosfrico y energa solar para sintetizar la glucosa y desprenden oxgeno, mientras que las clulas quimiorganotrficas de los animales oxidan a la glucosa y a otros productos de la fotosntesis, a expensas del oxgeno molecular, para as liberar energa y dixido de carbono. La energa solar es la fuente de energa fundamental para todas las formas de vida. En el ciclo biolgico del nitrgeno, las plantas obtienen su nitrgeno en forma de nitrato reducindolo a amonaco y a sus aminocidos: estos ltimos son utilizados despus por los animales y devueltos al suelo en forma de urea o de amonaco, los cuales son reoxidados a nitrato, por bacterias del suelo. Solamente las bacterias fijadoras de nitrgeno pueden emplear el nitrgeno molecular de la atmsfera. Algunos organismos precisan de aminocidos exgenos o preformados, y de purinas o de dirimidas como fuentes nitrogenadas. El metabolismo intermediario puede dividirse en rutas catablicas, que son las responsables de la degradacin de las molculas nutritivas de alto contenido energtico, y en rutas anablicas, por las cuales se efecta la biosntesis de los componentes celulares; la ruta anfiblica central puede desempear ambas capacidades. Cada ruta se halla promovida por una secuencia de Enzimas especficas que cataliza reacciones consecutivas. Las rutas catablicas y anablicas que se inician en un nutriente determinado o que conducen a l, como la glucosa, no son exactamente inversas una de otras, sino que son qumica y enzimticamente diferentes. Adems, se hallan reguladas independientemente y se localizan en diferentes partes de la clula. El catabolismo de las molculas de los compuestos nutritivos va acompaado de la conservacin de parte de la energa de aqullos en forma de energa de enlace fosfato del trifosfato de adenosina (ATP). Recprocamente, la energa qumica necesaria para las rutas biosintticas es aportada para la desfosforilacin del ATP. La energa qumica es transportada tambin desde las rutas catablicas a las anablicas en forma de coenzimas reducidas, especialmente de NADPH. Las rutas metablicas en las clulas intactas pueden investigarse por medio de estudios de los balances de productos d entrada y de salida, en organismos normales patolgicos, en estado de tensin (estrs) o de envenenamiento, por perfusin de rganos intactos y mediante el estudio de cortes de tejido superviviente. Los microorganismos con carencias genticas, llamados auxtrofos, han resultado tambin muy tiles para el anlisis de las rutas metablicas. La tcnica del marcado isotpico constituye un sistema eficaz para el estudio de las rutas, de las velocidades y de diversas alteraciones del metabolismo. Una que vez se ha podido demostrar una determinada conversin metablica en un sistema exento de clulas, las Enzimas individuales que catalizan las reacciones separadas pueden ser aisladas e identificadas. El metabolismo se halla regulado por las propiedades cinticas intrnsecas de las Enzimas, mediante la accin de Enzimas reguladoras o alostricas, por las variaciones en la velocidad de biosntesis de las Enzimas y por la accin hormonal. Cuestionario de orientacin: 1. Cmo se clasifican los organismos de acuerdo con su requerimiento de carbono exgeno? 2. Clasifique a los organismos vivos de acuerdo con su fuente de energa 3. Esquematice el Ciclo de Nitrgeno 4. Esquematice el Ciclo de Carbono 5. Defina el concepto de ruta metablica y explique el significado de catabolismo, anabolismo, anfibolismo. 6. Por medio de qu mtodos se pueden estudiar las diferentes rutas metablicas? 7. Qu significa que un organismo es auxtrofo? 8. Explique brevemente la importancia del ATP y del NADPH en el metabolismo intermediario. Modelo de Pregunta de Parcial:

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Considere la veracidad o falsedad de la siguiente afirmacin: Las rutas catablicas y anablicas que se inician en un nutriente determinado o que conducen a l, como la glucosa, son exactamente inversas una de otra. Respuesta: Falso, puesto que las rutas catablicas y anablicas que se inician en un nutriente determinado o que conducen a l, como la glucosa, no son exactamente inversas una de otra, puesto que no slo son diferentes qumicamente sino que, adems, estn catalizadas por Enzimas diferentes. Cul es la funcin del ATP? Respuesta. El ATP es un compuesto con niveles energticos intermediarios entre el compuesto de partida de una ruta metablica y el de destino final que cumple la funcin de conservar parte de la energa desprendida en el catabolismo de compuestos nutrientes..

