Guia de Practicas de Introduccion A La Ing. Biotecnologica

U.C.S.M. P.P. Ing. Biotecnolgica Prcticas de Introduccin a la Ing.
Biotecnolgica
El trmino biotecnologa es relativamente nuevo, sin embargo, la biotecnologa est presente en la vida cotidiana, siendo una actividad antigua, que comenz hace miles de aos cuando el hombre descubri la obtencin del pan, queso, vino, cerveza y yogurt por fermentacin. Por tanto, consideremos que la Biotecnologa es la utilizacin de organismos vivos como bacterias, hongos, plantas o animales, parte de ellos o los productos de su metabolismo para la obtencin de un bien o servicio til para el hombre. Al comprender mucho ms cmo ocurren los procesos biolgicos que permiten la obtencin de productos biotecnolgicos, se han desarrollado nuevas tcnicas a fin de modificar o imitar algunos de esos procesos y lograr una variedad mucho ms amplia de productos, estos conocimientos, dieron lugar al desarrollo de la biotecnologa moderna, que utiliza tcnicas de ingeniera gentica, para modificar y transferir genes de un organismo a otro. La Ingeniera Biotecnolgica con su gran avance cientfico tecnolgico, actualmente est liderando el desarrollo socioeconmico, ya que conjuga los principios bsicos, tcnicos y cientficos de las ciencias fsicas, qumicas y biolgicas con la ingeniera, para la obtencin de un bien o servicio til para mejorar la calidad de vida del ser humano. La presente Gua de Prcticas considera aspectos fundamentales en el manejo y uso intensivo de diferentes tcnicas de laboratorio de uso habitual en la investigacin y la industria biotecnolgica, a travs de aspectos prcticos en las diferentes reas de la Ingeniera Biotecnolgica: Biotecnologa industrial, Biotecnologa mdica, Biotecnologa animal, Biotecnologa vegetal y Biotecnologa ambiental. El objetivo es desarrollar en el futuro del Ingeniero Biotecnlogo la habilidad para disear, implementar, desarrollar e innovar procesos biotecnolgicos de tal forma que pueda insertarse en el sector productivo.
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
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U.C.S.M. P.P. Ing. Biotecnolgica Prcticas de Introduccin a la Ing. Biotecnolgica

Cada da y en todo el mundo las personas que trabajan en los laboratorios sufren diversos perjuicios, de igual manera, grandes cantidades de dinero son gastadas debido a numerosos accidentes que pudieran ser evitados si las personas siguieran algunas normas practicas de seguridad. Por tanto, es importante brindar las pautas sobre cmo trabajar en un ambiente de laboratorio de manera que se puedan evitar riesgos innecesarios. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de un accidente, en virtud de las sustancias y elementos que se utilizan, y la posibilidad de cometer algn error al realizar un experimento.
SUSTANCIA PELIGROSA + ERROR HUMANO = ACCIDENTE
Por consiguiente, cuando se trabaja en el laboratorio, se debe tener presente una serie de reglas o consejos que disminuyen y en algunos casos logran evitar los accidentes.
REGLAS Y CONSEJOS PARA EVITAR ACCIDENTES PAUTAS EN EL TRABAJO DE LABORATORIO 1 ORDEN El rea de trabajo siempre debe estar limpia y con los materiales ordenados. VENTILACIN Conviene trabajar siempre en un lugar bien ventilado. VESTIMENTA Es necesario el uso de una vestimenta protectora adecuada. ESTUDIE CADA EXPERIENCIA ANTES DE CLASE Ahorrar tiempo y evitar errores y accidentes innecesarios. Siga todas las indicaciones que le han sido designadas con seriedad. NUNCA COMER, BEBER O FUMAR Ni apoyar comida sobre la mesa del laboratorio. NO INTERFERIR EL PASO No se debe permitir el almacenamiento o disposicin momentnea de elementos que interfieran los corredores del laboratorio. REGISTRAR LOS INCIDENTES Comunicar inmediatamente para evitar accidentes posteriores. TRABAJANDO CON PRODUCTOS QUIMICOS

8 ROTULAR Etiquetar cualquier recipiente que sea llenado. CALENTAR UN LIQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO No mirar al interior del tubo durante el calentamiento y siempre mantenga este lejos de los dems. NUNCA ASPIRE A TRAVES DE UNA PIPETA CON LA BOCA Para llenar la pipeta use una propipeta o perilla. USO DE BURETA Llenar la bureta a una altura en la cual pueda observarse sin dificultad. OLOR DE LAS SUSTANCIAS GASEOSAS Solo si fuera necesario, para percibirlo mueva lentamente la mano y aspire con precaucin, evitando el contacto directo. LIQUIDOS VOLTILES Los experimentos que producen gases deben ser realizados en una campana de extraccin. LIQUIDOS INFLAMABLES Mantener lejos de una fuente de encendido o llama abierta. Para calentarlo trabaje con un bao de agua, aceite o vapor. RECIPIENTES CON GRANDES VOLMENES DE SUSTANCIAS No deben ser guardados en compartimientos ubicados en una altura superior a la altura propia del personal del laboratorio. TAPONES Y NEXOS DE GOMA EN MATERIAL QUEBRADIZO Nunca fuerce dentro o fuera los nexos de goma de material que se pueda quebrar. La glicerina o el detergente facilitan dicha tarea. ARMADO DE EQUIPOS Usar soportes que se apoyen bien en la mesa. Vigilar continuamente los aparatos con centro de gravedad alto. RESIDUOS QUIMICOS Informarse sobre la forma adecuada de desechar los restos y residuos qumicos. LIMPIEZA DEL MATERIAL AL FINALIZAR EL TRABAJO A fin de evitar contaminaciones y/o reacciones no deseadas en posteriores experimentos. PRIMEROS AUXILIOS Contar con un adecuado equipo para primeros auxilios y conocer los pasos a seguir en cada caso luego de un accidente.
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PROTECCION Vestimenta protectora

Mandil: Absolutamente necesario. Lentes de seguridad (goggles o safety glasses): Lo recomendable es usar lentes de seguridad (goggles o safety glasses) y esto es obligatorio cuando se lleven a cabo operaciones de laboratorio de alto riesgo, como por ejemplo: destilaciones al vaco, destilacin de grandes cantidades de lquidos inflamables y experimentos que requieran gran cantidad de sodio metlico. Calzado: Debe poseer suela slida y firme que asegure completa y totalmente el pie. Guantes: Deben utilizarse cuando se trabaja con qumicos cidos. Es importante tener en cuenta si el material de los guantes es el apropiado para los qumicos con los cuales se est trabajando, ya que algunos qumicos pueden penetrar los guantes estndares con mucha facilidad. PRIMEROS AUXILIOS EN EL LABORATORIO Quemaduras Cualquiera que sea la causa de una quemadura, como por ejemplo con fuego, metal caliente, lquidos calientes, cidos, lcalis casticos, etc. se debe: 1. Remover cualquier residuo de ropa empapado con cido o lcali. 2. Lavar con agua helada completamente y de manera profusa el rea quemada por al menos 10 minutos. 3. Secar suavemente con un manta seca usar algodn. 4. Si es posible, cubrir el rea afectada con gasa estril. 5. Transferir inmediatamente al paciente al hospital y que el mdico proporcione el tratamiento ms adecuado. Casos especiales Quemaduras con bromo: Cuando haya experimentos que involucren el uso de bromo lquido se recomienda tener ter petrleo (80-100 C) a la mano. Si el bromo salpica a las manos, lavar el rea afectada con el ter de petrleo y procure remover tanto bromo como sea posible. Subsecuentemente, la piel, que ha estado en contacto con el ter de petrleo, se vuelve suave y se puede sentir algo de picazn, se puede remover una pequea pelcula de grasa y luego se puede aplicar aceite de oliva. Quemaduras con sodio: Esto es frecuentemente causado por pequeas lentejuelas de sodio o de hidrxido de sodio. Remover con una pinza tanto sodio sea posible usando unas pinzas, lavar bien con agua helada, luego aadir cido actico al 1% y finalmente cubrir con gasa empapada con aceite de oliva. Quemaduras por fsforo: Lavar bien la zona afectada con agua helada y luego empapar con solucin de AgNO3 al 1%. Si la quemadura es seria, lavar nuevamente. Accidentes en los ojos: Cualquiera que sea el lquido (cido o lcali) que haya penetrado a los ojos, lavar inmediatamente de manera profusa y continuar con agua helada durante al menos 10

minutos, adems debe limpiar la cejas y piel alrededor de los ojos, para asegurar que el producto qumico a sido retirado, luego acuda inmediatamente a un oftalmlogo. Si trozos de vidrio han penetrado, por ningn motivo se debe intentar remover los trozos de vidrio, pues esto debe ser directamente hecho por el correspondiente mdico especialista. El dao puede ser peor si una persona sin la necesaria prctica lo hace. Cortes La mayora de cortes en el laboratorio son causados por vidrio de laboratorio, operaciones cuando se trata de abrir frascos que tienen su tapa demasiada ajustada, o por tubos de ensayo u otro material de vidrio que se quiebra durante un experimentos. Todos estos accidentes pueden evitarse si se trabaja con cuidado y sobre todo si se aplica el sentido comn. Cuando ocurra un corte lo primero que se debe hacer es enjuagar la herida con bastante agua, luego limpiarla con una solucin antisptica, secando la herida y los alrededores de la parte afectada, para luego cubrirla con una curita esterilizada. Venenos Venenos lquidos y slidos 1. Si se queda en la boca y no se ha tragado, escupirlo inmediatamente y lavar la boca de manera repetida con agua. 2. Si se trag, cualquiera que fuera la sustancia (cido, lcali, arsnico o compuestos mercuriales) diluirlo ingiriendo por lo menos 500 mL de leche o agua. 3. No se debe hacer algn intento para que el paciente vomite, especialmente si se ha ingerido lcalis o cidos. 4. Luego solicitar atencin mdica urgente Antes de usar cualquier producto qumico, es importante informarse acerca de los posibles peligros en su uso. Adems del nombre y el smbolo de peligro que se encuentra en la etiqueta del envase, tambin se puede encontrar informacin til sobre los riesgos especficos del producto, as como las precauciones a seguir en la seccin de guas de riesgos o guas R y guas de seguridad o guas S Adems, es importante consultar la ficha tcnica de los productos qumicos, las cuales son de carcter obligatorio en todos aquellos laboratorios que se trabajan bajo las normas de Buenas Prcticas de Laboratorio ( Good Laboratory Practices, GLP). Estas fichas se denominan usualmente Material Safety Data Sheet, MSDS o SDS, (Hoja de Datos de Seguridad del material). Las MSDS o SDS especifican los cuidados que se debe de tener, como por ejemplo niveles de toxicidad, incompatibilidades, etc. Las SDS pueden ser conseguidas a travs de cualquier buscador en Internet.
ANEXOS FRASES R: RIESGOS ESPECFICOS DE LOS PRODUCTOS QUMICOS

Frase R R1 RIESGO ESPECFICO Explosivo en estado seco. Frase R R 24 RIESGO ESPECFICO Txico en contacto con la piel. Frase R R 47 RIESGO ESPECFICO Puede causar malformaciones congnitas.
R2
R3
R4
Riesgo de explosin por choque, friccin, fuego o cualquier otra fuente de ignicin. Alto riesgo de explosin por choque, friccin, fuego o cualquier otra fuente de explosin. Forma compuestos metlicos explosivos muy sensibles.
R 25
Txico por ingestin.
R 48
Riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada. Puede causar cncer por inhalacin.
R 26
Muy txico por inhalacin.
R 49
R 27
Muy txico en contacto con la piel.
R 50
Muy txico para organismos acuticos.
R5
Peligro de explosin en caso de calentamiento.
R 28
Muy txico por ingestin.
R 51
Txico para organismos acuticos.
R6
Peligro de explosin, en contacto o sin contacto con el aire. Puede provocar incendios.
R 29
En contacto con agua libera gases txicos.
R 52
Nocivo para organismos acuticos.
R7
R 30
Puede inflamarse fcilmente al usarlo.
R 53
Puede causar efectos adversos a largo plazo en el ambiente acutico.
R8
Peligro de fuego en contacto con materias combustibles.
R 31
En contacto con cidos libera gases txicos.
R 54
Txico para la flora.
R9
Peligro de explosin al mezclar con materias combustibles.
R 32
En contacto con cidos libera gases muy txicos.
R 55
Txico para la fauna.