GLUCLISIS Resumen de los contenidos trabajados en clase: La fermentacin anaerbica es la ruta ms primitiva para la obtencin de energa de combustibles tales como la glucosa. En las clulas anaerbias constituye el nico proceso productor de energa. En la mayor parte de las clulas facultativas, constituye una primera etapa obligada del catabolismo de la glucosa, que va seguida de la oxidacin aerbica de los productos de la fermentacin. Los dos tipos ms corrientes de fermentacin son la gluclisis y la fermentacin alcohlica. Ambas utilizan idnticos mecanismos de conservacin de la energa difiriendo solamente en sus etapas terminales. La ecuacin global para la gluclisis es. glucosa + 2 ADP + 2Pi 2 cido lctico + 2 ATP + 2 Agua, y la de la fermentacin alcohlica es: glucosa + 2 ADP + 2Pi 2 etanol + 2 ATP + 2 Agua. Ambas fermentaciones son esencialmente irreversibles. La gluclisis se produce en dos fases. En la primera, la D-glucosa es enzimticamente fosforilada por el ATP, escindindose al final en dos molculas de gliceraldehido-3-fosfato. En la segunda fase de la gluclisis, el gliceraldehido-3-fosfato es oxidado por el NAD+, consumiendo fosfato inorgnico por accin de la gliceraldehido-fosfato deshidrogenasa, y formando 3fosfogliceril-fosfato. Este ltimo cede su grupo acil-fosfato al ADP, rindiendo ATP y 3 fosfoglicerato, que se isomeriza despus a 2 fosfoglicerato. Despus de la deshidratacin de este ltimo por la enonalas, el fosfoenol-piruvato formado cede su grupo fosfato al ADP. El otro producto, el piruvato libre, es reducido a lactato por el NADH formado en la deshidrogenacin del gliceraldehido-3-fosfato. Dos molculas de ATP entran en la primera fase de la gluclisis y en la segunda se forman cuatro a partir del ADP, con una ganancia neta de dos ATP por cada molcula de glucosa. La eficacia de la recuperacin de energa mediante la gluclisis en el eritrocito intacto es de cerca del 50%. En la gluclisis existen tres etapas esencialmente irreversibles; son las catalizadas por la hexoquinasa, la 6 fosfofructoquinasa y la piruvato quinasa. La reaccin catalizada por la fosfofructo-quinasa, una enzima reguladora, es la principal etapa limitante de la velocidad de la gluclisis. La incorporacin de restos de glucosa procedentes del glucgeno y del almidn a la gluclisis resulta posible gracias a la intervencin del glucgeno-(almidn)fosforilasa y de la fosfoglucomutasa. La glucgeno-fosforilasa, que cataliza la conversin de glucgeno en glucosa-1-fosfato, es una enzima reguladora que existe en forma activa (fosforilasa a) y en forma menos activa (fosforilasa b). Otras hexosas distintas de la glucosa, tales como la fructosa y la galactosa, se convierten enzimticamente en intermediarios de la ruta glucoltica, igual que algunas pentosas. En la fermentacin alcohlica, la secuencia de reacciones es idntica hasta la fase del piruvato, pero ste, en lugar de reducirse a lactato, se descarboxila y produce acetaldehdo, que posteriormente se reduce a etanol. Cuestionario de orientacin: 1. Quin es el agente reductor y quin es el agente oxidante en la segunda etapa de la gluclisis? 2. Cul es la ganancia neta de ATP si se parte de la glucosa al cabo del proceso? 3. Cul es el rendimiento energtico del proceso anaerbico? 4. Por qu se dice que la gluclisis homolctica o la alcohlica son rutas catablicas esencialmente irreversibles? 5. Indique las etapas limitantes de la ruta 6. Determine la energa libre neta que se obtiene en la gluclisis anaerbica 7. Esquematice las reacciones exergnicas y las reacciones endergnicas de la gluclisis.