R 10 Inflamable. R 33 Peligro de efectos acumulativos. R 56 Txico para los organismos del terreno.
R 11
Fcilmente inflamable.
R 34
Provoca quemaduras.
R 57
Txico para las abejas.
R 12
Extremadamente inflamable.
R 35
Provoca quemaduras graves.
R 58
Puede causar efectos adversos a largo plazo en el medio ambiente.
R 13
Gas licuado extremadamente inflamable.
R 36
Irrita los ojos.
R 59
Peligroso para la Capa de Ozono.
R 14
Reacciona violentamente con el agua.
R 37
Irrita las vas respiratorias.
R 60
Puede deteriorar la fertilidad.
R 15
Reacciona con el agua liberando gases inflamables
R 38
Irrita la piel.
R 61
Puede ser nocivo para los nonatos.
R 16
Puede hacer explosin en mezcla con sustancias comburentes. Se inflama espontneamente en contacto con el aire. Al usarlo pueden formarse mezclas aire/vapor explosivasinflamables.
R 39
Peligro de efectos irreversibles muy graves.
R 62
Riesgo de deteriorar la fertilidad.
R 17
R 40
Posibilidad de efectos irreversibles.
R 63
Posible riesgo de dao a los nonatos.
R 18
R 41
Riesgo de lesiones oculares graves.
R 64
Puede ser nocivo para los lactantes.

R 19 Puede formar perxidos explosivos. R 42 Posibilidad de sensibilizacin por inhalacin. R 65 Puede causar daos pulmonares al ser ingerido.
R 20
Nocivo por inhalacin.
R 43
Posibilidad de sensibilizacin en contacto con la piel. Riesgo de explosin al calentarlo en ambiente confinado. Puede causar cncer.
R 66
La exposicin repetida puede provocar sequedad y agrietar la piel. La inhalacin de los vapores puede provocar somnolencia y vrtigos. Posibilidad de efectos irreversibles.
R 21
Nocivo en contacto con la piel.
R 44
R 67
R 22
Nocivo por ingestin.
R 45
R 68
R 23
Txico por inhalacin.
R 46
Puede causar alteraciones genticas hereditarias.
R13 y R47 son frases obsoletas. R40 hasta 2001 esta frase R fue usada para posibles riesgos mutagnicos o teratognicos, ahora se utiliza la frase R68.
FRASES S CONSEJOS DE PRUDENCIA CON PRODUCTOS QUMICOS Frase S CONSEJO Frase S CONSEJO Frase S CONSEJO

S1 Consrvese bajo llave. S 22 No respirar el polvo. S 43 En caso de incendio, utilizar __ (medios de extincin a especificar por el fabricante). Si el agua aumenta el riesgo se debe aadir: "No usar nunca agua" En caso de malestar, acuda al mdico (si es posible mustrele la etiqueta).
S2
Mantngase fuera del alcance de los nios.
S 23
No respirar los gases / humos / vapores / aerosoles (Denominacin(es) adecuada(s) a especificar por el fabricante).
S 44
S3
Consrvese en lugar fresco.
S 24
Evtese el contacto con la piel.
S 45
En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al mdico (si es posible mustrele la etiqueta).
S4
Mantngase lejos de locales habitados.
S 25
Evtese el contacto con los ojos.
S 46
En caso de ingestin, acuda inmediatamente al mdico y mustrele la etiqueta o el envase.
S5
Consrvese en __ (lquido apropiado a especificar por el fabricante).
S 26
En caso de contacto con los ojos, lvenlos inmediata y abundantemente con agua y acdase a un mdico.
S 47
Consrvese a una temperatura no superior a __C (a especificar por el fabricante).

S6 Consrvese en __ (gas inerte a especificar por el fabricante). S 27 Qutese inmediatamente la ropa manchada o salpicada. S 48 Consrvese hmedo con __ (medio apropiado a especificar por el fabricante).
S7
Mantngase el recipiente bien cerrado.
S 28
En caso de contacto con los ojos, lvenlos inmediata y abundantemente con __ (productos a especificar por el fabricante).
S 49
Consrvese nicamente en el recipiente de origen.
S8
Mantngase el recipiente en lugar seco.
S 29
No tirar los residuos por el desage.
S 50
No mezclar con __ (a especificar por el fabricante).
S9
Consrvese el recipiente en lugar bien ventilado.
S 30
No echar jams agua al producto.
S 51
sese nicamente en lugares bien ventilados.
S 10
Mantener el contenido hmedo.
S 31
S 52
No usar sobre grandes superficies en locales habitados.
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S 11 Evitar el contacto con el aire. S 32 S 53 Evtese la exposicin recbense instrucciones antes del uso.
S 12
No cerrar el recipiente hermticamente.
S 33
Evtese la acumulacin de cargas electrostticas.
S 54
S 13
Mantngase lejos de alimentos y bebidas.
S 34
Evtense golpes y rozamientos.
S 55
Procurar el consenso de la autoridad de control de la contaminacin antes de descargar en las plantas de tratamiento de aguas de desage. Utilizar las mejores tcnicas de tratamiento disponibles antes de descargar a las alcantarillas o al ambiente acutico.
S 14
Consrvese lejos de __ (materiales incompatibles a especificar por el fabricante).
S 35
Elimnense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles.
S 56
Almacenar estos materiales y sus respectivos envases en un lugar apropiado para el tratamiento de residuos.
S 15
Protjase del calor.
S 36
Usen indumentaria protectora adecuada.
S 57
Usar envases adecuados para evitar la contaminacin ambiental
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S 16 Protjase de fuentes de ignicin. No fumar. S 37 Usen guantes adecuados. S 58 Eliminar como residuo peligroso.
S 17
Mantngase lejos de materias combustibles.
S 38
En caso de ventilacin insuficiente, usen equipo respiratorio adecuado.
S 59
Requerir informaciones al fabricante / proveedor para la recuperacin / reciclaje.
S 18
Maniplese y brase el recipiente con cuidado.
S 39
Usen proteccin para los ojos / la cara.
S 60
Este material y su envase deben ser almacenados como altamente peligrosos.
S 19
S 40
Para limpiar el suelo y los objetos contaminados por este producto, sese __ (a especificar por el fabricante).
S 61
No esparcir en el ambiente. Seguir las instrucciones especiales de la etiqueta informativa en materia de seguridad.
S 20
No comer ni beber durante su utilizacin.
S 41
En caso de incendio o explosin, no respire los humos.
S 62
No provocar el vmito: consultar inmediatamente al mdico y mostrarle el envase y la etiqueta.
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S 21 No fumar durante su utilizacin. S 42 Durante las fumigaciones / pulverizaciones, use equipo respiratorio adecuado. (Denominacin(es) adecuada(s) a especificar por el fabricante). S 63 En caso de ingestin por inhalacin, apartar al accidentado de la zona contaminada y mantenerlo en reposo.
S 64
En caso de ingestin por inhalacin, lavar la boca con agua (slo si el accidentado est consciente).
S10, S11, S31, S34 , S44 , S54 , S55 y S58 : son frases obsoletas.
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PRACTICA N 1.
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TECNICAS EXPERIMENTALES EN EL LABORATORIO

1. MARCO TERICO: Los procesos en Ingeniera Biotecnolgica requieren el uso intensivo de diferentes tcnicas de laboratorio, las cuales incluyen el uso de material de vidrio, equipos y por supuesto destreza en la manipulacin de estos instrumentos. Por lo tanto, se hace necesario un reconocimiento de los principales equipos y material de vidrio, para as continuar con los diferentes experimentos con una base ms slida. En la prctica, se proceder al reconocimiento del equipo de vidrio ms comn en el laboratorio, tal como los tubos de ensayo, beakers, fiolas o matraces aforados (volumetric flasks), buretas, pipetas, probetas, balones de fondo redondo (round bottom flasks), y otros, ya que existe una gran variedad de equipo de vidrio con aplicaciones especiales. El equipo de laboratorio es amplio y variado y una sola clase sera muy corta para explicar y presentar los materiales de vidrio existentes. Esto se ir haciendo de manera paulatina, tanto en este curso, como en los cursos que se llevan ms adelante. Se debe de tener en cuenta, que algunos experimentos requieren de material especial diseado especialmente para las condiciones del experimento. Esto puede ser factible si se cuenta con un Laboratorio o Taller de Soplado de Vidrio. Esto es altamente ventajoso, pues en estos talleres, no slo se repara el material quebrado, sino que es posible ordenar equipo de vidrio especialmente acondicionado para las necesidades propias de determinado experimento. A continuacin se muestra el material de vidrio ms comn en el laboratorio, tal como: Fiolas (Volumetric flasks): Son recipientes de vidrio, de cuello largo y angosto, en el que tienen una marca o aforo, que seala un volumen relativamente exacto de medida, a una temperatura determinada, la cual est grabada (20C). Se emplea para preparar disoluciones de una determinada concentracin. Buretas: Las buretas son tubos largos, cilndricos de calibre uniforme en la porcin graduada, cuyo extremo inferior se cierra con una llave de vidrio. Las buretas se emplean para medir distintos volmenes de lquidos, con bastante exactitud. Su mayor aplicacin est en las operaciones de titulacin. Pipetas: Son instrumentos tubulares, terminados en punta, graduados o no. Se utilizan para medir y transferir lquidos. Las ms comunes permiten medir de 1 a 10 mL. Propipeta: Se utiliza para evitar succionar con la boca lquidos venenosos, corrosivos o que emitan vapores. Se utiliza junto con una pipeta graduada. Probeta:
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Son tubos cilndricos de vidrio o de plstico, con una amplia base. Se utilizan para medidas aproximadas de lquidos en las que no se necesite ninguna exactitud. Las probetas estn graduadas en casi su extensin, con divisiones de 1 a 10 cm 3. Para realizar una buena lectura del volumen, hay que situar los ojos a la altura de la superficie libre del lquido. Vaso de precipitados o beaker: Es un vaso de vidrio con pico. Suele llevar marcada una escala graduada en mililitros, que permite medir distintos volmenes, aunque no con gran precisin. Son resistentes al calor por ello se les utiliza para preparar o calentar sustancias y trasvasar lquidos. Las capacidades de los vasos de precipitados suelen variar entre los 25 y los 2000 mL. Matraz o erlenmeyer: Son recipientes de vidrio, con forma cnica. Se emplea para calentar lquidos cuyos vapores no deben estar en contacto con la fuente de calor. Se le utiliza en el anlisis cuantitativo por la facilidad que ofrece para agitar la solucin a titular sin peligro a que se derrame. Embudos: Son recipientes cnicos que poseen un tubo de descarga es su parte inferior. Se emplean para efectuar filtraciones (separacin de los slidos insolubles del lquido con el cual estn mezclados); para ste propsito se utiliza papel filtro. Tambin se utiliza para el trasvase de un lquido. Tubos de ensayo: Es un tubo delgado de vidrio, cerrado por un extremo. El tamao del tubo se expresa por las dimensiones de su dimetro y altura, p.e 18 x 150. Se utiliza para contener o calentar pequeas cantidades de sustancia; Hay tubos de ensayo de distintos tamaos, y para sostenerlos se utilizan las gradillas de madera, metal o plstico. Balones: Son recipientes de vidrio de forma esfrica de cuello largo y angosto. Sirven para contener lquidos que van a reaccionar o a ser calentados, cuyos vapores no deben estar en contacto con la fuente de calor. Algunos tienen una salida lateral y son apropiados para destilacin. Embudo de separacin: Tambin conocido pera de decantacin, es un recipiente de vidrio periforme con una llave en su parte inferior para descargar lquidos. Se utiliza en el laboratorio en la separacin de lquidos no miscibles, por diferencia de densidades. Baguetas: Son varillas de vidrio macizo fundido de sus extremos para evitar que rayen los vasos. Se utiliza para mezclar o agitar sustancias y para operaciones de filtracin. En la prctica se proceder a preparar una solucin de suero fisiolgico (NaCl, 0.9%) para adquirir destrezas y habilidades en el uso de los diferentes materiales y equipos de laboratorio.
2. OBJETIVOS:
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2.1. Conocer las pautas necesarias sobre seguridad en el laboratorio. 2.2. Reconocer los principales materiales y equipos utilizados en el trabajo de laboratorio. 2.3. Introducir el concepto de calidad de las medidas en experimentacin. 2.4. Adquirir destrezas y habilidades en el trabajo de laboratorio. 3. MATERIALES: Indicar los materiales utilizados: 3.1. Reactivos o insumos: Cloruro de sodio (NaCl). 3.2. Material de vidrio: 3.3. Aparatos y equipos: 4. PROCEDIMIENTO DETALLADO: Preparacin de la solucin de suero fisiolgico
Figura N1: Preparacin del suero fisiolgico Fuente: Registro de la prctica 5. CONCLUSIONES: Importancia del suero fisiolgico 6. SUGERENCIAS: 7. CUESTIONARIO: Cmo se clasifican los productos qumicos segn su peligrosidad? Menciona algunas medidas de seguridad en caso de incendio Qu debe contener un botiqun de primeros auxilios? Con que material de vidrio se mide volmenes con alta precisin? Menciona y describe brevemente la funcin de cinco equipos utilizados en un laboratorio de biotecnologa. 8. BIBLIOGRAFIA:
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9. ANEXOS: Adjuntar una SDS (SAFETY DATA SHEET) de un producto qumico.
PRACTICA N 2. FILTRACIN Y MEDICIN DE pH

1. MARCO TERICO:
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Filtracin: Consiste en la separacin de partculas slidas insolubles a partir de un fluido (lquido o gaseoso), mediante el paso del fluido a travs de un medio filtrante sobre el cual, se deposita la torta de filtro. Elementos de la filtracin: Prefiltrado: Es la suspensin slido-lquido alimentada. Medio filtrante: Es la membrana porosa o pared separadora. El medio filtrante de cualquier filtro debe cumplir los siguientes requisitos: Retener los slidos a filtrar, dando lugar a un filtrado razonablemente claro. No obstruirse o cegarse. Ser qumicamente resistente. Tener suficiente resistencia fsica para soportar las condiciones del proceso. Permitir que la torta formada se desprenda de una forma limpia y completa. No ser en exceso caro. Torta de filtro: Son las partculas slidas insolubles que se depositan sobre la superficie del papel filtrante. En la filtracin de torta el lquido pasa a travs de dos resistencias en serie: la de la torta y la del medio filtrante. La resistencia del medio filtrante normalmente slo es importante durante las primeras etapas de la filtracin en cambio, la resistencia de la torta es nula al principio y aumenta con el tiempo a medida que transcurre la filtracin. Filtrado: Componente lquido que pasa a travs del medio filtrante. Coadyuvantes: Los coadyuvantes son slidos porosos, inertes al prefiltrado que aumentan la porosidad de la torta, permitiendo el paso del lquido con una velocidad razonable. Los coadyuvantes ms utilizados son: tierra de diatomeas, perlita, celulosa de madera purificada, arena, piedra pmez, etc. Los coadyuvantes pueden agregarse a la suspensin antes de la filtracin o mediante un recubrimiento previo, es decir depositando una capa del mismo sobre el medio filtrante antes de comenzar la operacin. El coadyuvante de filtracin se separa despus de la torta de filtracin disolviendo los slidos o quemando el coadyuvante si los slidos no tienen valor se desechan junto con el coadyuvante.
Mtodos de Filtracin: Filtracin por gravedad: Es aquella donde el lquido atraviesa el medio filtrante por su propio peso quedando el slido sobre el filtro. Para realizarla se emplean el embudo convencional de vidrio y el medio filtrante es un disco de papel especial que se
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dobla formando un cono (filtracin simple) o se pliega en forma de abanico (filtracin por pliegues) El papel filtro es doblado de tal manera que haya elevaciones y depresiones alternadas varias veces. La siguiente figura puede mostrar en detalle.
Finalmente el papel filtro debe de quedar como en (e) y es montado en el embudo.
Esta filtracin es muy til en algunos casos, pero la desventaja es que el proceso puede ser lento. Por lo tanto se procede a otro tipo de filtracin al vaco o por succin. Filtracin al vaco: En la filtracin al vaco, se logra el paso forzado del lquido a travs del papel bajo la accin del vaco que se realiza en el sistema. Por ello se logra una mayor rapidez y una mejor separacin. El equipo de filtracin al vaco consta del embudo Bchner y el matraz kitasato.
Matraz Kitasato
Embudo Bchner
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Se procede a armar el equipo como se muestra en la figura, se coloca un papel filtro al embudo Bchner, luego se conecta a una fuente de vaco (trompa de agua o water jet pump) y el equipo est listo para ser usado.
pH: La palabra pH es la abreviatura de "pondus Hydrogenium". Esto significa literalmente el peso del hidrgeno. El pH es la escala de acidez o basicidad que determinada solucin acuosa tiene. El pH puede ser cido, bsico o neutro. La escala de pH va de 0, que es lo ms cido hasta 14 que es el pH ms bsico. Cuando se tiene un pH de 7.0, se dir que estamos en condiciones neutras. Cuando una solucin es neutra, el nmero de protones iguala al nmero de iones hidroxilo. Cuando el nmero de iones hidroxilo es mayor, la solucin es bsica y cuando el nmero de protones es mayor, la solucin es cida. En un sentido prctico, el pH est dado por la concentracin de iones H + en una solucin y esto est representado por la siguiente ecuacin:
pH = -log[H+]
El pH no tiene unidades; se expresa simplemente por un nmero. El pH de una disolucin es una medida de la concentracin de iones hidrgeno. Una pequea variacin en el pH significa un importante cambio en la concentracin de los iones hidrgeno. Por ejemplo, la concentracin de iones hidrgeno en los jugos gstricos (pH = 1) es casi un milln de veces mayor que la del agua pura (pH = 7). El valor de pH en muchos procesos biotecnolgicos es muy importante pues as se puede controlar la extraccin de numerosas sustancias, por lo tanto se hace necesario saber cmo medirlo, desde un punto de vista experimental. Mtodos de medicin del pH: Cinta de pH: Este mtodo no es muy preciso y no es apropiado para determinar valores de pH exactos.
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La denominada cinta pH se introduce en una solucin, y cambiar de color. Cada color diferente indica un valor de pH diferente. pHmetro o potencimetro: Es un instrumento que mide la diferencia de potencial entre dos electrodos: un electrodo de referencia (generalmente de plata/cloruro de plata) y un electrodo de vidrio que es sensible al in hidrgeno. Por tanto tiene mayor precisin. 2. OBJETIVOS: 2.1. Comprender los principios bsicos de la filtracin como operacin unitaria de separacin. 2.2. Diferenciar los mtodos de filtracin por gravedad y al vaco. 2.3. Explicar la importancia de la medicin del pH en los procesos Biotecnolgicos. 2.4. Conocer y describir los mtodos de medicin del pH. 2.5. Distinguir las propiedades de acidez y alcalinidad de sustancias de uso diario. 3. MATERIALES: 3.1. Insumos: Frutas, bebidas, insumos y otras sustancias de uso diario 3.2. Material de vidrio: Baguetas. Beakers, 100 mL. Embudos de vidrio. Matraces, 100 mL y 250 mL. Probetas, 50 mL. 3.3. Otros Cinta universal. Esptulas. Gasa. Papel filtro. Picetas. Pinzas. 3.4. Aparatos y equipos: Balanza analtica. Equipo de filtracin al vaco: embudo Bchner, matraz kitasato y bomba de vaco. Potencimetro. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1 Preparacin de las muestras: Preparar las diferentes muestras cuyo valor del pH se va determinar. 4.2 Corrida experimental: Filtracin: Preparar los componentes de la filtracin por gravedad.
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Armar el equipo de filtracin al vaco. Proceder a filtrar 50 mL de una muestra a travs de ambos sistemas de filtracin. En todos los sistemas considerar la primera gota del filtrado como tiempo cero. Medicin del pH: Medir el pH de cada muestra, utilizando la cinta de pH y el pHmetro o potencimetro. Previamente antes de utilizar el potencimetro, ste debe ser calibrado, luego debe enjuagarse el electrodo con agua destilada, para finalmente secar ste con un poco de papel suave.
Figura N2: pHmetro o potencimetro Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Reportar el pH encontrado de cada una de las muestras Evaluar el tiempo de filtracin (min) en los sistemas de filtracin: por gravedad y al vaco. 7. CALCULOS: Utilizando la ecuacin que define el pH, calcular la concentracin de hidrogeniones de las muestras, cuyo valor de pH fue medido a travs del potencimetro. 8. CONCLUSIONES: 9. SUGERENCIAS: 10.CUESTIONARIO: Qu significa presin al vaco? Describe algunas aplicaciones de los coadyuvantes de la filtracin en la industria. Para filtrar en caliente Qu mtodo de filtracin elegira? Por qu? Qu otros mtodos existen para medir el pH de una determinada solucin? Cul es la relacin entre la concentracin de hidrogeniones y el valor de pH? Cul es la importancia de la medicin de pH en los procesos biotecnolgicos? 11. BIBLIOGRAFA: 12. ANEXOS:
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PRACTICA N 3. LA LEVADURA COMO ESPONJANTE DE LA MASA PANARIA

1. MARCO TERICO: En contraposicin a las tortas, cuya masa se prepara sin fermentacin microbiana y que se hornean directamente, ya desde tiempos prehistricos se elaboraban tambin panes con masa cida.
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Las masas cidas son cultivos mixtos de bacterias acidolcticas, del tipo Lactobacillus y levaduras tolerantes al cido, que se han formado por enriquecimiento y seleccin de la microflora que crece de manera espontnea en los cereales y que se mantienen de proceso en proceso de panificacin sobre masa fresca. La mayora de levaduras presentes en la masa cida son cepas de Saccharomyces cerevisiae, especialmente adaptadas al proceso comn con bacterias lcticas, asimismo, cepas de Candida krusei y Pichia saitoi. Las levaduras fermentan los azcares existentes en la harina o los azcares libres aportados como glucosa, fructosa, sacarosa y maltosa, formados por accin de las amilasas del grano de cereal a partir del almidn de la harina. El principal producto de la fermentacin es el dixido de carbono (CO 2), cuyas burbujas gaseosas hinchan la masa y son responsables de la porosidad y ligereza de la masa panaria, adems, la expansin y estiramiento de sta se debe a las propiedades extensibles y elsticas de la protena gluten. Los productos colaterales de la masa fermentada como alcohol, acido actico, acetona y diacetilo, son los que confieren el aroma y el sabor al pan. Al final del proceso fermentativo, la masa esponjada se calienta en el horno, concluyendo la fermentacin y dando lugar a un producto final que est libre de microorganismos vivos, el alcohol formado en la fermentacin se evapora, y en la masa cocinada permanecen solo los espacios huecos en forma de panales de las burbujas de CO2. La Ingeniera Biotecnolgica y las tcnicas de Ingeniera gentica buscan perfeccionar la calidad de las levaduras para incrementar su actividad y mejorar el sabor y la textura del producto. Aplicando las tcnicas de la ingeniera gentica se ha logrado obtener Saccharomyces cerevisiae con propiedades fermentativas ms adecuadas. 2. OBJETIVOS: 2.1. Explicar el proceso de fermentacin por Saccharomyces cerevisiae en la obtencin de masa panaria. 2.2. Evaluar el grado de esponjamiento de la masa panaria por Saccharomyces cerevisiae. 2.3. Identificar los factores que determinan el aumento de volumen de la masa panaria. 2.4. Explicar la importancia de la fermentacin en los procesos biotecnolgicos. 2.5. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Material biolgico: Levadura, Saccharomyces cerevisiae. 3.2. Insumos: Glucosa. Harina de trigo. 3.3. Material de vidrio:
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Baguetas. Beakers, 400 mL. Pipetas, 5 y 10 mL. 3.4. Aparatos y equipos: Balanza analtica. Estufa. 4. PROCEDIMIENTO: Rotular cuatro beakers del 1 al 4. Preparar la suspensin de levadura. Segn la Tabla N 1, preparar los siguientes sistemas: Tabla N 1: Preparacin de los sistemas Sistemas Vaso 1 Vaso 2 Vaso 3 Harina (g) Glucosa (g) Agua potable (mL) Levadura (mL) 25 3 22.5 7.5 25 3 15 15 25 3 30
Vaso 4 25 30
Mezclar la masa con la bagueta. Rotular cuatro probetas del 1 al 4. Aadir la masa a las probetas correspondientes y colocarlas a 30C en la estufa. Leer y anotar la altura de la masa en cada probeta (cm) al principio y a intervalos de 15 min., durante 60 min. Este valor constituye el grado de esponjamiento de la masa.
Figura N3: Preparacin de los sistemas Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Reportar el grado de esponjamiento de la masa panaria (cm) en cada sistema. 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: A qu se refiere el Poder fermentativo de la levadura?
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Qu tipo de levaduras se utilizan generalmente en panadera? En el campo de la Ing. Biotecnolgica, En que otros propsitos se utilizan las levaduras? En otras partes del mundo, Qu microorganismos se utilizan en la elaboracin de masa panaria? 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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PRACTICA N 4. OBTENCIN DE ETANOL POR Saccharomyces cerevisiae INMOVILIZADA EN AGAR