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Por qu se obtienen 4 moles de ATP en la segunda fase de la gluclisis? Respuesta: Se obtienen 4 moles de ATP en la segunda fase de la gluclisis, a partir de una hexosa, como es la glucosa, porque los intermediarios se escinden a triosas y por cada triosa formada se obtienen dos ATP en los pasos: a) 3-fosfogliceril-fosfato que cede su grupo acil-fosfato al ADP, rindiendo ATP y el 3 fosfoglicerato y b) el fosfoenol piruvato formado cede su grupo fosfato al ADP dando el segundo ATP. Calcule la variacin de energa libre neta de la gluclisis segn las reacciones exergnicas y endergnicas puestas en juego si cada mol de ATP provee 7.30 kcal mol-1. Respuesta. Reaccin exergnica: glucosa 2 lactato: AG = -47,0 kcal mol-1. Reaccin endergnica: 2 Pi + 2 ADP 2 ATP +2 Agua: AG = 2 X 7.30 kcal mol-1. Reaccin neta: glucosa + 2 ADP + 2Pi 2 ATP + 2 agua + 2 lactato: AG = -32,4 kcal mol-1. RESPIRACIN CELULAR

Resumen de los contenidos trabajados en clase: La respiracin se efecta en tres fases: formacin oxidante de acetil-CoA a partir del piruvato, de los cidos grasos, y de los aminocidos (fase I); degradacin de los restos acetilo del acetil-CoA, por el Ciclo de los cidos tricarboxlicos, para producir CO2 y tomos de hidrgeno (fase II); y transporte de electrones equivalentes a estos tomos de hidrgeno hasta el oxgeno molecular (fase III), proceso ste, que va acompaado de la fosforilacin acoplada del ADP. El acetil-CoA procede de los glcidos, a travs de la oxidacin del piruvato. El Ciclo del los cidos tricarboxlicos, que tiene lugar en las mitocondrias, comienza cuando la citrato-sintasa cataliza la condensacin del acetil-CoA con el cido oxalactico para formar cido ctrico. La aconitasa cataliza despus la formacin reversible del isocitrato a partir del citrato, reaccin en que el citrato, molcula proquiral, es manipulada asimtricamente. El isocitrato es oxidado despus a alfa-oxoglutarato y CO2 por la isocitrato-deshidrogenasa NAD dependiente, enzima alostrica que es activada por el ADP. El alfa oxoglutarato experimenta posteriormente la oxidacin a acetil-CoA, segn una secuencia de reacciones semejante a la oxidacin del piruvato a acetil-CoA. El succinil-CoA reacciona con el GDP y el fosfato para formar succinato libre y FTP; el grupo fosfato terminal del GTP es transferido al ADP. Despus, el succinato se oxida a fumarato por la succinatodeshidrogenasa, enzima flavnica. El fumarato es hidratado por la fumarasa a L-malato el cual es oxidado por L-malato-deshidrogenasa ligada al NAD para regenerar una molcula de oxalacetato. Este ltimo puede combinarse entonces con otra molcula de acetil-CoA para iniciar as otra vuelta del ciclo. Los experimentos con trazadores isotpicos, mediante intermediarios marcados en el carbono, han establecido que el ciclo de los cidos tricarboxlicos es, en las clulas intactas, el mecanismo principal de la degradacin oxidativa de los glcidos, as como de otros combustibles. La velocidad global del ciclo se halla controlada por la reaccin de la citratosintasa. Los intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos se emplean tambin como precursores en la biosntesis. Los intermediarios del ciclo que se consumen, se reponen, entonces, mediante las reacciones anapletricas, la ms importante de las cuales es la carboxilacin reversible del piruvato a oxalacetato a expensas de ATP. En los organismos capaces de vivir utilizando el acetato como nica fuente carbonada, entra en juego una variante del ciclo del cido ctrico: el ciclo de glioxilato. Este hace posible la formacin neta de succinato a partir del acetato para efectuar la biosntesis neta de glucosa a partir de los cidos grasos. La glucosa-6-fosfato puede catabolizarse por una ruta alternativa, la ruta del fofogluconato. Esta ruta permite la formacin del NADPH necesario en la biosntesis reductora de los cidos grasos y de los esteroides, y la produccin de ribosa-5-fosfato destinada a la biosntesis de los cidos nucleicos. Posibilita, adems la formacin fotosinttica de la glucosa a partir del CO2 en algunas plantas. Esta ruta permite tambin la interconversin de varios azcares de tres, cuatro, cinco, seis y siete tomos de carbono, conectndolos metablicamente con la secuencia glucoltica. En las reacciones de oxidorreduccin se transfieren electrones desde el reductor, o dador de electrones, al oxidante, o aceptor de electrones. La tendencia de cualquier reductor biolgico a ceder electrones viene dada por el potencial de oxidorreduccin estndar, E, que es la fem de un reductor 1,0 M en presencia de la especie oxidante 1M frente a un electrodo inerte, a 25 C y pH de 7,0. El valor de E de cualquier par redox conjugado permite la prediccin de la direccin del flujo electrnico neto en su reaccin con otro par redox. Existen cuatro clases principales de Enzimas de oxidorreduccin. 1) Las deshidrogenasas piridino dependientes, que catalizan la transferencia reversible de electrones desde los sustratos a las