1. MARCO TERICO: El uso de biocatalizadores para llevar a cabo biotransformaciones es un rea de la Ing. Biotecnolgica en continua expansin. Un aspecto clave del proceso es extender el uso de los mismos en un sistema continuo dando como resultado una disminucin de los costos del proceso y otras ventajas como una mayor pureza del producto y mayor productividad.
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Para lograr este objetivo los biocatalizadores se inmovilizan, segn la European Federation of Biotechnology (1983) define a los biocatalizadores inmovilizados como clulas, organelos u enzimas (o combinacin de ellos) confinados o localizados en cierta regin definida del espacio, con retencin de su actividad cataltica, que pueden ser usados de modo repetido y continuo, y que adems permite obtener el producto final deseado exento de sustancias biolgicas y clulas, excluyendo algunas etapas de purificacin. En algunos casos, los biocatalizadores se encuentran unidos a materiales de soporte insolubles (carriers) y en otros casos se encuentran confinados por atrapamiento Las levaduras del gnero Saccharomyces cerevisiae han sido utilizadas tradicionalmente en la industria de la produccin de etanol, con el propsito de incrementar los niveles productivos, uno de los procedimientos biotecnolgicos ms tiles es inmovilizar las levaduras en diferentes soportes como agar, alginato de calcio, carragenatos, colgeno, almidn, etc., obtenindose pellets, que permiten la difusin de los sustratos (glucosa) y productos (etanol y dixido de carbono). Por tanto, las instalaciones piloto producen durante meses continuamente etanol a partir de glucosa con la ayuda de clulas inmovilizadas. El objetivo es incrementar la produccin de etanol, simultneamente con el mantenimiento del nivel proteico mediante la utilizacin de las tcnicas de inmovilizacin. 2. OBJETIVOS: 2.1. Comprender los principios bsicos de la inmovilizacin de clulas. 2.2. Explicar la inmovilizacin de Saccharomyces cerevisiae en soporte de agar. 2.3. Explicar el proceso de obtencin de etanol a partir de materia prima fermentable y levaduras inmovilizadas en agar. 2.4. Evaluar por refractometra el grado alcohlico del producto de la fermentacin. 2.5. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Material biolgico: Levadura liofilizada, Saccharomyces cerevisiae. 3.2. Materia prima fermentable: Mosto de uvas. 3.3. Insumos: Aceite. Agar-agar. 3.4. Material de vidrio: Baguetas. Balones, 250 mL. Beakers, 250, 400 y 600 mL. Matraces, 250 mL.
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Probetas, 50 y 100 mL. Pipetas Pasteur. 3.5. Otros: Agitador magntico. Esptulas. Gasa. Jeringa hipodrmica (20 mL). Mortero. Papel toalla. 3.6. Equipos: Balanza analtica. Bao termosttico. Hotplate. Licuadora. Refractmetro. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1. Acondicionamiento de materiales: Solubilizar la levadura liofilizada en agua destilada. En un baln disolver el agar en agua destilada, con calentamiento y agitacin constante. Calibrar el Bao Mara a 50C, para mantener el agar licuado. Colocar en una probeta de 100 mL, 50 mL de aceite vegetal. 4.2. Inmovilizacin de la enzima: Mezclar 50 mL de la suspensin de levaduras y 50 mL de agar-agar licuado. Homogenizar. Tomar en una jeringa hipodrmica 20 mL de la mezcla y dejar caer gota a gota en la probeta que contiene el aceite. Repetir el paso anterior hasta agotar la mezcla. Decantar los pellets y lavarlos tres veces con agua destilada con movimientos rotatorios suaves. Secar los pellets en papel toalla. 4.3. Obtencin de la materia prima fermentable: Obtener por prensado mosto de uva. Filtrar con una gasa el jugo obtenido. Tomar una alcuota, considerando la muestra a tiempo cero y leer los grados Brix o porcentaje de azcar en el refractmetro. 4.4. Obtencin del etanol: colocar los pellets y el Agitar la mezcla en un y leer los grados Brix en cada da durante una
En un beaker, mosto de uva. hot plate. Tomar alcuotas el refractmetro, semana.
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Figura N4: Mosto de uva con levaduras inmovilizadas en agar Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Reportar la variacin en grados Brix o el porcentaje de azcar de la materia fermentable a travs del tiempo. Reportar el grado alcohlico del producto fermentado. 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Por qu es importante la inmovilizacin de clulas? Qu otros mtodo se utiliza para inmovilizar clulas? Cul es el fundamento de la inmovilizacin de levaduras en agar? En qu consiste la fermentacin alcohlica? Cul es el fundamento del refractmetro? 10. BIBLIOGRAFA: 11. ANEXOS:
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PRACTICA N 5. HIDROLISIS ENZIMTICA DE LA SACAROSA

1. MARCO TERICO: El consumo de azcar en el mundo aumenta cada vez ms, aunque la remolacha azucarera y la caa de azcar constituyen la fuente de materia prima ms utilizada para la industria de la sacarosa, hoy en da se buscan otras alternativas para su obtencin u otros azcares con mayor efecto edulcorante como la fructosa, que est cobrando inusitado inters. La hidrlisis (inversin) de la sacarosa, sea de manera completa o parcial a glucosa y fructosa, provee jarabes dulces que son ms estables (hay menos probabilidad de cristalizacin) que jarabes puros de sacarosa. El ms popular Jarabe Dorado se produce por hidrlisis cida en algunos ingenios azucarero s;
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sin embargo hay otros tipos de jarabe que son producidos usando invertasa de Saccharomyces cerevisiae, lo que constituye tecnologa de enzimas. Aunque esta enzima tiene la particularidad en que sufre la inhibicin del sustrato a altos niveles de sacarosa (> 20%, p/p), esto no significa su uso comercial La levadura contiene una variedad de enzimas tales como la zymasa y la invertasa. La invertasa cataliza la hidrlisis de sacarosa a glucosa y fructosa. + + Sacarosa Glucosa Fructosa
La sacarosa desva la luz polarizada a la derecha, por eso se le denomina que es dextrorotatoria. La fructosa muestra una accin levorotatoria de mayor magnitud comparada con la glucosa que es dextrorotatoria. Por eso es que mientras se produce la hidrlisis de la sacarosa, la dextrorotacin gradualmente cae a zero y la solucin finalmente muestra una desviacin a la izquierda. Por eso es que este tipo de hidrlisis algunas veces se llama inversin, por eso es que la enzima que cataliza la reaccin se conoce como invertasa. Tradicionalmente, la invertasa se produce in situ por un autolisado de las clulas de levadura. El autolisado se aade al jarabe (70% sacarosa, p/p) y este se invierte, y adems se aade xyleno a fin de evitar un crecimiento bacteriano. La inversin se completa en 48-72 horas a 50 C y pH 4.5. La enzima y el xyleno se remueven durante los subsiguientes procesos de refinacin y evaporacin. Los jarabes parcialmente invertidos se producen mezclando los jarabes totalmente invertidos junto con jarabes de sacarosa. A la fecha se emplean concentrados de invertasa que estn disponibles comercialmente. Se utilizan otras enzimas que ayudan a la produccin y refinacin de sacarosa, pues ayudan a remover materiales que inhiben la cristalizacin o causan una elevada viscosidad. En algunas partes del mundo, el azcar de caa contiene cantidades significativas de almidn y por eso las soluciones de sacarosa son bastante viscosas, retardando el proceso de filtracin y haciendo que las soluciones sean bastante turbias cuando la sacarosa se disuelve. Este problema se resuelve usando enzimas termoestables -amilasa (por ejemplo Termamyl) que son bastante compatibles con altas temperaturas y los diferentes valores de pH que prevalecen durante la evaporacin al vaco en la etapa de produccin de azcar. Alternativamente se obtiene fructosa a partir de la isomerizacin de la glucosa por la enzima intracelular glucosa isomerasa extrada de clulas bacterianas del genero Streptomyces. 2. OBJETIVOS: 2.1. Comprender los principios bsicos de la hidrlisis cida y enzimtica de la sacarosa. 2.2. Diferenciar los azcares reductores de los no reductores. 2.3. Explicar la importancia de la hidrlisis de la sacarosa en los procesos biotecnolgicos. 2.4. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Material biolgico:
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Levadura liofilizada. 3.2. Insumos: Sacarosa. 3.3. Reactivos: Hidrxido de sodio, 10%. Reactivo de Fehling. Reactivo de Tollens. 3.4. Material de vidrio: Baguetas. Fiolas, 50 mL. Pipetas, 1 y 10 mL. Probetas, 50 mL. Matraces, 100 mL. Tubos de ensayo. Beakers, 250 mL. 3.5. Otros: Esptulas. Gradilla para tubos. Morteros. Papel filtro. Propipeta. Pinzas. 3.6. Aparatos: Balanza analtica. Bao termosttico. Cocinilla elctrica. Equipo de filtracin al vaco: Embudo Bchner, matraz kitasato y bomba de vaco. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1 Preparacin de la solucin de invertasa: Pulverizar en un mortero 5 g de levadura, asegurndose que las clulas de levadura estn completamente lisadas, luego aadir agua destilada lentamente con un buen mezclado. Dejar reposar la mezcla por unos 10 minutos, agitando ocasionalmente. Filtrar por medio de un embudo Bchner al vaco hasta que se obtenga un filtrado razonablemente claro o traslcido. Es importante notar que esta solucin no contiene cantidades de zymasa. Si se desea obtener zymasa, se deben usar mtodos ms complejos. 4.2 Hidrlisis de la sacarosa:
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Preparar 50 mL de una solucin acuosa de sacarosa al 10%. Etiquetar 3 matraces, A, B y C y colocar en ellos lo siguiente: 1. 2. 3. 10 mL de solucin de sacarosa y 1 mL de solucin de invertasa obtenida anteriormente. 10 mL de solucin de sacarosa y 1 mL de solucin de invertasa a la que previamente ha sido calentada a ebullicin por 2-3 minutos. 10 mL de solucin de sacarosa, 1 mL de solucin de invertasa, y 1 mL de solucin de NaOH al 10%.
Mezclar bien las soluciones y colocar los matraces en un bao de agua cuya temperatura est a 50C. Despus de 10 minutos, transferir 3 mL de cada una de estas soluciones a tubos de ensayo previamente rotulados para la reaccin de Fehling y de Tollens.
Figura N5: Reaccin de Fehling en la hidrlisis de la sacarosa Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: En qu se diferencia la sacarosa de la glucosa y de la fructosa? Por qu es importante la obtencin del jarabe de fructosa? Cul es el fundamento de la reaccin de Fehling? Cul es el fundamento de la reaccin de Tollens? Cmo diferenciar con reactivos qumicos la sacarosa de glucosa y fructosa? 10. BIBLIOGRAFA: 11. ANEXOS:
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PRCTICA N 6AISLAMIENTO DE LA CASENA DE LA LECHE

1. MARCO TERICO: La leche es el alimento nutricionalmente ms completo presente en la naturaleza. Todas las clase de leche, sea humana o animal, contienen vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido pantotnico, vitamina A, B 12 y D), minerales (calcio, potasio, fsforo y elementos traza u oligomentos), protenas (principalmente casena), carbohidratos (principalmente lactosa), y lpidos (grasa). Las cantidades de estos nutrientes presentes en la leche varan grandemente de especie a especie. Se dice que la leche de vaca y la de cabra son esencialmente idnticas en cada aspecto. La leche humana contiene menos de la mitad de protenas que la leche de vaca y cabra, pero 1.5 ms veces lactosa. La leche de caballo es bastante baja en protenas y grasas si se compara con otras mientras que otros herbvoros (reno) contienen elevada cantidad de protenas, grasas y minerales, pero tienen un contenido bajo en carbohidratos. La composicin
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promedio de la leche entera de vaca en 87.1% de agua, 3.4% de protena, 3.9% de grasa, 4.9% de carbohidratos, y 0.7% de minerales. Los nicos nutrientes que no se encuentran en leche de manera apreciable son el hierro y la vitamina C. La leche entera es una emulsin aceite en agua (oil in water, o/w) que contiene un 3.8% de grasa dispersada como glbulos micronizados. La emulsin de leche est estabilizada por fosfolpidos y protenas complejas que son absorbidos sobre las superficies de los glbulos. Ya que la grasa en la leche est tan finamente dispersada es digerida de manera ms fcil que cualquier otra grasa. Los glbulos de grasa son ms livianos que el agua, por lo tanto, coalescen cuando se les deja en reposo y se colocan en la superficie de la leche como crema. Las grasas en leche son principalmente triglicridos, los que son steres de cidos carboxlicos saturados e insaturados junto con glicerol, que es un trialcohol. Casi dos tercios de los cidos grasos en leche son saturados y consisten principalmente de cidos C12, C14 y C16. Adicionalmente la leche tambin contiene pequeas cantidades de colesterol, fosfolpidos y lecitinas. Los fosfolpidos ayudan a estabilizar la leche entera como emulsin mientras que el grupo fosfato ayuda a lograr la solubilidad parcial del agua en los glbulos de grasa. La grasa de leche puede ser removida por extraccin con ter de petrleo o un solvente similar. Hay tres clases de protenas en leche: la casena, la lactoalbmina y las lactoglobulinas. Todas son protenas globulares las que tienden a envolverse en unidades compactas, casi esferoidales y as son ms fcilmente solubilizadas en agua como suspensiones coloidales antes que como protenas fibrosas. Se les denominan protenas completas ya que contienen todos los aminocidos esenciales como para mantener la cantidad de sangre y tejido muscular, adems contienen ms aminocidos que las protenas vegetales. La casena es la principal protena en la leche y es una fosfoprotena; esto quiere decir que los grupos fosfatos estn unidos a los grupos hidroxilo de algunos aminocidos en cadenas laterales. La casena existe en la leche como caseinato de calcio. Es una mezcla de al menos tres protenas similares las que difieren principalmente en su peso molecular y la cantidad de fsforo presente. La casena alfa y beta tienen pesos moleculares que van en el rango de de 25000 y poseen de 4 a 5 grupos fosfato, respectivamente. Ambas son insolubles en agua. La casena Kappa tiene un peso molecular de 8000 y posee 1 a 2 grupos fosfato por molcula. Es responsable por solubilizar las otras dos casenas en agua debido a la formacin de micelas. El caseinato de calcio tiene un punto isoelctrico de 4.6. Por eso, es insoluble en soluciones con un pH menor a 4.6. El pH aproximado de la leche es de 6.6. Por eso, la casena tiene una carga negativa a este pH y a este pH es solubilizada como una sal. Si se aade cido a la leche, las cargas negativas en la superficie externa se neutralizan (por protonacin del grupo fosfato) y la protena neutra precipita y los iones calcio permanecen en solucin. + + + + Un ejemplo tpico es cuando la leche se avinagra. El avinagramiento de la leche es un proceso complejo que empieza con la accin de los microorganismos sobre el carbohidrato de la leche, la lactosa. Los microorganismos hidrolizan la lactosa en glucosa y galactosa. Una vez que la galactosa se ha formado, los lactobacilos, una cepa de bacteria presente en leche, convierte a la lactosa en cido lctico, que es el responsable del sabor amargo. Ya que la produccin de
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cido lctico disminuye el pH de la leche, se observa que la leche se coagula o se corta pues la casena ha precipitado. Cuando las grasas y protenas han sido removidas de la leche, los carbohidratos permanecen en el suero, ya que ellos son solubles en solucin acuosa. En este experimento se aislar casena a partir de leche de vaca, y se llevarn a cabo algunos exmenes adicionales. Como se ha explicado previamente, se deben hacer algunas operaciones bastante simples. La casena es precipitada simplemente ajustando el pH de la leche y que sea lo suficientemente cido como para que la protena no sea soluble. Sin embargo se debe de tener cuidado de no acidificar demasiado, pues de otro modo, la lactosa se hidrolizar. Las otras protenas permanecern solubles en agua en solucin acdica pero tambin pueden ser precipitadas y aisladas simplemente calentado la solucin acdica y filtrando. La casena aislada es insoluble en agua, alcohol y ter pero se disuelve en soluciones alcalinas y algunas soluciones cidas. La casena aislada de leche es importante desde el punto de vista comercial e industrial ya que despus de disolverse en soluciones alcalinas y ser secada y se convierte en una sustancia pegajosa que puede ser usada en algunos pegamentos, cubiertas de papeles, como material de apelmazamiento de colores y pinturas y en papel para pared. Si las condiciones de aislamiento cumplen con normas sanitarias adecuadas, la casena aislada es empleada en industria farmacutica y elaboracin de productos nutricionales. 2. OBJETIVOS: 2.1. Aislar la casena a partir de la leche de origen animal. 2.2. Comparar y evaluar el rendimiento del producto a partir de diferentes tipos de leche de origen animal. 2.3. Conocer la importancia industrial de la casena de la leche. 2.4. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Insumos: Leche evaporada Gloria light, leche evaporada Gloria Sper Light, leche en polvo descremada y leche entera de vaca. 3.2. Reactivos: cido actico al 10 %. Etanol. ter etlico. 3.3. Material de vidrio: Baguetas. Beakers, 250 mL. Matraces, 150 mL. Pipetas, 5 y 10 mL. Probetas, 100 mL.
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3.4. Otros: Esptulas. Micropipeta, 100-1000 L. Papel Filtro. Picetas. Termmetro. Tijeras. 3.5. Aparatos y Equipos: Balanza analtica. Cocinilla elctrica. Equipo de filtracin al vaco: Embudo Bchner, matraz kitasato y bomba de vaco. Potencimetro. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1 Preparacin de la materia prima: Leche en polvo descremada: Pesar 6.25 g y disolver en 50 mL de agua destilada tibia. Leche evaporada: Mezclar 25 mL de leche con 25 mL de agua destilada. Leche entera: Medir 50 mL de la muestra Determinar el pH de la materia prima utilizando la cinta universal o el potencimetro. 4.2 Aislamiento de casena: Calentar la materia prima a 55C (no excederse) en una cocinilla elctrica, chequear la temperatura con el termmetro. Luego con una micropipeta, aadir gota a gota una solucin de cido actico al 10%, agitando continuamente con una bagueta. Continuar la adicin del cido hasta que el lquido cambie de lechoso a incoloro y no se separe ms casena. Registrar el volumen de acido actico al 10% adicionado. 4.3 Purificacin de casena: Recolectar la casena por succin o filtracin al vaco a fin de remover tanta agua como sea posible. Presionar el slido con una esptula a fin de drenar tanta agua sea posible. Colocar la casena aislada en un beaker y aadir 30 mL de una mezcla etanol-ter etlico (1:1). Agitar suavemente la casena en esta mezcla por unos minutos, decantar el ter y repetir esta operacin unas dos veces ms. Luego filtrar al vaco el producto. El ter se encarga de remover las pequeas cantidades de grasa que hayan podido precipitar junto con la casena. Colocar la casena sobre papel filtro o papel toalla y trate de secar de la mejor manera. Dejar en reposo a la casena por unos 10-15 minutos y proceder a secar su producto por unos das. Finalizado el tiempo de secado, registrar el peso de la casena.
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Figura N6: Separacin de la casena de la leche por filtracin al vaco. Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Determinar el porcentaje de casena aislada a partir de distintos tipos de leche de origen animal. Considerar la densidad de la leche igual a 1,03 g/mL. 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Qu es una protena y de que est compuesta? Defina con sus propias palabras: Precipitacin y decantacin. Definir que es una emulsin Cul es la frmula del cido lctico? Seala algunas aplicaciones de la casena en la industria. Seala algunas aplicaciones del suero de leche en la industria. Describa brevemente el procedimiento para la elaboracin de queso. 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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PRACTICA N 7. EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DEL CAROTENOIDE BIXINA A PARTIR DE Bixa Orellana (ACHIOTE)
1. MARCO TERICO: Los materiales vegetales son recursos invaluables y tiles diariamente, los cuales proveen un recurso interminable de materia prima a las industrias farmacutica, cosmtica y de alimentos. Por tanto, los compuestos naturales con propiedades funcionales o tecnolgicas, han cobrado gran importancia en diversas aplicaciones industriales. Es por ello, que se buscan mtodos eficientes, econmicos y favorables al ambiente para la extraccin de estos compuestos. Adems, se ha determinado que, en algunos casos, la extraccin puede ser ms econmica que la sntesis qumica de los compuestos de inters, razn por la cual, una extraccin que permita mayor productividad es definitivamente el inters de la industria. La produccin de colorantes naturales a partir de vegetales est incrementndose da a da. Aunque los colorantes vegetales son muy conocidos desde hace mucho tiempo, hoy en da estn cobrando inusitado inters. Muchos de los colorantes de alimentos se producen de manera sinttica y hay una enorme variedad al respecto. Sin embargo, la lista de colorantes sintticos se va acortando debido a que son
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vetados, principalmente debido a razones de toxicidad, pues son sospechosos de ser potenciales cancergenos. Por lo tanto, la industria de alimentos y cosmticos trata de buscar fuentes ms seguras y confiables, sobre todo respecto a su toxicidad. Es as como nuevamente se fija en los productos que se pueden obtener en la naturaleza. Una buena fuente es la obtencin de carotenoides los que se encuentran presentes en muchos vegetales. El -caroteno es la sustancia representativa y hay una gran variedad de sustancias similares, denominadas carotenoides, que se pueden obtener de diversas fuentes.
CH3 CH3 CH3 CH3

-caroteno
CH3
CH3
H3C CH3 CH3 CH3
El -caroteno es el pigmento amarillo-naranja de la zanahoria y es un ismero del licopeno, que es el pigmento rojo del tomate. Licopeno es el carotenoide predominante en sangre y tejido prosttico.
H3C
CH3
CH3
CH3
H3C
CH3
CH3
Licopeno
CH3
H3C
CH3
Es tambin responsable por el color rojo de los flamencos. Los flamencos, sin licopeno en su dieta, seran blancos. El licopeno se encuentra tambin en sanda, papaya y guayaba de color rojizo, as como la toronja pero la de color rojo-naranja. El licopeno no se convierte en vitamina A como s lo hace el -caroteno y, como es sabido, la vitamina A es un poderoso antioxidante y por eso se le considera como un anticancergeno. Los carotenoides son muy sensibles a la luz, por eso es que se deben de proteger de la luz intensa. Otra fuente de carotenoides no especficos tal como la capsantina y la capsorubina, que son los pigmentos predominantes del pimiento rojo.
H3C
CH3
CH3
CH3
CH3 OH
HO
CH3
Capsantina
CH3
CH3
H3C CH3
H3C CH3 HO H3C CH3 CH3 O CH3 OH O CH3 CH3 H3C CH3
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Capsorrubina Otro ejemplo clsico de un carotenoide nico es la crocetina, compuesto presente en el azafrn (saffron), que es el material indispensable para la coloracin del arroz en el plato paella a la valenciana. La bixina, es otro ejemplo, que es el mayor pigmento de la bixa orellana o achiote (anatto).
CH3 HOOC
CH3 COOH CH3

Crocentina
CH3
CH3 HOOC
CH3
CH3
Bixina Extraccin SlidoLquido: Consiste en la disolucin de un componente o grupo de componentes que forman parte de un slido, empleando un disolvente adecuado en el que es insoluble el resto del slido. Para llevar a cabo el proceso es necesario. Contacto del disolvente con el slido a tratar, para disolver el componente soluble. Separacin de la disolucin y el resto del slido. La disolucin separada se denomina extracto y el resto de slido se denomina inerte. Extraccin a reflujo: Es un tipo de extraccin directa que utiliza todo el disolvente en una sola operacin de extraccin. Extraccin asistida por ultrasonido (EAU): La extraccin asistida por ultrasonido (EAU) permite extraer las sustancias de inters utilizando sonidos de alta frecuencia, con el fin de desprender el compuesto buscado. Las partculas slidas y lquidas vibran y se aceleran ante la accin ultrasnica, como resultado el soluto pasa rpidamente de la fase slida al solvente.
COOCH3
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El proceso de extraccin es significativamente ms eficiente utilizando el bao de ultrasonido, el cual es capaz de generar ondas ultrasnicas con la finalidad de provocar una microagitacin muy energtica y til para la disolucin rpida de los principios activos, ya que las ondas acsticas aumentan la interaccin del solvente con las superficies del slido por un fenmeno mecnico denominado cavitacin. El mecanismo de extraccin involucra dos fenmenos fsicos: difusin a travs de la pared celular y el lavado de los contenidos celulares, una vez que las paredes se han lisado. El bao de ultrasonido requiere de un medio lquido y un generador de energa, capaz de transmitir una corriente elctrica a un sistema mecnico que la convertir en energa acstica o vibraciones de alta intensidad generndose ondas de ultrasonido que generan millones de burbujas microscpicas, las cuales se expanden y colapsan contra las clulas causando la ruptura de su membrana. Esta tcnica es la ms econmica, productiva y amigable con el medio ambiente, que los mtodos tradicionales, adems tiene los requerimientos instrumentales ms bajos entre las ltimas tcnicas de extraccin desarrolladas. 2. OBJETIVOS: 2.1. Aislar el pigmento carotenoide a partir de Bixa Orellana (Achiote). 2.2. Explicar los mtodos de extraccin a reflujo, por soxhlet y extraccin asistida por ultrasonido (EAU) en la obtencin del carotenoide bixina. 2.3. Comparar y evaluar el rendimiento de los mtodos de extraccin. 2.4. Identificar el pigmento por cromatografa en capa fina. 2.5. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Material vegetal: Semillas Bixa Orellana (Achiote). 3.2. Reactivos: Estandar de -Caroteno sinttico, 95%. Etanol. Cloroformo. Metanol. 3.3. Material de vidrio: Cmara de separacion para Cromatografia de Capa Fina (TLC). Capilares. Matraces 250 mL. Pipetas, 5 y 10 mL. Probetas, 100 mL. 3.4. Otros: Agitador magntico. Esptulas. Papel filtro. Picetas.
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Placas cromatogrficas de silica gel. 3.5. Equipos: Balanza analtica. Hotplate. Equipo de filtracin al vaco. Equipo de reflujo. Bao de ultrasonido. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1 Extraccin por reflujo: Reflujar 50 g de semillas Bixa Orellana (Achiote), no pulverizadas con 100 mL de etanol por unos 30 minutos. El tiempo de reflujo se cuenta a partir de que cae la primera gota de disolvente condensado. Desmontar el equipo y filtrar al vaco el extracto obtenido. 4.3 Extraccin asistida por ultrasonido (EAU): Pesar 50 g de semillas de Bixa Orellana (Achiote) y colocarlas en un matraz de 250ml, agregar 100 mL de etanol. El matraz conteniendo la mezcla es llevado a la zona de cavitacin del bao de ultrasonido por 30 minutos. Finalizado el tiempo, filtrar al vaco el extracto obtenido. Destilar el disolvente en un equipo de soxhlet o en el rotavapor, hasta obtener el extracto ms concentrado. La bixina pura son cristales en forma de agujas, color rojo intenso, cuya pureza puede ser evaluada usando una cromatografa en capa fina (Thin Layer Chromatography, TLC) sobre slica gel usando cloroformo-metanol (94:6) como solvente eluyente.
Figura N7: Filtracin del extracto de achiote Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
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6. RESULTADOS Y DISCUSIN: De los extractos obtenidos determinar su masa, una vez libre de disolvente, por el mtodo gravimtrico. Calcular el factor de retencin (Rf) de la bixina, -Caroteno y otros pigmentos encontrados por TLC. 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Enumera tres procedimientos en los cuales se utiliza el bao de ultrasonido. Dibujar la estructura qumica de la bixina. Dibujar la estructura qumica de cinco carotenoides adicionales y mencionar su procedencia. Haga un comentario sobre las oportunidades comerciales de la produccin de carotenoides por biotecnologa. 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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PRACTICA N 8_ CROMATOGRAFIA DE AMINOACIDOS