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coenzimas NAD+ y NADP+, dbilmente unidos, para formar NADH y NADPH, respectivamente. La reduccin enzimtica del anillo de piridina del NAD+ o del NADP+ va acompaada de un cambio espectral y es esteroespecfica. 2) Las deshidrogenasas flavino-dependientes contienen FMN o FAD fuertemente unido como grupos prostticos, y frecuentemente, un metal. En sus formas oxidadas aparecen intensamente coloreadas, pero por reduccin completa se decoloran. Las flavinodeshidrogenasas ms importantes son la succinato-deshidrogenasa y la NADH-deshidrogenasa. 3) Las protenas ferro sulfuradas contienen de dos a ocho tomos de hierro e igual nmero de tomos de azufre cidos-lbiles; los tomos de hierro experimentan transiciones Fe (II) a Fe (III). 4) Los citocromos, que actan en series, transfieren electrones desde las flavo protenas al oxgeno. Contienen grupos prostticos ferroporfirnicos, experimentando transiciones reversibles Fe (II) a Fe (III), que pueden seguirse espectrofotomtricamente. La secuencia respiratoria de las mitocondrias est constituida por la secuencia NADH, NADHdeshidrogenasa, protena ferro-sulfurada, ubiquinona y citocromos b, c, a y a3; participan tambin otros centros, o protenas, hierro-azufre. El transporte electrnico es caractersticamente inhibido en puntos especficos por la rotenona, la antimicina A y el cianuro, entre otros. Las observaciones espectrofotomtricas han posible el estudio de la secuencia de transportadores electrnicos. Algunas reacciones del transporte electrnico van acompaadas de absorcin o formacin de iones H+. El transporte electrnico desde el NADH hasta el oxgeno se realiza con una gran disminucin de energa libre, que se conserva, parcialmente, gracias a la fosforilacin acoplada del ADP a ATP. Las mitocondrias, presentes en todas las clulas eucariticas aerbicas, son los centros donde se verifican las reacciones del ciclo de los cidos tricarboxlicos, del transporte electrnico y de la fosforilacin oxidativa. Poseen una membrana externa lisa y otra con invaginaciones que forman pliegues llamados crestas, y una matriz interior rica en protena. Ambas membranas difieren en composicin qumica, permeabilidad y contenido enzimtico. Las enzimas del transporte electrnico y de la fosforilacin oxidativa se hallan localizadas en la membrana interna, mientras que las del ciclo del cido tricarboxlico se hallan, en gran parte, en la matriz. La fosforilacin oxidativa del ADP se producen las mitocondrias intactas que respiran, suplementadas con un sustrato, fosfato, ADP, Mg2+ y oxgeno. Esta fosforilacin oxidativa puede ser desacoplada por compuestos llamados agentes desacoplantes, un ejemplo de los cuales es el 2-4 dinitrofenol. Cuestionario de orientacin: 1. Esquematice la fase I, II y II de la respiracin celular. Aydese con sus apuntes de clase. 2. En el esquema anterior seale aquellas reacciones que son limitantes 3. Cul es el paso limitante general del Ciclo? 4. Cules son los substratos del Ciclo de Krebs? 5. Cuntos ATP se obtienen y cuntos CO2 por cada vuelta del ciclo? 6. Cules son algunos inhibidores de la fosforilacin oxidativa y del transporte de electrones? 7. Defina el concepto de fem (fuerza electromotriz). 8. Qu predice el potencial redox estndar 9. Indique los tipos de protenas transportadoras de electrones que participan de la cadena. Modelo de Pregunta de Parcial: 1. Cul es la funcin del Ciclo de los cidos tricarboxlicos? Respuesta: La ruta de los cidos tricarboxlicos es la va comn para degradar los restos acetilos de 2 carbonos derivados del metabolismo de los hidratos de carbono, cidos grasos y aminocidos a travs de un sistema multienzimtico aceptor del grupo acetilo de la acetil-CoA quien se degrada finalmente a CO2 y H+, quienes sern captados por una secuencia de protenas transportadoras de electrones. 2. Cul es la variacin neta de energa libre de la respiracin celular? Compare esta variacin con la de la gluclisis. Respuesta: En la respiracin la reaccin exergnica rinde -686 kcal mol-1, mientras que en la endergnica se consumen 263 kcal mol-1, por lo que la variacin es de -423 kcal mol-1. En cambio en la gluclisis esta variacin neta es de -32.4 kcal mol-1. Si lo colocamos en trminos porcentuales, el rendimiento de la respiracin es de slo el 38% mientras que el de la gluclisis alcanza el 69%. . Sin embargo a pesar del bajo rendimiento la eficiencia por la cantidad de ATP producido hace imprescindible en los organismos aerbicos la va de la respiracin celular. Bibliografa: El texto fue tomado de Lehninger Albert L. Bioqumica. Ediciones Omega S.A. Barcelona. 1979.