1. MARCO TEORICO: La palabra cromatografa viene de dos vocablos: i) Croma, que significa color, y ii) grafos, que significa dibujo. Este trmino fue introducido por Michael Tsweet, un qumico ruso, que se puede considerar el padre de la cromatografa. Sweet en 1911 quera separar los diferentes pigmentos verdes presentes en extractos de hojas. Se saba que podan existir varias formas de clorofila y su idea era separar tales pigmentos. Lo que hizo fue rellenar una columna (similar a una bureta) y la rellen con tiza (CaCO3). Luego el extracto fue aplicado en la columna y la tiza selectivamente iba reteniendo los diferentes tipos de clorofila. De esta manera se pudo aislar e identificar los diferentes tipos de clorofila. Este fue el punto de partida de la cromatografa y es as como con el correr de los aos se introdujeron nuevas tcnicas y procedimientos hasta llegar hasta lo que hoy en da se conoce como HPLC, que viene de las siglas High Performance Liquid Chromatography, que significa Cromatografa de Alto Rendimiento o Eficacia. Despus del trabajo de Tsweet, se llevaron a cabo numerosas mejoras y aplicaciones y es as como tanto a, Tiselius en Suecia, Synge y Martin en Inglaterra se les otorga el Premio Nbel en Qumica en el ao de 1948. La Cromatografa en capa Fina se le conoce en sus siglas en Ingles como Thin Layer Chromatography o simplemente TLC. Se puede apreciar que es una tcnica muy antigua pero a pesar de todo muy vigente y precursora de numerosas tcnicas avanzadas como la electroforesis, arma clave en Biologa Molecular.
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2. OBJETIVOS: 2.1. Comprender los principios bsicos de la cromatografa como herramienta til en la separacin de compuestos. 2.2. Explicar y distinguir los trminos adsorcin y elusin. 2.3. Separar e identificar los aminocidos presentes en una muestra. 2.4. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Reactivos: Solucin de aminocidos 0.1 M. Solucin de ninhidrina (al 2% en acetona). Etanol. cido actico. 3.2. Material de vidrio: Beakers, 250 mL. Capilares. Pipetas, 1 y 10 mL. Placas petri. 3.3. Otros: Placas de TLC. 3.4. Equipos: Cocinilla elctrica. 4. PROCEDIMIENTO: 1. Obtener una placa de TLC. Evite tocar la superficie; manipule las placas por los bordes. Si toca la superficie, las huellas digitales se quedarn impregnadas y podran interferir en el desarrollo de su cromatograma. Trace una lnea ms o menos a 0.5 cm del borde inferior. Marque o haga cruces a lo largo de esta placa pues en cada marca se sembrar un poco de muestra. 2. Coloque o siembre la muestra de cada aminocido en cada marca utilizando el capilar preparado previamente. No siembre poco, no sobre cargue la muestra, la experiencia le dir cual es la cantidad adecuada. Esto es muy importante. Poca muestra no ser detectada y una gran cantidad de muestra ofrecer dificultades. 3. Deje secar la placa y aada solvente a su cmara de desarrollo. Se puede utilizar un beaker de tamao adecuado, 100 o 250 ml. Coloque su placa cromatogrfica, que entre en contacto con el solvente y cubra el beaker con un poco de papel aluminio. 4. Deje que el solvente de elusin viaje a travs de la placa. Cuando el solvente est por llegar a la parte superior (que falte mas o menos 0.5 cm) saque el cromatograma.
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5. Trazar una lnea donde el solvente ha llegado y dejar que el solvente evapore. Puede calentar de manera suave o, mejor an, utilice un secadora. 6. Ahora es necesario visualizar las sustancias y se hace necesario aplicar el revelador. Aada el revelador de ninhidrina, djelo secar y caliente en una cocina elctrica. Los aminocidos tomarn un color azul o prpura. Marcar en el centro cada aminocido. 7. Calcular el factor de retencin (Rf) para cada aminocido utilizando la siguiente ecuacin: = 8. Repita el experimento para la sustancia desconocida e identifique los aminocidos desconocidos en la muestra.
Figura N8: Corrida cromatogrfica Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Registrar el valor de cada Rf para los aminocidos utilizados en el experimento y de la sustancia desconocida. 7. SUGERENCIAS: 8. CONCLUSIONES: 9. CUESTIONARIO: Cul es el rol del adsorbente en la TLC? Qu otros adsorbentes existen? Nombrar al menos 4. Qu papel juega el solvente en la elusin del cromatograma?
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Mencionar otros solventes que se utilizan en la TLC y escribir su frmula Cul es el propsito del revelador en la cromatografa en capa fina? Buscar 6 reveladores adicionales e indicar cul es su uso de cada uno de los reveladores. Qu otros materiales o sustancias pueden ser detectados por TLC? 10. BIBLIOGRAFA: 11. ANEXOS:
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PRACTICA N9. ACTIVIDAD PROTEOLTICA DE EXTRACTOS ENZIMTICOS DE ORIGEN VEGETAL

1. MARCO TERICO: La capacidad nica de las enzimas para llevar a cabo sus transformaciones qumicas especficas in vitro ha conducido a un uso creciente de las mismas en procesos industriales y alimentarios, en la mejora del medio ambiente y en medicina, y su produccin se denomina colectivamente biotecnologa enzimtica. Al igual que muchas otras enzimas usadas, las proteasas toman un polmero largo y lo descomponen en unidades ms pequeas. Las proteasas catalizan la hidrlisis de los enlaces peptdicos de las protenas y sus productos de descomposicin son los pptidos y los aminocidos. Una proteasa puede ser funcional sobre una protena en particular slo si la protena se encuentra en una forma especfica. Las proteasas ms utilizadas en la historia han sido las derivadas de plantas y animales. Las proteasas animales son la pancreatina, la tripsina y la quimotripsina. Las proteasas vegetales son la papana, que se encuentra a gran concentracin en el rbol de la papaya y en esta fruta, la bromelina en la pia y la ficina en los higos. Las proteasas se han utilizado tradicionalmente en la industria alimentaria como ablandadoras de carnes, horneado de masa panaria, industria cervecera y complemento alimenticio; en la industria farmacutica, en formulaciones de ayuda digestiva, tratamiento de inflamaciones, disolucin de cogulos de sangre, a su vez, investigaciones recientes les atribuyen actividad antitumoral, adems participan principalmente en la industria del cuero, textil y en la elaboracin de detergentes biolgicos, Sin embargo, el nmero de proteasas vegetales que se han aislado y caracterizado es an muy bajo y existen muchas fuentes naturales por explorar. Se han estudiado menos del 1 % de las especies vegetales conocidas, de ah el marcado inters en la bsqueda de nuevas fuentes naturales de obtencin de proteasas
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vegetales. Por tanto, es importante evaluar la actividad proteoltica de extractos enzimticos de origen vegetal. 2. OBJETIVOS: 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. Evaluar la actividad proteoltica de extractos enzimticos de origen vegetal. Investigar nuevas fuentes naturales de obtencin de proteasas vegetales. Explicar la importancia de las enzimas en los procesos biotecnolgicos. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.
3. MATERIALES: 3.1. Material biolgico: Extracto de frutas con actividad proteoltica. 3.2. Insumos: Detergente. Gelatina. 3.4. Material de vidrio: Baguetas. Beakers, 50, 250 y 1000 mL. Pipetas, 1 y 10 mL. Probetas, 50 mL. Tubos de ensayo. 3.5. Otros: Esptulas. Gradilla para tubos. Hielo. Morteros. Propipeta. Picetas. 3.6. Aparatos: Balanza analtica. 4. PROCEDIMIENTO: Rotular 3 tubos de ensayo con los nmeros del I al III. Colocar en el tubo I, 5 gotas de ltex de las frutas con actividad proteoltica. Colocar en el tubo II, 5 gotas del extracto de las frutas con actividad proteoltica. Dejar vaco el tubo III. Preparar en un recipiente gelatina siguiendo las instrucciones del envase. Agregar a cada tubo aproximadamente 5 mL de la gelatina recin preparada, mezclar haciendo rotar los tubos, y colocar todos los tubos en un bao de hielo durante 10 minutos.
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Cuando el tubo III contenga una gelatina firme, observar los restantes tubos. Registrar y comparar los resultados.
Figura N9: Obtencin del extracto enzimtico vegetal Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Qu son las proteasas? y Cmo se clasifican? Cules son los parmetros ideales para la actividad cataltica de las proteasas vegetales? Realiza un comentario sobre las aplicaciones de las proteasas en la Biotecnologa. 10. BIBLIOGRAFA: 11. ANEXOS:
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PRACTICA N 10. EXTRACCIN DE PECTINA A PARTIR DE CSCARAS DE CTRICOS

1. MARCO TERICO: Debido a la legislacin y a razones ambientales, la industria se ve cada vez ms forzada a encontrar alternativas de uso de sus residuos materiales; esto se da por lo general en las industrias procesadoras de alimentos. El valor agregado que se les confiere a los residuos de materias primas, genera utilidad o beneficio en la obtencin de ganancias en las industrias que en cierto momento vean que el confinamiento les costaba ms y provocaba severos problemas de contaminacin. En las industrias procesadoras de alimentos los residuos vegetales contienen importantes cantidades de compuestos potencialmente interesantes. La recuperacin de ellos es ahora una elegante va para la reutilizacin de diversos grupos de subproductos y en la ltima dcada el inters en alternativas de uso ha aumentado drsticamente. En la Industria citrcola se generan residuos que constituyen bsicamente la materia prima para la obtencin de pectinas, substancias extensamente usadas en las industrias alimenticias y farmacuticas, y que no se producen en cantidades necesarias a partir de un desperdicio insuficientemente industrializado: La cscara de frutas. Qu es la pectina? Es un heteropolisacrido altamente hidroflico. La estructura bsica la forman molculas de cido D-galacturnico unidas por enlaces glicosdicos 1-4, que constituyen el cido poligalacturnico, que existe parcialmente esterificado con metanol.
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Las pectinas son uno de los principales constituyentes de la pared celular de los vegetales, por su habilidad de absorber grandes cantidades de agua y su capacidad para balancear el equilibrio del agua dentro del sistema. Aplicaciones: En la industria alimentaria, como resultado se sus propiedades gelificantes y espesantes, la pectina ha tomado mucha importancia como una goma industrial, utilizndose en jaleas, mermeladas, gelatinas, conservas vegetales y en gran variedad de productos alimenticios. La pectina se emplea en la industria farmacutica para modificar la viscosidad de sus productos, en la formacin de complejos que regulan la accin de la insulina, de la epinefrina, de la estreptomicina y otros frmacos, es eficaz en las intoxicaciones con metales pesados y venenos. En la preparacin de medios de cultivo bacteriolgicos, se emplean varios tipos de pectinas, como medio de identificacin de ciertos microorganismos y como sustituyente de agar. En la preparacin de variedad de cosmticos. Debido a que las pectinas son compuestos utilizados en alimentos y la industria farmacutica, es necesario utilizar en su produccin, reactivos, disolventes y equipo que no dejen residuos txicos en el producto final. Mtodos de extraccin: Existen numerosos procesos patentados para obtener las pectinas, y en cada uno de ellos se obtienen productos de diferente calidad porque sta, as como sus posibles aplicaciones, depende mucho del mtodo de obtencin. Sakai en 1989 propuso un proceso biotecnolgico para obtener pectina utilizando microorganismos del gnero Bacillus, cuya actividad permite la liberacin y recuperacin de las pectinas, obteniendo fcilmente una pectina de alto peso molecular con un buen rendimiento. Graves en 1994 propuso un proceso ambientalmente amigable por intercambio inico, que consiste en hacer reaccionar una suspensin acuosa de una fibra comestible con una solucin de un metal alcalino trreo y luego separa la suspensin resultante en una fraccin slida rica en pectina y la fraccin lquida con menor contenido de sta. El material obtenido se hace pasar por una columna de intercambio inico para cambiar los iones H + por los iones metlicos agregados previamente, y proceder a recuperar la pectina. Fishman en el 2000, obtuvo pectinas de muy buena calidad a partir de material vegetal aplicndoles presin y con calentamiento por microondas. Precipitacin: La precipitacin es una operacin unitaria de separacin que se produce cuando tenemos una sustancia en disolucin que por algn factor externo, forma el precipitado, sustancia slida que se forma en el interior de una disolucin. Es un mtodo sencillo y directo para purificar solutos. Mtodos de precipitacin: Obtencin de un producto insoluble con un agente precipitante. Ej.: Adicin de una sal de potasio o sodio a una solucin de penicilina Precipitacin por adicin de un disolvente. Ej.: Precipitacin de dextrano utilizando acetona o alcohol.
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Variando la temperatura, generalmente disminuyndola. Ej.: Descenso de temperatura hace que disminuya la solubilidad. Precipitacin por cambio de pH. Ej.: La solubilidad de las protenas es menor a pH cercanos al punto isoelctrico 2. OBJETIVOS: 2.1. Explicar el mtodo de extraccin de pectina a partir de cscaras de ctricos. 2.2. Comparar y evaluar el rendimiento de pectina a partir de diferentes tipos de materia prima. 2.3. Explicar la importancia de la obtencin de bioproductos en los procesos biotecnolgicos 2.4. Comprender la importancia del aprovechamiento de residuos de materias primas. 2.5. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.
3. MATERIALES: 3.1. Material biolgico: Cscaras de frutas ctricas. 3.2. Reactivos: cido actico. cido ctrico. Etanol absoluto. 3.3. Material de vidrio: Baguetas. Beakers de 600 y 1000 mL. Matraces, 500 mL. Pipetas, 10 mL. Pipetas Pasteur. Probetas, 100 mL. Termmetro. 3.4. Otros: Agitador magntico. Cuchillo. Gasa. Picetas. Propipetas. Tijeras. 3.5. Equipos: Balanza analtica. Hot plate. Potencimetro.
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Refrigeradora. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1 Tratamiento de la materia prima: Seleccionar cscaras en buen estado, es decir sin partes en descomposicin. Separar manualmente el endocarpio y mesocarpio. Obtener 250 g de cscara. Lavar con agua corriente para eliminar impurezas. Escurrir y decantar el agua de lavado. Cortar las cscaras en pequeos trozos. Aadir agua destilada a una temperatura de 60C, agitando constantemente por 2 minutos. Repetir el lavado tres veces. Decantar el agua de desecho.
4.2 Extraccin de la pectina y separacin del extracto: Agregar a las cscaras, agua acidulada a un pH igual a 1.5 en proporcin 1:3. Calentar la solucin durante 60 minutos. a una temperatura de 90C. Con ayuda de una gasa filtrar los extractos obtenidos en cada procedimiento. 4.3 Precipitacin de las pectinas: Al extracto filtrado agregar etanol absoluto fro. Dejar en reposo durante 10 minutos. Hasta obtener un precipitado. Decantar el etanol. Secar la muestra a temperatura ambiente y anotar su peso.
Figura N10: Obtencin de pectina de cscaras de naranja Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
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6. RESULTADOS Y DISCUSIN: 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Qu otros residuos se utilizan para producir pectinas? Qu otros mtodos se utilizan para precipitar la pectinas? Qu otros residuos de materias primas pueden ser aprovechados? 10. BIBLIOGRAFA: 11. ANEXOS:
PRACTICA N 11. CALIDAD MICROBIOLGICA DE LOS ALIMENTOS

1. MARCO TERICO: En todos los ambientes naturales habitan mltiples microorganismos de diversos tipos y actividad fisiolgica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la poblacin mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean tcnicas de aislamiento que conduzcan a la obtencin de un cultivo puro. Por tanto, es importante desarrollar procedimientos que permitan el aislamiento y seleccin de microorganismos de inters. A fin de tener xito, los mtodos de seleccin deben constituir una actividad interdisciplinaria que combine actividades de microbiologa, qumica, bioqumica e ingeniera. El xito de un programa de seleccin depende de la fuente utilizada para la obtencin de los microorganismos y del mtodo elegido para detectar la actividad deseada. De manera general los mtodos de aislamiento incluyen: 1. Separacin fsica de los microorganismos mediante: Diluciones seriadas, siembra por vertido en placa y siembra por estra. 2. Utilizacin de medios de cultivo, selectivos y diferenciales. 3. Aprovechamiento de caractersticas particulares de los microorganismos, tales como la formacin de esporas, el metabolismo anaerobio y/o facultativo, la capacidad para utilizar sustratos poco comunes, etc. Para facilitar el proceso de aislamiento y obtener mejores resultados, frecuentemente se emplean combinaciones de las tcnicas anteriores En la presente prctica se realizar la dilucin de la muestra y su respectiva siembra por estra en diferentes medios de cultivo. 2. OBJETIVOS: 2.1. Aislar microorganismos en medios slidos a partir de muestras de alimentos.
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2.2. Identificar los microorganismos en el cultivo microbiolgico. 2.3. Evaluar la calidad microbiolgica de los alimentos analizados. 2.4. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia. 3. MATERIALES: 3.1. Medios de cultivo: Agar Agar Agar Agar Salmonella-Shigella (SS). MacConkey (MC) Sabouraud. Manitol salado.
3.2. Reactivos: Etanol 70%. Hipoclorito de sodio 2.5%. 3.3. Material de vidrio: Pipetas estriles. Tubos de ensayo estriles. 3.4. Otros: Asa de cultivo. Gradilla para tubos. Mechero. Plastic wrap. Propipetas. 3.5. Aparatos y equipos: Cmara de flujo laminar. Estufa. Incubadora. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1. Preparacin para el cultivo microbiolgico: Los materiales que se requieren estriles deben envolverse en papel craft antes de ser sometidos a la esterilizacin en la autoclave o por calor seco en una estufa a 150C durante 2 o 3 horas. La superficie de la mesa de trabajo, paredes y techo de la cmara de flujo laminar deben limpiarse con un pao humedecido con Hipoclorito de sodio al 2.5% y despus con etanol al 70%. Encender la cmara de flujo laminar y colocar el mechero Bunsen, 15 minutos antes de iniciar el trabajo. Evitar la interrupcin o inversin del flujo de aire. El operador debe llevar una bata de laboratorio limpia, adems debe lavarse las manos y brazos con jabn carblico y despus con etanol al 70%. Introducir todos los materiales necesarios para el cultivo en la cmara de flujo laminar, previamente esterilizados con etanol al 70%.
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4.2. Preparacin de la muestra: Recolectar las muestras en recipientes estriles o con hisopos estriles. Las muestras se identifican con abreviaturas para rotular las placas empleadas. En la cmara de flujo laminar y en condiciones aspticas, diluir la muestra en razn a 10-1. 4.3. Cultivo microbiolgico: Esterilizar al rojo vivo el asa de cultivo, enfriar, introduciendo en un extremo del agar. A partir del cultivo obtenido sembrar con un asa de cultivo por el mtodo de la estra en los diferentes medios de cultivo. Evitar destapar completamente los medios de cultivo. Rotular las placas e incubar a 37 C durante 24 a 48 horas. Observar y registrar los resultados.
Figura N11: Siembra por el mtodo de estra Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Qu es un medio de cultivo? Describir la composicin de cada medio de cultivo utilizado Describir los mtodos de aislamiento de los microorganismos Qu tipo de microorganismos son aislados en cada medio de cultivo utilizado? Nombrar algunas aplicaciones prcticas de la microbiologa en la biotecnologa. 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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PRACTICA N 12. EFECTO DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS BIOCIDAS

1. MARCO TERICO: El desarrollo de la agricultura sostenible en los ltimos aos ha planteado nuevos retos tecnolgicos y la necesidad de disponer de tcnicas sencillas y de bajo costo para poder manejar integralmente los sistemas de produccin agrcola y de esta manera reducir los problemas de contaminacin causados por el uso de los insumos sintticos. La importancia que viene adquiriendo el estudio y uso de las plantas con propiedades biocidas en el Per como alternativa ecolgica para regular plagas y enfermedades en los cultivos es significativa. El encuentro del saber tradicional o campesino con los conocimientos modernos sobre los principios activos de estas plantas, han tenido un efecto sinrgico para identificar las potencialidades y la viabilidad de este recurso botnico dentro de la estrategia de control de los organismos que compiten por alimentos con el ser humano. Las plantas biocidas son aquellas que producen sustancias qumicas naturales idneas para contrarrestar, neutralizar y ejercer un control sobre cualquier microorganismo considerado nocivo para un cultivo. Los recursos botnicos con propiedades biocidas como una alternativa importante para prevenir y controlar las diversas plagas en los cultivos de importancia econmica. En los ltimos aos el uso de una serie de preparados en base a estas plantas por parte de los agricultores se ha incrementado. Existe ahora un mayor convencimiento por parte de los tcnicos de su utilidad dentro de lo programas de manejo de plagas, existe tambin mayor inters de las empresas por obtener productos comerciales. La presencia en el mercado de productos comerciales que contienen los principios activos de algunas plantas representa una posibilidad para continuar en la identificacin y validacin con fines prcticos y comerciales de estas plantas. Es importante considerar que las especies de plantas con propiedades biocidas deben formar parte de unidades productivas para garantizar su produccin, transformacin y comercializacin, ya que muchas de las especies se encuentran en forma natural y su aprovechamiento irracional puede poner en peligro la reproduccin natural de la especie; por ello las plantas identificadas y validadas
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con fines biocidas deben ser multiplicadas y producidas dentro de los sistemas de produccin. La existencia de ms de 300 especies de plantas inventariadas en el Per entre nativas e importadas es potencialmente til para el desarrollo de la agricultura alternativa o ecolgica. En el Cuadro N1 podemos observar el abanico de posibilidades para que esta alternativa pueda ser desarrollada.
Cuadro N1: Potencial de plantas con propiedades biocidas reportadas en el Per. N de especies reportadas Insecticidas 117 Insecticidas de contacto 12 Inhibidores de la alimentacin 46 Reguladores del crecimiento de insectos 11 Repelentes 72 Atrayentes 10 Acaricidas 09 Garrapaticidas 13 Nematicidas 24 Moluscucidas 02 Raticidas 03 Fungicidas 38 Herbicidas 02 Fumigantes 01 Total 360 Fuente: Arning y Velasquez. Plantas con potencial biocida Propiedad de la planta Entre las especies de plantas con propiedades biocidas mas conocidas tenemos: ajo (Allium sativum L.), cebolla (Allium cepa L.), tabaco (Nicotiana tabacum L.), rocoto (Capsicum pubescens), eucalipto (Eucalyptus globulus labill), ortiga (Urtica dioica L.), ruda (Ruta graveolens L.), cedrn (Lippia citriodora), mua (Minthostachys mollis), tarwi (Lupinus mutabilis Sweet), chamico (Datura stramonium), cola de caballo (Equisetum arvense L.), etc. 2. OBJETIVOS: 2.1 2.2 2.3 2.4 Preparar extractos por maceracin a partir de plantas con propiedades biocidas. Preparar adherentes naturales que faciliten la aplicacin del extracto biocida. Evaluar el efecto de los extractos en cultivos de importancia econmica afectados por plagas o enfermedades. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.
3. MATERIALES: 3.1. Material vegetal:
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Plantas biocidas: Cactceas: sbila (Aloe vera) 3.2. Reactivos: Etanol 96%. 3.3. Material de vidrio: Baguetas. Beakers, 600 mL. Probetas, 100 mL. 3.4. Otros: Recipientes contenedores. Cuchillo. Tijeras. 3.5. Aparatos y equipos: Balanza analtica. 4. PROCEDIMIENTO: 4.1. Obtencin de los extractos biocidas: Para obtener el extracto biocida, seleccionar el material vegetal fresco y vigoroso, el cual ser cortado en pequeas rebanadas procurando que sean lo ms delgadas posible, para luego pesar aproximadamente 25 g, dejando macerar en un volumen de etanol al 96% por una semana. Finalizado el tiempo de maceracin separar el material vegetal del extracto biocida con ayuda de un tamiz. Registrar las caractersticas de los extractos obtenidos por maceracin: color y olor. 4.2. Preparacin del adherente: Las pencas de sbila recolectadas sern lavadas con agua corriente, luego se proceder a eliminar las espinas y retirar la cutcula externa de la corteza, conservando slo la mdula. Para obtener el extracto acuoso, la mdula ser cortada en pequeas rebanadas procurando que sean lo ms delgadas posible, para luego dejar macerar por una semana, en un volumen de agua destilada equivalente a la cantidad del mucilago obtenido. Finalizado el tiempo de maceracin separar el extracto viscoso de los residuos slidos restantes, con ayuda de un tamiz. Registrar las caractersticas del adherente obtenido por maceracin: color, olor y consistencia. 4.3. Aplicacin del producto con efectos biocidas: Seleccionar plantas afectadas por una plaga u enfermedad. Aplicar el extracto biocida filtrado con el adherente en igual proporcin.
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Figura N12: Obtencin del extracto biocida Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Evaluar el efecto de los extractos biocidas en plantas afectadas por una plaga u enfermedad. 7. CONCLUSIONES: 8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Menciona el efecto de diez plantas biocidas. Realiza un comentario sobre el Bacillus thuringensis como bioinsecticida. 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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PRACTICA N 13. DEPURACIN DEL AIRE CON MICROORGANISMOS FILTROS BIOLGICOS

1. MARCO TERICO: En la ciudad de Arequipa existen focos contaminantes de olores como resultado de la descomposicin anaerbica de la materia orgnica, afectando la salud pblica y la calidad del Medio ambiente. Por ejemplo, los focos contaminantes se encuentran en: la Planta de Tratamiento de aguas residuales, Chilpina Socabaya, terminal pesquero, zona del mercado de Productores, industria alimentaria Rico Pollo, Va de evitamiento-Pachacutec, industrias qumicas y del cuero, establos, granjas, etc. La eliminacin de estas sustancias nocivas productoras de olores es posible con procesos biotecnolgicos, utilizando como operacin unitaria la biofiltracin. Actualmente, existen numerosas empresas dedicada al diseo, construccin y operacin de sistemas de biofiltracin a escala industrial. En Alemania y en los pases bajos se encuentran ms de 500 biofiltros instalados a nivel industrial y abarcan reas que van desde 10 a 2000 m2, tratando volmenes de contaminantes en el rango de 17 a 2500 m3/min. La construccin de un biofiltro con materiales simples nos acerca a la realidad de cmo funciona un sistema de depuracin de gases a gran escala, propiciando la observacin para facilitar el proceso de comprensin del tratamiento biolgico de gases contaminantes. Biofiltracin: La biofiltracin es un sistema de tratamiento biolgico de gases que utiliza la capacidad de los microorganismos (bacterias y hongos) de oxidar aerbicamente compuestos orgnicos e inorgnicos voltiles peligrosos a compuestos inofensivos. Ej.: el cido sulfhdrico (H2S) es transformado en CO2, SO4 y H2O. Cuadro N1: Microorganismos ms comunes usados para el tratamiento biolgico de gases. Bacterias Actinomicetes Streptomyces Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Hongos Penicillium sp. Stemphylium sp. Scedosporium apiospermun
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La biofiltracin es una alternativa adecuada por ser una tecnologa compatible con el medio ambiente en comparacin a los procesos fisicoqumicos (dilucin, enmascaramiento, oxidacin trmica, etc.) Biofiltro: Es un reactor biolgico empleado en la purificacin de gases contaminados. Consta principalmente de: Lecho: Es un componente importante de un biofiltro debido a que es el hbitat de la poblacin microbiana. Biopelcula: Es la zona donde se produce el intercambio permanente de masa entre fases lquida y gaseosa. Es all donde los contaminantes gaseosos se difunden y son degradados por la actividad de las bacterias aerbicas. Factores determinantes en la biofiltracin: El agua en el lecho: El agua sirve como medio para disolver los compuestos qumicos esenciales que constituyen la vida de los microorganismos y su crecimiento poblacional. Temperatura: Los principales microorganismos activos en un biofiltro son las bacterias mesoflicas, que generalmente presentan mayor actividad en el rango de 5 a 50C y ptimamente a 37C. Los hongos se adaptan mejor a condiciones extremas. pH: Lo recomendable es que en un biofiltro se presenten valores de pH de 6 a 8. Finalmente el pH de estos sistemas debe ser regulado, ya que numerosos procesos de oxidacin generan productos cidos, bsicos o inhibitorios, como los compuestos clorados, azufrados y amonio entre otros. En general la capacidad amortiguadora se logra mediante la adicin de Carbonato de calcio. 2. OBJETIVOS: 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 Define la biofiltracin como sistema de tratamiento biolgico de gases contaminantes. Explica la importancia de la biofiltracin en la remocin de olores. Identifica los factores determinantes en el proceso de biofiltracin. Construye un sistema de biofiltros para la degradacin de aire de un establo artificial. Inculcar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.
3. MATERIALES: 3.1. Materia prima: Estircol fuerte y maloliente. 3.2. Sustratos: Tierra de jardn. Compost. Humus. Piedra pmez. 3.3. Material para la construccin del biofiltro:
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3 2 3 2 3 botellas de vidrio (frascos lavadores A3, A4 Y A5). botellas de vidrio (A1 y A2). pinzas de Mohr o llaves de paso. m de manguera de goma. tubos tipo Y.
3.4. Reactivos: Fosfato cido de potasio. Fosfato bsico de potasio. Sulfato de amonio. Sulfato de fierro. Sulfato de magnesio. 3.5. Otros: Silicona. Parafilm. 3.6. Aparatos: Balanza analtica. Bao termosttico. Bomba de acuario. Microscopio ptico compuesto. Potencimetro. 4. PROCEDIMIENTO: 1. Preparar 1 L de medio de cultivo con la siguiente composicin: Sulfato de amonio 2.0 g Fosfato bsico de potasio 3.0 g. Fosfato cido de potasio 1.0 g. Sulfato de magnesio 1.0 g. Sulfato de fierro 0.5 g. Disolver y enrasar con agua destilada hasta un volumen final de 1.0 L. 2. Tomar 25 g. de cada tipo de sustrato y mezclar con 1 L de medio de cultivo, agitando energticamente. Medir el pH de la suspensin. 3. Distribuir la suspensin en los frascos lavadores A3, A4 y A5, hasta la mitad de su capacidad. 4. Llenar los frascos lavadores A3, A4 y A5, con piedra pmez hasta 1/3 de su capacidad. 5. Llenar el frasco A1 (Establo artificial) hasta la mitad de su capacidad con 10 g de estircol previamente diluido en un volumen suficiente de ag\\]ua. 6. Conectar los tubos de goma y sellar el frasco A1 con silicona. 7. Llenar el frasco A2 con agua destilada hasta la mitad de su capacidad.
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8. Cerrar las pinzas de Mohr, nmeros 1 y 3. 9. Conectar la bomba y verificar que los frascos lavadores estn bien cerrados. 10. Abrir la pinza de Mohr nmero 1, lo justo como para permitir que del frasco lavador nmero 5 se escape un olor soportable. 11. Conseguir un flujo de aire moderado regulando las pinzas nmero 1 y 2. 12. Dejar trabajar el dispositivo de aireacin durante 2 o 3 semanas. 13. El control de la degradacin se realizar comparando la salida de la pinza 3 con la salida del lavador A5.
Figura N 13: Diseo de Filtros biolgicos para el aire
Figura N14: Frascos lavadores Fuente: Registro de la prctica 5. PROCEDIMIENTO DETALLADO: 6. RESULTADOS Y DISCUSIN: Evaluar y comparar la degradacin de los gases en los biofiltros sometidos a temperatura ambiente y a 37C. Evaluar y comparar la degradacin de los gases considerando los diferentes lechos o sustratos utilizados en cada biofiltro. Observar e identificar los microorganismos presentes en los frascos lavadores de cada biofiltro. 7. CONCLUSIONES:
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8. SUGERENCIAS: 9. CUESTIONARIO: Cmo incrementar la eficacia y eficiencia de los biofiltros? Cmo transforman los microorganismos los olores o gases contaminantes en compuestos inofensivos? Investiga que otros sustratos permiten el crecimiento de microorganismos para el tratamiento biolgico de gases. Menciona cinco ventajas de la biofiltracin en comparacin a los tratamientos fisicoqumicos tradicionales. En nuestro pas en qu sectores productivos es necesario realizar un tratamiento previo a los gases u olores producidos? Qu mtodos se utilizan para analizar y cuantificar gases contaminantes? 10. 11. BIBLIOGRAFA: ANEXOS:
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BIBLIOGRAFA
1. AEHLE, W. Enzymes in Industry: Production and Applications. Third Edition. Germany. 2007. 2. ARGENBIO.Por qu Biotecnologa. Consejo Argentino para la formacin y desarrollo de la Biotecnologa. Argentina. 2000. 3. ARNING, I y VELASQUEZ, H. Plantas con potencial biocida. Red de Accin en Alternativas al uso de Agroqumicos (RAAA). Per. 2000. 4. DEVIA, J. Proceso para producir pectinas ctricas. Revista Universidad Eafit. Colombia. 2003 N 129.
5. FORCINITI, D. Industrial Bioseparations. Principles and Practice. Blackwell Publishing. Iowa. USA. 2008. 6. GARCA, M., QUINTERO, R. y LPEZ-MUNGUA, A. Biotecnologa alimentaria. Editorial Limusa. Mxico. 2002. 7. GDIA, F., LPEZ, J., CASAS, C., GONZLEZ, G., LAFUENTES, F., MONTESINOS, J., SOL, C. y VALERO, F. Ingeniera Bioqumica. Editorial sntesis. Espaa. 1998. 8. JAQNOW, G., DAWID, W. Biotecnologa. Introduccin con experimentos modelo. Editorial Acribia. Espaa. 2000. 9. RENNEBERG, R. Biotecnologa para principiantes. Editorial Revert. Espaa. 2008.
10. SILVA, J. Remocin de olores en plantas de tratamiento de aguas residuales mediante biofiltros. Universidad del Valle. Colombia.2006. 11. SMITH, J. Biotecnologa. Editorial Acribia. Espaa. 2006. 12. THIEMAN, W. y PALLADINO, M. Introduction to Biotechnology. Third Edition. Pearson Education. USA. 2013. 13. WANKAT. P. Ingeniera de procesos de separacin. 2da Edicin. Editorial Pearson Educacin. Mxico. 2008.
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SUSTANCIA PELIGROSA + ERROR HUMANO = ACCIDENTE

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PROTECCION Vestimenta protectora

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ANEXOS FRASES R: RIESGOS ESPECFICOS DE LOS PRODUCTOS QUMICOS

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Txico por ingestin.

Muy txico por inhalacin.

Muy txico en contacto con la piel.

Muy txico para organismos acuticos.

Peligro de explosin en caso de calentamiento.

Muy txico por ingestin.

Txico para organismos acuticos.

En contacto con agua libera gases txicos.

Nocivo para organismos acuticos.

Puede inflamarse fcilmente al usarlo.

Puede causar efectos adversos a largo plazo en el ambiente acutico.

Peligro de fuego en contacto con materias combustibles.

En contacto con cidos libera gases txicos.

Txico para la flora.

Peligro de explosin al mezclar con materias combustibles.

En contacto con cidos libera gases muy txicos.

Txico para la fauna.

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Txico para las abejas.

Provoca quemaduras graves.

Puede causar efectos adversos a largo plazo en el medio ambiente.

Gas licuado extremadamente inflamable.

Irrita los ojos.

Peligroso para la Capa de Ozono.

Reacciona violentamente con el agua.

Irrita las vas respiratorias.

Puede deteriorar la fertilidad.

Reacciona con el agua liberando gases inflamables

Puede ser nocivo para los nonatos.

Peligro de efectos irreversibles muy graves.

Riesgo de deteriorar la fertilidad.

Posibilidad de efectos irreversibles.

Posible riesgo de dao a los nonatos.

Riesgo de lesiones oculares graves.

Puede ser nocivo para los lactantes.

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Nocivo por inhalacin.

Nocivo en contacto con la piel.

Nocivo por ingestin.

Txico por inhalacin.

Puede causar alteraciones genticas hereditarias.

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Mantngase fuera del alcance de los nios.

Consrvese en lugar fresco.

Evtese el contacto con la piel.

Mantngase lejos de locales habitados.

Evtese el contacto con los ojos.

En caso de ingestin, acuda inmediatamente al mdico y mustrele la etiqueta o el envase.

Consrvese en __ (lquido apropiado a especificar por el fabricante).

Consrvese a una temperatura no superior a __C (a especificar por el fabricante).

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Mantngase el recipiente bien cerrado.

Consrvese nicamente en el recipiente de origen.

Mantngase el recipiente en lugar seco.